CN111226697A - 一种多微量元素富集的灵芝菌丝粉及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种多微量元素富集的灵芝菌丝粉及制备方法。本发明以生物学理论为指导，采用葛根粉、豆粕饼、蔗糖、葡萄糖、磷酸二氢钾以及有机硒、硫酸锌、三氧化二铬作为添加剂配制成液体培养基，灭菌冷却后，将培养好的灵芝菌种液添加其中，在振荡器或液体发酵罐中28℃、振荡速率180次/min、PH5~6、在高氧下培养两周左右，过滤、干燥后，得到富硒、锌、铬和葛根素含量的灵芝菌丝粉。采用本技术生产得到的灵芝菌丝粉硒、锌、铬含量大大提高，且生产成本低、产量高，有机态硒、锌、铬和葛根素稳定有效，得到的产品营养成份含量高、作为治疗糖尿病药物或食物调理安全可靠，适合工业化生产。

Description

一种多微量元素富集的灵芝菌丝粉及制备方法

技术领域

本发明涉及灵芝菌丝粉的培养技术领域，更具体地，涉及一种多微量元素富集的灵芝菌丝粉及制备方法。

背景技术

随着城市化、工业化、人口老龄化的到来，环境污染加剧，农业生态条件恶化，各种食物安全性下降，给人类生存带来严重威胁。近三十年来，人类疾病谱、死因谱已经发生根本变化，据统计，我国糖尿病患者已经达到1.14亿，位居世界第一。高血糖患者超过2亿人，每年因糖尿病死亡人数高达300万人。西医治标不治本，降糖药停血糖又反弹。人们正在寻找标本兼治的药方。

硒是人体必需的微量元素之一,具有重要的生理功能，被誉为“生命之火”、“长寿元素”、“抗癌之王”。肌体中硒含量的多少，与人的健康密切相关。缺硒对人的代谢影响表现在对某些氧化损伤的敏感性和对胛状腺代谢的改变，对镉、汞等重金属损伤敏感的增加以及生物转化作用酶类的改变。人体的低硒状态，与癌症、关节炎、心血管病、糖尿病、中风等490多种疾病发病率密切相关。研究表明：糖尿病与脂质过氧化密切相关。一定剂量的微量元素硒具有清除自由基的作用。研究发现，当胰岛分泌功能受损伤时，血清及胰腺组织的谷光甘肽过氧化物酶活性显著降低，脂质过氧化物含量明显升高，补充硒后，胰岛分泌功能提高，同时伴有血清胰腺谷光甘肽过氧化物酶活性水平升高及脂质过氧化物含量显著降低。说明胰岛的伤害与缺硒引起的过氧化损伤有关。硒还能防治糖尿病引起的并发症。总之，硒具有降低血糖和调控胰岛素介导的代谢过程等拟胰岛素作用，对防治糖尿病有着非常显著的效果。

锌，1869年科学界发现微量元素锌与生物的生长发育有关以来，大量研究证明锌元素具有重要的生理功能，它是人体内许多重要代谢途径中酶的组成成分，大约有300种酶含有锌元素，其含量在体内仅次于铁，位居第 2位。锌的含量变化将会引起一系列的病理生理改变。尤其是缺锌与糖尿病密切相关。锌与碳水化合物代谢密切相关。可影响葡萄糖在体内的平衡过程。锌是糖分解代谢中三磷酸甘油脱氢酶、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的辅助因子，直接参与糖的氧化供能途径，同时，锌也能协助葡萄糖在细胞膜上的转运。锌，还是许多葡萄糖代谢酶的构成成分及脂质和蛋白质代谢酶的辅助因子。锌与胰岛素的合成、分泌、贮存、降解、生物活性及抗原性有关。缺锌可诱导产生胰岛素抵抗甚至糖尿病。胰岛素是体内降低血糖的唯一激素，它的分子构造中有2个金属原子锌，缺锌的胰岛素易变性失效。作为超氧化物歧化酶 (SOD)的活性成分，锌对机体保护胰岛细胞起着至关重要的作用，它可通过抗氧化作用减轻胰岛的炎症反应，抑制巨噬细胞释放细胞因子，减少糖尿病大鼠血清中NO等损伤因子的产生，从而保护胰岛β细胞。锌可激活羧肽酶B，促进胰岛素原转变为胰岛素。缺锌时，大鼠体内羧肽酶 B活性下降50％，无活性的胰岛素原转变为有活性胰岛素的趋势下降，从而造成血清胰岛素水平下降。锌还能调节胰岛素和受体的水平，在维持受体磷酸化和去磷酸化水平及胰岛素信号转导过程中发挥重要的作用。同时锌也可增强胰岛素对肝细胞膜的结合力。锌，不但可以维持胰岛素的活性，而其本身又具有胰岛素样作用。研究表明：锌化合物可以抑制大鼠脂肪细胞释放游离脂肪酸，并且可以降低 KK．Ay小鼠的血糖水平,纠正葡萄糖耐量异常;补锌可以降低糖尿病大鼠的糖化血红蛋白水平，并纠正糖尿病大鼠的脂代谢紊乱。缺锌与胰岛素分泌减少以及组织对胰岛素作用的抵抗有关。糖尿病患者普遍缺锌，血清中锌水平与血糖呈显著负相关，与胰岛素和 C肽呈正相关。给缺锌的Ⅱ型糖尿病患者每天补充200~300mg锌可改善 T细胞对植物凝血素应答而不提高自然杀伤细胞的活性。锌还能纠正糖尿病脂代谢紊乱，加速伤口或溃疡的愈合，对防治糖尿病并发症有积极意义。

