CN111208307A - 一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法，所述方法在生物分子相互作用分析系统上进行，包括设置NTA芯片的实验组1、对照组1、实验组2和对照组2，使各组芯片如下结合靶蛋白（A）、参照分子（Ab1）与待测分子（Ab2）：实验组1 A‑Ab1‑Ab2；对照组1 A‑Ab1‑0；实验组2 A‑0‑Ab2；对照组2 A‑0‑0，通过检测结合信号并计算（实验组1‑对照组1）/（实验组2‑对照组2）的比值，来判断待测分子是否与参照分子竞争与靶蛋白的结合。本发明的方法可针对多个参照分子同时进行筛选，且可直接进行杂交瘤细胞培养上清的筛选，具有样品适用性强、灵敏度高、通量高等优点。

Description

一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选 方法
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体而言，本发明涉及一种与已知参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的新分子筛选鉴定方法。
背景技术
单克隆抗体技术已成为重要的临床诊断手段和有效的药物治疗方法，特别是治疗性单克隆抗体已成为近几年来生物制药业发展最快的领域之一。同时，单克隆抗体技术也为一些新技术提供了基础平台，如抗体偶联药物、双特异性抗体及新兴的CAR-T细胞治疗。
抗体功能取决于其与靶抗原结合的表位，表位是抗原的一部分，与抗体的可变区结合，与不同表位结合发挥特定的功能。单克隆抗体与相应抗原的反应性决定于所识别的抗原表位，确定相应表位在抗原结构上的位置是单克隆抗体筛选中的关键步骤。同时，可进一步分析这类表位的差异，正确评价单克隆抗体的特异性和交叉反应性，例如可用于评价某抗原表位是某种菌株不同血清型的共同表位，还是特异表位。
与传统的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体的效力仍相对较低，仅用一种中和性单克隆抗体时，其效力可能会由于表位的突变受到抑制。为提高用药效力、扩大特异性，可将对靶抗原有不同特异性的单克隆抗体混合作用，这种混合的单克隆抗体可能会出现协同作用，其效力超过每种单克隆抗体效力之和。例如，单克隆抗体鸡尾酒药物CL184由两种针对不同表位的单克隆抗体混合而成，用于狂犬病的暴露后预防。在这种情况下，就更需要对不同的单克隆抗体进行表位分析来判断其结合的表位是否相同，甚至完全明确其结合的表位序列。
现有常用的抗原表位分析方法有酶联免疫吸附法（ELISA法）、生物酶解法及化学切割法、噬菌体随机肽库，X-射线晶体学、丙氨酸扫描、氢氘交换质谱、生物信息学表位预测。其中，竞争ELISA法是单克隆抗体表位分析最常用的方法，这种方法的基本原理为双抗体竞争，抗原包板后同时加入未标记的待检单克隆抗体和酶标的对照单克隆抗体，当两种单克隆抗体的表位特异性相同时，酶标对照单克隆抗体与待检单克隆抗体发生竞争，从而出现抑制现象。但是，使用ELISA法进行表位分析，前期需要对已知抗体浓度进行大量实验性摸索，优化出最优浓度，操作繁琐费时；待测样品通常为浓度已知的纯化的抗体，培养基中的其它物质会对ELISA结果有较强干扰；且已知抗体需额外的标记，或使用不同种属或亚型的已知抗体以便于最终的检测。最重要的是，ELISA法不能对待测抗体与多种已知抗体同时进行表位分析，从而大大增加了操作者的劳动量，难以实现大规模高通量快速筛选。
生物膜干涉技术(Bio-1ayer interferometry，BLI)是一种实时、无需标记的快速检测技术，其原理是当生物分子结合到芯片表面形成一层生物膜层，该生物膜层对透过芯片的光的波形造成干涉现象。干涉现象以相位移动的方式被检测，可以检测结合到芯片分子数量的变化。BLI技术已经成功应用于蛋白质分子间相互作用的检测，尤其是抗体的亲和力测定，样品用量少，可检测亲和力范围广泛，可得到kon、koff、KD等动力学参数。
已提出利用BLI可分析抗原抗体之间的表位，但是在分析抗体分子之间表位竞争关系或筛选与已知抗体的表位相同或者不同的新抗体分子这一方面，BLI尚未得到充分开发和利用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，基于生物膜干涉技术，针对多个不同表位的已知抗体同时筛选与其中任一个抗体具有相同或不同抗原结合、特别是相同或不同抗原表位的新抗体分子，从而节约抗体高通量筛选的时间和工作量；并且，在筛选时，可将杂交瘤细胞培养上清作为待测样品，从而直接鉴定该上清中是否存在所述新抗体分子，进一步提高抗体筛选效率。
因此，本发明的目的是提供一种与已知分子具有相同或不同结合的抗体筛选方法，所述方法基于生物膜干涉技术。
本发明的技术方案如下：
本发明提供一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法，所述方法在生物分子相互作用分析系统上进行，包括以下步骤：
(1)设置实验组1、对照组1、实验组2和对照组2，各组芯片在缓冲液中平衡，然后浸入靶蛋白在缓冲液中的溶液以固化靶蛋白；
