CN111218392B - 一种生化反应试管及其使用方法和基因扩增试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生化反应试管及其使用方法和基因扩增试剂盒,生化反应试管包括管部和盖部,所述管部包括:管体,所述管体包括有第一腔室和第二腔室,所述第二腔室的底部与所述第一腔室的底部具有一定距离;限位单元,所述限位单元设置于所述管体的外侧;其中,当所述盖部封闭所述管部时,所述第一腔室的顶部与所述第二腔室的顶部连通。其优点在于,通过设置第一腔室和第二腔室来放置不同的反应组分及溶液,而且第一腔室和第二腔室的高低位置不同;在实际使用时,仅第一腔室和第二腔室中的一个被独立加热完成生化反应另一个不被加热;将试管垂直翻转180°并进行振荡操作时,第一腔室和第二腔室内的溶液混合并进行进一步反应,以消除有害结果。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域,尤其涉及一种生化反应试管及其使用方法和基因扩增试剂盒。
背景技术
在常规的小型生化反应中,一般是单个的试管内设置一个腔体并放置一种溶液,当需要多个溶液参与反应时,将不同试管的溶液吸取后加入其它反应试管。当存在一些特殊原因如试剂污染时,可在试管内设置一个挡板将试管分隔为两部分,分别将A/B两个溶液放置在同一个试管的不同腔体内,在不开盖的情况下将A/B溶液进行混合反应,避免了试剂外泄污染。
核酸扩增如PCR反应的最大特点是具有较大的扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,当实验室样本和扩增目标经常出现大量相同的情况时,核酸气溶胶污染在实验区域内不断累积,污染风险不断增加,假阳性的发生频率也会越来越高。PCR技术的高扩增效率产生的核酸气溶胶污染,会导致检测结果的假阳性。假阳性意味着实验不可信,并且直接造成实验室经济损失。更严重的是,如果形成气溶胶污染,则可引起整个PCR实验室的污染,甚至要关闭实验室。
PCR扩增产物污染是最主要最常见的污染。极微量的PCR产物污染就可造成假阳性。最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。气溶胶是悬浮于气体介质中粒径一般为0.001μm~1000μm的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态散体系。核酸气溶胶即DNA/RNA气溶胶,是分散并悬浮在气体介质中的核酸聚合物,广泛存在于实验室桌面、仪器、耗材以及空气中,据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝。核酸气溶胶与PCR过程相伴相生,操作时空气与液体面摩擦,离心机离心,剧烈地摇动反应管,反应管开盖,吸样时及移液器的反复吸样,污染物的外泄等途径,都会产生核酸气溶胶。
除了PCR扩增方法外,目前核酸恒温扩增方法也逐步进入实验室。目前主要包括以下几种:环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、切口酶核酸恒温扩增(nicking enzyme mediated amplification,NEMA)、链替代扩增(stranddisplacement amplification,SDA)、滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)、依赖解旋酶的恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HAD)、转录依赖的扩增系统(transcription-based amplification system,TAS)、依赖核酸序列的扩增(NASBA)又称自主序列复制系统(self-sustained sequence replication,3SR)、QB复制酶扩增(Q-beta replicase-amplified assay)等。恒温扩增摆脱了热循环的限制,使其应用范围大大增加,而且目前应用的恒温扩增方法都有较高的敏感性和特异性,在核酸检测中应用范围非常广。但敏感性高会带来扩增物污染和假阳性的问题,从而导致反应结果判读不准确。
将核酸反应产物与样品来源的核酸进行差异化,从核酸反应试剂组分中来解决污染问题是很多试剂厂家在努力的方向,其中UNG酶的预防作用日益受到重视和肯定。在PCR产物或引物中用dU代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育,因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键,可除去dU而阻止Taq-DNA聚合酶的延伸,从而失去被再扩增的能力。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶,而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。在扩增反应中用dUTP代替dTTP,使产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前,用UNG处理PCR混合液即可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性一步便可被灭活,因此不会影响含dU的新的PCR产物。但是由于酶的反应效率有限而消化反应时间往往只有5分钟,这种方式一般只能用UNG处理PCR混合液中的轻度PCR产物污染,不能彻底解决问题。
