CN111281829A - 含马齿苋提取物的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

含马齿苋提取物的组合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及防腐技术领域，公开了一种含马齿苋提取物的组合物及其制备方法与应用，该组合物含有肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为20‑100重量份，厚朴树皮提取物的含量为5‑10重量份，马齿苋提取物的含量为10‑60重量份，并辅以特定重量份的低级醇、非离子表面活性剂和水，得到具有优异抑菌效果的组合物，且为油溶性，适合用于含乳化剂的产品中，并且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉具有较低的抑菌MIC值，且刺激性降低，对产品颜色无影响，对上述五种菌防腐挑战均可通过。

Description

含马齿苋提取物的组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及防腐技术领域，具体地涉及一种含马齿苋提取物的组合物及其制备方法与应用。
背景技术
随着生活水平的快速提高，人们对化妆品的安全、健康问题越来越重视。化妆品中含有大量的适宜微生物生长、繁殖的物质，因此，在条件适宜情况下，使得微生物大量繁殖，导致化妆品产生腐败变质，而危害人们的健康。
因此，为了避免化妆品产生变质或延长化妆品的使用时间，对于应用于化妆品的防腐剂的研究发展迅速。目前常用的防腐剂有甲醛释放体型防腐剂、苯氧乙醇、尼泊金酯等，但随着越来越严格的化妆品法规以及人们的健康意识增强，这些防腐剂的安全性也逐渐受到质疑。因此，对于具有“绿色”、“天然”、“安全”的特点防腐剂研究越来越受到人们的重视。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供一种含马齿苋提取物的组合物及其制备方法与应用，实现抑菌、抗炎且安全、环保的目的。
为了实现上述目的，本发明一方面提供一种含马齿苋提取物的组合物，其中，该组合物含有肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物，其中，相对100重量份肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为20-100重量份，厚朴树皮提取物的含量为5-10重量份，马齿苋提取物的含量为10-60重量份。
本发明第二方面提供一种含马齿苋提取物的组合物的制备方法。
本发明第三方面提供一种上述的组合物在无色产品中的应用。
本发明第四方面提供一种上述的组合物在抑制细菌和/或真菌中的应用。
本发明提供的组合物中含有的肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物按照特定重量比进行复配，具有明显的协同抑菌和抗炎作用，并且安全、环保、无刺激性，再辅以特定重量份的低级醇、非离子表面活性剂和去离子水，能够形成透明溶液，无沉淀，且油溶性良好，可广泛应用于含乳化剂的日化用品中。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
第一方面，本发明提供了一种含马齿苋提取物的组合物，其中，该组合物含有肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物，其中，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为20-100重量份，厚朴树皮提取物的含量为5-10重量份，马齿苋提取物的含量为10-60重量份。
根据本发明，优选地，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为35-60重量份，厚朴树皮提取物的含量为8-10重量份，马齿苋提取物的含量为20-40重量份。
根据本发明，所述组合物还含有低级醇、非离子表面活性剂和水，为了使所述组合物中的组分分散均匀且使该组合物呈现透明无沉淀的溶液状态，优选地，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，低级醇的含量为200-600重量份，非离子表面活性剂的含量为10-50重量份，水的含量为80-655重量份。
更优选地，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，低级醇的含量为400-500重量份，非离子表面活性剂的含量为15-30重量份，水的含量为260-422重量份。
