CN111281892B - 一种鱿鱼内脏提取物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种鱿鱼内脏提取物,其制备方法包括以下步骤:(1)将鱿鱼内脏清洗后研磨,形成鱿鱼内脏匀浆;(2)将鱿鱼内脏匀浆中加入水,加入木瓜蛋白酶,进行酶解;(3)离心得到沉淀物和上清液,将得到的上清液中加入萃取剂进行萃取,将每次制得的萃取液合并得第一混合液;(4)将步骤(3)离心得到的沉淀物,蒸煮后进行精滤,得到第二混合液;(5)将第一混合液和第二混合液混合后进行浓缩。通过本发明提取方法制得的鱿鱼内脏提取物,能够有效治疗糖尿病足,开辟了鱿鱼内脏利用的新途径。
Description
技术领域
本发明涉及鱿鱼内脏回收利用技术领域,具体涉及一种鱿鱼内脏提取物及其应用。
背景技术
鱿鱼隶属海洋软体动物类,是乌贼的一种,身体呈圆锥形,身体颜色为白色,有淡褐色斑,头较大。鱿鱼产品在世界各国水产品中占有主导地位,在全世界范围内,鱿鱼生产
消费主要集中在日本、波兰、中国台湾、泰国、韩国、意大利、俄罗斯、加拿大、新西兰、阿根廷等许多国家和地区。近十几年来,我国的对鱿鱼的捕捞量也不断增加,逐渐形成一定
规模。在鱿鱼加工过程中,占鱿鱼重量10%左右的内脏作为下脚料被丢弃,造成资源的极大浪费和环境的严重污染。
糖尿病足是指因糖尿病神经病变,包括未梢神经感觉障碍及植物神经损害,下肢血管病变—动脉硬化引起周围小动脉闭塞症,或皮肤微血管病变以及细菌感染所导致的足部疼病、足部溃疡及足坏疽等病变。常常由于缺血、神经病变和感染三种因素协同发生作用,糖尿病足增加了糖尿病治疗的难度,极大增加了患者的痛苦。目前糖尿病足治疗很有难度,治疗效果较差。目前还没有将鱿鱼内脏提取物应用到防治糖尿病足的相关研究,本发明经过研究,通过本发明的方法提取得到的鱿鱼内脏提取物,对防治糖尿病足具有重要的作用。
发明内容
针对上述现有技术,本发明的目的是提供一种鱿鱼内脏提取物及其应用。按照本发明制备方法制得的鱿鱼内脏提取物,能够有效治疗糖尿病足;本发明将鱿鱼内脏重新利用,通过本发明的方法提取其有效成分,避免了鱿鱼内脏的浪费,开辟了鱿鱼内脏利用的新途径;将鱿鱼内脏提取物应用于糖尿病足治疗领域,开拓了鱿鱼内脏的新用途。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
本发明的第一方面,提供一种鱿鱼内脏提取物,其制备方法包括以下步骤:
(1)将鱿鱼内脏清洗后研磨,形成鱿鱼内脏匀浆;
(2)将鱿鱼内脏匀浆中加入水,加入木瓜蛋白酶,进行酶解;
(3)离心得到沉淀物和上清液,将得到的上清液中加入萃取剂进行2-3 次萃取,将每次制得的萃取液合并得第一混合液,所述萃取剂为乙醚,每次萃取时上清液和萃取剂的体积比为(1-2):(7-7.5);
(4)将步骤(3)离心得到的沉淀物,在压力为0.1-0.3MPa 的条件下蒸煮1-2h,然后冷却至室温后进行精滤,得到第二混合液;
(5)将第一混合液和第二混合液以体积比为(2.5-3.5):1 的比例混合后进行浓缩。
优选的,步骤(2)中,所述鱿鱼内脏匀浆与水的体积比为1:(2-2.5)。
优选的,步骤(2)中,木瓜蛋白酶的加入量是鱿鱼内脏匀浆质量的0.2%-0.5%。
更优选的,木瓜蛋白酶购买于河北利华生物科技有限公司,酶活力为10-30 万。
优选的,步骤(2)中,酶解温度为40~55℃,pH 为8-9,时间为50-60min;酶解结束后加热灭酶。
优选的,步骤(3)中,离心是在转速为1500-2000r/min 的条件下离心15-30min。
优选的,步骤(3)中,每次萃取时间为1-2h,萃取温度为100-110℃。
优选的,步骤(4)中,精滤采用硅藻土精滤机过滤。
优选的,步骤(5)中,浓缩温度60-70℃,浓缩真空度-(0.06-0.08)Mpa,浓缩至浸膏相对密度为1.1-1.15,相对密度的测定温度为40℃。
本发明的第二方面,提供上述的鱿鱼内脏提取物在制备治疗糖尿病足药物中的用途。
本发明的第三方面,提供一种用于治疗糖尿病足的药剂,所述药剂以上述鱿鱼内脏提取物为活性成分。
优选的,在使用时,将药剂直接外敷于患者的足部患处。
本发明的有益效果:
1、通过本发明提取方法制得的鱿鱼内脏提取物,能够有效治疗糖尿病足,开辟了鱿鱼内脏利用的新途径。