铬元素与糖代谢紧密相关，是胰岛素发挥降糖作用必需的元素，铬通过与烟酸结合形成 GTF或与氨基酸形成其他有机铬化合物协同胰岛素发挥其生理功能，其作用机制主要是通过GTF调节胰岛素与细胞膜上的胰岛素受体形成二硫键，促使胰岛素发挥生物学效应。铬还可作用于葡萄糖代谢中的磷酸变位酶和琥珀酸脱氢酶增加糖的利用，促进葡萄糖转运体的表达，增加葡萄糖转运。胰岛素在体内发挥作用时需要铬的参与，近年来发现天然低分子量的铬合物可激活胰岛素受体激酶，在胰岛素存在的情况下可刺激激酶活性增加 8倍，如将铬从LMWCr中分离，则其增加酶活性的作用消失。Davis等…的研究表明： LMWCr最显著的特点是，它可以在不增加胰岛素浓度的前提下，提升胰岛素的活性。铬元素不但与糖代谢有关，与脂代谢也密切相关。对实验大鼠进行缺铬喂养，发现其血糖、胆固醇和甘油酸脂增高，出现动脉粥样硬化病变；若给予高铬饲料，则粥样硬化病变发生率很低。研究表明：给糖尿病大鼠补铬，能使升高的血糖水平降低 14％～29％，胆固醇降低 35％、甘油三脂降低45％。而给正常大鼠补充铬时，则没有此种情况发生。铬，对蛋白质代谢也有一定影响，铬元素与蛋白质及RNA的合成有关，是维持核酸结构与功能的必需物质。铬在体内可通过协助胰岛素促进蛋白质的合成、代谢，并可与血液中焦磷酸盐、核蛋白、蛋氨酸、丝氨酸等结合，对蛋白质代谢起调节作用。临床研究表明，每天补充100~200mg的铬，对治疗不同类型的糖尿病 (包括Ⅰ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病、妊娠糖尿病和类固醇引起的糖尿病等 )均有效，铬对糖尿病的治疗作用已经得到广泛的证实，补充铬元素已成为对糖尿病患者适宜的营养干预措施。

当前人们正广泛地应用微生物作为硒等微量元素的生物有机化载体进行富硒等功能性食品和药品的研究开发,其中运用发酵工程手段，通过食用菌富硒等培养进行微生物转化获取富含有机硒、锌等的保健品，是硒等微量元素生物有机化的安全有效途径之一，而药用真菌灵芝因其极高的药用价值和富硒锌等能力，在微量元素生物有机化方面的研究和应用正在得到越来越多的关注。

近年来，我国学者对灵芝富硒特性及发酵条件进行了一些研究，尚德静等通过研究金针菇、香菇、猴头和灵芝在液体深层培养中的富硒能力发现四者中灵芝富硒能力最强，是其他3种食用菌的10～20倍；谢必峰等，通过发酵工程手段进行灵芝富硒深层培养，也得出灵芝富硒与耐硒能力很强的结论；姚敏等对富硒灵芝中硒的赋存形态的研究表明，蛋白质硒是富硒灵芝中硒的主要赋存形态。但对于灵芝液体富硒深层培养基的配方、培养条件、培养时间、硒来源选择以及硒浓度、灵芝菌种选择等关键技术尚不成熟，正在探索之中，对多种微量元素在灵芝液体培养中的富集尚无报道。