本发明的发明人在研究中发现，肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物四者配合具有明显的协同抑菌和抗炎作用，且马齿苋提取物可降低厚朴树皮提取物的刺激性，尤其是相对于100重量份的肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为20-100重量份，厚朴树皮提取物的含量为5-10重量份，马齿苋提取物的含量为10-60重量份的优选情况下，该组合物具有优异的抑菌及抗炎效果且安全、无刺激性，并且与所述低级醇、非离子表面活性剂和水混合后且相对于100重量份的肉桂树皮提取物，低级醇的含量为400-500重量份，非离子表面活性剂的含量为15-30重量份，水的含量为260-422重量份的情况下呈现透明无沉淀的溶液状态，并且具有较好的油溶性。
根据本发明，对所述低级醇的种类没有特别的限制，为了提高所述组合物的分散性，优选地，所述低级醇为碳原子数为1-6的二元醇，更优选选自1,3-丁二醇、1,3-丙二醇、异戊二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的至少一种。
根据本发明，对所述非离子表面活性剂的种类没有特别的限制，为了提所述组合物的分散性，优选地，所述非离子表面活性剂选自PEG40氢化蓖麻油、PEG60氢化蓖麻油、PEG-7甘油椰油酸酯和泊洛沙姆中的至少一种。
根据本发明，对所述水的种类没有特别的限制，只要不影响所述组合物的分散性即可，优选地，所述水为去离子水。
根据本发明，对所述肉桂树皮提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述肉桂树皮提取物的活性成分为肉桂酸。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述肉桂树皮提取物中肉桂酸的含量为40-60重量％。
根据本发明，对所述茴香提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述茴香提取物的活性成分为茴香酸。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述茴香提取物中茴香酸的含量为40-60重量％。
根据本发明，优选地，所述茴香提取物选自茴香籽提取物。
根据本发明，对所述厚朴树皮提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述厚朴树皮提取物的活性成分为厚朴酚以及和厚朴酚。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述厚朴树皮提取物中厚朴酚以及和厚朴酚的含量分别为40-60重量％和5-15重量％。
根据本发明，对所述马齿苋提取物的活性成分没有特别的限制，只要能够具有抑菌和/或抗炎效果即可，为了提高协同抑菌和抗炎效果且可以降低厚朴树皮提取物的刺激性，优选地，所述马齿苋提取物的活性成分为黄酮、皂苷、氨基酸和多糖。
根据本发明，为了进一步提高协同抑菌和抗炎效果，优选地，所述马齿苋提取物中黄酮和皂苷的含量分别为0.5-1.5重量％、0.1-1重量％、0.1-0.3重量％和0.1-0.5重量％。
根据本发明，优选地，所述肉桂树皮提取物为肉桂树皮的乙醇水溶液提取物。
优选地，所述茴香提取物为茴香籽的乙醇水溶液提取物。
优选地，所述厚朴树皮提取物为厚朴树皮的乙醇水溶液提取物。
优选地，所述马齿苋提取物的为马齿苋的乙醇水溶液提取物；
根据本发明，优选地，所述肉桂树皮提取物、茴香籽提取物、厚朴树皮提取物或马齿苋提取物的提取方法包括以下步骤：
(1)将所述肉桂树皮的粉碎物、茴香籽的粉碎物、厚朴树皮的粉碎物或马齿苋(全株)的粉碎物与乙醇水溶液进行混合；
(2)将混合后的物料进行回流提取，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得的提取液进行固液分离，得到液相；
(4)将步骤(3)所得的液相进行浓缩、干燥。
根据本发明，为了使得提取的肉桂树皮提取物中肉桂酸的含量为40-60重量％，且能够提高协同抑菌和抗炎效果，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述肉桂树皮的粉碎物与65-75体积％浓度的乙醇水溶液(采用氢氧化钾调节pH值至8.5-9)以1:45-55的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在75-85℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