2、本发明将鱿鱼内脏重新利用,通过本发明的方法提取其有效成分,避免了鱿鱼内脏的浪费,将鱿鱼内脏提取物应用于糖尿病足治疗领域,开拓了鱿鱼内脏的新用途。
3、原料来源广,价格低廉,生产成本低,生产工艺简单,适用于各种规模生产。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是例示性的,旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理
解的相同含义。
正如背景技术部分介绍的,目前鱿鱼内脏不能被充分利用,造成资源的极大浪费和环境的严重污染。
基于此,通过本发明的提取方法将鱿鱼内脏提取有效成分,避免了鱿鱼内脏的浪费,开辟了鱿鱼内脏利用的新途径;将鱿鱼内脏提取物应用于糖尿病足治疗领域,开拓了鱿鱼内脏的新用途,且对糖尿病足的治疗效果好。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案,以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例和对比例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料,均可通过商业渠道购买得到。
实施例1:
一种鱿鱼内脏提取物,其制备方法包括以下步骤:
(1)将鱿鱼内脏清洗后研磨,形成鱿鱼内脏匀浆;
(2)将鱿鱼内脏匀浆中加入水,所述鱿鱼内脏匀浆与水的体积比为1:2,加入木瓜蛋白酶,木瓜蛋白酶的加入量是鱿鱼内脏匀浆质量的0.5%,进行酶解,酶解温度为40℃,pH为8,时间为60min;酶解结束后加热灭酶;
(3)离心得到沉淀物和上清液,离心是在转速为1500r/min 的条件下离心30min;将得到的上清液中加入萃取剂进行2 次萃取,每次萃取时间为1h,萃取温度为110℃,将每次制得的萃取液合并得第一混合液,所述萃取剂为乙醚,每次萃取时上清液和萃取剂的体积比为1:7;
(4)将步骤(3)离心得到的沉淀物,在压力为0.1-0.3MPa 的条件下蒸煮1h,然后冷却至室温后进行精滤,得到第二混合液;
(5)将第一混合液和第二混合液以体积比为2.5:1 的比例混合后进行浓缩,浓缩温度70℃,浓缩真空度-0.06Mpa,浓缩至浓膏相对密度为1.1-1.15,相对密度的测定温度为40℃。
实施例2:
一种鱿鱼内脏提取物,其制备方法包括以下步骤:
(1)将鱿鱼内脏清洗后研磨,形成鱿鱼内脏匀浆;
(2)将鱿鱼内脏匀浆中加入水,所述鱿鱼内脏匀浆与水的体积比为1:2.5,加入木瓜蛋白酶,木瓜蛋白酶的加入量是鱿鱼内脏匀浆质量的0.2%,进行酶解,酶解温度为55℃,pH 为9,时间为50min;酶解结束后加热灭酶;
(3)离心得到沉淀物和上清液,离心是在转速为2000r/min 的条件下离心15min;将得到的上清液中加入萃取剂进行3 次萃取,每次萃取时间为2h,萃取温度为100℃,将每次制得的萃取液合并得第一混合液,所述萃取剂为乙醚,每次萃取时上清液和萃取剂的体积比为2:7.5;
(4)将步骤(3)离心得到的沉淀物,在压力为0.1-0.3MPa 的条件下蒸煮2h,然后冷却至室温后进行精滤,得到第二混合液;
(5)将第一混合液和第二混合液以体积比为3.5:1 的比例混合后进行浓缩,浓缩温度60℃,浓缩真空度-0.08Mpa,浓缩至浓膏相对密度为1.1-1.15,相对密度的测定温度为40℃。
实施例3:
一种鱿鱼内脏提取物,其制备方法包括以下步骤:
(1)将鱿鱼内脏清洗后研磨,形成鱿鱼内脏匀浆;
(2)将鱿鱼内脏匀浆中加入水,所述鱿鱼内脏匀浆与水的体积比为1:2,加入木瓜蛋白酶,木瓜蛋白酶的加入量是鱿鱼内脏匀浆质量的0.3%,进行酶解,酶解温度为50℃,pH为8,时间为55min;酶解结束后加热灭酶;
(3)离心得到沉淀物和上清液,离心是在转速为1800r/min 的条件下离心20min;将得到的上清液中加入萃取剂进行3 次萃取,每次萃取时间为1.5h,萃取温度为105℃,将每次制得的萃取液合并得第一混合液,所述萃取剂为乙醚,每次萃取时上清液和萃取剂的体积比为1:7.5;
(4)将步骤(3)离心得到的沉淀物,在压力为0.1-0.3MPa 的条件下蒸煮1.5h,然后冷却至室温后进行精滤,得到第二混合液;
