CN111218511B - Mfsd4a-as1在甲状腺癌淋巴结转移中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明首次发现MFSD4A‑AS1在伴有淋巴结转移的PTC组织中显著高表达，且在伴有淋巴结转移的PTMC组织中也高表达，而沉默MFSD4A‑AS1能抑制甲状腺癌细胞体内发生淋巴结转移。基于这些结果，本发明提出检测MFSD4A‑AS1可用于诊断是否发生PTC淋巴结转移或PTMC淋巴结转移，并且沉默MFSD4A‑AS1能够治疗甲状腺癌淋巴结转移的方案，为甲状腺癌淋巴结转移的早诊和治疗提供新的策略。

Description

MFSD4A-AS1在甲状腺癌淋巴结转移中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，更具体地涉及MFSD4A-AS1在甲状腺癌淋巴结转移中的应用。
背景技术
甲状腺癌是内分泌系统中最常见的肿瘤类型。甲状腺癌的发病率近年来也呈现显著增涨的趋势：2000-2009年间，美国甲状腺癌发病年增长率(Annual percentage change,APC)高达6.6％，居所有肿瘤类型的首位。随着老龄化趋势的显著增涨以及营养结构改变，甲状腺癌的发生率在我国近年来也呈现显著增长的趋势，APC高达20.1％，位居各类肿瘤发病年增长率的首位。根据病理类型区分，甲状腺癌主要分为甲状腺乳头状癌(papillarythyroid cancer,PTC)、未分化甲状腺癌(anaplastic thyroid cancer,ATC)、甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer,MTC)和甲状腺滤泡癌(follicular thyroid cancer,FTC)。PTC是最常见的甲状腺癌病理类型，发生率高达80-90％。随着医疗技术水平的不断提高，PTC患者的5年生存期超过95％(3)。然而，术后淋巴结转移仍是造成PTC肿瘤复发，导致患者死亡率增加的主要因素。特别是在甲状腺微小乳头状癌中(根据WHO分类，将肿瘤直径小于等于1cm的PTC称之为papillary thyroid microcarcinoma(PTMC))，多数患者以临床密切随访为主要手段，并不需要手术治疗。然而，PTMC初诊患者若伴随着淋巴结转移的发生，PTMC的治疗策略多以手术治疗加淋巴结清扫为主，且PTMC患者的肿瘤复发率显著增加，严重地影响患者的生存质量。因此，寻找和发现促进PTMC淋巴结转移的关键功能分子，阐明其在PTMC淋巴结转移中的临床意义及其潜在的功能及调控机制，不但有助于指导PTMC患者的治疗策略，也为临床PTMC早期诊断及治疗提供重要的科学根据与指导，具有重大的科学意义。
越来越多的研究证实，lncRNAs的异常表达在肿瘤发生发展以及复发、转移中的作用受到越来越多的关注。根据核苷酸序列长度的不同，长度大于200个核苷酸的称为LncRNA。LncRNA一方面作为蛋白连接分子，促进蛋白与靶基因启动子之间，以及蛋白与蛋白之间的相互作用，参与转录水平及翻译水平的调控；另一方面，lncRNAs也可作为内源性竞争RNA(Competing endogenous RNA：ceRNA)，吸附并解除miRNAs对其下游靶基因的抑制作用，参与转录后表观遗传水平的调控，从而实现多层面参与基因表达的调控。至今未见任何关于MFSD4A-AS1在肿瘤领域中临床意义、生物学功能相关的研究报道。
发明内容
本发明提供了MFSD4A-AS1在甲状腺癌淋巴结转移中的应用。
本发明的技术方案是：
检测MFSD4A-AS1水平的试剂在制备诊断甲状腺乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具的应用。
进一步的，检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的生物样本，优选地，检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的甲状腺乳头状癌组织样本。
进一步的，所述检测MFSD4A-AS1水平的试剂包括与MFSD4A-AS1杂交的探针或特异性检测MFSD4A-AS1的引物。