根据本发明，为了使得提取的茴香提取物中茴香酸的含量为40-60重量％，且能够提高协同抑菌和抗炎效果，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述茴香籽的粉碎物与75-85体积％浓度的乙醇水溶液以1:45-55的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在65-75℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
根据本发明，为了使得提取的厚朴树皮提取物中厚朴酚以及和厚朴酚的含量分别为40-60重量％和5-15重量％，且能够提高协同抑菌和抗炎效果，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述厚朴树皮的粉碎物与65-75体积％浓度的乙醇水溶液以1:45-55的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在45-55℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
根据本发明，为了使得提取的马齿苋提取物中的黄酮、皂苷、氨基酸和多糖的含量分别为0.5-1.5重量％、0.1-1重量％、0.1-0.3重量％和0.1-0.5重量％，且能够提高协同抑菌和抗炎效果以及降低厚朴树皮提取物的刺激性，一种优选的提取方法包括以下步骤：
(1)将粒度为40-60目的所述马齿苋的粉碎物与65-75体积％浓度的乙醇水溶液以1:45-55的重量比进行混合；
(2)将混合后的物料在55-65℃下回流提取2-4小时，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得提取液采用600-1000目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，得到二次滤液；
(4)将步骤(3)所得二次滤液进行减压蒸馏除去乙醇，然后进行冷冻干燥。
第二方面，本发明提供了一种含马齿苋提取物的组合物的制备方法，其中，该方法包括将前述的肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物进行混合。
根据本发明，为了提高所述组合物的分散性且使该组合物呈现透明溶液状态，优选地，所述方法还包括以下步骤：
(1)将肉桂提取物和茴香提取物与低级醇进行混合，得到溶液Ⅰ；
(2)将厚朴提取物与非离子表面活性剂进行混合，得到溶液Ⅱ；
(3)将马齿苋提取物与水进行混合，得到溶液Ⅲ；
(4)将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ进行混合，得到含马齿苋提取物的组合物。
根据本发明，为了进一步提高所述组合物的分散性并且使该组合物呈现透明溶液状态，优选地，先将溶液Ⅱ加入溶液Ⅰ中得到预混液，再将溶液Ⅲ缓慢加入预混液中；
第三方面，本发明提供了一种前述的组合物在无色产品中的应用。
根据本发明，优选地情况下，所述无色产品为日化用品。
根据本发明，优选地情况下，无色产品可以为乳液、膏霜、面膜液、洗发水、护发素等，对所述组合物在无色产品中的用量没有特别的限制，优选地，相对于1千克无色产品，所述肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物、马齿苋提取物的总用量为1-3g。
优选地，相对于1千克无色产品，所述肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物、马齿苋提取物、低级醇、非离子表面活性剂和水的总用量为5-15g。
第四方面，本发明还提供了一种前述的组合物在抑制细菌和/或真菌中的应用。
根据本发明，优选的情况下，所述细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢杆菌中的至少一种；所述真菌为白色念珠菌和/或黑曲霉。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，
肉桂树皮提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的肉桂树皮的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液(采用10％氢氧化钾溶液调节pH至8.8)以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在80℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏1h除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到肉桂树皮提取物，所得肉桂树皮提取物中肉桂酸含量为50重量％；
