CN111281888A - 一种用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液，包括间充质干细胞和脐血血浆。所述注射液中人脐带间充质干细胞的细胞数量为1×107‑9×107个。本发明所提供的人脐带间充质干细胞注射液在制备治疗早期股骨头坏死病的药物中的应用。与现有技术相比，采用以上技术方案配制的用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液，具有成分简单，成本低；细胞存活率高，可长时间保存；人脐带间充质干细胞与脐血血浆组合具有显著的治疗效果。

Description

一种用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液
技术领域
本发明属于干细胞技术领域，尤其涉及一种用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液。
背景技术
股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head,ONFH)，又称股骨头缺血性坏死，是由于不同病因的破坏导致股骨头血供中断或受损，引起骨细胞及骨髓成分死亡及随后的修复，继而导致股骨头结构改变、股骨头塌陷、关节功能障碍的疾病，是骨科领域常见的难治性疾病。股骨头坏死的好发年龄一般为30-50岁，发病原因有创伤、长期服用激素、饮酒过量、血液类疾病或减压病等。
股骨头坏死可分为两大类：一类是由于供应股骨头的血运突然中断而造成的创伤性股骨头缺血性坏死；另一类则是发病机制渐进慢性的非创伤性的股骨头缺血性坏死。股骨头坏死的临床表现是非特异性的，血管损伤后的早期或者病变较小的时候，是无关节症状的；但随着骨内压的升高，疼痛通常会逐渐加重，这也提示患者的关节面可能已经塌陷，最终患者可能发生跛行和活动受限。目前，股骨头坏死的早期治疗方法主要有髓芯减压、带血管蒂的髂骨瓣移植、经股骨粗隆旋转截骨等，最终治疗手段则为实施全髋关节置换术。但是，早期的治疗在一定程度上缓解了疾病的进展与患者的症状，却仍不能让病情逆转并治愈；而置换的人工髋关节的有效期往往有限。随着干细胞技术研究的发展，间充质干细胞在股骨头坏死治疗中的应用已被广泛关注。
间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)是来源于胚胎发育早期中胚层的成体干细胞，具有高度自我更新能力和多向分化潜能，是造血微环境中的一种重要的细胞成分，可以向多种组织如骨、软骨、肌肉、韧带、肌腱、脂肪及基质细胞增殖分化，而且免疫原性弱，是组织工程立项的种子细胞来源。近年来，应用间充质干细胞移植修复股骨头坏死成为国内外研究的热点。研究证实，通过移植补充股骨头坏死部位的骨髓间充质干细胞的数量，在坏死骨吸收的同时促进新生骨的产生，可以促进坏死区的重建；骨髓间充质干细胞不但具有成骨能力，还能促进内皮祖细胞形成新的毛细血管，改善股骨头坏死区域微循环，减轻骨组织缺血缺氧的状态，以此达到延缓疾病进展的目的；在ONFH动物模型中有显著的治疗效果；临床研究中显示骨髓间充质干细胞可以成为一个早期股骨头坏死干预的良好选择，早期应用骨髓间充质干细胞可以有效避免全髋关节置换术的施行，并能改善患者的疼痛，降低Lequesne指数和WOMAC指数。但骨髓间充质干细胞来源有限，采集过程中会造成创伤；随着年龄的增长，骨髓中具有分化潜能的间充质干细胞数量会逐渐减少。脐带间充干细胞来源于新生儿脐带中的华通氏胶，除具有 MSCs的所有特性外，还具有含量丰富，细胞纯净，免疫原性更低，细胞原始、分化能力更强，无伦理限制等优势。研究发现成人骨髓与期待组织中的 MSCs的免疫抑制作用和分泌因子基本一致，这说明脐带间充质干细胞可以替代骨髓间充质干细胞用于同种异体干细胞治疗。现有的技术中有使用间充质干细胞作为制剂治疗股骨头坏死，但注射液成分复杂，细胞存活率并不能保证，且治疗效果并不显著。
发明内容
针对现有技术中存在的治疗股骨头坏死病的上述缺点，本发明提供了一种用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液；该注射液配方成分简单，成本低，细胞存活率高，安全且效果明显，无任何毒副作用，可直接应用于早期股骨头坏死的临床注射。
本发明提供了一种人脐带间充质干细胞注射液，包括间充质干细胞和脐血血浆。
本发明中，以脐血血浆作为溶媒，能很好的为细胞提供营养，保持细胞活性。脐血血浆除具有一般正常成人外周血血浆的功能外，还含有丰富的造血生长因子，且不需要人类白细胞抗原配型，无免疫排斥反应。
优选的，本发明提供的一种人脐带间充质干细胞注射液，所述注射液中人脐带间充质干细胞的细胞数量为1×107-9×107个。
优选的，本发明提供的一种人脐带间充质干细胞注射液，其中人脐带间充质干细胞的细胞数量为5×107个；
所述的人脐带间充质干细胞，为传代培养5代的细胞；
本发明所提供的人脐带间充质干细胞注射液在制备治疗早期股骨头坏死病的药物中的应用。
与现有技术相比，采用以上技术方案配制的用于治疗股骨头坏死的人脐带间充质干细胞注射液，具有成分简单，成本低；细胞存活率高，可长时间保存；人脐带间充质干细胞与脐血血浆组合具有显著的治疗效果。