检测MFSD4A-AS1水平的试剂在制备诊断甲状腺微小乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具的应用。
进一步的，检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的生物样本，优选地，检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的甲状腺微小乳头状癌组织样本。
进一步的，所述检测MFSD4A-AS1水平的试剂包括与MFSD4A-AS1杂交的探针或特异性检测MFSD4A-AS1的引物。
沉默MFSD4A-AS1的物质在制备预防或治疗甲状腺癌淋巴结转移的药物的应用。
进一步的，所述甲状腺癌为甲状腺乳头状癌。
进一步的，所述药物能靶向促进PPARα信号通路；和/或抑制NF-κB信号通路。
进一步的，所述沉默的方式包括RNAi、反义寡核苷酸、CRISPRi或敲除。
本发明通过对不同分群的临床样本进行mRNA表达谱分析，主成分因子、差异表达分析等，并结合大量的实验摸索，最终意外地发现：(1)MFSD4A-AS1在伴有淋巴结转移的PTC组织中显著高表达；(2)MFSD4A-AS1在伴有淋巴结转移的PTMC组织中的表达水平显著高于无淋巴结转移的PTMC组织与癌旁组织；(3)沉默MFSD4A-AS1能抑制甲状腺癌细胞体内发生淋巴结转移。这些结果都能证明：检测MFSD4A-AS1可用于诊断是否发生PTC淋巴结转移或PTMC淋巴结转移，并且沉默MFSD4A-AS1能够治疗甲状腺癌淋巴结转移。
在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂在制备诊断甲状腺乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具的应用。在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的生物样本。在一些技术方案中，生物样本包括肿瘤样本和非肿瘤样本，其中非肿瘤样本可用于作为测试对照。在一些技术方案中，肿瘤样本包括肿瘤组织、肿瘤循环细胞、或含肿瘤循环细胞的血液。在一些技术方案中，肿瘤样本包括甲状腺乳头状癌组织。在一些技术方案中，非肿瘤样本包括非肿瘤组织、非肿瘤细胞。在一些技术方案中，非肿瘤样本包括良性甲状腺上皮细胞。在一些技术方案中，诊断甲状腺乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具是通过对受试者进行MFSD4A-AS1检测，例如对甲状腺乳头状癌患者的甲状腺乳头状癌组织样本进行MFSD4A-AS1检测，将测得的MFSD4A-AS1水平与参考值比较，若受试者的MFSD4A-AS1水平高于参考值，则诊断受试者发生甲状腺乳头状癌淋巴结转移。在一些技术方案中，参考值可以基于大量非淋巴结转移的甲状腺乳头状癌患者的肿瘤组织MFSD4A-AS1水平统计获得的可区分是否发生淋巴结转移的阈值。本领域可以确定非淋巴结转移的甲状腺乳头状癌患者应当包括未发生任何转移的甲状腺乳头状癌群体以及发生转移但转移部位不是淋巴结的甲状腺乳头状癌群体。在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂为与MFSD4A-AS1杂交的探针，探针的形式包括但不限于单一探针、微阵列。在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂为特异性检测MFSD4A-AS1的引物，引物的形式包括但不限于单链核酸、带二级结构(如环、茎)核酸、修饰的核酸(如锁核酸修饰)。
