CN111220592A - 基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品快速检测技术领域，涉及一种基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法；首先制备不同浓度的羟基‑α‑山椒素标准溶液，依次加入到含有SERS基底材料的悬液、无机盐凝聚剂，混合均匀，扫描获得拉曼光谱图，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值I，与其相对应的羟基‑α‑山椒素标准溶液浓度绘制标准曲线；然后制备待测样品溶液，进一步得到待测样品溶液的拉曼光谱图，根据得到的羟基‑α‑山椒素标准曲线计算得到待测液中总羟基山椒素的浓度，最后计算出花椒样品中总羟基山椒素的含量。本发明操作简单、检测成本低，所需样品量少，可便携，适用于现场大规模花椒样品的检测，为羟基山椒素的智能化分析检测提供技术参考。

Description

基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法

技术领域

本发明属于食品快速检测技术领域，具体涉及一种基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法。

背景技术

花椒，位列调味料“十三香”之首，是一种我国传统的药食同源植物，具有色泽饱满、鲜香味麻等特点，受到人们的广泛青睐。花椒的主要麻味物质为羟基山椒素，主要包括羟基-α-山椒素、羟基-β-山椒素、羟基-γ-山椒素、羟基-ε-山椒素等类型，羟基山椒素总含量是评价花椒品质的一个重要指标。

目前，检测羟基山椒素的方法主要有液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS)，紫外分光光度法，薄层层析法等。其中，HPLC-MS虽能对羟基山椒素成分进行准确的定性和定量分析，但存在仪器昂贵体积大，检测时间较长，操作程序繁琐等不足，使该方法难以实现现场快速检测。申请号201210410462.1，名称为“一种花椒麻味素类物质含量快速检测方法”的专利申请，通过提取总酰胺浸膏，建立了甲醛滴定法检测羟基山椒素类物质的含量。申请号201410573260.8，名称为“花椒油中酰胺类物质含量的测定方法”的专利申请，根据标准曲线和溶液的紫外吸光度得到花椒油中酰胺类物质的含量。但这些方法的检测结果极易受花椒中多酚、色素等其他物质的干扰，容易出现假阳性结果，更无法实现准确地定量分析。因此，建立一种快速、准确识别羟基山椒素的检测方法用于花椒的质量监控及品质分级有重要意义。

拉曼光谱技术是一种高效的光谱检测技术，而表面增强拉曼散射光谱(SurfaceEnhancedRaman Scattering，SERS)技术是纳米材料与拉曼光谱技术相结合的有效产物，能够可靠地提供分子的结构信息，从而可以快速得到被测样品的成分信息，具有分析速度快，操作简单，灵敏度高等优点，适合现场快速鉴别及检测，在食品检测领域的应用越来越广泛。比如，有文献公开以银纳米或金纳米溶胶为增强基底，建立了柑桔中三唑磷农药残留的快速检测方法。还有有文献采用银纳米棒阵列为基底，利用SERS技术对食用油中的辣椒碱进行定性和定量分析。

但是目前，基于SERS技术快速检测花椒中羟基山椒素的研究尚未见报道。因此，设计一种操作简便、分析快速、能够反映羟基山椒素结构信息且能准确定量的SERS检测方法成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有检测羟基山椒素技术中存在的不足，构造了针对羟基山椒素的SERS基底材料，并依此建立了一种基于SERS技术的羟基山椒素快速检测方法，实现对羟基山椒素的快速定性判别和定量检测。为实现上述目的，本发明采用以下技术手段：

本发明提供一种基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，具体包括以下步骤：

(1)绘制羟基山椒素标准曲线：

首先制备不同浓度的羟基-α-山椒素标准溶液，然后分别取不同浓度的羟基-α-山椒素标准溶液，体积均相同，记为V₁；然后取与羟基-α-山椒素标准溶液相同数量的SERS基底材料的悬液，体积均相同，记为V₂；再取相同数量的无机盐凝聚剂，体积均相同，记为V₃；

