CN111286465A - 猪源枯草芽孢杆菌、微生物制剂及用途 - Google Patents

猪源枯草芽孢杆菌、微生物制剂及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种猪源枯草芽孢杆菌、微生物制剂及用途。本发明的猪源枯草芽孢杆菌从猪粪获得，能够耐受高温且具有抑制大肠杆菌的活性。由此制备的微生物制剂可促进动物生长和/或降低养殖料肉比。

Description

猪源枯草芽孢杆菌、微生物制剂及用途
技术领域
本发明涉及一种微生物，具体涉及一种猪源的枯草芽孢杆菌，其微生物制剂以及作为饲料添加剂用于畜禽养殖业的用途。
背景技术
畜牧养殖是大农业的重要组成部分，其贡献了整个产值的40％左右，全球人类约六分之一的食物能量和三分之一的蛋白质来自于动物源食品。高效和安全养殖无论是在经济领域还是在社会领域都具有重要的影响。抗生素的发明和应用，不仅给人类健康带来了革命性的变化，其在畜禽疾病的防治中也发挥了重要作用。随着一些关于抗生素对畜禽养殖中的促生长作用的报道，大量的抗生素被应用的饲料添加剂中。然而，抗生素在畜禽养殖业中的滥用不仅仅在于导致病原菌耐药性的增加，而且抗生素的残留也会被食用动物制品的人类所吸收，严重的影响人类健康。
养殖业中对于安全和高效养殖的需求，促进了对抗生素替代添加剂的开发。微生态制剂(益生菌)成为一种重要的时代选择。益生菌的定义为“适当使用时能够给宿主健康带来益处活的微生物”。益生菌从分类上可以分为细菌和非细菌微生物，前者包括乳酸菌、双岐杆菌、芽孢杆菌和肠球菌等，非细菌包括米曲霉、假丝酵母、布拉酵母和酿酒酵母等；细菌依据是否形成芽孢可分为芽孢杆菌和非芽孢菌类，如乳酸菌和双岐杆菌多等；益生菌还可以分为单菌种和多菌种、外来菌种和自源菌种等。
益生菌在畜禽养殖中具有重要的作用，包括可以改变肠道菌群，提高有益菌群、降低大肠杆菌含量；增加营养物的消化和吸收；产生抗菌物；改变病原微生物的基因表达；免疫调节等。益生菌的菌种选择上，需要为非病原菌、耐受复杂的肠胃环境生活(低pH，高胆汁酸)和加工运输储藏等环节，综合考虑以上要求以及降低生产成本方面综合考虑，芽孢杆菌成为应用在畜禽养殖中的首选菌类。
现有技术中已公开了芽孢杆菌在饲料领域的应用。例如， CN102178057A中公开了一种枯草芽孢杆菌及其饲料添加剂和发酵剂。其中的枯草芽孢杆菌具有良好的抗逆性功能和益生功能：可以耐受pH2.0，1％胃蛋白酶的人工胃液、可以耐受0.3％的人工胆盐、可以耐受80℃的制粒温度；对大肠杆菌K88、K99和金黄色葡萄球菌有较强抑制作用，产纤维素酶能力较强，可以降解纤维素。再如， CN102499326A公开了一种仔猪后期微生物发酵无抗生素饲料，其由配合料和复配的发酵料混合而成，其中配合料与复配的发酵料的重量之比为：92～96∶4～8，复配的发酵料由以下重量份数的发酵料复配而成：嗜酸乳杆菌发酵料3～6份、枯草芽孢杆菌发酵料0.10～0.50 份、酿酒酵母发酵料0.35～1.05份、长柄木霉发酵料0.05～0.10份、黑曲霉发酵料0.05～0.15份、米曲霉发酵料0.05～0.30份。本发明得到的不添加抗生素的瘦肉型仔猪后期微生物发酵饲料有益菌品种多，数量大，同时还含有β-葡聚糖酶、木聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶等多种高活性消化酶，起到了很好的协同作用，能够提高仔猪机体免疫力，改善肠道微生态环境，从而改善仔猪健康状况，并且提高了饲料消化利用率，提升养殖经济效益。
然而，上述现有技术仍不能满足目前的需求，仍然需要更加多样化的微生态制剂。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种猪源枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其在体外具有抑制大肠杆菌的活性。
根据本发明所述的猪源枯草芽孢杆菌，其16s rDNA的序列如 SEQ ID NO:1所示。优选地，本发明所述的猪源枯草芽孢杆菌为在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.16477的菌株。
本发明的另一目的在于提供一种微生物制剂，其由猪源枯草芽孢杆菌经发酵制备得到。
本发明的微生物制剂优选通过包括下述阶段的发酵制备：
(1)种子培养阶段，即将上述猪源枯草芽孢杆菌利用种子培养基在25～35℃恒温搅拌培养15～20小时，得到种子培养液；