在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂在制备诊断甲状腺微小乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具的应用。在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的生物样本。在一些技术方案中，生物样本包括肿瘤样本和非肿瘤样本，其中非肿瘤样本可用于作为测试对照。在一些技术方案中，肿瘤样本包括肿瘤组织、肿瘤循环细胞、或含肿瘤循环细胞的血液。在一些技术方案中，肿瘤样本包括甲状腺乳头状癌组织。在一些技术方案中，非肿瘤样本包括非肿瘤组织、非肿瘤细胞。在一些技术方案中，非肿瘤样本包括良性甲状腺上皮细胞。在一些技术方案中，诊断甲状腺微小乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具是通过对受试者进行MFSD4A-AS1检测，例如对甲状腺微小乳头状癌患者的甲状腺微小乳头状癌组织样本进行MFSD4A-AS1检测，将测得的MFSD4A-AS1水平与参考值比较，若受试者的MFSD4A-AS1水平高于参考值，则诊断受试者发生甲状腺微小乳头状癌淋巴结转移。在一些技术方案中，参考值可以基于大量非淋巴结转移的甲状腺微小乳头状癌患者的肿瘤组织MFSD4A-AS1水平统计获得的可区分是否发生淋巴结转移的阈值。本领域可以确定非淋巴结转移的甲状腺微小乳头状癌患者应当包括未发生任何转移的甲状腺微小乳头状癌群体以及发生转移但转移部位不是淋巴结的甲状腺微小乳头状癌群体。在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂为与MFSD4A-AS1杂交的探针，探针的形式包括但不限于单一探针、微阵列。在一些技术方案中，检测MFSD4A-AS1水平的试剂为特异性检测MFSD4A-AS1的引物，引物的形式包括但不限于单链核酸、带二级结构(如环、茎)核酸、修饰的核酸(如锁核酸修饰)。
在一些技术方案中，沉默MFSD4A-AS1的物质在制备预防或治疗甲状腺癌淋巴结转移的药物的应用。在一些技术方案中，甲状腺癌为甲状腺乳头状癌。在一些技术方案中，所所述药物能靶向促进PPARα信号通路；和/或抑制NF-κB信号通路。在一些技术方案中，所述沉默的方式包括RNAi、反义寡核苷酸、CRISPRi或敲除。其中，RNAi是RNA干扰技术，通常包括siRNA和shRNA两种手段，通过与Dicer酶形成的沉默复合物(RISC)介导的RNA降降解。反义寡核苷酸(ASO)是反义RNA、DNA的杂合物，胞浆定位的lncRNA由RNA-RNA形成的二元复合物以RISC的形式被Dicer酶降解。CRISPRi是转录抑制，CRISPRi系统是在DNA水平实现基因的转录抑制，dCas9(失去切割活性的cas9)与转录抑制域KRAB融合，表达的融合蛋白在gRNA介导下结合到启动子区，并通过KRAB抑制PolII与启动子的结合，从而抑制基因的转录。敲除是通过将基因组中lncRNA基因敲除，实现沉默lncRNA的目的，传统的有CRISPR/Cas9敲除系统。
关于无/非淋巴结转移的解释，是指甲状腺癌患者不存在淋巴结转移，至于是否还有其他转移(如骨转移、肺转移等)都不考虑，换言之，无淋巴结转移的患者通常包括未发生任何转移的患者以及发生其他非淋巴结转移的患者。
本发明的有益效果是：
本发明首次发现MFSD4A-AS1在伴有淋巴结转移的PTC组织中显著高表达，且在伴有淋巴结转移的PTMC组织中也高表达，而沉默MFSD4A-AS1能抑制甲状腺癌细胞体内发生淋巴结转移。基于这些结果，本发明提出检测MFSD4A-AS1可用于诊断是否发生PTC淋巴结转移或PTMC淋巴结转移，并且沉默MFSD4A-AS1能够治疗甲状腺癌淋巴结转移的方案，为甲状腺癌淋巴结转移的早诊和治疗提供新的策略。
附图说明
图1：不同甲状腺乳头状癌组织的MFSD4A-AS1相对表达量；
图2：不同甲状腺微小乳头状癌组织的MFSD4A-AS1相对表达量；
图3：上调或沉默MFSD4A-AS1的B-CPAP细胞或K1细胞的构建情况；
图4：上调或沉默MFSD4A-AS1的K1细胞构建的体内肿瘤模型情况，其中，图A为移植瘤的大小，图B为移植瘤的重量，图C为移植瘤的体积；图D为移植瘤组织中的脉管数量；图E为腹股沟淋巴结肿瘤数；
图5：上调或沉默MFSD4A-AS1的B-CPAP细胞或K1细胞中的信号通路的研究；图A为信号通路荧光素酶报告基因筛选体系结果图；图B为PPARα信号通路和NF-κB信号通路核蛋白的表达。
具体实施方式