茴香提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的茴香籽的粉碎物与80体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在70℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏1h除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在10Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到茴香提取物，所得茴香提取物中茴香酸的含量为50重量％；
厚朴树皮提取物通过提取得到，该方法包括：先粒度为40目的厚朴树皮的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在50℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏1h除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到厚朴树皮提取物，所得厚朴树皮提取物中厚朴酚以及和厚朴酚的含量分别为50重量％和10重量％；
马齿苋提取物通过提取得到，该方法包括：先粒度为50目的马齿苋(全株)的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在60℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏1h除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8a，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到马齿苋提取物，所得马齿苋提取物中黄酮、皂苷、氨基酸和多糖的含量分别为1重量％、0.5重量％、0.2％重量％和0.3％重量％；
艾叶提取物通过提取得到，该方法包括：先将粒度为50目的艾叶的粉碎物与70体积％浓度的乙醇水溶液以1:50的重量比进行混合，然后将混合后的物料在50℃下回流提取3小时，再然后将所得提取液采用800目滤布进行第一次过滤，所得一次滤液再采用0.45μm孔径的滤膜进行第二次过滤，然后将所得二次滤液在0.005MPa，40℃条件下减压蒸馏1h除去乙醇，最后将除去乙醇后的二次滤液在8Pa，-30℃条件下冷冻干燥至恒重，得到艾叶提取物，所得艾叶提取物中菊花黄酮的含量为3重量％；
泊洛沙姆购自巴斯夫公司生产的泊洛沙姆407(生产批号20180917)；
CCK-8购自东京同仁化学研究所的LJ621产品；
HaCaT细胞购自武汉普诺赛生物科技有限公司的CL-0090产品；
牛角膜取自健康的成年牛牛眼。
鸡胚购自北京勃林格殷格翰维通生物技术有限公司SPF级白莱杭鸡蛋，生产许可证号：SCXK(京)2014-0002；
无酚红MEM培养基购自北京百奥莱博科技有限公司GS0189；
含酚红MEM培养基购自武汉普诺赛生物科技有限公司PM150410；
细菌培养基(卵磷脂-吐温80营养琼脂)购自广东环凯微生物科技有限公司027020；
真菌培养基(孟加拉红(虎红)琼脂)购自广东环凯微生物科技有限公司021010。
实施例1-7和对比例1-6
按照表1和表1(续表)的各组分比例(重量份)进行制备实施例1-7和对比例1-6的组合物。具体步骤为：
(1)将肉桂提取物和茴香提取物与低级醇进行混合，得到溶液Ⅰ；
(2)将厚朴提取物与非离子表面活性剂进行混合，得到溶液Ⅱ；
(3)将马齿苋提取物与水进行混合，得到溶液Ⅲ；
(4)将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ进行混合，得到含马齿苋提取物的组合物。
测试例1
观察组合物的外观，以及评估组合物的气味。
将实施例和对比例的组合物分别进行性能测试，测试结果见表5至表9(续表)。
对组合物的性能测试项目及测试方法如下：
(A)稳定性：检测步骤为(1)将制备的组合物在常温下放置24h，对理化指标如pH、电导率进行检测，记录pH值为A，电导率为B，然后常温下放置24h的组合物等分成3份样品，(2)第一份样品在高温40℃放置一个月，对理化指标如pH、电导率进行检测，记录pH值为A1，电导率为B1；第二份样品在低温4℃放置一个月，对理化指标如pH、电导率、进行检测，记录pH值为A2，电导率为B2；第三份样品在常温放置一个月，对理化指标如pH、电导率进行检测，记录pH值为A3，电导率为B3；(3)当|A-Ai|/A<0.5％和|B-Bi|/B<0.5％时，稳定性为“优”，当|A-Ai|/A>0.5％或|B-Bi|/B>0.5％时，稳定性为“差”，i＝1，2或3；实施例1-7和对比例1-6均进行了稳定性测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)，测试结果见表6和表6(续表)；