合成引物时以dU代dT,这样PCR产物中仅5ˊ端带dU。UNG处理后,引物失去了结合位点而不能扩增。对长片段(1-2kb以上)的扩增用dUTP法效率较用dTTP低,而用dU法就可克服这一缺点。dU引物最好将dU设计在3ˊ端或近ˊ端。该法仅能用于引物以外试剂处理。
目前的UNG酶污染方法只是关注了在核酸扩增反应前对扩增产物的酶解处理,没有考虑过在核酸扩增反应后直接将扩增产物进行酶解处理。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足,提供一种生化反应试管及其使用方法和基因扩增试剂盒。
为实现上述目的,本发明采取的技术方案是:
本发明的第一个方面,提供一种生化反应试管,包括管部和盖部,所述管部包括:
管体,所述管体包括有第一腔室和第二腔室,所述第二腔室的底部与所述第一腔室的底部具有一定距离;
限位单元,所述限位单元设置于所述管体的外侧;
其中,当所述盖部封闭所述管部时,所述第一腔室的顶部与所述第二腔室的顶部连通。
优选地,所述第二腔室的底部与所述第一腔室的底部之间的距离至少为3mm。
优选地,所述第二腔室位于所述第一腔室的外侧;和/或,
所述第二腔室位于所述第一腔室的内侧。
优选地,所述第二腔室的轴线与所述第一腔室的轴线共线或平行。
优选地,所述第二腔室的底部与所述限位单元的顶部处于同一水平面;或,
所述第二腔室的底部位于所述限位单元的顶部的上侧。
优选地,所述限位单元至少部分地环绕所述管体的外侧设置。
优选地,当所述限位单元被生化反应仪器进行接触式传导加热时,所述第一腔室或所述第二腔室接触所述生化反应仪器的热源。
优选地,所述管部还包括:
第一嵌合部件,所述第一嵌合部件设置在所述管体的内壁的圆周面;
所述盖部包括:
第二嵌合部件,所述第二嵌合部件设置在所述盖部的外壁的圆周面,所述第二嵌合部件与所述第一嵌合部件连接,以使所述盖部封闭所述管部。
优选地,所述第一嵌合部件为若干个,若干所述第一嵌合部件沿所述管部的轴向设置;
所述第二嵌合部件为若干个,若干所述第二嵌合部件沿所述盖部的轴向设置;
其中,位于所述盖部的最下侧的所述第二嵌合部件至少与位于所述管部的最上侧的所述第一嵌合部件连接。
优选地,还包括:
连接部件,所述连接部件的两端分别与所述管部和所述盖部连接。
优选地,所述盖部包括:
辅助部件,所述辅助部件设置在所述盖部的外壁;
其中,当所述盖部封闭所述管部时,所述辅助部件凸出于所述管部设置。
优选地,所述辅助部件的厚度小于所述的盖部的顶部的厚度;或
所述辅助部件的厚度小于等于0.4mm。
优选地,所述盖部包括:
中空部件,所述中空部件贯穿地设置在所述盖部的内部,所述中空部件包括:
第一开口元件,所述第一开口元件设置于所述中空部件的上端;
第二开口元件,所述第二开口元件设置于所述中空部件的下端;
密封部件,所述密封部件封闭所述中空部件,所述密封部件包括:
第一密封元件,所述第一密封元件封闭所述第一开口元件;
第二密封元件,所述第二密封元件封闭所述第二开口元件。
优选地,当所述密封部件封闭所述中空部件时,所述第一密封元件与所述第二密封元件不接触;或
所述第一密封元件破坏所述第二密封元件。
优选地,所述中空部件包括:
第三嵌合部件,所述第三嵌合部件设置在述所述中空部件的内壁的圆周面;
所述密封部件包括:
第四嵌合部件,所述第四嵌合部件设置在所述第一密封元件的外壁的圆周面,所述第三嵌合部件与所述第四嵌合部件连接,以使所述第一密封元件封闭所述第一开口元件。
优选地,所述第一腔室的底部呈柱形体结构或锥形体结构。
优选地,所述柱形体结构或锥形体结构的顶部的内径为1.5~8mm。
优选地,所述第二腔室的顶部的内径为5~15mm。
优选地,还包括:
金属温浴仪器,用于对所述生化反应试管内的生化反应溶液进行接触式传导加热。
优选地,还包括:
生化反应光学检测仪器,用于对所述生化反应试管进行接触式传导加热时采集所述生化反应试管内的生化反应溶液的光学信号。
本发明的第二个方面,提供一种基因扩增试剂盒,包括:
如上所述的生化反应试管;
核酸扩增试剂;
功能性反应试剂;
其中,所述核酸扩增试剂和所述酶溶液中的一个放置于所述第一腔室的内部,所述核酸扩增试剂和所述功能性反应试剂中的另一个放置于所述第二腔室的内部;
在所述盖部封闭所述管部的情况下:
其中,在所述盖部封闭所述管部时:
当所述核酸扩增试剂接触热源完成扩增反应后,所述功能性反应试剂的反应活性保持良好;