(2)使实验组1、对照组1的芯片再次在缓冲液中平衡，然后浸入参照分子在缓冲液中的溶液以使靶蛋白结合参照分子至饱和，再次在缓冲液中平衡；之后使实验组1的芯片浸入包含待测分子的样品，同时使对照组1的芯片浸入不包含待测分子的对照溶液；并且，
使实验组2、对照组2的芯片再次在缓冲液中平衡，然后使实验组2的芯浸入所述样品，同时使对照组2的芯片浸入所述对照溶液；
(3)检测各实验组和对照组的结合信号，计算（实验组1-对照组1）/（实验组2-对照组2）的比值，比值为60%-100%表明待测分子与参照分子完全不竞争与靶蛋白的结合，比值为30-60%表明待测分子与参照分子部分竞争与靶蛋白的结合，比值为<30%表明待测分子与参照分子完全竞争与靶蛋白的结合。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述生物分子相互作用分析系统基于生物膜干涉技术或表面离子共振技术，包括但不限于fortebio或biacore生物分子相互作用分析系统。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述靶蛋白为抗原。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述参照分子为一种或多种特异性结合靶蛋白的抗体。根据本发明的具体实施方式，所述参照分子为四种特异性结合抗原的抗体。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述待测分子为抗体。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述样品为待测分子在缓冲液中的溶液或包含待测分子的细胞培养液；所述对照溶液为缓冲液或细胞培养基。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述样品为待测分子在缓冲液中的溶液或包含待测分子的单克隆杂交瘤细胞培养上清；所述对照溶液为缓冲液或单克隆杂交瘤细胞培养基。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液 + 0.1% BSA +0.02%吐温20 + 0.05% Priclin300，pH 7.4。
优选地，在本发明的筛选方法中，所述平衡为将芯片在所述缓冲液中放置60s。
优选地，在步骤(1)中，固化靶蛋白至信号高度2nm。
优选地，在步骤(2)中，使实验组1的芯片浸入样品300s，并且使对照组1的芯片浸入对照溶液300s。
优选地，在步骤(2)中，使实验组2的芯片浸入样品接触300s，并且使对照组2的芯片浸入对照溶液300s。
优选地，所述参照分子为一种或多种特异性结合靶蛋白的抗体，并且每种参照分子在缓冲液中的浓度为66.6-200nM。根据本发明的具体实施方式，每种参照抗体在缓冲液中的浓度为200nM。
根据本发明的具体实施方式，所述靶蛋白为人补体C5蛋白，在缓冲液中的浓度为10-100nM，例如10、12.5、25、50或100nM，优选50nM。
根据本发明的具体实施方式，所述参照分子为以下中的任一种或多种：抗体1，重链可变区示于SEQ ID NO: 1，轻链可变区示于SEQ ID NO: 2；抗体2，重链可变区示于SEQID NO: 3，轻链可变区示于SEQ ID NO: 4；抗体3，重链可变区示于SEQ ID NO: 5，轻链可变区示于SEQ ID NO: 6；抗体4，重链可变区示于SEQ ID NO: 7，轻链可变区示于SEQ ID NO:8。所述抗体构建成人IgG4形式。
优选地，所述样品包含一种或多种待测分子。根据本发明的具体实施方式，所述样品中每种待测分子在缓冲液中的浓度为25-200nM。根据本发明的具体实施方式，每种待测分子的浓度为200nM、100nM、50nM或25nM，优选200nM。或者，所述样品为稀释或未稀释的单克隆杂交瘤细胞培养上清。根据本发明的具体实施方式，所述单克隆杂交瘤细胞是以人补体C5蛋白作为抗原免疫动物而得到的。
可选地，所述方法还包括：
设置一组自反应实验，将实验组1和实验组2里待测分子的结合过程均替换为参照分子，所测得的数据比值<30%证明所述方法的数据可信。
根据本发明的具体实施方式，本发明的方法采用PALL生产的型号为OCTET RED 96的Fortebio OCTET Red生物分子相互作用仪和PALL生产的货号为18-5101的NTA芯片进行。
根据本发明的具体实施方式，所述芯片在检测后可通过依次在再生缓冲液中放置5s、平衡液中放置5s且重复3次进行再生，其中所述再生缓冲液为：100mM甘氨酸-盐酸（Glycine-HCl），pH 1.7。
本发明通过采用以下参照抗体、以人补体C5蛋白作为抗原，证明了利用生物膜干涉技术，本发明的方法可检测待测样品中是否包含与参照抗体具有相同或不同抗原表位的抗体：
Alexion制药公司的人源化抗体Eculizumab（参见WO1995025540A1），简称Ref Ab1，重链可变区示于SEQ ID NO: 1，轻链可变区示于SEQ ID NO: 2；
Chugai制药公司Crovalimab抗体（参见WO2016098356A1），简称Ref Ab2，重链可变区示于SEQ ID NO: 3，轻链可变区示于SEQ ID NO: 4；