最后将羟基-α-山椒素标准溶液、SERS基底材料的悬液和无机盐凝聚剂分别混合，涡旋混合均匀，利用拉曼光谱仪进行光谱扫描获得拉曼光谱图，并对其进行谱峰归属和解析；拉曼光谱图进行预处理后，以1620～1650cm^-1处的特征拉曼峰作为定量基准峰，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值I，以羟基-α-山椒素标准溶液浓度与其相对应的拉曼峰强度值I绘制标准曲线；

(2)待测样品溶液的制备：

以花椒为原料，除去萎蔫或褐变的干燥花椒果皮，粉碎，经筛网筛选，得到花椒粉；称取花椒粉，质量为w，加入乙酸乙酯A，震荡摇匀，常温条件下进行超声浸提，得到粗提液；将粗提液进行离心，收集上清液，过滤后得到待测液，记录体积V₀，冷藏待用；整个步骤在避光条件下操作；

(3)待测液的拉曼检测：

取V₁体积步骤(2)制备得到的待测液加入到含有SERS基底材料的悬液(体积为V₂)中，再加入无机盐凝聚剂(体积为V₃)，涡旋混合均匀，利用拉曼光谱仪进行光谱扫描获得拉曼光谱图；

(4)定性判断：

对步骤(3)得到的拉曼光谱图进行预处理后，当谱图中1140～1190cm^-1，1250～1270cm^-1，1440～1470cm^-1，1620～1650cm^-1处存在特征拉曼峰时，则待测液中含有羟基山椒素；

(5)定量测定：

在步骤(4)检测结果的基础上，根据步骤(3)得到的待测液的拉曼光谱图，以1620～1650cm^-1处的特征拉曼峰作为定量基准峰，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值，并根据步骤(1)得到的羟基-α-山椒素标准曲线得到的待测液中总羟基山椒素的浓度，记为m，进一步根据公式计算出花椒样品中总羟基山椒素的含量X。

X：花椒样品中总羟基山椒素的含量，mg/g；

m：根据标准曲线得到的待测液中总羟基山椒素的浓度，mg/L；

V₀：待测液体积，L；

w：花椒样品质量，g。

进一步地，步骤(1)中，羟基-α-山椒素标准溶液浓度范围为0-20mg/L，每个浓度配制3份平行样本。

进一步地，步骤(1)中，所述SERS基底材料为聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料；所述SERS基底材料的悬液为聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料与超纯水的混合物；悬液中聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料质量比w/v为10％-40％；

聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料的具体制备过程如下：

a、制备三角形银纳米粒子(TAg)：向柠檬酸三钠(TSC 2.5nM，5mL)，聚乙二醇(500mg/L，200μL)和硼氢化钠10mM，300μL)的混合溶液中加入5mL 0.5mM硝酸银，并在磁力搅拌下保持3分钟；用种子溶液(20-500μL)以及抗坏血酸(10mM，75μL)一起生长TAg，并在剧烈搅拌条件下加入硝酸银(0.5mM，3mL)，通过添加500μL 25mM TSC使TAg稳定；

b、制备rGO-p：将石墨薄片氧化，通过超声处理约30分钟将所得的氧化石墨烯(GO)分散在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中，基于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)/GO的重量比＝5/1，加入PVP并将其溶解在GO的棕色均匀悬浮液(1mg/mL)中，并超声处理1-2h，得到PVP化学修饰的还原氧化石墨烯(rGO-p)；

c、制备聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料：将聚苯酚溶解在约60℃的DMF中，形成透明均匀的溶液，然后将其与rGO-p溶液混合，搅拌2小时后，再加入预先制备的三角形银纳米粒子，超声搅拌后，在25-30℃水浴中静置2-5h；通过离心洗涤，其中离心速度为6000-9000r/min，离心时间为8-20min；最后干燥得到聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料粉末；SERS基底材料使用前加入适量超纯水溶解，超声分散即得悬液。