附图说明
图1为实施例1制备的40倍显微镜下培养的P5人脐带间充质干细胞形态图；
图2为实施例2制备的P3人脐带间充质干细胞的流式细胞仪检测结果图；
图3为实施例3制备的P5人脐带间充质干细胞的成骨诱导分化结果图；
图4为实施例3制备的P5人脐带间充质干细胞的成脂诱导分化结果图；
图5为实施例6中患者2017年股骨头的MRI检测结果；
图6为实施例6中患者2019年股骨头的MRI检测结果。
具体实施方法
下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。
实施例1人脐带间充干细胞的制备
将购买的P2代人脐带间充质干细胞(购自赛业生物)进行复苏，使用间充干细胞专用无血清培养基(购自青岛麦迪赛斯医疗技术有限公司)置于 37℃、5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱培养48h，重复传代至第5代，得到大量的人脐带间充质干细胞，收集细胞，用于注射液的制备。图1为40倍显微镜下培养的第五代人脐带间充质干细胞的形态，细胞成纤维样，呈漩涡状生长。
实施例2流式细胞术检测细胞表面标记的表达水平
取实施例1中培养的P3-P5代人脐带间充质干细胞，待细胞融合至90％时，消化收集细胞，用PBS洗涤2遍，分别加入带有荧光标记的CD44、CD73、 CD90、CD105、CD34、CD45和HLA-DR表面抗体孵育30min，再用PBS 洗涤2遍，采用流式细胞仪检测细胞表面标记的表达水平，结果见图2，发现培养的P3-P5代人脐带间充质干细胞表面标记蛋白均符合MSCs的生物学特性。
实施例3培养的人脐带间充质干细胞的成骨、成脂诱导分化潜能
取实施例1中培养的P5代细胞，以5×103个/cm2的密度接种于6孔板中，添加间充质干细胞专用无血清培养基进行培养，待细胞汇合达80％时，将培养基吸出，并加入成骨诱导分化培养基(购自STEMCELL公司，货号 05404)，每隔3天换液一次，培养28天后，用茜素红染色液进行成骨鉴定，结果如图3所示。从图中可知，本发明培养的P5代人脐带间充质干细胞可以进行成骨细胞的诱导分化。
取实施例1中培养的P5代细胞，以5×103个/cm2的密度接种于6孔板中，添加间充质干细胞专用无血清培养基进行培养，待细胞汇合达80％时，将培养基吸出，并加入成脂诱导分化培养基(购自STEMCELL公司，货号 05412)，每隔3天换液一次，培养20天后，用油红O染色液试剂盒(购自索莱宝公司，货号G1262)进行成脂鉴定，结果如图4所示。从图中可知，本发明培养的P5代人脐带间充质干细胞可以进行成脂细胞的诱导分化。
实施例4人脐带间充质干细胞注射液的制备
将实施例1离心获得的5×107个人脐带间充质干细胞沉淀用脐血血浆 (购自ALLCELLS公司，货号CB027F)5ml进行重悬，备用。
实施例5不同存放时间注射液细胞活率的测定
对实施例4中制备获得的注射液设置不同的存放时间，以确定不同存放时间对注射液中细胞活率的影响。设置0h、2h、4h、6h、12h、24h、48h、 72h及96h九个存放时间，每个时间点取样一次，每次3个重复，使用0.1％台盼蓝染色计数。测定结果见表1。
表1不同存放时间注射液细胞活率
Figure RE-GDA0002481258140000051
实施例6注射液对治疗股骨头坏死的实验效果
患者，左右股骨头区域疼痛，坏死，2017年MRI检测结果见图5，从图中可以看出股骨头坏死灶明显。2017年通过MRI导引下靶向注射人脐带间充质干细胞注射液进行治疗。治疗过程中疼痛症状逐渐消失，可以自行活动， 2019年再次进行MRI检测，结果见图6，从图中可以看出股骨头内坏死骨明显缩小，疼痛消失。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种人脐带间充质干细胞注射液，其特征在于，所述的包括间充质干细胞和脐血血浆。
2.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞注射液，其特征在于，所述的注射液中人脐带间充质干细胞的细胞数量为1×107-9×107个。
3.如权利要求1所述的人脐带间充质干细胞注射液，其特征在于，所述的注射液中人脐带间充质干细胞的细胞数量为5×107个。
4.如权利要求1-3任一项所述的人脐带间充质干细胞注射液，其特征在于，所述的注射液中人脐带间充质干细胞为传代培养3-5代的细胞。
5.权利要求1-4任一项所述的人脐带间充质干细胞注射液在制备治疗早期股骨头坏死病的药物中的应用。
6.一种治疗早期股骨头坏死病的药物，其特征在于，所述的治疗早期股骨头坏死病的药物包含有权利要求1-4任一项所述的人脐带间充质干细胞注射液。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115025120A (zh) * 2022-06-23 2022-09-09 深圳凯兰赛尔健康管理有限公司 一种间充质干细胞注射液及其应用
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