Regeneron制药公司Pozelimab抗体（参见WO2017218515A1），简称Ref Ab3，重链可变区示于SEQ ID NO: 5，轻链可变区示于SEQ ID NO: 6；
Morphosis制药公司Tesidolumab抗体（参见WO2010015608A1），简称Ref Ab4，重链可变区示于SEQ ID NO: 7，轻链可变区示于SEQ ID NO: 8。
本发明的方法针对多个参照抗体同时进行抗体筛选，显著提高了抗体筛选效率；并且该方法还可直接检测未纯化的抗体，例如杂交瘤细胞培养上清，可直接进行检测而无需纯化、稀释或浓缩。因此，本发明方法的样品适用性强，灵敏度高。此外，借助于分析系统，可同时进行批量样本检测，大大提高了抗原表位的鉴定筛选效率，检测通量灵活，检测时间短，样品使用量低，实现了高通量样品快速检测，具有很高的实用价值。并且，所采用的光纤芯片可通过再生过程重复使用，大大降低了检测的成本。而相比于常规使用的ELISA检测法，样品无需标记，无需二抗。
附图说明
以下结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为本发明筛选方法的示意图。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
（一）主要仪器与设备信息，见表1：
表1. 仪器与设备
Figure 919369DEST_PATH_IMAGE002
（二）参考抗体与抗原信息，如下：
Alexion制药公司的人源化抗体Eculizumab（参见WO1995025540A1），简称Ref Ab1，重链可变区示于SEQ ID NO: 1，轻链可变区示于SEQ ID NO: 2；
Chugai制药公司Crovalimab抗体（参见WO2016098356A1），简称Ref Ab2，重链可变区示于SEQ ID NO: 3，轻链可变区示于SEQ ID NO: 4；
Regeneron制药公司Pozelimab抗体（参见WO2017218515A1），简称Ref Ab3，重链可变区示于SEQ ID NO: 5，轻链可变区示于SEQ ID NO: 6；
Morphosis制药公司Tesidolumab抗体（参见WO2010015608A1），简称Ref Ab4，重链可变区示于SEQ ID NO: 7，轻链可变区示于SEQ ID NO: 8。
将以上几种参照抗体构建成人IgG4形式。再将重轻链共转染到293细胞中，培养5-7天后收集上清，用Mabselect Sure柱纯化。
抗原：人补体C5蛋白，购自义翘神州，C末端带有组氨酸标签。
（三）缓冲液，如下：
缓冲液1：磷酸盐缓冲液（PBS）+0.1% BSA+0.02%吐温20（Tween 20）+0.05% Priclin300，pH 7.4
再生缓冲液：100mM甘氨酸-盐酸（Glycine-HCl），pH 1.7
补镍缓冲液：10mM硫酸镍（NiSO4）。
（四）筛选方法
将抗原固化在芯片上，然后依次与第一抗体和第二抗体相互作用，检测第二抗体结合信号以判定两个抗体是否识别同一表位。示意图见图1。
设置以下实验组和对照组。A表示抗原，Ab1表示1种或多种已知表位的抗体或参照抗体（也称为第一抗体），Ab2表示待测抗体，0表示不含有抗体的缓冲液1或培养基。
A-Ab1-Ab2 实验组1
A-Ab1-0 对照组1
A-0-Ab2 实验组2
A-0-0 对照组2
实验组1：在NTA芯片上偶联抗原，先与第一抗体Ab1反应，再与待测抗体Ab2反应。
实验组2：在NTA芯片上偶联抗原，先与缓冲液1反应，再与待测抗体Ab2反应。
对照组1：在NTA芯片上偶联抗原，先与第一抗体Ab1反应，再与缓冲液1或培养基反应。
对照组2：在NTA芯片上偶联抗原，先与缓冲液1反应，再与缓冲液1或培养基反应。
在本发明的上下文中，术语“第一抗体”与“参照抗体”可互换使用；术语“第二抗体”与“待测抗体”可互换使用。
实施例1 一对一检测4个已知抗体之间的表位关系
采用ForteBio OCTET Red生物分子相互作用仪检测4个已知抗体彼此之间的表位竞争关系。具体如下：
1：分别用缓冲液1配制抗体和抗原：抗体配制成200nM，抗原配制成0.47、0.94、1.88、2.35、4.7、9.4或18.8ug/ml（2.5-100nM）。
2：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s（信号不再发生明显波动），然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
3：浸入缓冲液1中平衡60s。
4：实验组2浸入第二抗体溶液进行结合反应300s，对照组2浸入缓冲液1 300s。
5：NTA芯片浸入再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
6：用补镍缓冲液补镍。
7：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s，然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
8：浸入缓冲液1中平衡60s。
9：浸入第一抗体溶液进行结合反应至饱和，即信号不再升高。
10：浸入缓冲液1中平衡60s。