(B)细胞毒性：HaCaT细胞为人永生表皮细胞系，对HaCaT细胞的细胞毒性，可作为对皮肤安全性的参考数据。正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质还原为带颜色的结晶状物质，沉积在细胞周围，该变化可通过酶标仪读取OD(光密度)值，通过与空白对照组的OD值进行比较，可以得知细胞的相对生长情况(OD值大小与细胞存活率成正比)；用含有1.5重量％组合物的水溶液处理样品后，用CCK-8测定HaCaT细胞的存活率；细胞存活率在75％以上认定为“无”毒性；实施例1-7和对比例1-6均进行了细胞毒性测试，测试结果见表5和表5(续表)；
(C)斑贴刺激性测试：将组合物配制成浓度为1.5重量％的水溶液，滴加于斑贴纸上，采用封闭斑贴24h方法将斑贴粘于胳膊上部内臂，按压多次，确保不会脱落，24h后，揭开斑贴，记录斑贴红肿、痒、痛等感觉；无红肿、痒、痛的感觉认定为“无”刺激性，有红肿、痒和/或痛的感觉认定为“有”刺激性；实施例1-7和对比例1-6均进行了斑贴无刺激测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(D)牛角膜刺激性测试：选择无损伤的角膜沿巩膜边缘2.5mm处剪下，将剪下的角膜分成实验组和对照组共两组，每组3个角膜，将角膜固定在预热的角膜夹持器上，表面朝上，前后室用预热的无酚红MEM培养基填满，32±1℃培养箱中平衡1.5h，平衡结束后将角膜从培养箱中取出，以新鲜无酚红MEM培养基更换前后室旧培养基，用浊度仪测定所有角膜基础浊度值；移除前室液体，在实验组和对照组中所有角膜上皮侧均加入0.75mL组合物，并放置于32±1℃培养箱中孵育10±1min；孵育结束后，将前室中的孵育后的角膜用含酚红MEM培养基清洗至少3次至样品无残留，清洗后用新鲜的无酚红MEM培养基填充前后室，并置于32±1℃培养箱后孵育120min。以新鲜无酚红MEM培养基更换前后室旧培养基，再次用浊度仪测定所有角膜的浊度值。移除前室培养基并加入1.0mL的4mg/mL的荧光素钠溶液，夹持器竖直放回培养箱中孵育90min后，收集后室中的培养基并转移到96孔板中，每孔转入360μL，在490nm下测定吸光度值，计算体外评分(体外评分(IVS)＝平均校正浊度值+15×平均校正OD值)，按照OECD指南和联合国全球化学品统一分类和标识制度(UN GHS)对实验结果进行分类，具体分类原则见表2；体外评分数据中负数值优于正数值，且数值越接近0，刺激性越低；实施例1-7和对比例1-6均进行了牛角膜刺激性测试并进行了体外评分，体外评分结果见表5和表5(续表)；
(E)鸡胚绒毛膜尿囊膜(CAM)血管测试：配制1.5重量％组合物的水溶液，使用10只鸡胚，取待测样品40μL加入环内。鸡胚置于孵箱环境中30min。孵育后，将鸡胚从孵箱中取出，观察并比较环内与环外CAM血管的变化，评估环内血管损伤；毒性效应包括出血、毛细血管充血和鬼影血管，评估标准见表3；
实施例1-7和对比例1-6均进行了鸡胚绒毛膜尿囊膜(CAM)血管测试并进行了评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(F)3D皮肤模型刺激性测试：参照SN/T 4577-2016(化妆品皮肤刺激性检测重建人体表皮模型体外测试方法)的方法进行测试，配制含1.5重量％组合物的水溶液作为待测样品。测试终点是使用MTT法(又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法)测定细胞活性，MTT是一种黄色染料，活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶还原MTT，在细胞色素C的作用下，生成蓝色(或蓝紫色)不溶于水的甲臜(Formazan)，用酶标仪在570nm处测定甲臜的量，死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，不与MTT反应；通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比，根据570nm处OD值推算活细胞数，活细胞数占总细胞数50％以上，则认定为非刺激性，活细胞数占总细胞数50％以下，则认定为具有刺激性；实施例1-7和对比例1-6均进行了3D皮肤模型刺激性测试并进行了刺激性评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(G)临床眼周刺激性测试：1)将两组样品(一组空白纯水对照，一组含1.5重量％组合物的水溶液)置于25℃的恒温水浴箱中；2)受试者保持面部洁净在恒温恒湿室静坐15min后，取两支干净的