进一步地，步骤(1)中，无机凝聚剂为钠盐、钾盐、镁盐和钙盐的一种或多种混合的溶液。

进一步地，步骤(1)中，所述无机凝聚剂的浓度范围为10mmol/L至其饱和浓度。

进一步地，步骤(1)和(4)中，所述预处理为利用平滑和基线优化对谱图进行改善的数据处理方法。

进一步地，步骤(1)和(3)中，所述待测液V₁、SERS基底材料悬液V₂和无机凝聚剂V₃的体积为：1:0.5-5:0-2。

进一步地，步骤(2)中，所述筛网的目数为20-40目；所述花椒粉末与乙酸乙酯A的用量比为(1-25g)：(25-100)mL；所述超声浸提时间为5-40min。

进一步地，所述步骤(2)中，所述离心条件均为：转速1500-3000r/min，时间为3-10min。

进一步地，步骤(3)中，所述仪器参数条件如下：拉曼光谱仪发射激光波长为785nm，固定激光功率为50-200mW，扫描范围为200-3500cm^-1，积分时间为1-10s，每个样扫描6次取平均值。

有益效果：

本发明提供的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，主要解决了现有的主要技术手段存在的无法对羟基山椒素进行准确定性和定量分析检测、操作程序繁琐、分析时间长等缺点，不仅可以实现对羟基山椒素进行定性鉴别，获得分子结构信息，也可以定量检测花椒中羟基山椒素类物质的含量，具体有益效果如下。

(1)本发明制备了一种复合SERS基底材料(聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料)，该基底材料极大增强了羟基山椒素原有的拉曼光谱信号强度；通过该SERS基底材料可获取羟基山椒素明确的分子基团识别信息，并能对其进行准确定量分析。

(2)借助上述SERS基底材料，本发明首次将SERS技术应用于花椒中羟基山椒素的检测，检测速度快(每个样品在1分钟内检测完成)，结果准确(与HPLC-MS结果误差率小于8％)，填补了羟基山椒素快速、准确定性定量检测方法方面的空白。

(3)花椒中含有大量多酚、色素等物质，这些物质容易产生荧光，对羟基山椒素的拉曼光谱影响非常大。本发明采用乙酸乙酯提取花椒中的羟基山椒素成分，极大地减小了待测液中黄酮、色素等荧光物质的影响，从而大大提高了表面增强拉曼光谱用于花椒中羟基山椒素的检测精度，使该方法基本满足市面上花椒的检测需求。

(4)本发明操作简单，不需要操作人员有较强的专业背景，检测成本低，所需样品量少，可便携，适用于现场大规模花椒样品的检测，为羟基山椒素的智能化分析检测提供技术参考。

附图说明

图1为羟基山椒素标准品检测的拉曼光谱图。

图2为羟基山椒素的标准曲线图。

图3为待测液中羟基山椒素检测的拉曼光谱图示例。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明的内容，下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，显而易见地，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，不应被解释为本发明的全部实施例。

1、实验样品、主要试剂和仪器

样品：采用6种产地明确(均为当地采收)的干燥花椒作为检测对象，它们分别为：1号样，藤椒(四川广安)；2号样，昭通青花椒(云南昭通)；3号样，藤椒(重庆江津)；4号样，甘肃伏椒(甘肃临夏)；5号样，山东大颗粒(山东莱芜)；6号样，汉源花椒(四川汉源)。

试剂：羟基-α-山椒素标准品购置于成都麦德生科技有限公司，纯度大于98％。实验过程所使用的水均为去离子水，实验试剂均为分析纯。

仪器：便携式拉曼光谱仪(SR-510Pro，上海蔚海光学仪器公司)

实施例1

(1)绘制羟基山椒素标准曲线：

聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料的具体合成过程如下：

制备三角形银纳米粒子(TAg)：向柠檬酸三钠(TSC 2.5nM，5mL)，聚乙二醇(500mg/L，200μL)和硼氢化钠10mM，300μL)的混合溶液中加入5mL 0.5mM硝酸银，并在磁力搅拌下保持3分钟。用种子溶液(200μL)以及抗坏血酸(10mM，75μL)一起生长TAg，并在剧烈搅拌条件下加入硝酸银(0.5mM，3mL)，通过添加500μL 25mM TSC使TAg稳定；