11：实验组1芯片浸入第二抗体溶液300s。同时，对照组1浸入缓冲液1 300s。
12：NTA芯片在再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
13：用补镍缓冲液补镍，NTA芯片可重复利用。
步骤1-4实验组2及其对照组2，步骤1和7-11为实验组1及其对照组1。
表位竞争判定标准：通过检测各组第二抗体的结合信号，计算（实验组1-对照组1）/（实验组2-对照组2）的比值，来判定待测抗体是否和已知抗体竞争。比值60%-100%为完全不竞争；30-60%为部分竞争；<30%为完全竞争。
还设置一组自反应实验，实验组1和实验组2里第二抗体的结合过程均使用第一抗体，用于反映数据的可信度，按上述公式测得数据比值<30%，说明这组数据的可信度高。
预实验时摸索抗原和第一抗体的使用浓度，1.88-18.8ug/ml（10-100nM）抗原，66.6nM和200nM第一抗体，均可以有效进行检测；但是，抗原浓度低于1.88ug/ml（10nM），抗体浓度低于66.6nM会降低数据可信度。抗原及第一抗体浓度越高，芯片结合抗原、抗原结合第一抗体速度越快，综合考虑实验成本，后续检测均采用50nM抗原，200nM第一抗体。结果参见表2。
表2. 一对一检测4个已知抗体之间的表位关系
Figure 429985DEST_PATH_IMAGE003
检测可知，四种已知抗体相互之间不存在表位竞争关系，有不同的抗原表位，与专利和文献里报道的相同。
实施例2 多对一检测4个已知抗体之间的表位关系
采用ForteBio OCTET Red生物分子相互作用仪检测1个已知抗体与4个已知抗体的表位竞争关系。
分别用缓冲液1稀释抗体及抗原：第一抗体为4个已知抗体混和稀释而成，每种抗体浓度20nM、66.6nM或200nM，第二抗体（待测抗体）梯度稀释分别为：200nM、100nM、50nM、25nM、6.6nM；抗原稀释至50nM。NTA芯片固化抗原至2nm信号高度，然后依次与第一抗体和第二抗体相互作用，检测第二抗体结合信号以判定第二抗体跟第一抗体是否识别相同表位。具体如下：
1：分别用缓冲液1配制抗体和抗原，第一抗体为4个已知抗体混和稀释而成，每种抗体浓度20nM、66.6nM或200nM，第二抗体为单个待测抗体200nM、100nM、50nM、25nM、6.6nM，抗原配制成50nM。
2：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s，然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
3：浸入缓冲液1中平衡60s。
4：实验组2浸入第二抗体溶液进行结合反应300s，对照组2浸入缓冲液1 300s。
5：NTA芯片浸入再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
6：用补镍缓冲液补镍。
7：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s，然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
8：浸入缓冲液1中平衡60s。
9：浸入第一抗体溶液进行结合反应至饱和，即信号不再升高。
10：浸入缓冲液1中平衡60s。
11：实验组1芯片浸入第二抗体溶液300s。同时，对照组1浸入缓冲液1 300s。
12：NTA芯片在再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
13：用补镍缓冲液补镍，NTA芯片可重复利用。
步骤1-4为实验组2及其对照组2，步骤1和7-11为实验组1及其对照组1。
表位竞争判定标准：通过检测各组第二抗体的结合信号，计算（实验组1-对照组1）/（实验组2-对照组2）的比值，来判定待测抗体是否和已知抗体竞争。比值60%-100%为完全不竞争；30-60%为部分竞争；<30%为完全竞争。
还设置一组自反应实验，实验组1和实验组2里第二抗体的结合过程均使用第一抗体，用于反映数据的可信度，按上述公式测得数据比值<30%，说明这组数据的可信度高。
预实验时摸索第一抗体的使用浓度，每种抗体浓度10ug/ml和30ug/ml的第一抗体，可以有效进行检测，第一抗体中每种抗体浓度低于10ug/ml会降低数据可信度。后续检测均采用每种已知抗体浓度30ug/ml的第一抗体。
结果参见表3。
表3. 多对一检测4个已知抗体之间的表位关系（第一抗体中每种抗体浓度30ug/ml）
Figure 412984DEST_PATH_IMAGE004
检测可知，四种已知抗体的每一种与混合抗体均存在表位竞争。并且，第二抗体浓度为20-200nM时可以有效检测第一抗体和第二抗体的竞争关系；而第二抗体浓度为6.6nM或更低时第二抗体与第一抗体结合的信号高度过低，结果可信度低。
实施例3 用实施例2中多对一表位分析方法检测小鼠B细胞杂交瘤上清
以人补体C5蛋白作为抗原免疫小鼠，获得小鼠B细胞杂交瘤。采用ForteBio OCTET Red生物分子相互作用仪检测待测小鼠B细胞杂交瘤上清（单克隆化的杂交瘤上清）与多个已知抗体的表位竞争关系。