棉签，分别同时放进两款样品中浸泡1min，取出棉签，将浸泡过空白样品的棉签在左下眼周部位轻轻涂抹两次(从内眼角到外眼角方向)，将浸泡过含有组合物的样品的棉签在右下眼周部位轻轻涂抹两次(从内眼角到外眼角方向)；3)分别在第0min，5min，10min时询问受试者刺激反应并观察皮肤反应，评分标准见表4；实施例1-7和对比例1-6均进行临床眼周刺激性测试并进行了刺激性评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(H)临床含组合物面膜刺激性测试：1)将两组样品(一组为空白面膜液不含组合物的半脸面膜；一组为面膜液中含1.5重量％组合物的半脸面膜)置于25℃的恒温水浴箱中；2)受试者保持面部洁净在恒温恒湿室静坐15min后，将不含组合物的半脸面膜敷在受试者左脸部，将含1.5重量％组合物的半脸面膜敷在受试者右脸部；3)分别在第0min，5min，10min时询问受试者刺激反应并观察皮肤反应，评分标准见表4；实施例1-7和对比例1-6均进行临床含组合物面膜刺激性测试并进行了刺激性评估，评估结果见表5和表5(续表)；
(I)抑菌圈测试方法：采用D＝8mm滤纸片法进行抑菌圈实验。滴加1μL组合物于滤纸片中，待滤纸片挥干，将滤纸片轻轻贴在分别涂布黑曲霉、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞杆菌的固体培养基上。细菌置于37℃培养箱中过夜培养，第二天可进行抑菌圈直径测量；真菌置于28℃培养箱中培养三天，测量抑菌圈直径；实施例1-7和对比例1-6均进行了抑菌圈测试，抑菌圈测试结果见表7和表7(续表)，抑菌圈直径单位为mm；
(J)最低抑菌浓度(MIC)测试方法：将组合物稀释不同倍数后得到的样品液分别加入到各自对应的灭菌的96孔板中，每孔加入10μL样品液，同时留一孔加入10μL灭菌蒸馏水作为空白对照；将浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液与LB培养基以体积比1:1000方式混合，得到稀释液，每孔中加入90μL稀释液与孔中的样品液混合，接种细菌的96孔板密封后置于37℃摇床孵育18h判断结果，接种真菌的96孔板密封后置于25℃摇床孵育48h判断结果。当空白对照内菌体明显生长的情况下，以其余小孔内完全抑制菌体生长的最低样品浓度为MIC(用酶标仪测得OD600，MIC的单位为：重量％)；实施例1-7和对比例1-6均进行了最低抑菌浓度(MIC)测试，测试结果见表8和表8(续表)；优秀、良好等的评估标准是：MIC值低于0.5％为“优秀”，MIC值在0.5％-1％之间为“良好”，MIC值高于1％为“差”；
(K)应用产品中防腐挑战测试方法：配制1.5重量％组合物的水溶液，从中取样50g样品，等分成两份待测样品，一份待测样品接种混合细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌，活菌数比值为1:1:1)，另一份待测样品接种混合真菌(白色念珠菌和黑曲霉，活菌数比值为1:1)，接种细菌的样品置于35℃的培养箱，接种真菌的样品置于25℃的培养箱。接种后的样品在挑战过程内按一定时间间隔取样检测活菌数。取样时间定为：接种后立即(0天)、7天、14天、21天、28天。取样检测时选择相应培养基进行检测。检测方法可参照《检验操作规程(霉菌和酵母菌)》和《检验操作规程(菌落总数)》进行；评判标准为：(1)从接种(第0天)开始到第14天，细菌总数的减少量的lg值不能小于2，并且从14天到28天细菌数不能增加；2、真菌总数从接种(第0天)开始到第14天，真菌总数不能增加，从第14天和第28天，真菌总数不能增加；3、第28天后，测试样品中的的活菌浓度应小于10cfu/g或10cfu/mL。实施例1-7和对比例1-6均进行了防腐挑战测试，防腐挑战测试结果见表9和表9(续表)，单位为cfu/mL。
表1
Figure BDA0002383602480000131
Figure BDA0002383602480000141
表1(续表)
Figure BDA0002383602480000142
表2
IVS UN GHS
≤3 不分类
＞3，＜55 不可预测类
≥55 分类
表3
Figure BDA0002383602480000143
Figure BDA0002383602480000151
表4
Figure BDA0002383602480000152
表5
Figure BDA0002383602480000153
表5(续表)
Figure BDA0002383602480000161
表6
Figure BDA0002383602480000162
表6(续表)
Figure BDA0002383602480000163
Figure BDA0002383602480000171