当所述生化反应试管垂直翻转180°后,所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
优选地,所述核酸扩增试剂包括dUTP,所述功能性反应试剂为含有UNG酶的溶液;或
所述核酸扩增试剂包括含核酸内切酶对应内切序列的核酸扩增引物,所述功能性反应试剂为含有内切酶的溶液;或
所述核酸扩增试剂包括核酸扩增引物,所述功能性反应试剂为含有核酸酶的溶液。
本发明的第三个方面,提供一种生化反应试管的使用方法,包括:
将核酸扩增试剂和功能性反应试剂中的一个放置于所述第一腔室内,将核酸扩增试剂和功能性反应试剂中的另一个放置于所述第二腔室内;
将所述生化反应试管插入扩增仪器进行温度控制,仅使放置有所述核酸扩增试剂的所述第一腔室或所述第二腔室进行接触式传导加热;
当核酸扩增反应结束后,使所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
优选地,当核酸扩增反应结束后,将所述生化反应试管从所述扩增仪器移除,并将所述生化反应试管垂直翻转180°使所述生化反应试管处于倒立状态,使所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
优选地,所述功能性反应试剂为裂解酶,所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合,使所述扩增产物裂解。
优选地,所述扩增仪器包括PCR仪器、荧光检测仪器。
本发明采用以上技术方案,与现有技术相比,具有如下技术效果:
本发明的一种生化反应试管,通过设置第一腔室和第二腔室来放置不同的反应组分及溶液,而且第一腔室和第二腔室的高低位置不同;在实际使用时,仅第一腔室和第二腔室中的一个被独立加热完成生化反应并能被仪器采集相关生化反应信号如荧光信号,另一个不被加热;将试管垂直翻转180°并进行振荡操作时,第一腔室和第二腔室内的溶液混合并进行进一步反应,以消除有害结果;如将不同腔体中的核酸降解酶溶液与核酸扩增产物溶液混合后能将扩增产物进行降解,避免扩增产物溶液外泄污染操作环境。
附图说明
图1是本发明的一个示意性实施例的生化反应试管的剖视图示意图(盖部未封闭管部)
图2是本发明的一个示意性实施例的生化反应试管的剖视图示意图(盖部封闭管部)。
图3是本发明的一个示意性实施例的生化反应试管的管部的剖视图示意图。
图4是本发明的一个示意性实施例的生化反应试管的盖部的剖视图示意图。
图5是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的剖视图示意图(盖部未封闭管部)。
图6是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的俯视图示意图。
图7是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的剖视图示意图(盖部未封闭管部)。
图8是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的俯视图示意图。
图9是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的剖视图示意图(盖部未封闭管部)。
图10是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的剖视图示意图(盖部封闭管部)。
图11是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的剖视图示意图(盖部封闭管部)。
图12是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的中空部件的剖视图示意图。
图13是本发明的一个具体实施方式的生化反应试管的第一密封元件的剖视图示意图。
图14是本发明的一个具体实施方式的带有金属温浴仪器的生化反应试管的示意图。
图15是本发明的一个具体实施方式的带有生化反应光学检测仪器的生化反应试管的示意图。
其中的附图标记为:管部10、管体11、限位单元12、第一腔室13、第二腔室14、第一嵌合部件15、盖部20、第二嵌合部件21、连接部件30、辅助部件40、中空部件50、第一开口元件51、第二开口部件52、第三嵌合部件53、密封部件60、第一密封元件61、第二密封元件62、第四嵌合部件63、限位件611、破坏件612、金属温浴仪器70、生化反应光学检测仪器80。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
需要说明的是,在不冲突的情况下,本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明,但不作为本发明的限定。
实施例1
本发明的一个示意性实施例,如图1~2所示,一种生化反应试管,包括管部10和盖部20,管部10包括管体11和限位单元12,其中,限位单元12设置于管体11的外壁,管体11包括第一腔室13和第二腔室14,在盖部20封闭管部10的情况下,第一腔室13的顶部与第二腔室14的顶部连通。