本发明人长期致力于富硒灵芝、牛樟芝等菌丝的培养，采用葛根粉作为碳源、在培养基中添加有机硒糖、硫酸锌、三氧化二铬，通过对培养条件的优化得到了品质优良并且产率较高的富硒、锌、铬灵芝菌丝粉，还富含降糖的葛根素，且生产成本相对较低，适合工厂化生产，其产品对高血糖和糠尿病的治疗和调养具有实际意义。同时，利用其过滤的培养液，添加“兹阴清热、生津止渴、降糖降脂、补肾健脾、调节免疫、修复胰岛”的中药材，经配伍组方后，进行提取浓缩制成口服液，配合多微量元素灵芝菌丝粉服用，能起到标本兼治糖尿病的作用。

发明内容

在本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种工艺简单易于实现、生产成本较低，同时硒、锌、铬和葛根素富集率显著提高的多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法。

本发明还提供一种富硒、锌、铬灵芝菌丝粉，所得的多微量元素灵芝菌丝粉在保持原有营养成份的同时硒、锌、铬和葛根素含量大大提高。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

提供一种多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，包括以下步骤：

S1. 多微量元素灵芝菌丝粉培养基的制备：

S11. 葛根粉的预处理：取葛根粉加入纯净水，依次经过加热糊化、液化酶液化、糖化酶糖化，取滤液得葛根粉液，备用；

S12. 豆粕饼的预处理：取大豆饼用纯净水进行提取，取滤液得大豆饼液备用；

S13. 三氧化二铬的预处理：将所要添加的三氧化二铬用适量硝酸溶解备用；

S14. 多微量元素培养基的制备：取蔗糖、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌、维生素B1用纯净水溶解与步骤S11所得葛根粉液、步骤S12所得大豆饼液、S13经硝酸处理的三氧化二铬混合均匀，加入合成的有机硒，灭菌，得多微量元素灵芝菌丝粉培养基；

S2. 多微量元素灵芝菌丝粉的接种、培养：将大赤灵芝菌种在无菌条件下接种到多微量元素灵芝菌丝粉培养基中，经过培养后过滤、干燥，得到所述的富硒、锌、铬和葛根素灵芝菌丝粉；

其中，步骤S1中所述制备多微量元素灵芝菌丝粉培养基的各原料的重量份配比如下：

葛根粉 40～80份；

豆粕饼 40～60份；

蔗糖 30～80份；

葡萄糖 10～20份；

磷酸二氢钾 2～5份；

硫酸镁 0.07～0.08份；

维生素B1 0.001～0.002份；

纯化水 900～1000份；

有机硒 0.0024～0.0068份；

硫酸锌 0.5～3份

三氧化二铬 0.5～2份

优选地，步骤S1中所述制备多微量元素灵芝菌丝粉培养基的各原料的重量份配比如下：

葛根粉 60份；

豆粕饼 50份；

蔗糖 80份；

葡萄糖 20份；

磷酸二氢钾 2份；

硫酸镁 0.075份；

维生素B1 0.001份；

纯化水 1000份；

有机硒 0.0045～0.006份；

硫酸锌 2份

三氧化二铬 1份

其中，所述有机硒，由葡萄糖与单质硒，经碳酸铯催化合成的有机硒糖；所述葛根粉为过80目筛的葛根干燥粉；所述豆粕饼为蛋白质含量35%以上的黄豆饼。

优选地，步骤S11所述葛根粉的预处理具体为：先将葛根粉加入纯净水中，在90℃糊化15min，冷却至室温；再加入液化酶，在60℃恒温液化4小时，100℃煮沸20min后，冷却至室温；再加入糖化酶，在60℃恒温糖化12小时以上，100℃煮沸20min，冷却至室温；然后在转速为800r/min，离心15min或者用4～6层纱布过滤，取滤液得葛根粉液。