分别用缓冲液1稀释抗体及抗原：第一抗体为4个已知抗体混和稀释而成，每种抗体浓度200nM，第二抗体为杂交瘤上清，无需稀释；抗原稀释至50nM。NTA芯片固化抗原至2nm信号高度，然后依次与第一抗体和第二抗体相互作用，检测第二抗体结合信号以判定第二抗体跟第一抗体是否识别相同表位。具体如下：
1：分别用缓冲液1配制抗体和抗原：第一抗体为4个已知抗体混和稀释而成，每种抗体浓度200nM，第二抗体为未稀释的杂交瘤上清200ul，抗原配制成50nM。
2：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s；然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
3：浸入缓冲液1中平衡60s。
4：实验组2浸入杂交瘤上清进行结合反应300s，对照组2浸入杂交瘤细胞培养基300s。
5：NTA芯片浸入再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
6：用补镍缓冲液补镍。
7：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s；然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
8：浸入缓冲液1中平衡60s。
9：浸入第一抗体溶液进行结合反应至饱和。
10：浸入缓冲液1中平衡60s。
11：实验组1芯片浸入杂交瘤上清300s。同时，对照组1浸入杂交瘤细胞培养基300s。
12：NTA芯片在再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
13：用补镍缓冲液补镍，NTA芯片可重复利用。
步骤1-4为实验组2及其对照组2，步骤1和7-11为实验组1及其对照组1。
表位竞争判定标准：通过检测各组第二抗体的结合信号，计算（实验组1-对照组）/（实验组2-对照组）的比值，来判定待测抗体是否和已知抗体竞争。比值60%-100%为完全不竞争；30-60%为部分竞争；<30%为完全竞争。
还设置一组自反应实验，实验组1和实验组2里第二抗体的结合过程均使用第一抗体，用于反映数据的可信度，按上述公式测得数据比值<30%，说明这组数据的可信度高。
结果见表4。
表4. 多对一表位分析方法检测小鼠B细胞杂交瘤上清
Figure 886822DEST_PATH_IMAGE005
Figure 294670DEST_PATH_IMAGE006
实施例4 用实施例2中多对一表位分析方法检测纯化的鼠抗
基于实施例3的结果，从杂交瘤上清中纯化鼠抗。采用ForteBio OCTET Red生物分子相互作用仪检测待测纯化鼠抗与多个已知抗体的表位竞争关系。
分别用缓冲液1稀释抗体及抗原：第一抗体为4个已知抗体混和稀释而成，每种抗体浓度200nM，第二抗体为从小鼠B细胞杂交瘤培养上清中纯化出的鼠抗，浓度为200nM；抗原稀释至50nM。NTA芯片固化抗原至2nm信号高度，然后依次与第一抗体和第二抗体相互作用，检测第二抗体结合信号以判定第二抗体跟第一抗体是否识别相同表位。具体如下：
1：分别用缓冲液1配制抗体和抗原：第一抗体为4个已知抗体混合配制成，每个抗体终浓度均为200nM，第二抗体为杂交瘤上清纯化出的抗C5蛋白的鼠抗200nM，抗原C5蛋白配制成50nM。
2：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s；然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
3：浸入缓冲液1中平衡60s。
4：实验组2浸入第二抗体溶液进行结合反应300s，对照组2浸入缓冲液1 300s。
5：NTA芯片浸入再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
6：用补镍缓冲液补镍。
7：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s；然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
8：浸入缓冲液1中平衡60s。
9：浸入第一抗体溶液进行结合反应至饱和，即信号不再升高。
10：浸入缓冲液1中平衡60s。
11：实验组1芯片浸入第二抗体溶液300s。同时，对照组1浸入缓冲液1 300s。
12：NTA芯片在再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
13：用补镍缓冲液补镍，NTA芯片可重复利用。
步骤1-4为实验组2及其对照组2，步骤1和7-11为实验组1及其对照组1。
表位竞争判定标准：通过检测两个实验组第二抗体的结合信号，计算（实验组1-对照组）/（实验组2-对照组）的比值，来判定待测抗体是否和已知抗体竞争。比值60%-100%为完全不竞争；30-60%为部分竞争；<30%为完全竞争。
还设置一组自反应实验，实验组1和实验组2里第二抗体的结合过程均使用第一抗体，用于反映数据的可信度，按上述公式测得数据比值<30%，说明这组数据的可信度高。
结果见表5-1至表5-5，多对一表位分析方法检测纯化的鼠抗。
表5-1
Figure 117132DEST_PATH_IMAGE007
