CN1112433A - 红豆杉属植物提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从红豆杉属植物的皮、根和/ 或茎叶中提取的提取物及含有该提取物的抗癌药物 组合物。

Description

本发明涉及一种红豆杉属（Taxus）植物提取物及其制备方法和应用，更具体地讲，本发明涉及一种从红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶中的得到的提取物及其制备方法和其作为抗癌药物的应用。

1971年Wani等从短叶红豆杉（T.brevifolia）的皮中分离到紫杉醇，并证明它对KB细胞具有显著的细胞毒作用，对P388和P1534白血病有很高的活性，并能抑制W256肉瘤、S180和肺癌的生长（参见Waniv    MC    et    al.,J.Am.Chem.Soc,1971,93∶2325）。此后的20多年人们进行了广泛的研究，从红豆杉属植物中分离出紫杉烷二萜及其生物碱共约100个之多，它们都具有不同程度的抗癌活性，其中紫杉醇的活性最强。尽管紫杉醇具有优秀的抗癌活性，美国FDA已于1992年12月批准用于卵巢癌的治疗，但由于在美国红豆杉属植物资源有限，且紫杉醇在其皮中的含量小于0.02%，再加上提取分离的困难，能得到的纯的紫杉醇的量很小，因此其价格相当昂贵，一直不能扩大应用。人们一直寄希望于化学合成，但至今尚未成功。

本发明的目的之一是提供来自红豆杉属植物的提取物和其制备方法。

本发明的目的之二是提供一种含有所述提取物且能广泛应用的抗癌药物组合物及其制备方法。

药物学家过去一直把注意力集中在红豆杉属植物的单一有效成分的分离上，这样分离难度极大，得到的纯产物的量又极小，不能大量应用；过去分离到的近100个纯化合物，其中多数是紫杉烷类化合物及其生物碱，它们都具有不同程度的抗癌活性。基于上述事实，本发明人根据中医的复方理论，用溶剂将红豆杉植物中的活性成分充分地提取出来，作为一个复方的混合物直接应用。结果惊奇地发现：除了提取率比分离纯的单一物质时高100多倍外，这种提取物还具有可与紫杉醇相比的意想不到的抗癌活性，从而完成了本发明。

因此，本发明提供了一种红豆杉属植物提取物，其特征在于：

（1）提取物中至少含有两种或两种以上的抗癌活性成分；和

（2）提取物具有优良的抗癌活性。

本发明提取物是从红豆杉属植物的皮、根或茎叶、或其混合物中经特定的方法处理提取出来的。所述的红豆杉属植物包括红豆杉科的所有种属的植物，例如云南红豆杉、西藏红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉、中国红豆杉、欧洲红豆杉、太平洋红豆杉、加拿大红豆杉、日本红豆杉和美洲红豆杉等。优选云南红豆杉、西藏红豆杉和太平洋红豆杉。

本发明提取物中含有的抗癌活性成分包括已知和未知两个部分，已知部分包括至今为止已分离到的所有有效化合物，其中有代表性的化合物实例是：紫杉醇（Taxol）、紫杉醇B（cephalomanine）、云南红豆杉甲素（Yunnaxane）和云南紫杉烯（Taxus    yunanensi）等，未知部分包括至今仍未分离和未发现的所有活性化合物。

本发明的提取物具有优良的抗癌活性。用标准方法测定了本发明的提取物在0.01、0.1、1和10μg/ml浓度下对鼻咽鳞癌细胞株（KB）、宫颈鳞癌细胞株（Hela）、胃腺癌细胞株（MGC80-3）和小鼠白血病细胞株（P388）的体外抗癌活性，并用同浓度的临床上有显效的长春新碱和秋水仙碱作对照（长春碱和秋水仙碱抗癌活性不明显的细株未进行测定），药物作用48小时后镜检存活的癌细胞数、计算出百分抑制率，结果列于表1中（三次结果的平均值）。