其中,第一腔室13内用于放置核酸扩增试剂,第二腔室14内用于放置分解第一腔室13内的扩增产物的功能性反应试剂;或者,第二腔室14内用于放置核酸扩增试剂,第一腔室13内用于放置分解第二腔室14内的扩增产物的功能性反应试剂。在核酸扩增反应完成后,将生化反应试管垂直翻转180°,即可使功能性反应试剂与扩增产物混合,以分解扩增产物。
其中,功能性反应试剂包括但不限于降解酶、裂解液、探针、缓冲液、稀释液等,或者是扩增反应完成后进行后续反应的试剂。
第二腔室14的底部与第一腔室13的底部具有一定距离,即,第二腔室14的底部与水平面之间的距离大于第一腔室13的底部与水平面之间的距离。
第二腔室14的底部与第一腔室13的底部之间的距离至少为3mm。
第二腔室14位于第一腔室13的外侧,第二腔室14位于管体11的内壁与第一腔室13的外壁之间,并且第二腔室14为环形腔室,即第二腔室14环绕第一腔室13的外壁的圆周面设置。在这种情况下,第二腔室14的轴线与第一腔室13的轴线共线。
与之相对应的,第二腔室14可以位于第一腔室13的内侧,并且第二腔室14为环形腔室,即第二腔室14环绕第一腔室13的内壁的圆周面设置。在这种情况下,第二腔室14的轴线与第一腔室13的轴线共线。
在本实施例的另一种实施方式中,第二腔室14位于第一腔室13的外侧,第二腔室14位于管体11的内壁与第一腔室13的外壁之间,并且第二腔室14为圆形腔室,即第二腔室14的外壁的圆周面与第一腔室13的外壁的圆周面相切。在这种情况下,第二腔室14的轴线与第一腔室13的轴线平行。其中,第二腔室14可以有多个,多个第二腔室14以第一腔室13为中心环绕设置在第一腔室13的外壁的圆周面。
与之相对应的,第二腔室14可以位于第一腔室13的内侧,并且第二腔室14为圆形腔室,第二腔室14的外壁的圆周面与第一腔室13的内壁的圆周面相切。在这种情况下,第二腔室14的轴线与第一腔室13的轴线平行。其中,第二腔室14可以有多个,多个第二腔室14以第一腔室13为中心环绕设置在第一腔室13的内壁的圆周面。
在上述结构中,第二腔室14与第一腔室13可以是一体式设置,也可以是分体式设置。在第二腔室14与第一腔室13为分体式设置的情况下,第二腔室14可拆卸地设置在第一腔室13的外侧,可拆卸方式包括但不限于卡扣连接。
限位单元12至少部分地环绕管体11设置,即限位单元12与管体11的连接侧呈弧形,该弧形的圆心角至少为锐角。具体地,限位单元12可以是全裙边、半裙边或1/4裙边。
限位单元12的顶部与第二腔室14的底部之间的距离可以是0,即限位单元12的顶部与第二腔室14的底部处于同一水平面;或,限位单元12的顶部与第二腔室14的底部之间的距离大于0,即在垂直方向上,限位单元12位于第二腔室14的下侧。
限位单元12为对称的柱体或锥体,能够以任意角度插入生化反应仪器进行固定,如能够以任意角度插入PCR扩增仪加热座中固定,并且从第一腔室13的底面或邻近底面的侧面对第一腔室13内的溶液的生化反应结果进行光学信号采集检测。
或者,限位单元12为非对称的柱体,只能从单一角度插入生化反应仪器进行固定,并且只能从单一方向对第一腔室13内的溶液的生化反应结果进行光学信号采集检测。
在限位单元12被生化反应仪器进行接触式传导加热时,第一腔室13的底部溶液(含有核酸扩增试剂)进行接触式传导加热,而第二腔室14的底部溶液(含有功能性反应试剂)不进行接触式传导加热;或者,第二腔室14的底部溶液(含有核酸扩增试剂)进行接触式传导加热,而第一腔室13的底部溶液(含有功能性反应试剂)不进行接触式传导加热。
如图1~3所示,第一腔室13的底部呈柱体结构或锥体结构,能够匹配生化反应仪器的加热座内孔。
第一腔室13的柱体结构或锥体结构的顶部的内径为1.5~8mm,第二腔室14的顶部的内径为5~15mm。
为了提高管部10和盖部20的密封效果,管部10和盖部20分别设置有第一嵌合部件15和第二嵌合部件21。
如图3所示,第一嵌合部件15设置在管体11的内壁的圆周面,且第一嵌合部件15至少为一个。
如图4所示,第二嵌合部件21设置在盖部20的外壁的圆周面,且第二嵌合部件21至少为一个。
在盖部20封闭管部10时,第二嵌合部件21与第一嵌合部件15进行连接,使得盖部20与管部10相互配合,从而提高盖部20封闭管部10的密封效果。
第一嵌合部件15为凹槽(或密封槽),第二嵌合部件21为凸起(或凸起密封环);或者,第一嵌合部件15为凸起(或凸起密封环),第二嵌合部件21为凹槽(密封槽)。
第一嵌合部件15为若干个,且第一嵌合部件15沿着管部10的轴向设置。同样地,第二嵌合部件21为若干个,且第二嵌合部件21沿着盖部20的轴向设置。
第一嵌合部件15与第二嵌合部件21可以是一一对应连接。具体地,在盖部20封闭管部10的情况下,位于管部10的最下侧的第一嵌合部件15与位于盖部20的最下侧的第二嵌合部件21进行连接,位于管部10的最上侧的第一嵌合部件15与位于盖部20的最上侧的第二嵌合部件21连接。在这种情况下,需要施加较大的外力将盖部20移除,以露出管部10的内腔。