表5-2
Figure 587428DEST_PATH_IMAGE008
表5-3
Figure 130536DEST_PATH_IMAGE009
表5-4
Figure 127310DEST_PATH_IMAGE010
表5-5
Figure 589516DEST_PATH_IMAGE011
实施例5 用实施例2中多对一表位分析方法检测纯化的嵌合抗体
基于实施例4的结果，由鼠抗构建成人IgG1形式的嵌合抗体。采用ForteBio OCTET Red生物分子相互作用仪检测待测嵌合抗体与多个已知抗体的表位竞争关系。具体如下：
1：分别用缓冲液1配制抗体和抗原：第一抗体为4个已知抗体混合配制成，每个抗体终浓度均为200nM，第二抗体为嵌合抗体200nM，抗原C5蛋白配制成50nM。
2：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s；然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
3：浸入缓冲液1中平衡60s。
4：实验组2浸入第二抗体溶液进行结合反应300s，对照组2浸入缓冲液1 300s。
5：NTA芯片浸入再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
6：用补镍缓冲液补镍。
7：NTA芯片先浸入缓冲液1中平衡60s；然后将芯片浸入抗原溶液固化抗原至信号高度2nm。
8：浸入缓冲液1中平衡60s。
9：浸入第一抗体溶液进行结合反应至饱和。
10：浸入缓冲液1中平衡60s。
11：实验组1芯片浸入第二抗体溶液300s。同时，对照组1浸入缓冲液1 300s。
12：NTA芯片在再生缓冲液中再生5s，缓冲液1平衡5s，重复3次，使芯片再生。
13：用补镍缓冲液补镍，NTA芯片可重复利用。
步骤1-4为实验组2及其对照组2，步骤1和7-11为实验组1及其对照组1。
表位竞争判定标准：通过检测各组第二抗体的结合信号，计算（实验组1-对照组）/（实验组2-对照组）的比值，来判定待测抗体是否和已知抗体竞争。比值60%-100%为完全不竞争；30-60%为部分竞争；<30%为完全竞争。
还设置一组自反应实验，实验组1和实验组2里第二抗体的结合过程均使用第一抗体，用于反映数据的可信度，按上述公式测得数据比值<30%，说明这组数据的可信度高。
结果见表6-1至表6-5，多对一表位分析方法检测纯化的嵌合抗体与单个及多个混合的已知抗体间的竞争关系（仅列出完全竞争）。
表6-1
Figure 343845DEST_PATH_IMAGE012
表6-2
Figure 159486DEST_PATH_IMAGE013
表6-3
Figure 151712DEST_PATH_IMAGE014
表6-4
Figure 909453DEST_PATH_IMAGE015
表6-5
Figure 151078DEST_PATH_IMAGE016
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
序列表
<110> 上海普铭生物科技有限公司
<120> 一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法
<130> LC20110016
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Glu Tyr Thr Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Phe Phe Gly Ser Ser Pro Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gly Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Gly Ala
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Leu Asn Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Val His Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Gly Ala Ile Phe Thr Gly Ser Gly Ala Glu Tyr Lys Ala Glu Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Asp Ala Gly Tyr Asp Tyr Pro Thr His Ala Met His Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 4
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Glu Thr Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Thr Lys Val Gly Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 5
