CN111286473A - 一种农用微生物菌复合菌剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种农用微生物菌复合功能菌剂，按重量百分比计，包括80～85％的辅料、15～20％的菌群孢子液。一种农用微生物菌复合菌剂的制备方法，包括步骤A、菌种发酵离心液制备，B、菌群孢子液配制，C、辅料配制，D、复合功能菌剂制备，E、成品。本发明提供的复合功能菌剂具有改良土壤、增强作物抗逆性，降低土壤农残等功效，集土壤改良防治植物致病菌于一体，可降低单位面积施用量，节约劳动成本；在复合功能菌群孢子液中添加了大豆粉、可溶性淀粉、麦芽糊精等微生物可利用的原料，保持微生物活性，使功能菌群分布于整个颗粒内部及表面，效有活菌数高，效果持久、显著，避免货架期过于短暂或不稳定等问题，有效降低生产成本，易推广。

Description

一种农用微生物菌复合菌剂及其制备方法
技术领域
本发明属于农用微生物菌剂制备技术领域，具体涉及一种农用微生 物菌复合菌剂及其制备方法。
背景技术
随着社会的发展，人们对生活品质要求的提高和健康意识的增强， 以及国家对化肥农药使用量的限制，微生物菌剂、有机肥类产品由于其 具有对环境友好的作用而得到了大力的推广。农用微生物菌剂是指目标 微生物或有效菌经过工业化扩繁后加工制成的活菌制剂，可用于拌种、 灌根，具有改良土壤、恢复地力、维持根际微生物菌群平衡以及降解有 毒害物质等作用，因此广泛应用于农作物的种植和土壤的改良。使用农 用微生物菌剂后，微生物的生命活动及分泌物可对土壤起一定改良作 用，增强植物营养吸收，部分微生物对一些植物致病菌还具有杀灭作 用，施用后可有效预防相关病害。
农用微生物菌剂按剂型可分为液体、粉剂、颗粒。而液体菌剂与粉 剂在施用过程中存在操作困难等现象，而且目前各种农用微生物菌剂存 在功能比较单一、生产成本高、有效活菌数低，不易推广等问题。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种具有改良土壤、增强植物营养吸 收、预防病虫害的农用微生物菌复合菌剂；本发明的第二目的在于提供 一种农用微生物菌复合菌剂的制备方法。
本发明的第一目的是这样实现的：所述的农用微生物菌复合菌剂按 重量百分比计，包括80～85％的辅料、15～20％的菌群孢子液，所述菌群 孢子液中包括芽孢杆菌WSWFJ-3的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-11的 离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-16的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ- 24、芽孢杆菌WSWFJ-25的离心发酵液，五者的重量百分比为10～20％：10～20％：10～20％：10～20％：10～20％；其中，所述的芽孢杆菌 WSWFJ-3的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-11的离心发酵液、芽孢杆菌 WSWFJ-16的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-24的离心发酵液、芽孢杆 菌WSWFJ-25的离心发酵液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL。
本发明的第二目的是这样实现的：所述的农用微生物菌复合菌剂的 制备方法的具体步骤为
A、菌种发酵离心液制备，把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢 杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24 和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的功能株系在无菌条件下分别接种于液体 发酵培养基中，于25～37℃条件下培养24～36h活化，然后把初次培养得 的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌 WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25分 别按10～20％重量百分比再次接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件 下扩大培养24～36h分别得到枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液；最后把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液分别离心得到芽孢量 不低于95％的离心孢子液，并取离心孢子液的下层孢子液备用；
B、菌群孢子液配制，把步骤A制得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的下层孢子液按10～20％： 10～20％：10～20％：10～20％：10～20％的重量百分比混匀得到混合菌 液，再在混合菌液中加入助剂制得菌群孢子液备用；
C、辅料配制，按重量百分比计，黄腐酸25～30％、氨基酸2～5％、 过40目筛的油菜枯饼有机肥55-60％、过40目筛的粘土2～3.5％、无土造 粒剂1～1.5％混合搅拌均匀制成辅料备用；
D、复合功能菌剂制备，把步骤B制得的菌群孢子液喷涂在步骤B制 得的辅料上，菌群孢子液与辅料的重量百分比为15～20％：80～85％，最 后塑形造粒为颗粒状结构得到复合功能菌剂半成品；
E、成品，把步骤D制得的复合功能菌剂半成品干燥、筛分即得到 复合功能菌剂成品。
进一步的，上述的芽孢杆菌WSWFJ-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WSWFJ-3，其保藏编号为：CGMCC No.15843；上述的芽孢杆 菌WSWFJ-11为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WSWFJ- 11，其保藏编号为：CGMCC No.15851；上述的芽孢杆菌WSWFJ-16为 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WSWFJ-16，其保藏编号为：CGMCCNo.18264；上述的芽孢杆菌WSWFJ-24为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)WSWFJ-24，其保藏编号为：CGMCC No.18272；上述的芽 孢杆菌WSWFJ-25为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens) WSWFJ-25，其保藏编号为：CGMCC No.18262。