表7
菌株 实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6 实施例7
大肠杆菌 18±0.5 16.9±0.5 18.2±0.5 16.9±0.5 16.1±0.5 16.9±0.5 16.9±0.5
金黄色葡萄球菌 22±0.5 20±0.5 19±0.5 18±0.5 18.5±0.5 18±0.5 18.6±0.5
铜绿假单孢杆菌 12±0.5 10±0.5 10±0.5 10±0.5 10±0.5 10.5±0.5 10±0.5
白色念珠菌 20±0.5 19±0.5 20±0.5 17.5±0.5 20±0.5 18±0.5 18.6±0.5
黑曲霉 20±0.5 18±0.5 20±0.5 16±0.5 19.5±0.5 18±0.5 17.5±0.5
表7(续表)
菌株 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
大肠杆菌 18.5±0.5 17.9±0.5 8±0.1 13.8±0.5 12.4±0.5 11.9±0.5
金黄色葡萄球菌 19.1±0.5 18.1±0.5 8.2±0.1 12.3±0.5 11.9±0.5 12±0.5
铜绿假单孢杆菌 10.7±0.5 10±0.5 8±0.1 10.5±0.5 9.9±0.5 11±0.5
白色念珠菌 18±0.5 8±1 8±0.1 14.6±0.5 12.7±0.5 8±0.5
黑曲霉 18.5±0.5 8±1 8±0.1 13.7±0.5 13.4±0.5 8±0.5
表8
Figure BDA0002383602480000172
Figure BDA0002383602480000181
表8(续表)
Figure BDA0002383602480000182
表9
Figure BDA0002383602480000183
Figure BDA0002383602480000191
表9(续表)
混合细菌 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
第0天 2.5×10<sup>8</sup> 2.5×10<sup>8</sup> 2.5×10<sup>8</sup> 2.5×10<sup>8</sup> 2.5×10<sup>8</sup> 2.5×10<sup>8</sup>
第1周 90 87 7.4×10<sup>5</sup> 93 9.8×10<sup>5</sup> 810
第2周 ＜10 ＜10 2.6×10<sup>5</sup> ＜10 7×10<sup>5</sup> 96
第3周 ＜10 ＜10 6×10<sup>4</sup> ＜10 9.3×10<sup>4</sup> 80
第4周 ＜10 ＜10 2.3×10<sup>3</sup> ＜10 9×10<sup>3</sup> ＜10
混合真菌 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4 对比例5 对比例6
第0天 4.5×10<sup>6</sup> 4.5×10<sup>6</sup> 4.5×10<sup>6</sup> 4.5×10<sup>6</sup> 4.5×10<sup>6</sup> 4.5×10<sup>6</sup>
第1周 ＜10 970 2.9×10<sup>6</sup> ＜10 1.9×10<sup>6</sup> 2.2×10<sup>5</sup>
第2周 ＜10 600 2.5×10<sup>5</sup> ＜10 3.6×10<sup>5</sup> 1.3×10<sup>4</sup>
第3周 ＜10 100 9×10<sup>4</sup> ＜10 6.2×10<sup>4</sup> 5×10<sup>3</sup>
第4周 ＜10 53 8.1×10<sup>3</sup> ＜10 9×10<sup>3</sup> 2×10<sup>3</sup>
由以上实验结果可以看出，使用本发明的方法制备的含马齿苋提取物的组合物的抑菌和抗炎效果良好，安全、环保，并且该组合物呈现透明无沉淀的溶液状态，可以很好的用于无色产品中。从实施例1与对比例5和对比例6的实验结果可以看出，使用本发明的组合物的抑菌抗炎效果更好，组合物中各组分发挥了协同抑菌抗炎的效果；使用本发明的方法制备的含马齿苋提取物的组合物的防腐效果良好，且使用少量浓度即能达到优异的抑菌效果。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种含马齿苋提取物的组合物，其特征在于，该组合物含有肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物，其中，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为20-100重量份，厚朴树皮提取物的含量为5-10重量份，马齿苋提取物的含量为10-60重量份；