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gly Asn Val Asp Thr Thr Met Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 6
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ala Gly
50 55 60
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Phe Asn Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Gly Pro Phe Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Thr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 8
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ser Ile Pro Asn Tyr Tyr Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Ala Gln Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Phe Asp Ser Ser Leu Asn Ala
85 90 95
Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105

Claims (22)

1.一种与参照分子具有相同或不同的靶蛋白结合的分子的筛选方法，所述方法在生物分子相互作用分析系统上进行，包括以下步骤：
(1)设置实验组1、对照组1、实验组2和对照组2，各组芯片在缓冲液中平衡，然后浸入靶蛋白在缓冲液中的溶液以固化靶蛋白；
(2)使实验组1、对照组1的芯片再次在缓冲液中平衡，然后浸入参照分子在缓冲液中的溶液以使靶蛋白结合参照分子至饱和，再次在缓冲液中平衡；之后使实验组1的芯片浸入包含待测分子的样品，同时使对照组1的芯片浸入不包含待测分子的对照溶液；
使实验组2、对照组2的芯片再次在缓冲液中平衡，然后使实验组2的芯片浸入所述样品，同时使对照组2的芯片浸入所述对照溶液；
(3)检测各实验组和对照组的结合信号，计算（实验组1-对照组1）/（实验组2-对照组2）的比值，比值为60%-100%表明待测分子与参照分子完全不竞争与靶蛋白的结合，比值为30-60%表明待测分子与参照分子部分竞争与靶蛋白的结合，比值为<30%表明待测分子与参照分子完全竞争与靶蛋白的结合。
2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述生物分子相互作用分析系统基于生物膜干涉技术或表面离子共振技术。
3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述生物分子相互作用分析系统为fortebio或biacore生物分子相互作用分析系统。
4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白为抗原。
5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述参照分子为一种或多种特异性结合靶蛋白的抗体。
6.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述待测分子为抗体。
7.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述样品为待测分子在缓冲液中的溶液或包含待测分子的细胞培养液；所述对照溶液为缓冲液或细胞培养基。
8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述样品为待测分子在缓冲液中的溶液或包含待测分子的单克隆杂交瘤细胞培养上清；所述对照溶液为缓冲液或单克隆杂交瘤细胞培养基。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)和步骤(2)中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液 + 0.1% BSA + 0.02%吐温20 + 0.05% Priclin300，pH 7.4。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)和步骤(2)中，所述平衡为将芯片在所述缓冲液中放置60s。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(1)中，固化靶蛋白至信号高度2nm。
12.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，使实验组1的芯片浸入样品300s，并且使对照组1的芯片浸入对照溶液300s。
13.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，在步骤(2)中，使实验组2的芯片浸入样品300s，并且使对照组2的芯片浸入对照溶液300s。