进一步优选地，步骤S11中所述葛根粉与纯净水的质量比为1 : 3～4；葛根粉与液化酶的质量比25 :1～2；葛根粉与糖化酶的质量比25 : 1～1.5。

最优选地，步骤S11中所述葛根粉与纯净水的质量比为1:4；葛根粉与液化酶的质量比25 : 2；葛根粉与糖化酶的质量比25 : 1。

优选地，步骤S2所述，大豆饼与纯净水的质量比为1:4。

优选地，步骤S2所述，赤灵芝菌种为液体菌种；液体菌种接种与培养基的体积比为5 ～10 : 100。

更优选地，步骤S2所述，赤灵芝菌液体菌种接种与培养基的体积比为5 : 100。

优选地，步骤S2所述培养，为将培养瓶放入转速为150～200r/min的震荡器，在温度为25～30℃的条件下，培养5～20天。

更优选地，其特征在于，步骤S2所述转速为180r/min，在PH5.8、温度为28℃的条件下，培养5～15天，培养时间的长短，与产量和品质有直接的关系，培养时间太短，产量低，成本高；培养时间过长，不仅产量和品质下降，还消耗能源和材料，生产成本增加。

培养基是灵芝液体培养成败的关键，培养基配方中关键的是碳氮比合理，同时多微量元素灵芝菌丝粉的生产，微量元素来源与浓度是重点。无机硒虽然成本较低，但活性强，灵芝吸收率较低，甚至对灵芝菌丝产生一定毒害，产品硒含量不够稳定；纯化亚硒酸钠盐，虽然较单质硒稳定，但仍伴有其它重金属元素；采用单质硒用碳酸铯作催化剂，与葡萄糖分子反向对接后合成的有机态硒糖，虽然成本稍高，但克服了硒粉和亚硒酸钠的缺陷，灵芝吸收率大大提高，即使较高浓度，也不会对灵芝细胞产生毒害，生产出来的产品有机硒含量稳定，产品质量优。高价铬元素对灵芝菌丝体会产生毒害，以化合价为三价铬较合适。

以葛根粉经过液化糖化处理后，不仅可为灵芝菌丝体提供有机碳源，同时，葛根粉中的葛根素能以植物分子的形式进入人体，修复并保护胰岛细胞，抑制胰高血糖素的分泌的同时促进胰岛素的分泌，从而达到降低血糖的效果。葛根素能改善胰岛素的抵抗系统，增强胰岛素受体的敏感性，促进与胰岛素受体结合的亲和力，提高胰岛素细胞的生物效应，从而实现稳定快速降糖。葛根素能在短时间内活化糖尿病人的血管，软化血管壁，增加平滑肌的弹性，减少血管阻力加大血流速度，减少血管内物质沉积，改善血液循环，以降低血糖、血脂及心脑血管疾病的发生率。葛根素对蛋白质非酶糖基化有很好的抑制作用，还能减少因蛋白质非酶糖基化引起的周细胞损伤，葛根素对人血清白蛋白（SHA）非酶糖基化有明显的抑制作用，抑制率为40%；对晶状体蛋白非酶糖基化也有明显的抑制作用，抑制率为46%。是保护和强化肾功能的得力之选，也是明显改善糖尿病视网膜病变的最直接原因。

灵芝液体培养需要适宜的温度和充足的氧气，温度太低，菌丝生长慢，温度太高，菌丝会老化，甚至抑制菌丝生长。在20～35℃范围内，随着温度升高，生长加快，但超过30℃生长明显减慢，以28℃最适宜。振荡不仅能增加培养液中的氧含量，振荡频率与产量有密切关系，振荡频率太低，培养基中的氧含量低，菌丝生长慢，频率太高也不利菌丝生长，以180次/min为最适宜。PH是灵芝液体培养基的一个重要因素，太酸或碱太强对菌丝生长都不利，以PH5.8最为适宜；培养时间的长短，与产量和品质有直接的关系，培养时间太短，产量低，成本高；培养时间过长，不仅产量和品质下降，还消耗能源和材料，生产成本增加。菌丝生长高峰集中在5～15天，15天后，生长明显减慢，培养20天后，部分菌种多糖和有机硒含量反而下降，这是因为部分菌丝产生溶解后硒糖和硒蛋白分解所致。灵芝液体深层培养产量与品质与菌种关系也非常密切，不同菌种差异很大，以赤灵芝中的大赤灵芝产量和有效成份含量最高，菌种添加量以5%最为适宜。