本发明的有益效果：本发明提供的复合功能菌剂具有改良土壤、增 强作物抗逆性，降低土壤农残等功效；以复合功能菌群孢子液为造粒菌 剂，菌含量活性高、菌量不低于500cfu/mL，集土壤改良防治植物致病 菌于一体，可降低单位面积施用量，节约劳动成本；在复合功能菌群孢 子液中添加了大豆粉、可溶性淀粉、麦芽糊精等微生物可利用的原料，保持微生物活性，使功能菌群分布于整个颗粒内部及表面，效有活菌数 高，效果持久、显著，避免货架期过于短暂或不稳定等问题，有效降低 生产成本，易推广。
具体实施方式
下面对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限 制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范 围。
本发明提供的农用微生物菌复合功能菌剂，按重量百分比计，包括80～85％的辅料、15～20％的菌群孢子液，所述菌群孢子液中包括芽孢杆 菌WSWFJ-3的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-11的离心发酵液、芽孢杆 菌WSWFJ-16的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-24、芽孢杆菌WSWFJ-25 的离心发酵液，五者的重量百分比为10～20％：10～20％：10～20％： 10～20％：10～20％。
所述的芽孢杆菌WSWFJ-3的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-11的离 心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-16的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-24、 芽孢杆菌WSWFJ-25的离心发酵液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL。
所述的芽孢杆菌WSWFJ-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WSWFJ-3，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为： 2018年06月04日，保藏编号为：CGMCC No.15843。
所述的芽孢杆菌WSWFJ-11为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WSWFJ-11，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，保藏日为：2018年06月04日，保藏编号为：CGMCCNo.15851。
所述的芽孢杆菌WSWFJ-16为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) WSWFJ-16，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为： 2019年07月22日，保藏编号为：CGMCCNo.18264。
所述的芽孢杆菌WSWFJ-24为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)WSWFJ-24，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏日为：2019年07月22日，保藏编号为：CGMCCNo.18272。
所述的芽孢杆菌WSWFJ-25为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WSWFJ-25，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院 3号，保藏日为：2019年07月22日，保藏编号为：CGMCCNo.18262。
本发明所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，具体步骤为：
A、菌种发酵离心液制备，把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢 杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24 和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的功能株系在无菌条件下分别接种于液体 发酵培养基中，于25～37℃条件下培养24～36h活化，然后把初次培养得 的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌 WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25分 别按10～20％重量百分比再次接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件 下扩大培养24～36h分别得到枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液；最后把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液分别离心得到芽孢量 不低于95％的离心孢子液，并取离心孢子液的下层孢子液备用；
B、菌群孢子液配制，把步骤A制得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的下层孢子液按10～20％： 10～20％：10～20％：10～20％：10～20％的重量百分比混匀得到混合菌 液，再在混合菌液中加入助剂制得菌群孢子液备用；
C、辅料配制，按重量百分比计，黄腐酸25～30％、氨基酸2～5％、 过40目筛的油菜枯饼有机肥55-60％、过40目筛的粘土2～3.5％、无土造 粒剂1～1.5％混合搅拌均匀制成辅料备用；
D、复合功能菌剂制备，把步骤B制得的菌群孢子液喷涂在步骤B制 得的辅料上，菌群孢子液与辅料的重量百分比为15～20％：80～85％，最 后塑形造粒为颗粒状结构得到复合功能菌剂半成品；
E、成品，把步骤D制得的复合功能菌剂半成品干燥、筛分即得到 复合功能菌剂成品。
各所述的步骤A中枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25制得的下层孢子液中的芽孢量均不低于500亿 cfu/mL。