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
下述实验例中所使用的实验方法或实验条件，如无特殊说明，均按常规方法或厂家说明书进行，下述实验例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
细胞培养
乳头状甲状腺癌细胞系，包括K1，B-CPAP，均购买自中科院上海细胞库。所有细胞均培养于二氧化碳浓度为5％，温度为37℃的细胞培养箱中。细胞生长于25cm2培养瓶中，加入5毫升RPMI 1640培养基(Invitrogen,USA)，培养基中加入终浓度为10％的胎牛血清(FBS,Life Technologies)。观察细胞状态及细胞密度，每隔1-2天更换培养基，待细胞密度长至80％时适宜实验使用。
组织标本和RNA提取
20例配对的甲状腺癌及其癌旁对照组织(ANT)、28例PTMC无淋巴结转移(pT1N0)、37例PTMC有淋巴结转移(pT1N1)和11例直径大于1cm的PTC伴有淋巴结转移组织(pT2N1)均来自吉林大学中日联谊医院的手术样品。所有标本的使用及其临床数据的采集均征得患者的知情同意，并通过了林大学中日联谊医院学术伦理委员会的审核与批准。取少量标本组织放入1.5ml无核酸离心管中(Eppendorf)。所有组织浸泡在消化缓冲液中(20mM Tris-HCl,10mM EDTA,1％SDS)，缓冲液中需加入蛋白酶K(Merck)。为使组织充分消化，将组织置于55℃培养箱孵育过夜。随后，用Trizol裂解组织，并按照说明书提取RNA。RNA需用无RNA酶蒸馏水重悬。用光度适应计定量备用。
实时定量PCR
使用Trizol试剂提取RNA，将2μg RNA进行逆转录反应，反应完成后将cDNA保存于-20℃备用。按照检测试剂盒说明书准备DNA扩增所需要的SYBR Green mix(Roche)，及相关引物(委托广州市锐博生物科技有限公司设计和合成)。在Bio-rad实时定量PCR仪，根据试剂盒说明书要求设置扩增反应条件，进行40个循环反应。GAPDH基因作为内参，所有样本至少设置3个副孔。目的基因DNA相对表达量通过Schmittgen and Livak 2-ΔΔCt公式计算得出。
质粒构建和转染
MFSD4A-AS1(HGNC:27632)的基因从基因组DNA中扩增得到，并构建进pMSCV-puro逆转录病毒载体(Clontech)中。siRNA和质粒的转染均使用Lipofectamine 3000脂质体转染系统(Life Technologies)，操作按试剂说明书操作。具体操作如下：转染前，将生长于T25培养瓶中的细胞用胰蛋白酶消化并计数细胞。按照2×105密度将细胞接种于六孔板，培养18～24小时待细胞完全贴壁后进行转染。根据Lipofectamine 3000转染试剂盒(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)说明书按步骤进行转染：准备两个高压灭菌1ml离心管，分别加250μl Opti-Mem medium(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)入离心管，标记为T1和T2。T1加入5μl lipofectamine 3000，室温下静置5分钟；T2加入1μl浓度为500mg/ml MFSD4A-AS1质粒，室温下静置5分钟。5分钟后，将T1中的液体小心移入T2，轻弹T2管壁使液体混匀。将混匀后的T2室温下静置20分钟使lipofectamine 3000和质粒或抑制剂充分结合以达到最佳转染效果。用1.5ml无血清培养基替换六孔板细胞中培养基，并将细胞放回培养箱。20分钟后，将T2中混合液体小心加入细胞并轻摇六孔板使与lipofectamine 3000充分结合的质粒与细胞充分接触。将细胞放入培养箱中培养4-6小时后移去六孔板中的培养基，并用完全培养基(Ham's F-12medium，10％胎牛血清)替换，每孔2ml。继续将细胞置于培养箱培养48～36小时备用。
Western blot