(2)扩大培养阶段，即利用发酵培养基在25～35℃培养所得种子培养液15～20小时，然后恒温至35～40℃继续培养45～51小时，得到所述微生物制剂。
根据本发明的微生物制剂，优选地，所述种子培养基包括葡萄糖 1～5重量份、牛肉膏0.1～0.5重量份、蛋白胨0.5～3重量份、氯化钠0.1～1重量份、消泡剂0.01～0.1重量份。
根据本发明的微生物制剂，优选地，所述发酵培养基包括葡萄糖 1～4重量份、玉米淀粉0.5～4重量份、豆粕0.5～3重量份、玉米芯粉1～5重量份、磷酸氢二钾0.1～0.5重量份、磷酸二氢钾0.05～0.3 重量份、硫酸锰0.01～0.05重量份、消泡剂0.05～0.3重量份。
本发明的再一目的在于提供利用上述猪源枯草芽孢杆菌促进动物生长和/或降低养殖料肉比的方法。
本发明的促进动物生长和/或降低养殖料肉比的方法包括向动物施用所述猪源枯草芽孢杆菌的步骤，或者向动物施用所述微生物制剂的步骤。
根据本发明的方法，优选地，所述动物为畜禽动物。
本发明的又一目的在于提供猪源枯草芽孢杆菌作为饲料添加剂的用途，以及微生物制剂作为饲料或饲料添加剂的用途。
与已知枯草芽孢杆菌相比，本发明的猪源枯草芽孢杆菌从猪粪获得，并且能够耐受高温且具有抑制大肠杆菌的活性。由此制备的微生物制剂可促进动物生长和/或降低养殖料肉比。
附图说明
图1为示例性枯草芽孢杆菌MK-AMT1抑制大肠杆菌的图。
图2为示例性枯草芽孢杆菌MK-AMT1的系统发育树。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
除非另有说明，否则本发明的“％”是指基于重量的百分数。本发明的数据范围包括两端的本数及其限定的范围内的任何数。例如， 15～20小时表示可以是15小时，也可以是20小时，还可以是大于 15而小于20小时范围内的任何时间。
本发明的第一目的在于提供一种猪源枯草芽孢杆菌，其16s rDNA的序列如SEQ IDNO:1所示。与已知枯草芽孢杆菌相比，本发明的猪源枯草芽孢杆菌从猪粪获得，并且能够耐受高温且具有抑制大肠杆菌的活性。
本发明的猪源枯草芽孢杆菌从生长状况良好的猪粪便中分离获得。猪粪包括健康的仔猪、育肥猪、种猪、母猪的新鲜粪便。由于健康猪肠道中的菌株更有利于动物生长，由此获得的菌株更利于动物的成长。
本发明的猪源枯草芽孢杆菌具有能够耐受高温而不丧失活性的耐热性，优选能够耐受60℃以上的温度，更优选能够耐受70℃以上的温度，进一步优选能够耐受80℃以上的温度。例如，能够在80℃的温度下处理5～30分钟，例如10分钟而仍然具有活性。
本发明的猪源枯草芽孢杆菌在体外具有抑制大肠杆菌的活性，本说明书中有时简称为“抑菌活性”。本发明所述的“抑制大肠杆菌的活性”或“抑菌活性”是指与在仔猪、育肥猪、种猪、母猪的新鲜粪便中存在的耐热性细菌相比，对于大肠杆菌的抑制作用较强的活性。抑制大肠杆菌的活性可通过在平板上观察抑菌圈的大小而比较简单地判断。
本发明的猪源枯草芽孢杆菌的分离方法不特别限定，可使用已知手段进行。例如，用无菌生理盐水稀释粪便样品，并用纱布过滤，使滤液在高温中加热5～30分钟以去除热不稳定性菌株，然后采用梯度稀释法将不同浓度的样品接种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。30℃培养 20小时后挑取不同单克隆而获得。此处，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的配方优选为：牛肉膏为3.0g、蛋白胨为10.0g、NaCl为5.0g琼脂为 15g、水为1000ml，其pH一般为7.4～7.6。发明人通过上述方法获得一株猪源枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，并将其命名为MK- AMT1，在保藏日期为2018年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为CGMCCNo.16477。因此，本发明的猪源枯草芽孢杆菌优选是指在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的编号为CGMCC No.16477的菌株。
本发明的另一目的在于提供猪源枯草芽孢杆菌经发酵制备得到的微生物制剂。本发明的微生物制剂是一种含有猪源枯草芽孢杆菌及其发酵产物的组合物，有时也称作“微生态制剂”。本发明的微生物制剂的类型不特别限定，包括以悬浮液、混合液形式存在的菌液类型，也包括干燥的粉末类型，和半干燥状态的固体类型。