(5)将第一混合液和第二混合液以体积比为3:1 的比例混合后进行浓缩,浓缩温度65℃,浓缩真空度-0.07Mpa,浓缩至浸膏相对密度为1.1-1.15,相对密度的测定温度为40℃。
对比例1
将实施例3 制备得到的第一混合液进行浓缩,浓缩温度65℃,浓缩真空度-0.07Mpa,浓缩至浸膏相对密度为1.1-1.15,相对密度的测定温度为40℃,制备得到鱿鱼内脏提取物。
对比例2
将实施例3 制备得到的第二混合液进行浓缩,浓缩温度65℃,浓缩真空度-0.07Mpa,浓缩至浸膏相对密度为1.1-1.15,相对密度的测定温度为40℃,制备得到鱿鱼内脏提取物。
将实施例1-3,对比例1-2 制得的鱿鱼内脏提取物进行动物试验,验证其防治糖尿病足的效果。
动物试验:Wistar 大鼠(山东省实验动物中心提供),体重在220-240g,验前适应性预饲养1 周;将大鼠随机分为6 组,每组大鼠数量为20 只,6 组大鼠分为糖尿病模型对照组、实施例1 组、实施例2 组和实施例3 组,对比1 组,对比2 组。6 组大鼠采用STZ腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠模型,制造糖尿病足大鼠模型(足溃疡是糖尿病足的主要症状之一),对糖尿病模型组大鼠的右后肢同一部位进行结扎,使用10 号外科缝线结扎大鼠足踝部,每次结扎2h,放开30min,每天重复结扎3 次,共结扎3d,隔1d 操作1 次。以被结扎肢体出现皮肤发黑,水泡、血泡、溃疡,为确认造模成功的标准。结扎时,由同一个人进行操作,所有被结扎大鼠均成模。
糖尿病模型对照组是建模后,大鼠后肢患处不做任何处理;实施例1 组是将实施例1制备的提取物2g 外敷于大鼠后肢患处,每天1 次,连续15 天;实施例2 组是将实施例2制备的提取物2g 外敷于大鼠后肢患处,每天1 次,连续15 天;实施例3 组是将实施例3制备的提取物2g 外敷于大鼠后肢患处,每天1 次,连续15 天;对比1 组是将对比例1 制备的提取物2g 外敷于大鼠后肢患处,每天1 次,连续15 天;对比2 组是将对比例2 制备的提取物2g 外敷于大鼠后肢患处,每天1 次,连续15 天。
建模成功后,记录所有大鼠的初始溃疡面积;第8 天、第16 天分别测量大鼠后肢患处的溃疡面积,溃疡面积的测量采用计算机像素点法。计算愈合率,愈合率=(第8 天或第16 天的溃疡面积-初始溃疡面积)/初始溃疡面积×100%,结果如下表所示:
由上表可知,实施例1-3 组的愈合率明显高于糖尿病模型对照组、对比1 组和对比2组,因此本发明实施例1-3 制备的鱿鱼内脏提取物对糖尿病大鼠的足溃疡有明显的抑制作用,其中实施例3 的效果最优。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已,并不用于限制本申请,对于本领域的技术人员来说,本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (1)
1.鱿鱼内脏提取物在制备治疗糖尿病足药物中的用途,其特征在于:所述鱿鱼内脏提取物由以下方法制备:
(1)将鱿鱼内脏清洗后研磨,形成鱿鱼内脏匀浆;
(2)将鱿鱼内脏匀浆中加入水,加入木瓜蛋白酶,进行酶解;所述鱿鱼内脏匀浆与水的体积比为1:(2-2.5);木瓜蛋白酶的加入量是鱿鱼内脏匀浆质量的0.2%-0.5%;酶解温度为40~55℃,pH为8-9,时间为50-60min;酶解结束后加热灭酶;
(3)离心得到沉淀物和上清液,将得到的上清液中加入萃取剂进行2-3次萃取,将每次制得的萃取液合并得第一混合液,所述萃取剂为乙醚,每次萃取时上清液和萃取剂的体积比为(1-2):(7-7.5);离心是在转速为1500-2000r/min的条件下离心15-30min;每次萃取时间为1-2h,萃取温度为100-110℃;
(4)将步骤(3)离心得到的沉淀物,在压力为0.1-0.3MPa的条件下蒸煮1-2h,然后冷却至室温后进行精滤,得到第二混合液;
(5)将第一混合液和第二混合液以体积比为(2.5-3.5):1的比例混合后进行浓缩;浓缩温度60-70℃,浓缩真空度-(0.06-0.08)Mpa,浓缩至浸膏相对密度为1.1-1.15。
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