制备rGO-p：将石墨薄片氧化，通过超声处理约30分钟将所得的氧化石墨烯(GO)分散在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中，基于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)/GO的重量比＝5/1，加入PVP并将其溶解在GO的棕色均匀悬浮液(1mg/mL)中，并超声处理2h，得到PVP化学修饰的还原氧化石墨烯(rGO-p)；

制备聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料：将聚苯酚溶解在约60℃的DMF中，形成透明均匀的溶液，然后将其与rGO-p溶液混合，搅拌约2小时后，再加入预先制备的三角形银纳米粒子，超声搅拌后，在27℃水浴中静置3h。通过离心洗涤，干燥得到聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料粉末。离心速度为8000r/min，离心时间为15min。SERS基底材料使用前加入适量超纯水溶解，超声分散(聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料质量比w/v为25％)。

准确称取0.20mg羟基-α-山椒素标准品，用10mL乙酸乙酯溶解，制成标准母液，将标准母液分别用乙酸乙酯稀释，制备一系列不同浓度的羟基-α-山椒素标准溶液，置于4℃下避光保存。取1mL聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料，分别加入1mL不同浓度的标准溶液，再加入0.5mL氯化钠溶液(0.1mol/L)，涡旋混合均匀后得到混合液，倾入石英比色皿中，在400～2500cm^-1范围内利用便携式拉曼光谱仪进行光谱扫描获得拉曼光谱图，并对谱图进行平滑和基线优化，图1为羟基-α-山椒素标准品在785nm激发波长的拉曼光谱图，横坐标是拉曼位移，纵坐标是拉曼信号，其中a代表未经修饰的三角形银纳米粒子未测得明显的羟基-α-山椒素的拉曼信号，b-h分别代表聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料对0.5，1.0，2.0，3.0，4.5，5.0，10mg/L不同浓度羟基-α-山椒素标准品测得的拉曼信号。从图中可以看出，羟基山椒素的特征峰位移出现在1154cm^-1，1178cm^-1，1260cm^-1，1452cm^-1，1632cm^-1，分别归属于C-C伸缩振动，C-H形变振动，CH₃形变振动，C＝O伸缩振动。在羟基山椒素的拉曼特征峰中，1632cm^-1归属于C＝O伸缩振动，且没有重叠峰的影响，因此选用该特征峰作为定量分析谱峰。此外，从图1中可以看出，羟基-α-山椒素标准溶液在未经任何修饰的三角形银纳米基底上基本不产生拉曼信号；而在经过聚苯酚/氧化石墨烯复合材料修饰的三角形银纳米改性基底上则表现出强拉曼信号。测定1632cm^-1±3cm^-1处的拉曼峰强度值I，以I对羟基山椒素浓度绘制标准曲线，标准曲线如图2所示，得到在线性范围为0.1-10mg/L标准曲线的函数关系为：y＝118.43x+5915，相关系数R²＝0.9968，线性关系良好，可用于花椒中总羟基山椒素的定量分析。所述便携式拉曼光谱仪检测工作条件为：激光功率：100mW；积分时间：5s；平均次数：3；平滑参数：2。

(2)待测花椒样品溶液的制备；

除去萎蔫或褐变的干燥花椒果皮，粉碎，过30目筛筛选，得到花椒粉，称取花椒粉为5g于棕色具塞锥形瓶中，加入乙酸乙酯75mL，震荡摇匀，常温条件下进行超声浸提30min，得到粗提液；将粗提液进行离心，2000r/min离心5min，收集上清液；收集滤渣再加入乙酸乙酯25mL，震荡后再次离心，2000r/min下离心5min，收集上清液；如此重复3次，混合3次收集的上清液，并用乙酸乙酯定容至100mL，记录为总体积V₀，摇匀，作为待测液冷藏待用。