根据上述所述方法多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法所得到的多微量元素灵芝菌丝粉。

本发明的有益效果：

本发明以生物学理论为指导，采用葛根粉、豆粕饼、蔗糖、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌、三氧化二铬以及有机硒作为添加剂配制成液体培养基，得到的多微量元素灵芝菌丝粉硒、锌、铬和葛根素含量大大提高，需要特别说明的是，培养基是灵芝液体培养成败的关键，培养基配方中关键的是碳/氮比合理，虽然很多材料可供选择，经过本申请人大量的实验探索发现，与本申请人之前的研究相比，使用葛根粉作为碳源，用常规使用的豆粕饼替代常用的营养肉汤作为氮源、使用维生素B1替代维生素C作为添加剂并配合使用有机硒作为添加剂，在一定配比范围内作为多微量元素灵芝菌丝粉的培养基原料时存在协同作用，使所得到的菌丝粉的硒、锌、铬和葛根素含量大大提高，其它营养成份也有一定程度的提高，大大提高了硒、锌、铬的富集率，用于工业生产成本大大降低，得到的产品有效成份含量高、品质稳定安全，同时能显著提高产量，适合工业化生产，产品对高血糖和糖尿病患者可起到标本兼治的效果，具有实际推广价值与经济意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明。除非特别说明，本发明实施例中采用的原料和方法为市购的原料和常规使用的方法，所使用的设备为本领域常规设备。

本发明中评定产品质量的4个参数的测定方法如下：

生物量：采用干重法进行测量，即在60℃将多微量元素灵芝菌丝粉干燥至恒重，称量计算每升培养基菌丝粉重量；

灵芝多糖含量测定：采用硫酸蒽酮法测定，对多微量元素灵芝菌丝粉中的含糖量进行确定。

硒、锌、铬含量的测定：称取样品经过硝酸微波高压消解后，用电感耦合等离子光谱仪进行测定。

葛根素含量的测定：采用高效液相色谱法。

实施例1

按照表1中所示多微量元素灵芝菌丝粉培养基所需量准备各原料，具体多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，包括以下步骤：

S1. 多微量元素灵芝菌丝粉培养基的制备

S11. 葛根粉的预处理：先将葛根粉加入4倍量纯净水中，在90℃糊化15min，冷却至室温；再加入液化酶，葛根粉与液化酶的质量比25 : 2，在60℃恒温液化4小时，100℃煮沸20min后，冷却至室温；再加入糖化酶，葛根粉与糖化酶的质量比25 : 1，在60℃恒温糖化12小时以上，100℃煮沸20min，冷却至室温；然后在转速为800r/min，离心15min过滤，取滤液得葛根粉液，备用；

S12. 豆粕饼的预处理：取豆粕饼用4倍量纯净水进行提取，取滤液得豆粕饼液，备用；

S13. 三氧化二铬的预处理：将所要添加的三氧化二铬用适量硝酸溶解备用；

S14. 多微量元素培养基的制备：取蔗糖、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锌、维生素B1用适量纯净水溶解与步骤S11所得葛根粉液、步骤S12所得大豆饼液、步骤S13.所得三氧化二铬硝酸液混合均匀，加入人工合成的有机硒以及余量纯净水，灭菌，得多微量元素灵芝菌丝粉培养基；

S2. 多微量元素灵芝菌丝粉的接种、培养：将与培养基的体积比为8 : 100的液态大赤灵芝菌种在无菌条件下接种到富硒灵芝菌丝粉培养基中，将培养瓶放入转速为180r/min的震荡器，在温度为28℃的条件下，培养15天后过滤、干燥，得到所述的多微量元素灵芝菌丝粉。

对制备多微量元素灵芝菌丝粉的生物量、所得多微量元素灵芝菌丝粉中多糖含量测定以及硒、锌、铬、葛根素含量进行测定，结果如表2所示。

实施例2、3

与实施例1不同的是按照表1所示各种原料。

对制备多微量元素灵芝菌丝粉的生物量、所得富硒灵芝菌丝粉中多糖含量测定以及硒、锌、铬、葛根素含量进行测定，结果如表2所示。

对比例1

与实施例1不同的是按照表1所示各种原料，其中，葛根粉用玉米粉代替；使用等量的营养肉汤替代豆粕饼，用等量的维生素C替代维生素B1。

对制备富硒灵芝菌丝粉的生物量、所得富硒灵芝菌丝粉中多糖含量测定以及硒、锌、铬、葛根素含量进行测定，结果如表2所示。

对比例2

与实施例1不同的是按照表1所示各种原料。

对制备富硒灵芝菌丝粉的生物量、所得富硒灵芝菌丝粉中多糖含量测定以及硒、锌、铬和葛极素含量进行测定，结果如表2所示。

对比例3

与实施例1不同的是按照表1所示各种原料。

对制备富硒灵芝菌丝粉的生物量、所得富硒灵芝菌丝粉中多糖含量测定以及硒、锌、铬和葛根素含量进行测定，结果如表2所示。

表1

表2

Claims (10)