表①：本发明提取物对体外培养癌细胞的抗癌活性

药物	浓度(μg/ml)	癌细胞株平均生长抑制率（％）
						KB	MGC80-3	P388	Hela
		提取物	100	98.7	97.0					100	100
10	96.3					92.0	94.4	82.8
			1	93.5	89.0				92.5	69.7
0.1	90.4					86.0	97.6	55.3
			0.01	86.7	69.0				82.0	48.3
长春新碱	100					100	95.3	98.7			-
		10	98.3	91.0	93.8				-
	1					96.4	88.5	91.2		-
		0.1	94.3	85.4	88.1				-
	0.01					91.2	74.2	82.5		-
		秋水仙碱	100	-	-				-		-
10	-					-	-	81.0
			1	-	-				-	65.1
0.1	-					-	-	52.5

“-”表示未做测定

表Ⅰ结果表明本发明提取物的抗癌谱比长春碱和秋水仙碱广；它对KB、MGC80-3和P388的抗癌活性与长春新碱相当，对Hela的抗癌活性与秋水仙碱相似。

此外，本发明的提取物与紫杉醇相比具有下列优点：

A.提取工艺简便，不需要进行复杂的纯物质分离，因而极大地节省时间和费用；

B.提取率比紫杉醇高100倍，既可以节省资源，又可以方便地提供大量应用的药物；

C.紫杉醇的应用要求含量必须高于97%，而其在红豆杉属植物中的含量小于0.02%，要达到临床应用的要求是相当困难的；而本发明提取物中只要求紫杉醇含量不低于2.25%，而且本发明提取物如此低的紫杉醇含量与97%的紫杉醇的抗癌活性相当（紫衫醇对KB细胞株的EDT为5.5×10^-5μmol/L，即47μg/ml）；

D.本发明提取物的溶解度明显好于紫杉醇。

本发明还提供了制备红豆杉属植物提取物的方法，它包括用溶剂充分提取红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶，然后蒸发溶剂，并对得到的残余物进行必要的处理，制得本发明的提取物。所述溶剂包括：水；烃类、如己烷、环已烷、石油醚等；芳烃类，如苯、甲苯、二甲苯等；卤代烃类，如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、二氯乙烯等；醇类，如甲醇、乙醇等；乙酸乙酯、丙酮；以及上述溶剂的两种或两种以上任意比例的混合物。用于本发明方法的提取溶剂是可以任意选择的，只要能把抗癌有效成分充分地提取出来即可。

红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶在提取之前最好将其粉碎成0.2～5mm的颗粒，优选0.5～2.0mm的颗粒。

在一优选实例中，本发明方法包括以下步骤：

（1）将红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶粉碎成0.5～2mm的颗粒；

（2）用80～95%的乙醇浸泡粉碎的颗粒；

（3）滤出浸泡的乙醇液，蒸发溶剂，得残留物；

（4）用水和二氯甲烷的混合物处理该残留物并分离出二氯甲烷层，蒸去溶剂，得粗提物；

（5）将该粗提物依次用正己烷和甲醇洗涤，然后用二氯甲烷溶解并过滤，蒸发得残留物；

（6）将残留物用乙醚和乙酸乙酯洗提，洗提液分别蒸发，得到两部分黄褐固体物，将其合并得到本发明的提取物。必要时还可将该提取物经硅胶和/或活性炭处理。

本发明的另一方面是提供了一种抗癌药物组合物，它包括抗癌有效量的本发明的红豆杉属植物提取物和可药用的载体。

本发明还提供了制备本发明抗癌药物组合物的方法，该方法包括将有效量的本发明提取物分散于可药用的载体中。

可药用的载体是指制药上常用所有无毒的、对本发明提取物无不良影响的固体、半固体和液体稀释剂或赋形剂。它们的实例包括水、乙醇、乙二醇、丙醇、甘油、聚乙二醇、花生油、蓖麻油、山梨醇、淀粉、维晶纤维素、羧甲基纤维素钠、滑石等，或它们的混合物。

在本发明的药物组合物中，还可加入润滑剂、崩解剂、调味剂、色素、助溶剂、分散剂、乳化剂、表面活性剂和pH调节剂等。

本发明的药物组合物可以制剂成制药领域中常用的各种制剂形式，其实例包括粉剂、颗粒剂、软或硬的明胶胶囊剂、丸剂、锭剂、栓剂、乳化液、溶液或注射剂等，其中优选注射剂。

本发明的药物组合物可用于防治各种癌症，例如卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌、结肠癌等。本发明的药物组合物可以以口服或非肠道形式给药，优选非肠道给药，例如静脉给药。应用的剂量取决于病人的年龄、性别、对药物的反应和病情的严重程度，通常成人的日剂量为10mg～1000mg，优选100mg～500mg。