第一嵌合部件15与第二嵌合部件21也可以不是一一对应连接。例如,在盖部20封闭管部10的情况下,位于管部10的最上侧的第一嵌合部件15与位于盖部20的最下侧的第二嵌合部件21进行连接。在这种情况下,能够容易地将盖部20移除,以露出管部10的内腔。
由上述可知,位于管部10的最上侧的第一嵌合部件15至少与位于盖部20的最下侧的第二嵌合部件21进行连接即可使盖部20封闭管部10。
为了确保管部10和盖部20能够一一对应,还设置有连接部件30将管部10和盖部20进行连接。具体地,连接部件30的第一端与管部10的顶部的外壁连接,连接部件30的第二端与盖部20的顶部的外壁连接。
连接部件30为连接绞合条。
如图2所示,在盖部20封闭管部10的情况下,除了折叠的连接部件30外,盖部20的顶部的外边缘没有超出管部10的顶部边缘的任何部分。
实施例2
本实施例为本发明的一个具体实施方式,为实施例1的改进实施方式,其能够便于将盖部20移除。
如图5~6所示,一种生化反应试管,包括管部10、盖部20、连接部件30和辅助部件40。其中,管部10、盖部20和连接部件30的结构和连接关系同实施例1基本相同,在此不再赘述。
辅助部件40设置在盖部20的外壁,在盖部20封闭管部10的情况下,辅助部件40凸出于管部10设置。即,辅助部件40为沿着盖部20的顶部的外边缘伸出管部10的顶部边缘一定长度的凸起。
辅助部件40设置在连接部件30的对称侧。
辅助部件40的厚度小于盖部20的顶部的厚度。
辅助部件40的厚度小于等于0.04mm。
实施例3
本实施例为本发明的一个具体实施方式,为实施例1的改进实施方式,其能够便于向第二腔室14内添加溶液。
如图7~8所示,一种生化反应试管,包括管部10、盖部20和连接部件30。其中,盖部20和连接部件30的结构和连接关系同实施例1基本相同,在此不再赘述。
如图7~8所示,在管部10中,第一腔室13的底部呈柱体结构或锥体结构,能够匹配生化反应仪器的内孔,第二腔室14位于管体11的外壁与限位单元12的内壁之间,且第二腔室14的轴线与第一腔室13的轴线平行,即第一腔室13设置于第二腔室14的底面的偏心位置。
具体地,第一腔室13的一侧外壁远离限位单元12的对应侧的内壁,第一腔室13的另一侧外壁靠近限位单元12的对应侧的内壁,使得第二腔室14的径向尺寸加大,从而使移液枪枪头的枪尖较深地插入第二腔室14,让溶液顺利地进入第二腔室14,避免因操作人员操作不当使溶液进入第一腔室13。
实施例4
本实施例为本发明的一个具体实施方式,为实施例1的改进实施方式,其能够进一步地减少生化反应试管被污染的概率。
如图9~10所示,一种生化反应试管,包括管部10、盖部20和连接部件30。其中,管部10和连接部件30的结构和连接关系同实施例1基本相同,在此不再赘述。
如图9~10所示,在实施例1的基础上,盖部20还包括中空部件50和密封部件60,中空部件50贯穿地设置在盖部20的内部,密封部件60封闭中空部件50。
中空部件50包括设置在中空部件50的上端的第一开口元件51,使得溶液通过第一开口元件51由盖部20的外侧进入至中空部件50的内部。
相对应地,密封部件60包括第一密封元件61,其封闭第一开口元件51。
具体地,第一密封元件61为封口膜,或带有不干胶的封口膜。在操作时,将第一密封元件61移除,向中空部件50内添加生化反应溶液,再将第一密封元件61封闭第一开口元件51。
在上述结构的基础上,为了进一步地提高操作效率,中空部件50还包括设置在中空部件50的下端的第二开口元件52,密封部件60还包括封闭第二开口元件62的第二密封元件62。
具体地,第二密封元件62为易被破坏的密封元件,如封口膜,或带封口粘贴材质的铝箔或其他膜材。在第一次操作时,将第一密封元件61移除,向中空部件50内添加生化反应溶液,再将第一密封元件61封闭第一开口元件51;在第二次操作时,将第一密封元件61移除,操作人员使用工具依次穿过第一开口元件51和第二开口元件52后破坏第二密封元件62,使中空部件50的内部生化反应溶液进入到管体11的内部,最后将第一密封元件61封闭第一开口元件51。
实施例5
本实施例为本发明的一个具体实施方式,为实施例1的改进实施方式,其能够进一步地减少生化反应试管被污染的概率。
如图11所示,一种生化反应试管,包括管部10、盖部20和连接部件30。其中,管部10和连接部件30的结构和连接关系同实施例1基本相同,在此不再赘述。
如图11所示,在实施例1的基础上,盖部20还包括中空部件50和密封部件60,中空部件50贯穿地设置在盖部20的内部,密封部件60封闭中空部件50。
中空部件50包括设置在中空部件50的上端的第一开口元件51和设置在中空部件50的下端的第二开口元件52。
相对应地,密封部件60包括封闭第一开口元件51的第一密封元件61和封闭第二开口元件52的第二密封元件62,并且在第一密封元件61完全封闭第一开口元件51时,第一密封元件61破坏第二密封元件62。