在某些实施方案中，本发明的微生物制剂通过如下步骤制备，或者本发明的微生物制剂的制备方法包括如下步骤：(1)种子培养阶段和(2)扩大培养阶段，以及可选地(3)干燥阶段。
(1)种子培养阶段，即将猪源枯草芽孢杆菌利用种子培养基在 25～35℃恒温搅拌培养15～20小时，得到种子培养液的阶段。
种子培养阶段的培养温度一般在25～35℃之间，优选为30～ 34℃之间，更优选为31～33℃之间。种子培养阶段需在搅拌条件下进行培养，从而有利于均匀培养，避免微生物在局部浓度过高，影响生长。搅拌的转速一般为100～300rpm，优选为150～250rpm。如果转速过低，则培养基的流动性不足，培养基成分以及氧气分布不均。另一方面，如果转速过高，则会产生过高的剪切力，进而影响细菌生长，甚至对细菌造成损害。种子培养的时间一般为15～20小时，优选为18～19小时。在某些实施方案中，种子培养阶段进行通气培养，通气量一般在35～45m3/h之间，优选为38～40m3/h之间。在某些实施方案中，种子培养在发酵罐内进行，此时一般控制罐压为 0.03～0.05MPa。
在种子培养阶段中，种子培养基一般包括葡萄糖1～5重量份、牛肉膏0.1～0.5重量份、蛋白胨0.5～3重量份、氯化钠0.1～1重量份、消泡剂0.01～0.1重量份。优选包括葡萄糖1～5重量份、牛肉膏 0.1～0.5重量份、蛋白胨0.5～3重量份、氯化钠0.1～1重量份、消泡剂0.01～0.1重量份。优选地，种子培养基包括葡萄糖2～4重量份、牛肉膏0.2～0.4重量份、蛋白胨1～2重量份、氯化钠0.3～0.6重量份、消泡剂0.02～0.08重量份。在优选的实施方案中，种子培养基包括葡萄糖3wt％、牛肉膏0.3wt％、蛋白胨1.5wt％、氯化钠0.5wt％、消泡剂0.05wt％，余量为水。
(2)扩大培养阶段，即利用发酵培养基在25～35℃培养所得种子培养液15～20小时，然后恒温至35～40℃继续培养45～51小时，得到微生物制剂。
本发明中，扩大培养首先需在25～35℃下培养15～20小时，从而有利于微生物从种子培养阶段向大规模培养阶段过渡。此时的温度优选为30～34℃之间，更优选为31～33℃之间。在某些实施方案中，此时的温度与种子培养阶段的温度相同，从而更有利于种子培养液中细菌向大规模生长的过渡。此时的培养时间一般为15～20小时，优选为16～18小时。随后提高温度进一步大规模培养。此时的温度一般恒温至35～40℃，优选为36～38℃，例如37℃。培养时间一般为45～51小时，优选为46～50小时等。
在扩大培养阶段，同样也可在搅拌条件下进行培养，从而有利于均匀培养，避免微生物在局部浓度过高，影响生长。搅拌的转速一般为100～300rpm，优选为150～250rpm。转速过低培养基的流动性不足，培养基成分以及氧气分布不均。另一方面，如果转速过高，则会产生过高的剪切力，进而影响细菌生长，甚至对细菌造成损害。在某些实施方案中，扩大培养阶段也进行通气培养，通气一般在35～ 45m3/h之间，优选为38～40m3/h。在某些实施方案中，扩大培养在发酵罐内进行，此时一般控制罐压为0.03～0.05MPa。
在扩大培养阶段中，发酵培养基包括葡萄糖1～4重量份、玉米淀粉0.5～4重量份、豆粕0.5～3重量份、玉米芯粉1～5重量份、磷酸氢二钾0.1～0.5重量份、磷酸二氢钾0.05～0.3重量份、硫酸锰 0.01～0.05重量份、消泡剂0.05～0.3重量份。优选地，发酵培养基包括葡萄糖1～3重量份、玉米淀粉0.8～2重量份、豆粕1～2重量份、玉米芯粉2～4重量份、磷酸氢二钾0.2～0.3重量份、磷酸二氢钾0.1～0.3重量份、硫酸锰0.02～0.03重量份、消泡剂0.1～0.2重量份。在某一实施方案中，本发明的发酵培养基包括葡萄糖2％、玉米淀粉1％、豆粕1.5％、玉米芯粉3％、磷酸氢二钾0.3％、磷酸二氢钾 0.15％、硫酸锰0.02％、消泡剂0.1％，余量为水。
在某些实施方案中，本发明的微生物制剂的制备方法还可包括 (3)干燥阶段。优选地，干燥阶段包括向扩大培养得到的微生物制剂中加入辅料喷雾干燥，制成成品。辅料的实例包括但不限于玉米淀粉、麦芽糊精、元明粉和环糊精等。本发明中可使用上述辅料中的一种或多种。辅料的添加量不特别限定，例如，基于成品的重量，玉米淀粉的添加量为0.5～2wt％，优选1～2wt％；麦芽糊精的添加量为 0.05～0.10wt％，优选0.06～0.09wt％；元明粉的添加量为0.02～ 0.10wt％，优选0.03～0.05wt％；环糊精的添加量为0.01～0.05wt％， 0.01～0.02wt％。