所述的步骤A中的液体发酵培养基包括蛋白胨0.01～0.02g/mL、酵母 提取物0.05～0.1g/mL、氯化钠0.01～0.02g/mL、余量为水，溶解后调节pH 至6.8～7.5。
所述的步骤B中的助剂包括可溶性淀粉、大豆粉、麦芽糊精，三者 按重量百分比配比为30～35％:30～35％:25～30％。
所述的步骤C中的油菜枯饼有机肥为经发酵腐熟和粉碎后的油菜枯 饼，油菜枯饼的粒径不大于10mm。
所述的步骤D中的菌群孢子液的喷涂方式为高压喷涂。
所述的步骤E中的复合功能菌剂半成品的干燥方式为真空抽滤干 燥。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明：
实施例1
本发明所述的农用微生物菌复合功能菌剂按重量百分比计，包括 80％的辅料、15％的菌群孢子液，所述菌群孢子液中包括芽孢量均不低 于500亿cfu/mL的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3离心发酵液、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11离心发酵液、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16离心发酵液、图瓦永 芽孢杆菌WSWFJ-18离心发酵液，所述枯草芽孢杆菌WSWFJ-3离心发酵 液、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11离心发酵液、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16 离心发酵液、图瓦永芽孢杆菌WSWFJ-18五者的离心发酵液重量百分比 为10％：10％：10％：10％：10％；其中，所述的辅料按重量百分比计， 包括黄腐酸25％、氨基酸2％、过40目筛的油菜枯饼有机肥55％、过40目 筛的粘土2％、无土造粒剂1％。
实施例2
本发明所述的农用微生物菌复合功能菌剂按重量百分比计，包括83％的辅料、17％的菌群孢子液，所述菌群孢子液中包括芽孢量均不低 于500亿cfu/mL的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3离心发酵液、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11离心发酵液、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16离心发酵液、图瓦永 芽孢杆菌WSWFJ-18离心发酵液，所述枯草芽孢杆菌WSWFJ-3离心发酵 液、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11离心发酵液、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16 离心发酵液、图瓦永芽孢杆菌WSWFJ-18五者的离心发酵液重量百分比 为15％：15％：15％：15％：15％；其中，所述的辅料按重量百分比计， 包括黄腐酸27％、氨基酸3.5％、过40目筛的油菜枯饼有机肥58％、过40 目筛的粘土2.7％、无土造粒剂1.25％。
实施例3
本发明所述的农用微生物菌复合功能菌剂按重量百分比计，包括 85％的辅料、20％的菌群孢子液，所述菌群孢子液中包括芽孢量均不低 于500亿cfu/mL的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3离心发酵液、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11离心发酵液、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16离心发酵液、图瓦永 芽孢杆菌WSWFJ-18离心发酵液，所述枯草芽孢杆菌WSWFJ-3离心发酵 液、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11离心发酵液、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16 离心发酵液、图瓦永芽孢杆菌WSWFJ-18五者的离心发酵液重量百分比 为20％：20％：20％：20％：20％；其中，所述的辅料按重量百分比计， 包括黄腐酸30％、氨基酸5％、过40目筛的油菜枯饼有机肥60％、过40目 筛的粘土3.5％、无土造粒剂1.5％。
实施例4
本发明所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，具体步骤为：
A、菌种发酵离心液制备，把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢 杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24 和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的功能株系在无菌条件下分别接种于液体 发酵培养基中，于25～37℃条件下培养24～36h活化，然后把初次培养得 的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌 WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25分 别按10％的重量百分比再次接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件 下扩大培养24～36h分别得到枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液；最后把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液分别离心得到芽孢量 不低于95％的离心孢子液，并取离心孢子液的下层孢子液备用，且下层 孢子液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL；
B、菌群孢子液配制，把步骤A制得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的下层孢子液按10％：10％： 10％：10％：10％的重量百分比混匀得到混合菌液，再在混合菌液中加 入助剂制得菌群孢子液备用；
C、辅料配制，按重量百分比计，把黄腐酸25％、氨基酸2％、过40 目筛的粘土2％、无土造粒剂1％，以及经发酵腐熟和粉碎，并过40目筛 的油菜枯饼有机肥55％混合搅拌均匀制成辅料备用；
D、复合功能菌剂制备，把步骤B制得的菌群孢子液高压喷涂在步 骤B制得的辅料上，菌群孢子液与辅料的重量百分比为15％：80％，最 后塑形造粒为颗粒状结构得到复合功能菌剂半成品；