第一密封元件61包括限位件611和破坏件612,破坏件612设置于限位件611的下端。其中,限位件611的内径大于中空部件50的内径,破坏件612的内径小于等于中空部件50的内径。当第一密封元件61完全封闭第一开口元件51时,破坏件612的底端破坏第二密封元件62。
具体地,限位件611为盖板,破坏件612为中空管。
限位件611与破坏件612为活动连接,即对限位件611进行一定操作(如打开),可以向破坏件612内添加生化反应组分或溶液。
具体地,限位件611与破坏件612进行嵌套连接、螺纹连接、卡扣连接等,如限位件611与破坏件612之间的连接与盖部20与管部10的连接方式相同。
具体地,第二密封元件62为易被破坏的密封元件,如封口膜,或带封口粘贴材质的铝箔或其他膜材。
为了提高中空部件50和密封部件60的密封效果,中空部件50和密封部件60分别设置有第三嵌合部件53和第四嵌合部件63。
如图12所示,第三嵌合部件53设置在中空部件50的内壁的圆周面,且第三嵌合部件53至少为一个。
如图13所示,第四嵌合部件63设置在第一密封元件61的外壁的圆周面,且第四嵌合部件63少为一个。
在第一密封元件61封闭第一开口元件51时,第四嵌合部件63与第三嵌合部件53进行连接,使得第一密封元件61与中空部件50相互配合,从而提高第一密封元件61封闭第一开口元件51的密封效果。
第三嵌合部件53为凹槽(或密封槽),第四嵌合部件63为凸起(或凸起密封环);或者,第三嵌合部件53为凸起(或凸起密封环),第四嵌合部件63为凹槽(密封槽)。
第三嵌合部件53为若干个,且第三嵌合部件53沿着中空部件50的轴向设置。同样地,第四嵌合部件63为若干个,且第四嵌合部件63沿着第一密封元件61的轴向设置。
第三嵌合部件53与第四嵌合部件63可以是一一对应连接。具体地,位于中空部件50的最下侧的第三嵌合部件53与位于第一密封元件61的最下侧的第五连接部63进行连接,位于中空部件50的最上侧的第三嵌合部件53与位于第一密封元件61的最上侧的第四嵌合部件63连接。在这种情况下,第一密封元件61破坏第二密封元件62。
第三嵌合部件53与第四嵌合部件63也可以不是一一对应连接。例如,位于中空部件50的最上侧的第三嵌合部件53与位于第一密封元件61的最下侧的第四嵌合部件63进行连接。在这种情况下,第一密封元件61没有破坏第二密封元件62。
使用本实施例的生化反应试管时,可以打开第一密封元件61的限位件611,向破坏件612的内部放置某种生化反应组分或溶液,在第一密封元件61从第一开口元件51插入中空部件50并破坏第二密封元件62,破坏件612内的生化反应组分或溶液与管体11的内部的溶液进行混合,产生进一步的生化反应。例如,向破坏件612内放置核酸降解酶,将生化反应试管的内部的核酸扩增产物降解。
实施例6
本实施例为本发明的一个具体实施方式,为实施例1~5的扩展实施方式。
如图14所示,生化反应试管还包括一种对生化反应试管的内部的溶液进行接触式温度传导控制的金属温浴仪器70,能够进行一定数值的温度设定,能让温度按设定条件在一定数值稳定保持或在多个温度之间进行循环变动。
如图15所示,生化反应试管还包括一种对生化反应试管的内部的溶液进行接触式温度传导控制的生化反应光学检测仪器80,该生化反应光学检测仪器80对生化反应试管的内部的溶液进行温度传导时采集生化反应试管的内部的生化反应溶液的光学信号。
实施例7
本实施例为实施例1~5的生化反应试管的应用。
一种基因扩增试剂盒,至少包括生化反应试管、核酸扩增试剂和功能性反应试剂。其中,核酸扩增试剂放置于管体11的第一腔室13内且功能性反应试剂放置于管体11的第二腔室14内;或者,核酸扩增试剂放置于管体11的第二腔室14内且功能性反应试剂放置于管体11的第一腔室13内。
其中,功能性反应试剂的热敏性与核酸扩增试剂的热敏性不同。
具体地,功能性反应试剂包括但不限于降解酶、裂解液、探针、缓冲液、稀释液等,或者是扩增反应完成后进行后续反应的试剂。
本实施例的第一个具体实施方式,核酸扩增试剂为含dUTP的核酸扩增试剂,功能性反应试剂为含有UNG酶的溶液。在该实施方式中,使用含dUTP的核酸扩增试剂,能够在一定温度条件控制下完成核酸扩增反应使扩增产物中掺入一定量的dU。具体地,第一腔室13(或第二腔室14)内的核酸扩增试剂受热完成扩增反应后,第二腔室14(或第一腔室13)内的UNG酶的反应活性保持良好,将生化反应试管垂直翻转180°进行振荡操作,第二腔室14(或第一腔室13)内的预先添加的UNG酶溶液或预先加入溶解固化在第二腔室14(或第一腔室13)内的UNG酶的溶液,与第一腔室13(或第二腔室14)的扩增产物溶液混合,酶解掺入dU的核酸产物。
本实施例的第二个具体实施方式,核酸扩增试剂为含核酸内切酶对应内切序列的核酸扩增引物及其扩增试剂,功能性反应试剂为含有内切酶的溶液。在该实施方式中,使用含核酸内切酶对应内切序列的核酸扩增引物及其扩增试剂,能够在一定温度条件控制下完成掺入某种内切酶对应内切序列的核酸产物扩增。具体地,第一腔室13(或第二腔室14)内的核酸扩增试剂受热完成扩增反应后,将生化反应试管垂直翻转180°进行振荡操作,第二腔室14(或第一腔室13)内的预先添加的内切酶溶液或预先加入溶解固化在第二腔室14(或第一腔室13)内的内切酶的溶液,与第一腔室13(或第二腔室14)的扩增产物溶液混合,酶解核酸产物。