本发明的再一目的在于提供利用上述猪源枯草芽孢杆菌促进动物生长和/或降低养殖料肉比的方法，有时简称为“本发明的方法”。
本发明的促进动物生长和/或降低养殖料肉比的方法包括向动物施用上述猪源枯草芽孢杆菌的步骤，或者向动物施用上述微生物制剂的步骤。本发明的“施用”是指通过食用和/或饮用等而摄取至动物体内。
本发明的动物为任何动物，优选禽畜动物，其实例包括但不限于、鸡、鸭、鹅、猪、牛、狗、猫、马、兔、羊等。优选产肉动物，特别优选为猪，最优选断奶仔猪。
在示例性方法中，本发明包括向动物直接施用猪源枯草芽孢杆菌。此处的猪源枯草芽孢杆菌可以是干燥形式。在另外的示例性方法中，本发明包括向动物施用微生物制剂。如上所述，此处的微生物制剂可以是菌液，也可以是干燥剂。
本发明的又一目的在于提供猪源枯草芽孢杆菌作为饲料添加剂的用途，以及微生物制剂作为饲料或饲料添加剂的用途。
在示例性的实施方案中，本发明的猪源枯草芽孢杆菌可以作为饲料添加剂而添加至已知的饲料中。其中，猪源枯草芽孢杆菌的添加量基于所得饲料的总重量一般为0.1～0.5千克/吨饲料；优选为0.1～ 0.2千克/吨饲料。
在另外的示例性的实施方案中，本发明的微生物制剂直接作为饲料而施用至动物。在另外的示例性实施方案中，本发明的微生物制剂作为添加剂添加至饲料，然后投放给动物而施用。
实施例1
本实施例为枯草芽孢杆菌MK-AMT1的菌种分离及鉴定。
1.枯草芽孢杆菌MK-AMT1的分离
在闽清县塔庄镇林洞村福建省闽清福猪良种牧业发展有限公司采集健康的仔猪、育肥猪、种猪、母猪的新鲜粪便样品。由这些生长状况良好的猪粪便中分离健康动物肠道中多含有的有益于动物生长的多种菌株。用无菌生理盐水稀释粪便样品，并用6层纱布过滤，滤液在 80℃中加热10min以去除热不稳定性菌株，然后采用梯度稀释法将不同浓度的样品接种到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(牛肉膏3.0g；蛋白胨10.0g；NaCl 5.0g；琼脂15g；水1000ml；pH为7.4～7.6)。30℃培养20h后挑取不同单克隆用于下一步测试。
2.利用大肠杆菌作为指示菌筛选活性菌株。
将分离到的菌株分别在固体培养基上培养24h后，挖去一小块含有大肠杆菌的平板上继续培养18h，观察抑菌圈的大小(见图1)。通过筛选，我们选取一株具有较高抑制大肠杆菌活性的细菌，命名为 MK-AMT1。
3.枯草芽孢杆菌MK-AMT1的鉴定
取1.5ml培养好的细菌培养液，5000rpm，10min离心后菌体重悬于0.5ml TE溶液，加入50mg/ml溶菌酶溶液2μL，37℃保温 30min，然后加入10％SDS溶液0.5ml，37℃保温30min，加入蛋白酶K(20mg/ml)10μl，50℃保温60min，加入等体积的苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，混匀，8000rpm×5min，取上清液转入另一离心管中，再加入1/5体积的醋酸钠和1倍体积异丙醇，会出现沉淀物 DNA。将DNA挑取至新的离心管中，70％乙醇洗涤一次，室温下干燥，加入0.5ml TE溶解DNA。
PCR扩增细菌16s rDNA：利用PCR引物27F(5′- AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3′)和1492R(5′- GGYTACCTTGTTACGACTT-3′)。PCR扩增反应体系配制为 (50μL)：10×Buffer 5μL，10mmol/L dNTP 1μL，Taq酶1μL，模板 1μL，引物各1μL，灭菌双蒸水41μL。PCR扩增条件为：95℃初始变性3min；95℃变性30sec，50℃退火1min，72℃延伸2min，30个循环；72℃延伸5min。
将16SrDNA扩增产物进行琼脂糖电泳，回收大约为1.4kb的特异性片段，纯化后测序，测序所得序列见SEQ ID NO:1。通过NCBI 数据库进行BLAST比对，通过MEGA7软件与模式菌进行系统发育分析。如图2所示，菌株MK-AMT1与枯草芽孢杆菌杆菌(Bacillus subtilis)亲缘关系最接近，被鉴定为枯草芽孢杆菌MK-AMT1。