E、成品，把步骤D制得的复合功能菌剂半成品真空抽滤干燥、筛 分即得到复合功能菌剂成品。
上述步骤A中的液体发酵培养基包括蛋白胨0.01～0.02g/mL、酵母提 取物0.05～0.1g/mL、氯化钠0.01～0.02g/mL、余量为水，溶解后调节pH至 6.8～7.5；步骤B中的助剂包括可溶性淀粉、大豆粉、麦芽糊精，三者按 重量百分比配比为30～35％:30～35％:25～30％。
实施例5
本发明所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，具体步骤为：
A、菌种发酵离心液制备，把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢 杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24 和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的功能株系在无菌条件下分别接种于液体 发酵培养基中，于25～37℃条件下培养24～36h活化，然后把初次培养得 的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌 WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25分 别按15％重量百分比再次接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件下 扩大培养24～36h分别得到枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液；最后把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液分别离心得到芽孢量 不低于95％的离心孢子液，并取离心孢子液的下层孢子液备用，且下层 孢子液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL；
B、菌群孢子液配制，把步骤A制得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的下层孢子液按15％：15％： 15％：15％：15％的重量百分比混匀得到混合菌液，再在混合菌液中加 入助剂制得菌群孢子液备用；
C、辅料配制，按重量百分比计，把黄腐酸27％、氨基酸3.5％、过 40目筛的粘土2.7％、无土造粒剂1.25％，以及经发酵腐熟和粉碎，并过 40目筛的油菜枯饼有机肥58％混合搅拌均匀制成辅料备用；
D、复合功能菌剂制备，把步骤B制得的菌群孢子液高压喷涂在步 骤B制得的辅料上，菌群孢子液与辅料的重量百分比为17％：82.5％，最 后塑形造粒为颗粒状结构得到复合功能菌剂半成品；
E、成品，把步骤D制得的复合功能菌剂半成品真空抽滤干燥、筛 分即得到复合功能菌剂成品。
上述步骤A中的液体发酵培养基包括蛋白胨0.01～0.02g/mL、酵母提 取物0.05～0.1g/mL、氯化钠0.01～0.02g/mL、余量为水，溶解后调节pH至 6.8～7.5；步骤B中的助剂包括可溶性淀粉、大豆粉、麦芽糊精，三者按 重量百分比配比为30～35％:30～35％:25～30％。
实施例6
本发明所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，具体步骤为：
A、菌种发酵离心液制备，把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢 杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24 和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的功能株系在无菌条件下分别接种于液体 发酵培养基中，于25～37℃条件下培养24～36h活化，然后把初次培养得 的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌 WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25分 别按20％重量百分比再次接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件下 扩大培养24～36h分别得到枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌 WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液；最后把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液分别离心得到芽孢量 不低于95％的离心孢子液，并取离心孢子液的下层孢子液备用，且下层 孢子液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL；
B、菌群孢子液配制，把步骤A制得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解 淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌 WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的下层孢子液按20％：20％： 20％：20％：20％的重量百分比混匀得到混合菌液，再在混合菌液中加 入助剂制得菌群孢子液备用；
C、辅料配制，按重量百分比计，把黄腐酸30％、氨基酸5％、过40 目筛的粘土3.5％、无土造粒剂1.5％，以及经发酵腐熟和粉碎，并过40目 筛的油菜枯饼有机肥60％混合搅拌均匀制成辅料备用；
D、复合功能菌剂制备，把步骤B制得的菌群孢子液高压喷涂在步 骤B制得的辅料上，菌群孢子液与辅料的重量百分比为20％：85％，最 后塑形造粒为颗粒状结构得到复合功能菌剂半成品；
E、成品，把步骤D制得的复合功能菌剂半成品真空抽滤干燥、筛 分即得到复合功能菌剂成品。
上述步骤A中的液体发酵培养基包括蛋白胨0.01～0.02g/mL、酵母提取物 0.05～0.1g/mL、氯化钠0.01～0.02g/mL、余量为水，溶解后调节pH至 6.8～7.5；步骤B中的助剂包括可溶性淀粉、大豆粉、麦芽糊精，三者按 重量百分比配比为30～35％:30～35％:25～30％。

Claims (10)