优选地，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，茴香提取物的含量为35-60重量份，厚朴树皮提取物的含量为8-10重量份，马齿苋提取物的含量为20-40重量份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物还含有低级醇、非离子表面活性剂和水，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，低级醇的含量为200-600重量份，非离子表面活性剂的含量为10-50重量份，水的含量为80-655重量份；
优选地，相对于100重量份的肉桂树皮提取物，低级醇的含量为400-500重量份，非离子表面活性剂的含量为15-30重量份，水的含量为260-422重量份。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述低级醇为碳原子数为1-6的二元醇，优选选自1,3-丁二醇、1,3-丙二醇、异戊二醇、1,2-戊二醇和1,2-己二醇中的至少一种；
优选地，所述非离子表面活性剂选自PEG40氢化蓖麻油、PEG60氢化蓖麻油、PEG-7甘油椰油酸酯和泊洛沙姆中的至少一种。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的组合物，其中，所述肉桂树皮提取物的活性成分为肉桂酸，优选地，所述肉桂树皮提取物中肉桂酸的含量为40-60重量％；
优选地，所述茴香提取物的活性成分为茴香酸，更优选地，所述茴香提取物中茴香酸的含量为40-60重量％；
优选地，所述厚朴树皮提取物的活性成分为厚朴酚以及和厚朴酚，更优选地，所述厚朴树皮提取物中厚朴酚以及和厚朴酚的含量分别为40-60重量％和5-15重量％；
优选地，所述马齿苋提取物的活性成分为黄酮、皂苷、氨基酸和多糖，更优选地，所述马齿苋提取物中黄酮、皂苷、氨基酸和多糖的含量分别为0.5-1.5重量％、0.1-1重量％、0.1-0.3重量％和0.1-0.5重量％。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的组合物，其中，所述肉桂树皮提取物为肉桂树皮的乙醇水溶液提取物；
所述茴香提取物为茴香籽的乙醇水溶液提取物；
所述厚朴树皮提取物为厚朴树皮的乙醇水溶液提取物；
所述马齿苋提取物的为马齿苋的乙醇水溶液提取物；
优选地，所述肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物或马齿苋提取物的提取方法包括以下步骤：
(1)将所述肉桂树皮粉碎物、茴香籽粉碎物、厚朴树皮粉碎物或马齿苋粉碎物与乙醇水溶液进行混合；
(2)将混合后的物料进行回流提取，得到提取液；
(3)将步骤(2)所得的提取液进行固液分离，得到液相；
(4)将步骤(3)所得的液相进行浓缩、干燥。
6.一种制备含马齿苋提取物的组合物的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求1-5中任意一项所述的肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物和马齿苋提取物进行混合。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述方法包括以下步骤：
(1)将肉桂提取物和茴香提取物与低级醇进行混合，得到溶液Ⅰ；
(2)将厚朴树皮提取物与非离子表面活性剂进行混合，得到溶液Ⅱ；
(3)将马齿苋提取物与水进行混合，得到溶液Ⅲ；
(4)将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ进行混合，得到含马齿苋提取物的组合物。
8.权利要求1-5中任意一项所述的组合物在无色产品中的应用；
优选地，所述无色产品为日化用品；
优选地，相对于1千克无色产品，所述肉桂树皮提取物、茴香提取物、厚朴树皮提取物、马齿苋提取物、低级醇、非离子表面活性剂和水的总用量为5-15g。
9.权利要求1-5中任意一项所述的组合物在抑制细菌和/或真菌中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述细菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单孢杆菌中的至少一种；所述真菌为白色念珠菌和/或黑曲霉。
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