本实施例的第三个具体实施方式,核酸扩增试剂为核酸扩增引物及其扩增试剂,功能性反应试剂为含有核酸酶的溶液。在该实施方式中,使用核酸扩增引物及其扩增试剂,能够在一定温度条件控制下完成产物扩增。具体地,第一腔室13(或第二腔室14)内的核酸扩增试剂受热完成扩增反应后,将生化反应试管垂直翻转180°进行振荡操作,第二腔室14(或第一腔室13)内的预先添加的核酸酶溶液或预先加入溶解固化在第二腔室14(或第一腔室13)内的核酸酶的溶液,与第一腔室13(或第二腔室14)的扩增产物溶液混合,酶解核酸产物。
实施例8
本实施例为实施例1~5的生化反应试管的使用方法。
一种生化反应试管的使用方法,包括:
将核酸扩增试剂和功能性反应试剂中的一个放置于第一腔室13内,将核酸扩增试剂和功能性反应试剂中的另一个放置于第二腔室14内;
将生化反应试管插入扩增仪器进行温度控制,仅使放置有核酸扩增试剂的第一腔室13或第二腔室14进行接触式传导加热;
当核酸扩增反应结束后,使功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
具体地,当核酸扩增反应结束后,将生化反应试管从扩增仪器移除,并将生化反应试管垂直翻转180°使生化反应试管处于倒立状态,使功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
本实施例的第一个具体实施方式,包括:
将PCR扩增试剂放入第一腔室13内,将切断PCR扩增产物的酶溶液放入第二腔室14内;
将生化反应试管插入扩增核酸的PCR仪器进行温度控制,此时只有第一腔室13内的溶液受到温度传导,第二腔室14不与PCR仪器的传热部件接触;
当核酸扩增反应结束后,拔出生化反应试管并将生化反应试管倒放,第一腔室13和第二腔室14内的溶液混合;
将生化反应试管倒放在适合酶进行产物分解温度的环境中保温直至扩增产物被分解完毕。
本实施例的第二个具体实施方式,包括:
将核酸扩增试剂放入第二腔室14内,将分解核酸扩增产物的酶溶液放入第一腔室13内;
将生化反应试管插入扩增核酸的扩增仪器进行温度控制,此时只有第二腔室14内的溶液受到温度传导,第一腔室13内的溶液不被扩增仪器的加热部件传热;
当核酸扩增反应结束后,拔出生化反应试管并将生化反应试管倒放,第一腔室13和第二腔室14内的溶液混合;
将生化反应试管倒放在适合酶进行产物分解温度的环境中保温直至扩增产物被分解完毕。
本实施例的第三个具体实施方式,包括:
将核酸扩增试剂放入第一腔室13内,将分解核酸扩增产物的酶溶液放入第二腔室14内;
将生化反应试管插入扩增核酸的荧光检测仪器进行温度控制,此时只有第一腔室13内的溶液受到温度传导产生扩增反应;
当核酸扩增反应结束后,拔出生化反应试管并将生化反应试管倒放,第一腔室13和第二腔室14内的溶液混合;
将生化反应试管倒放在适合酶进行产物分解温度的环境中保温直至扩增产物被分解完毕。
以上所述仅为本发明较佳的实施例,并非因此限制本发明的实施方式及保护范围,对于本领域技术人员而言,应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案,均应当包含在本发明的保护范围内。
Claims (22)
1.一种生化反应试管,包括管部和盖部,其特征在于,所述管部包括:
管体,所述管体包括有第一腔室和第二腔室,所述第二腔室的底部与所述第一腔室的底部具有一定距离,所述管体一体成型;
限位单元,所述限位单元设置于所述管体的外侧,所述限位单元的顶部与所述第二腔室的底部位于同一水平面或所述限位单元的顶部位于所述第二腔室的底部的下方;
第一嵌合部件,所述第一嵌合部件设置在所述管体的内壁的圆周面;
所述盖部包括:
第二嵌合部件,所述第二嵌合部件设置在所述盖部的外壁的圆周面,所述第二嵌合部件与所述第一嵌合部件连接,以使所述盖部封闭所述管部;
其中,当所述盖部封闭所述管部时,所述第一腔室的顶部与所述第二腔室的顶部连通;
当所述限位单元被生化反应仪器进行接触式传导加热时,所述第一腔室或所述第二腔室接触所述生化反应仪器的热源;或者,所述第一腔室或所述第二腔室被采集相关生化反应信号。
2.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述第二腔室的底部与所述第一腔室的底部之间的距离至少为3mm。
3.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述第二腔室位于所述第一腔室的外侧;和/或,
所述第二腔室位于所述第一腔室的内侧。
4.根据权利要求3所述的生化反应试管,其特征在于,所述第二腔室的轴线与所述第一腔室的轴线共线或平行。
5.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述限位单元至少部分地环绕所述管体的外侧设置。