(3)待测液的拉曼检测：

取1mL聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料，加入1mL步骤(2)制得的待测液，再加入0.5mL氯化钠溶液(0.1mol/L)，涡旋混合均匀后得到混合液，倾入石英比色皿中，在400～2500cm^-1范围内利用便携式拉曼光谱仪进行光谱扫描获得拉曼光谱图，并对谱图进行平滑和基线优化图3为待测液在785nm激发波长的拉曼光谱图，横坐标是拉曼位移，纵坐标是拉曼峰强度。

(4)定性判断：

以拉曼光谱图中1632cm^-1±3cm^-1处的拉曼吸收作为羟基山椒素的定性特征峰位移，并将其作为是否存在羟基山椒素的判断依据。

(5)定量测定：

基于步骤(4)的检测结果，对步骤(3)得到待测液的拉曼光谱图，以1632cm^-1±3cm^-1处的特征拉曼峰作为定量基准峰，根据羟基-α-山椒素标准曲线和1632cm^-1±3cm^-1处光谱对应峰强度计算出花椒样品中总羟基山椒素的含量X。

X：花椒样品中总羟基山椒素的含量，mg/g

m：根据标准曲线得到的待测液中总羟基山椒素的浓度，mg/L

V₀：待测液体积，L

w：花椒样品质量，g

(6)验证实验

分别对六种待测液采用HPLC-MS法测定并计算花椒样品中的总羟基山椒素含量，以验证本发明方法测定结果的准确性。HPLC-MS检测以羟基-α-山椒素标准品为标样，用乙酸乙酯溶解羟基-α-山椒素配成一系列不同浓度的标准溶液进行液相色谱检测，以羟基-α-山椒素浓度作横坐标，峰面积作纵坐标绘制标准曲线。分别取200μL待测液用乙酸乙酯定容至2mL，吸取1.5mL经0.22μm滤膜过滤后进行液相色谱检测；以保留时间在32-34min的峰为目标峰，根据计算所得的峰面积之和和标准曲线对应的线性回归方程，计算得出待测液中的总羟基山椒素浓度，再根据步骤(5)中所述公式换算得到花椒样品中的总羟基山椒素含量；拉曼检测方法与HPLC-MS测定的总羟基山椒素含量如表1所示。不同花椒样品的HPLC-MS测定值与拉曼光谱法之间的相对误差范围在0.02％-5.87％，均低于8％。结果表明：利用拉曼光谱法能够很好地得到花椒样品中的总羟基山椒素含量，其结果与HPLC-MS的结果高度近似。

表1 HPLC-MS法与拉曼光谱法测定结果比较

(7)羟基山椒素回收率和精密度加标回收结果

选取1、3、6号花椒样品，按实施方式中的步骤(2)，在超声提取过程中分别加入25mg、50mg、75mg羟基-α-山椒素标品，制备未加标待测液和含有羟基-α-山椒素标品的待测液，再按照实施方式中的步骤(3)(4)(5)检测并计算出未加标及加标待测液中的总羟基山椒素浓度，结果如表2所示：

表2加标回收实验结果

由表2结果可知，回收率为88.60％到111.20％之间，相对标准偏差均低于5％，数据结果表明本发明的检测方法可靠。

综上，本发明基于SERS技术的羟基山椒素快速检测方法，属于食品快速检测技术领域。首先制备聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料，作为SERS基底材料，与羟基山椒素分子相互作用后可以显著增强羟基山椒素原有的拉曼信号强度，进一步采用便携式拉曼光谱仪采集拉曼光谱，可对溶液中的羟基山椒素进行定性判别和定量测定。本方法操作简单，检测速度快，整个检测过程可在1分钟内完成，适用于现场的在线检测，可以实现花椒中羟基山椒素的快速准确检测，基本满足市面上花椒的检测需求。

说明：以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；因此，尽管本说明书参照上述的各个实施例对本发明已进行了详细的说明，但是本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离本发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (9)