专业人员很清楚，本发明可作出许多变化而不违背本发明的精神，但所有的这些变化均包括在本发明范围之内。

下述实施例进一步解释本发明，而不是限制本发明。

实施例1

将50kg粉碎成1mm颗粒的云南红豆杉树皮用450kg85%医用乙醇浸泡7天，过滤出乙醇液，固体再用300kg85%乙醇浸泡3天，过滤得第二次乙醇液，重复第二次操作1次，将3次乙醇提取液合并，减压蒸发去溶剂，得残留的膏状物9.5kg。

将膏状物19kg水和19kg二氯甲烷的混合物提取，分离出有机层并蒸发去二氯甲烷，得到残留的固体。将该固体分别用1.2kg正已烷和1.2kg甲醇洗涤，残余物溶于二氯甲烷中，过滤，滤液蒸发，残留的黄褐色固体，分别用乙醚和乙酸乙酯提取该固体，将乙醚和乙酸乙酯提取液蒸发，分别得到250g和300g黄色粉状固体，将其合并即为本发明的提取物，共550g，提取率为1.10%（按生药重量计）。

实施例2

按实施例Ⅰ的方法，用50kg西藏红豆杉为原料，制得了本发明的提取物540g，提取率为1.08%。

实施例3

按照实施例1的方法，用1kg太平洋红豆杉皮为原料，制得了本发明的提取物9.9g，提取率为0.99%。

实施例4

按实施例1的方法，用1kg加拿大红豆杉皮为原料，制得了本发明的提取物9.6g，提取率为%，其中紫杉醇含量为0.96%。

实施例5

将本发明提取物10g溶于1升乙二醇、乙醇和水（5∶2∶3）的混合溶剂中，过滤，封装于2ml的安瓶中，灭菌后即得本发明的药物组合物注射剂，每ml含10mg活性成分。

实施例6

用下列成分制备了本发明的药物组合物片剂：

mg/片

提取物        20

维晶纤维素        30

淀粉        40

聚乙烯烷酮

（10%水溶液）        4

羧甲基淀粉钠        4.5

硬脂酸镁        0.5

滑石粉        1

100mg

将提取物、淀粉和维晶纤维素过45目筛并充分混合，将聚乙烯烷酮的水溶液与之混合，然后过14目筛，得到的颗粒于50-60℃干燥后过18目筛。将羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石粉过60目筛后加入上述的颗粒中，混合后压片，每片重100mg，其中含提取物20mg。

Claims (10)

1、一种从红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶中得到的提取物，其特征在于：

(1)提取物中至少含有两种或两种以上的抗癌活性化合物；和

(2)提取物具有优秀的抗癌活性。

2、权利要求1的提取物，它是从下列任一种红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶中提取的：云南红豆杉、西藏红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉、中国红豆杉、欧洲红豆杉、太平洋红豆杉、加拿大红豆杉、日本红豆杉和美洲红豆杉。

3、权利要求1的提取物，它是从云南红豆杉、西藏红豆杉或太平洋红豆杉的皮中提取的。

4、权利要求1至3中任一项的提取物，其中所含的抗癌活性化合物至少包括下述的一种或一种以上的化合物：紫杉醇、紫杉醇B、云南红豆杉甲素和云南紫杉烯。

5、制备权利要求1的提取物的方法，它包括用溶剂充分提取红豆杉属植物的皮、根和/或茎叶，然后蒸发溶剂，并用适当的溶剂对残余物进行必要的处理，其中所述溶剂包括水、乙醇、甲醇、二氯甲烷、氯仿、乙醚、石油醚、正已烷、乙酸乙酯、丙酮或它们的两种或两种以上的任意混合物。

6、一种抗癌药物组合物，它包括抗癌有效量的权利要求1至4中任一项的提取物，及可药用的载体。

7、权利要求6的抗癌药物组合物在防治各种癌症中的应用。

8、权利要求6的抗癌药物组合物在防治卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜癌和结肠癌中的应用。

9、制备权利要求6的抗癌药物组合物的方法，它包括将抗癌有效量的权利要求1至4中任一项的提取物分散于可药用的载体中。

10、权利要求1至4中任一项的提取物在制备抗癌药物中的应用。