预冷的PBS冲洗培养于六孔板中的细胞，用蛋白提取液(62.5mmol/l Tris-HCl(pH6.8),2％SDS,10％glycerol和5％β-mercaptoethanol)收获细胞蛋白，细胞密度以60～70％为宜。该操作在4℃冷室进行或将六孔板置于冰上操作。分别配制分离胶和积层胶，每条泳道中加入等量样品蛋白并做好记录。SDS聚丙烯酰胺电泳跑胶1小时，恒压100V。然后转膜1小时，恒流100mA，将蛋白转移至PVDF膜上(Millipore)。室温下摇床上5％脱脂牛奶封闭1小时。用5％脱脂牛奶按照抗体说明书分别稀释一抗和二抗。一抗4℃孵育过夜。次日用TBST洗膜三次，每次10分钟。二抗室温下孵育1小时，后用TBST洗膜三次，每次10分钟。随后压片，曝光显影，所用抗体：抗兔PPARα、p65、p84。
裸鼠皮下移植肿瘤实验模型
动物实验均通过了吉林大学实验动物伦理委员会的审核和批准。将6周龄的BALB/c-nu裸鼠随机分为3组(每组6只裸鼠)，将1×106个细胞分别接种在裸鼠背部的皮下组织中。同时使用IVIS活体成像系统观察(IVIS imagining system,Caliper)肿瘤形成的大小。待肿瘤生长4-5周，安乐死动物并取出肿瘤。肿瘤体积用游标卡尺测量，体积用(L×W2)/2计算，同时称量后保存在液氮中。
免疫组化染色
先将组织切片65℃热处理1h后，置二甲苯脱蜡2次每次5min；将切片依次用100％乙醇、95％乙醇、85％乙醇、75％乙醇和纯水水化，每次1min；取出后滴加3％过氧化氢室温孵育10min灭活内源性过氧化物酶；将切片置于盛有EDTA pH9.0修复液的容器中，高压锅高压修复10min；取出切片后用免疫组化笔包围组织并用PBS缓冲液漂洗3min，甩干后滴加山羊血清封闭液(试剂A)室温孵育20min；去除试剂A滴加用抗体稀释液稀释好的CD31或Podoplanin一抗工作液4℃孵育过夜；去除一抗后用PBST缓冲液漂洗3次每次5min，甩干后滴入生物素标记的二抗工作液(试剂B)，室温孵育20min；弃去试剂B后用PBST缓冲液漂洗3次每次5min，甩干后滴加辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素工作液(试剂C)，室温孵育10min；弃去试剂C后用PBST缓冲液漂洗3次每次5min，甩干后滴加DAB显色液，室温孵育1min～5min；将切片浸入自来水中终止显色，苏木素染液复染1min，自来水清洗后用盐酸酒精分化5s；将切片用75％乙醇、85％乙醇、95％乙醇、100％乙醇梯度脱水，每次3min，再置37℃干燥箱处理30min，环保树脂封片剂封片。
信号通路荧光素酶报告基因筛选体系
信号通路荧光素酶报告基因筛选体系购买自clontech。荧光素酶基因检测实验在甲状腺癌细胞中进行。将信号通路荧光素酶报告基因筛选体系和MFSD4A-AS1沉默或过表达的质粒分别导入荧光素酶报告系统pGL3质粒(Promega,Madison,Wis.,USA)KpnI/HindIII位点，培养48小时。48小时后收获并裂解细胞为荧光检测备用。具体步骤按照荧光素酶基因检测试剂盒(Promega)手册逐步进行。实验组与对照组分别至少设置三个副孔。
统计学方法
每组实验重复3次以上，所得数据用Excel 2010、SPSS 21和GraphPad 5进行统计学的分析；重复试验的计量资料用均值±标准差表示，动物实验等单次实验的计量资料用中位值±四分位差(median±IQR)表示；两组间采用T检验，多组间比较采用单因素方差分析。
实验例1、MFSD4A-AS1可用于诊断PTC是否发生淋巴结转移
针对收集的7例癌旁对照组织(ANT)与24例无远处实质器官转移的PTC冰冻组织进行实时定量PCR检测，其中PTC组织中包括了5例PTMC无淋巴结转移(pT1N0)、8例PTMC有淋巴结转移(pT1N1)和11例直径大于1cm的PTC伴有淋巴结转移(pT2N1)。结果如图1所示，MFSD4A-AS1在伴有淋巴结转移的PTC组织(包括PT1N1组和PT2N1组)中显著高表达，可见，MFSD4A-AS1可用于诊断PTC是否发生淋巴结转移。
实验例2、MFSD4A-AS1可用于诊断PTMC是否发生淋巴结转移