14.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述参照分子为一种或多种特异性结合靶蛋白的抗体，并且每种参照分子在缓冲液中的浓度为66.6-200nM。
15.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白为人补体C5蛋白，在缓冲液中的浓度为10-100nM。
16.根据权利要求15所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白在缓冲液中的浓度为10、12.5、25、50或100nM。
17.根据权利要求16所述的筛选方法，其特征在于，所述靶蛋白在缓冲液中的浓度为50nM。
18.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述参照分子为以下的一种或多种：抗体1，重链可变区示于SEQ ID NO: 1，轻链可变区示于SEQ ID NO: 2；抗体2，重链可变区示于SEQ ID NO: 3，轻链可变区示于SEQ ID NO: 4；抗体3，重链可变区示于SEQID NO: 5，轻链可变区示于SEQ ID NO: 6；抗体4，重链可变区示于SEQ ID NO: 7，轻链可变区示于SEQ ID NO: 8；并且为人IgG4形式。
19.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述样品包含一种或多种待测分子，其中每种待测分子在缓冲液中的浓度为25-200nM；或者，所述样品为稀释或未稀释的单克隆杂交瘤细胞培养上清。
20.根据权利要求19所述的筛选方法，其特征在于，每种待测分子在缓冲液中的浓度为200nM、100nM、50nM或25nM。
21.根据权利要求20所述的筛选方法，其特征在于，每种待测分子在缓冲液中的浓度为200nM。
22.根据权利要求1至8中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述方法还包括：
设置一组自反应实验，将实验组1和实验组2里待测分子的结合过程均替换为参照分子，所测得的数据比值<30%证明所述方法的数据可信。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105073196A (zh) * 2013-02-01 2015-11-18 米迪缪尼有限公司 呼吸道合胞病毒f蛋白表位
US20160025746A1 (en) * 2008-11-14 2016-01-28 Regen Biopharma, Inc Methods of screening compounds that can modulate nr2f6 by displacement of a reference ligand

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160025746A1 (en) * 2008-11-14 2016-01-28 Regen Biopharma, Inc Methods of screening compounds that can modulate nr2f6 by displacement of a reference ligand
CN105073196A (zh) * 2013-02-01 2015-11-18 米迪缪尼有限公司 呼吸道合胞病毒f蛋白表位

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DANIEL G.W. ALANINE等: "Human Antibodies that Slow Erythrocyte Invasion Potentiate Malaria-Neutralizing Antibodies", 《CELL》 *
RASHI TAKKAR 等: "Cross-competition or epitope binning assays on the Octet HTX system", 《FORTEBIO》 *
YASMINA N 等: "Exploring blocking assays using Octet, ProteOn, and Biacore biosensors", 《ANALYTICAL BIOCHEMISTRY》 *
YASMINA N 等: "Label-free epitope binning assays of monoclonal antibodies enable the identification of antigen heterogeneity", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS》 *
李亚妃: "利用生物膜干涉技术测定竞争性结合", 《HTTPS://MP.WEIXIN.QQ.COM/S/COIXEAPRE8KWQHOGBAAIGW》 *

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