1.一种农用微生物菌复合功能菌剂，其特征在于：按重量百分比计，包括80～85％的辅料、15～20％的菌群孢子液，所述菌群孢子液中包括芽孢杆菌WSWFJ-3的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-11的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-16的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-24、芽孢杆菌WSWFJ-25的离心发酵液，五者的重量百分比为10～20％：10～20％：10～20％：10～20％：10～20％。
2.根据权利要求1所述的农用微生物菌复合菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌WSWFJ-3的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-11的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-16的离心发酵液、芽孢杆菌WSWFJ-24、芽孢杆菌WSWFJ-25的离心发酵液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL。
3.根据权利要求1或2所述的农用微生物菌复合菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌WSWFJ-3为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WSWFJ-3，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2018年06月04日，保藏编号为：CGMCC No.15843。
4.根据权利要求1或2所述的农用微生物菌复合菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌WSWFJ-11为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WSWFJ-11，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2018年06月04日，保藏编号为：CGMCC No.15851。
5.根据权利要求1或2所述的农用微生物菌复合菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌WSWFJ-16为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WSWFJ-16，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2019年08月29日，保藏编号为：CGMCC No.18264。
6.根据权利要求1或2所述的农用微生物菌复合菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌WSWFJ-24为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)WSWFJ-24，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2019年08月29日，保藏编号为：CGMCC No.18272。
7.根据权利要求1或2所述的农用微生物菌复合菌剂，其特征在于：所述的芽孢杆菌WSWFJ-25为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)WSWFJ-25，其保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2019年08月29日，保藏编号为：CGMCC No.18262。
8.一种权利要求1所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，其特征在于：包括步骤A、菌种发酵离心液制备，B、菌群孢子液配制，C、辅料配制，D、复合功能菌剂制备，E、成品；具体步骤为
A、菌种发酵离心液制备，把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的功能株系在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件下培养24～36h活化，然后把初次培养得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25分别按10～20％重量百分比再次接种于液体发酵培养基中，于25～37℃条件下扩大培养24～36h分别得到枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液；最后把枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的发酵液分别离心得到芽孢量不低于95％的离心孢子液，并分别取五者的离心孢子液的下层孢子液备用，且各下层孢子液中的芽孢量均不低于500亿cfu/mL；
B、菌群孢子液配制，把步骤A制得的枯草芽孢杆菌WSWFJ-3、解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-11、枯草芽孢杆菌WSWFJ-16、贝莱斯芽孢杆菌WSWFJ-24和解淀粉芽孢杆菌WSWFJ-25的下层孢子液按10～20％：10～20％：10～20％：10～20％：10～20％的重量百分比混匀得到混合菌液，再在混合菌液中加入助剂制得菌群孢子液备用；
C、辅料配制，按重量百分比计，黄腐酸25～30％、氨基酸2～5％、过40目筛的油菜枯饼有机肥60～65％、过40目筛的粘土2～3.5％、无土造粒剂1～1.5％混合搅拌均匀制成辅料备用；
D、复合功能菌剂制备，把步骤B制得的菌群孢子液喷涂在步骤B制得的辅料上，菌群孢子液与辅料的重量百分比为15～20％：80～85％，最后塑形造粒为颗粒状结构得到复合功能菌剂半成品；
E、成品，把步骤D制得的复合功能菌剂半成品干燥、筛分即得到复合功能菌剂成品。
9.根据权利要求8所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤A中的液体发酵培养基包括蛋白胨0.01～0.02g/mL、酵母提取物0.05～0.1g/mL、氯化钠0.01～0.02g/mL、余量为水，溶解后调节pH至6.8～7.5。
10.根据权利要求8所述的农用微生物菌复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述的步骤B中的助剂包括可溶性淀粉、大豆粉、麦芽糊精，三者按重量百分比配比为30～35％:30～35％:25～30％。
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