针对收集的20例癌旁对照组织(ANT)与65例无远处实质器官转移的PTMC冰冻组织进行实时定量PCR检测，其中PTMC组织中包括了28例PTMC无淋巴结转移(pT1N0)、37例PTMC有淋巴结转移(pT1N1)。结果图2所示，MFSD4A-AS1在癌旁组织与无淋巴结转移的PTMC组织之间并无统计学表达差异；重要的是，MFSD4A-AS1在伴有淋巴结转移的PTMC组织中的表达水平显著高于无淋巴结转移的PTMC组织与癌旁组织，可见MFSD4A-AS1可用于诊断PTMC是否发生淋巴结转移。
实验例3、沉默MFSD4A-AS1能抑制甲状腺癌细胞体内发生淋巴结转移
在B-CPAP和K1甲状腺癌细胞中，利用慢病毒构建了稳定表达MFSD4A-AS1及沉默MFSD4A-AS1的细胞模型，如图3所示，与各自的对照vector相比，稳定表达MFSD4A-AS1的细胞能够上调MFSD4A-AS1，而沉默MFSD4A-AS1(图示sh#1)的细胞能够下调MFSD4A-AS1。我们利用裸鼠皮下移植瘤模型，检测了K1细胞的体内成瘤情况，结果如图4所示，MFSD4A-AS1的过表达(图示MFSD4A-AS1，下同)与沉默(图示sh#1，下同)并不显著影响移植瘤的大小(图4A)，移植瘤的重量及生长曲线亦如此(图4B-C)。重点分析切片中脉管的密度，通过CD31及Podoplanin的免疫组化染色，我们能观察到单位面积的移植瘤切片中，过表达MFSD4A-AS1的脉管数量最多，而沉默则显著增加移植瘤组织中的脉管数量(图4D)。此外，腹股沟淋巴结的病理分析发现，过表达MFSD4A-AS1能增加淋巴结中肿瘤细胞数，沉默则减少(图4E)。上述结果表明，沉默MFSD4A-AS1能促进甲状腺癌细胞体内发生淋巴结转移。
实验例4、MFSD4A-AS1能抑制PPARα信号而促进NF-κB信号通路
信号通路荧光素酶报告基因实验结果如图5所示，过表达MFSD4A-AS1能抑制PPARα信号通路(PPARαpathway)并激活NF-κB信号通路(NF-κB pathway)，沉默则作用相反(图5A)；进一步，利用免疫印迹检测了核内PPARα和p65的蛋白水平，可明确过表达MFSD4A-AS1能抑制核内PPARα的蛋白水平并增加p65的入核，沉默则作用相反(图5B)，表明过表达MFSD4A-AS1能抑制PPARα而促进NF-κB信号通路，沉默MFSD4A-AS1能促进PPARα而抑制NF-κB信号通路。

Claims (10)

1.检测MFSD4A-AS1水平的试剂在制备诊断甲状腺乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的生物样本。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的甲状腺乳头状癌组织样本。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测MFSD4A-AS1水平的试剂包括与MFSD4A-AS1杂交的探针或特异性检测MFSD4A-AS1的引物。
5.检测MFSD4A-AS1水平的试剂在制备诊断甲状腺微小乳头状癌患者是否发生淋巴结转移的工具的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的生物样本。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：检测MFSD4A-AS1水平的试剂用于检测所述患者的甲状腺微小乳头状癌组织样本。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述检测MFSD4A-AS1水平的试剂包括与MFSD4A-AS1杂交的探针或特异性检测MFSD4A-AS1的引物。
9.沉默MFSD4A-AS1的物质在制备预防或治疗甲状腺癌淋巴结转移的药物的应用，所述甲状腺癌为甲状腺乳头状癌，所述沉默的方式选自RNAi、反义寡核苷酸、CRISPRi或敲除。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述药物能靶向促进PPARα信号通路；和/或抑制NF-κB信号通路。
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