1.一种富硒等多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 富硒、锌、铬灵芝菌丝粉培养基的制备

S11. 葛根粉的预处理：取葛根粉加入纯净水，依次经过加热糊化、液化酶液化、糖化酶糖化，取滤液得葛根粉液，备用；

S12. 豆粕饼的预处理：取豆粕饼用纯净水进行提取，取滤液得豆粕饼液，备用；

S13. 三氧化二铬的预处理：将所要添加的三氧化二铬用适量硝酸溶解备用；S14.有机硒等多微量元素培养基的制备：取蔗糖、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1用纯净水溶解与步骤S11所得葛根粉液、步骤S12所得大豆饼液混合均匀，加入人工合成的二硒糖、硫酸锌和S13.三氧化二铬溶液灭菌，得多微量元素灵芝菌丝粉培养基；

S2. 多微量元素灵芝菌丝粉的接种、培养：将大赤灵芝菌种在无菌条件下接种到多微量元素灵芝菌丝粉培养基中，经过培养后过滤、干燥，得到所述的富硒、锌、铬灵芝菌丝粉；

其中，步骤S1中所述制备多微量元素灵芝菌丝粉培养基的各原料的重量份配比如下：

葛根粉 40～60份；

豆粕饼 40～60份；

蔗糖 30～80份；

葡萄糖 10～20份；

磷酸二氢钾 2～5份；

硫酸镁 0.07～0.08份；

维生素B1 0.001～0.002份；

纯净水 900～1000份；

有机硒 0.0036～0.0068份；（由葡萄糖与单质硒经碳酸铯催化合成的有机硒糖）；

硫酸锌 0.5～5份；

三氧化二铬 0.5～3份。

2.根据权利要求1所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述制备多微量元素灵芝菌丝粉培养基的各原料的重量份配比如下：

葛根粉 50份；

豆粕饼 50份；

蔗糖 80份；

葡萄糖 20份；

磷酸二氢钾 2份；

硫酸镁 0.075份；

维生素B1 0.001份；

纯化水 1000份；

有机硒 0.0045～0.006份；

硫酸锌 2份；

三氧化二铬 1份；

其中，所述葛根粉为过80目筛的葛根干燥粉；豆粕饼为蛋白质含量35%以上的黄豆榨油后的饼。

3.根据权利要求1所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S11所述葛根粉的预处理具体为：先将葛根粉加入纯净水中，在90℃糊化15min，冷却至室温；再加入液化酶，在60℃恒温液化4小时，100℃煮沸20min后，冷却至室温；再加入糖化酶，在60℃恒温糖化12小时以上，100℃煮沸20min，冷却至室温；然后在转速为800r/min，离心15min或者用4～6层纱布过滤，取滤液得葛根粉液。

4.根据权利要求3所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S11中所述葛根粉与纯净水的质量比为1 : 3～4；葛根粉与液化酶的质量比25 :1～2；葛根粉与糖化酶的质量比25 : 1～1.5。

5.根据权利要求4所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S11中所述葛根粉与纯净水的质量比为1:4；葛根粉与液化酶的质量比25 : 2；葛根粉与糖化酶的质量比25 : 1。

6.根据权利要求1所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S12所述：大豆饼与纯净水的质量比为1:4。

7.根据权利要求6所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S2所述大赤灵芝菌种为液体菌种；液体菌种接种与培养基的体积比为5 ～10 : 100，优选地，所述大赤灵芝液体菌种接种与培养基的体积比为5 : 100。

8.根据权利要求1所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S2所述培养：为将培养瓶放入转速为150～200r/min的震荡器，在温度为25～30℃的条件下，培养5～20天。

9.根据权利要求8所述：多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法，其特征在于，步骤S2所述转速为180r/min，PH5.8、在温度为28℃的条件下，培养5～15天。

10.根据权利要求1至9任意一项所述多微量元素灵芝菌丝粉的制备方法所得到的多微量元素灵芝菌丝粉。