1.基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)绘制羟基山椒素标准曲线：

首先制备不同浓度的羟基-α-山椒素标准溶液，然后分别取不同浓度的羟基-α-山椒素标准溶液，体积均相同，记为V₁；然后取与羟基-α-山椒素标准溶液相同数量的SERS基底材料的悬液，体积均相同，记为V₂；再取相同数量的无机盐凝聚剂，体积均相同，记为V₃；

最后将羟基-α-山椒素标准溶液、SERS基底材料的悬液和无机盐凝聚剂分别混合，涡旋混合均匀，利用拉曼光谱仪进行光谱扫描获得拉曼光谱图，并对其进行谱峰归属和解析；拉曼光谱图进行预处理后，以1620～1650cm^-1处的特征拉曼峰作为定量基准峰，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值I，以羟基-α-山椒素标准溶液浓度与其相对应的拉曼峰强度值I绘制标准曲线；

(2)待测样品溶液的制备：

以花椒为原料，除去萎蔫或褐变的干燥花椒果皮，粉碎，经筛网筛选，得到花椒粉；称取花椒粉，质量为w，加入乙酸乙酯A，震荡摇匀，常温条件下进行超声浸提，得到粗提液；将粗提液进行离心，收集上清液，过滤后得到待测液，记录体积V₀，冷藏待用；整个步骤在避光条件下操作；

(3)待测液的拉曼检测：

取V₁体积步骤(2)制备得到的待测液加入到含有SERS基底材料的悬液中，含有SERS基底材料的悬液的体积为V₂，再加入无机盐凝聚剂，无机盐凝聚剂的体积为V₃，涡旋混合均匀，利用拉曼光谱仪进行光谱扫描获得拉曼光谱图；

(4)定性判断：

对步骤(3)得到的拉曼光谱图进行预处理后，当谱图中1140～1190cm^-1，1250～1270cm^-1，1440～1470cm^-1，1620～1650cm^-1处存在特征拉曼峰时，则待测液中含有羟基山椒素；

(5)定量测定：

在步骤(4)检测结果的基础上，根据步骤(3)得到的待测液的拉曼光谱图，以1620～1650cm^-1处的特征拉曼峰作为定量基准峰，测定定量基准峰位移处的拉曼峰强度值，并根据步骤(1)得到的羟基-α-山椒素标准曲线得到的待测液中总羟基山椒素的浓度，记为m，进一步根据公式计算出花椒样品中总羟基山椒素的含量X。

X：花椒样品中总羟基山椒素的含量，mg/g；

m：根据标准曲线得到的待测液中总羟基山椒素的浓度，mg/L；

V₀：待测液体积，L；

w：花椒样品质量，g。

2.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述羟基-α-山椒素标准溶液浓度范围为0-20mg/L，每个浓度配制3份平行样本。

3.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述SERS基底材料为聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料；所述SERS基底材料的悬液为聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料与超纯水的混合物；悬液中聚苯酚/氧化石墨烯三角形银纳米复合材料质量比w/v为10％-40％；

4.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述无机凝聚剂为钠盐、钾盐、镁盐和钙盐的一种或多种混合的溶液；所述无机凝聚剂的浓度范围为10mmol/L至其饱和浓度。

5.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，步骤(1)和(4)中，所述预处理为利用平滑和基线优化对谱图进行改善的数据处理方法。

6.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，步骤(1)和(3)中，所述待测液V₁、SERS基底材料悬液V₂和无机凝聚剂V₃的体积为1:0.5-5:0-2。

7.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，步骤(2)中，所述筛网的目数为20-40目；所述花椒粉末与乙酸乙酯A的用量比为(1-25g)：(25-100)mL；所述超声浸提时间为5-40min。

8.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述离心条件为：转速1500-3000r/min，时间为3-10min。

9.根据权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的羟基山椒素快速检测方法，其特征在于，步骤(3)中，所述仪器参数条件如下：拉曼光谱仪发射激光波长为785nm，固定激光功率为50-200mW，扫描范围为200-3500cm^-1，积分时间为1-10s，每个样扫描6次取平均值。

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