将枯草芽孢杆菌MK-AMT1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.16477。
实施例2
本实施例为枯草芽孢杆菌MK-AMT1微生物制剂的制备例。
取适量实施例1得到的枯草芽孢杆菌MK-AMT1接种于1L种子培养基中。在32℃恒温、罐压0.03～0.05MPa下以转速200rpm搅拌培养，在培养期间通气以保证35～45m3/h的气量，在该条件下培养 18小时，得到种子培养液。其中，种子培养基的配方如下：葡萄糖3wt％、牛肉膏0.3wt％、蛋白胨1.5wt％、氯化钠0.5wt％、消泡剂 0.05wt％，余量为水。
取适量种子培养液置入发酵培养基中。首先在32℃培养17h，然后恒温至37℃、罐压0.03～0.05MPa下以转速200rpm搅拌培养，同时通气以保证通气量在35～45m3/h之间。在该条件下培养50小时，得到枯草芽孢杆菌MK-AMT1菌液。其中发酵培养基的配方如下：葡萄糖2wt％、玉米淀粉1wt％、豆粕1.5wt％、玉米芯粉3wt％，磷酸氢二钾0.3wt％、磷酸二氢钾0.15wt％、硫酸锰0.02wt％、消泡剂 0.1wt％，余量为水。
取适量菌液，以重量计加入玉米淀粉1wt％，麦芽糊精0.07 wt％，元明粉0.03wt％，环糊精0.01wt％后直接喷雾干燥，制成成品。
实施例3
选取7千克左右断奶仔猪150头，平均分为两个组，每组5个栏，每栏15头猪，进行下述实验。
试验猪进行群体饲养，每天定时饲喂4次，分别是8点、12点、 16点和20点，每餐饲喂量以料槽内略有剩余为度。每天早上清空料槽，结算前一天的采食量。试验开始和结束时对猪进行称重，计算平均日增重，平均日采食量和料肉比预饲期5天，正式试验期28天。
实验结果见下表1和表2。
表1
Figure RE-GDA0001948722090000121
表2
Figure RE-GDA0001948722090000122
由表1和表2可知，在起始重差相近的情况下，试验组末重比对照组体重提高了4.3％，平均日增重提高了6.8％，料肉比降低了 5.7％。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福建省新闽科生物科技开发有限公司
<120> 猪源枯草芽孢杆菌、微生物制剂及用途
<130> YC12018110036-A
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1424
<212> DNA
<213> 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
<400> 1
ttcggcggct ggctcctaaa ggttacctca ccgacttcgg gtgttacaaa ctctcgtggt 60
gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct gatccgcgat 120
tactagcgat tccagcttca cgcagtcgag ttgcagactg cgatccgaac tgagaacaga 180
tttgtgggat tggcttaacc tcgcggtttc gctgcccttt gttctgtcca ttgtagcacg 240
tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg atttgacgtc atccccacct tcctccggtt 300
tgtcaccggc agtcacctta gagtgcccaa ctgaatgctg gcaactaaga tcaagggttg 360
cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacaa ccatgcacca 420
cctgtcactc tgcccccgaa ggggacgtcc tatctctagg attgtcagag gatgtcaaga 480
cctggtaagg ttcttcgcgt tgcttcgaat taaacccaca tgctccaccg cttgtgcggg 540
cccccgtcaa ttcctttgag tttcagtctt gcgaccgtac tccccaggcg gagtgcttaa 600