6.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述第一嵌合部件为若干个,若干所述第一嵌合部件沿所述管部的轴向设置;
所述第二嵌合部件为若干个,若干所述第二嵌合部件沿所述盖部的轴向设置;
其中,位于所述盖部的最下侧的所述第二嵌合部件至少与位于所述管部的最上侧的所述第一嵌合部件连接。
7.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,还包括:
连接部件,所述连接部件的两端分别与所述管部和所述盖部连接。
8.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述盖部包括:
辅助部件,所述辅助部件设置在所述盖部的外壁;
其中,当所述盖部封闭所述管部时,所述辅助部件凸出于所述管部设置。
9.根据权利要求8所述的生化反应试管,其特征在于,所述辅助部件的厚度小于所述的盖部的顶部的厚度;或
所述辅助部件的厚度小于等于0.4mm。
10.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述盖部包括:
中空部件,所述中空部件贯穿地设置在所述盖部的内部,所述中空部件包括:
第一开口元件,所述第一开口元件设置于所述中空部件的上端;
第二开口元件,所述第二开口元件设置于所述中空部件的下端;
密封部件,所述密封部件封闭所述中空部件,所述密封部件包括:
第一密封元件,所述第一密封元件封闭所述第一开口元件;
第二密封元件,所述第二密封元件封闭所述第二开口元件。
11.根据权利要求10所述的生化反应试管,其特征在于,当所述密封部件封闭所述中空部件时,所述第一密封元件与所述第二密封元件不接触;或
所述第一密封元件破坏所述第二密封元件。
12.根据权利要求10所述的生化反应试管,其特征在于,所述中空部件包括:
第三嵌合部件,所述第三嵌合部件设置在述所述中空部件的内壁的圆周面;
所述密封部件包括:
第四嵌合部件,所述第四嵌合部件设置在所述第一密封元件的外壁的圆周面,所述第三嵌合部件与所述第四嵌合部件连接,以使所述第一密封元件封闭所述第一开口元件。
13.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述第一腔室的底部呈柱形体结构或锥形体结构。
14.根据权利要求13所述的生化反应试管,其特征在于,所述柱形体结构或锥形体结构的顶部的内径为1.5~8mm。
15.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,所述第二腔室的顶部的内径为5~15mm。
16.根据权利要求1所述的生化反应试管,其特征在于,还包括:
金属温浴仪器,用于对所述生化反应试管内的生化反应溶液进行接触式传导加热。
17.根据权利要求1或16所述的生化反应试管,其特征在于,还包括:
生化反应光学检测仪器,用于对所述生化反应试管进行接触式传导加热时采集所述生化反应试管内的生化反应溶液的光学信号。
18.一种基因扩增试剂盒,其特征在于,包括:
如权利要求1~17任一所述的生化反应试管;
核酸扩增试剂;
功能性反应试剂;
其中,所述核酸扩增试剂和所述功能性反应试剂中的一个放置于所述第一腔室的内部,所述核酸扩增试剂和所述功能性反应试剂中的另一个放置于所述第二腔室的内部;
在所述盖部封闭所述管部的情况下:
其中,在所述盖部封闭所述管部,并进行生化反应时,所述核酸扩增试剂接触热源,并且所述功能性反应试剂不接触热源;
在所述核酸扩增试剂受热完成扩增反应后,所述生化反应试管垂直翻转180°,所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
19.根据权利要求18所述的基因扩增试剂盒,其特征在于,所述核酸扩增试剂包括dUTP,所述功能性反应试剂为含有UNG酶的溶液;或
所述核酸扩增试剂包括含核酸内切酶对应内切序列的核酸扩增引物,所述功能性反应试剂为含有内切酶的溶液;或
所述核酸扩增试剂包括核酸扩增引物,所述功能性反应试剂为含有核酸酶的溶液。
20.一种如权利要求1~17任一所述的生化反应试管的使用方法,其特征在于,包括:
将核酸扩增试剂和功能性反应试剂中的一个放置于所述第一腔室内,将核酸扩增试剂和功能性反应试剂中的另一个放置于所述第二腔室内;
将所述生化反应试管插入扩增仪器进行温度控制,仅使放置有所述核酸扩增试剂的所述第一腔室或所述第二腔室进行接触式传导加热;
当核酸扩增反应结束后,使所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合。
21.根据权利要求20所述的生化反应试管的使用方法,其特征在于,所述功能性反应试剂为裂解酶,所述功能性反应试剂与完成扩增反应的扩增产物混合,使所述扩增产物裂解。
22.根据权利要求20所述的生化反应试管的使用方法,其特征在于,所述扩增仪器包括PCR仪器、荧光检测仪器。
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