tgcgttagct gcagcactaa ggggcggaaa ccccctaaca cttagcactc atcgtttacg 660
gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc ctcagcgtca 720
gttacagacc agagagtcgc cttcgccact ggtgttcctc cacatctcta cgcatttcac 780
cgctacacgt ggaattccac tctcctcttc tgcactcaag ttccccagtt tccaatgacc 840
ctccccggtt gagccggggg ctttcacatc agacttaaga aaccgcctgc gagcccttta 900
cgcccaataa ttccggacaa cgcttgccac ctacgtatta ccgcggctgc tggcacgtag 960
ttagccgtgg ctttctggtt aggtaccgtc aaggtgccgc cctatttgaa cggcacttgt 1020
tcttccctaa caacagagct ttacgatccg aaaaccttca tcactcacgc ggcgttgctc 1080
cgtcagactt tcgtccattg cggaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtctgggc 1140
cgtgtctcag tcccagtgtg gccgatcacc ctctcaggtc ggctacgcat cgtcgccttg 1200
gtgagccgtt acctcaccaa ctagctaatg cgccgcgggt ccatctgtaa gtggtagccg 1260
aagccacctt ttatgtctga accatgcggt tcaaacaacc atccggtatt agccccggtt 1320
tcccggagtt atcccagtct tacaggcagg ttacccacgt gttactcacc cgtccgccgc 1380
taacatcagg gagcaagctc ccatctgtcc gctcgactgc atgt 1424

Claims (10)

1.一种猪源枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其特征在于，其16s rDNA的序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的猪源枯草芽孢杆菌，其特征在于，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.16477。
3.一种微生物制剂，其特征在于，其由根据权利要求1或2所述的猪源枯草芽孢杆菌经发酵制备。
4.根据权利要求3所述的微生物制剂，其特征在于，所述发酵包括：
(1)种子培养阶段，即将如权利要求1或2所述的猪源枯草芽孢杆菌利用种子培养基在25～35℃恒温搅拌培养15～20小时，得到种子培养液；
(2)扩大培养阶段，即利用发酵培养基在25～35℃培养所得种子培养液15～20小时，然后恒温至35～40℃继续培养45～51小时，得到所述微生物制剂。
5.根据权利要求4所述的微生物制剂，其特征在于，所述种子培养基包括葡萄糖1～5重量份、牛肉膏0.1～0.5重量份、蛋白胨0.5～3重量份、氯化钠0.1～1重量份和消泡剂0.01～0.1重量份。
6.根据权利要求4所述的微生物制剂，其特征在于，所述发酵培养基包括葡萄糖1～4重量份、玉米淀粉0.5～4重量份、豆粕0.5～3重量份、玉米芯粉1～5重量份、磷酸氢二钾0.1～0.5重量份、磷酸二氢钾0.05～0.3重量份、硫酸锰0.01～0.05重量份和消泡剂0.05～0.3重量份。
7.一种促进动物生长和/或降低养殖料肉比的方法，其特征在于，包括向所述动物施用根据权利要求1或2所述的猪源枯草芽孢杆菌的步骤，或者向所述动物施用根据权利要求3～6任一项所述的微生物制剂的步骤。
8.根据权利要求7所述的促进动物生长和/或降低养殖料肉比的方法，其特征在于，所述动物为畜禽动物。
9.根据权利要求1或2所述的猪源枯草芽孢杆菌作为饲料添加剂的用途。
10.根据权利要求3～6任一项所述的微生物制剂作为饲料或饲料添加剂的用途。
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