CN111184870A - 一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法 - Google Patents
一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111184870A CN111184870A CN201911014790.8A CN201911014790A CN111184870A CN 111184870 A CN111184870 A CN 111184870A CN 201911014790 A CN201911014790 A CN 201911014790A CN 111184870 A CN111184870 A CN 111184870A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- astaxanthin
- zein
- preparation
- ethanol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 title claims abstract description 177
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 title claims abstract description 177
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 title claims abstract description 177
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 title claims abstract description 177
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 title claims abstract description 177
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 title claims abstract description 20
- 230000029087 digestion Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 claims abstract description 46
- 239000005019 zein Substances 0.000 claims abstract description 46
- 229940093612 zein Drugs 0.000 claims abstract description 46
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 28
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims abstract description 26
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims abstract description 26
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 112
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 87
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 35
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims description 22
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 16
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 10
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 8
- 238000010025 steaming Methods 0.000 claims description 8
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N aldehydo-N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 1
- 239000000648 calcium alginate Substances 0.000 abstract description 13
- 229960002681 calcium alginate Drugs 0.000 abstract description 13
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 33
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 16
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 13
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L calcium;(2s,3s,4s,5s,6r)-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxy-6-[(2r,3s,4r,5s,6r)-2-carboxylato-4,5,6-trihydroxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Ca+2].O[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H](C([O-])=O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O2)C([O-])=O)O)[C@H](C(O)=O)O1 OKHHGHGGPDJQHR-YMOPUZKJSA-L 0.000 description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 7
- 235000010410 calcium alginate Nutrition 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 4
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 3
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 3
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDLNSTQYXPTXMC-UHFFFAOYSA-N Astaxanthin-diacetat Natural products O=C1C(OC(=O)C)CC(C)(C)C(C=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC=2C(CC(C(=O)C=2C)OC(C)=O)(C)C)=C1C HDLNSTQYXPTXMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000029560 autism spectrum disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 2
- FDSDTBUPSURDBL-LOFNIBRQSA-N canthaxanthin Chemical compound CC=1C(=O)CCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)CCC1(C)C FDSDTBUPSURDBL-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 208000012672 seasonal affective disease Diseases 0.000 description 2
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 2
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 2
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 2
- JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N (3R,3'R)-beta,beta-carotene-3,3'-diol Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019888 Circadian rhythm sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024254 Delusional disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 1
- OOUTWVMJGMVRQF-DOYZGLONSA-N Phoenicoxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)CCC2(C)C OOUTWVMJGMVRQF-DOYZGLONSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009205 Tinnitus Diseases 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N Z-zeaxanthin Natural products C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1C=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N 0.000 description 1
- QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCC(O)C1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N all-trans-Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000003999 astaxanthin group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000012682 canthaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001659 canthaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940008033 canthaxanthin Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002851 paranoid schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 238000007539 photo-oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000004626 scanning electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M sodium;methanol;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OC GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 231100000886 tinnitus Toxicity 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 235000010930 zeaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001775 zeaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940043269 zeaxanthin Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C403/00—Derivatives of cyclohexane or of a cyclohexene or of cyclohexadiene, having a side-chain containing an acyclic unsaturated part of at least four carbon atoms, this part being directly attached to the cyclohexane or cyclohexene or cyclohexadiene rings, e.g. vitamin A, beta-carotene, beta-ionone
- C07C403/24—Derivatives of cyclohexane or of a cyclohexene or of cyclohexadiene, having a side-chain containing an acyclic unsaturated part of at least four carbon atoms, this part being directly attached to the cyclohexane or cyclohexene or cyclohexadiene rings, e.g. vitamin A, beta-carotene, beta-ionone having side-chains substituted by six-membered non-aromatic rings, e.g. beta-carotene
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
- C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
- C07C2601/16—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring the ring being unsaturated
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及生物材料领域，公开了一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法，包括步骤：1）虾青素的提取，记作溶液A；2）玉米醇溶蛋白溶液的制备，记作溶液B；3)海藻酸钠水溶液的制备，记作溶液C；4)虾青素递送体的制备：将溶液A和溶液B混合，均质处理，加入溶液C，然后再次均质处理，迅速倒入CaCl2溶液中，室温静置，收集沉淀，用蒸馏水洗涤，沉淀经冷冻或烘箱烘干方式干燥，得到颗粒状的虾青素递送体。本发明首次将虾青素制备为玉米醇溶蛋白‑海藻酸钙递送体系，制备的虾青素递送体耐受胃液消化，包埋体玉米醇溶蛋白可在肠液中降解，释放出虾青素在小肠吸收，从而最大化地提高虾青素的生物利用度。
Description
技术领域
本发明涉及生物材料领域，尤其涉及一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法。
背景技术
虾青素具有抗氧化活性，且极性强于其他类胡萝卜素。众所周知，虾青素可有效地防止紫外线光氧化，抗氧化活性比类胡萝卜素如玉米黄质、叶黄素、角黄素高10倍，抗氧化活性比α-生育酚高100-500倍。然而，虾青素在水体系中高度不溶，在一些环境条件下(如光、热、氧)很容易降解。虾青素的包封将提高其稳定性和货架期。递送虾青素体系必须保护核心物质虾青素不受酸性胃液影响，同时允许其随后在肠道环境下释放，以适当的形式发挥虾青素功能。因此，开发食品级虾青素包封载体系统以提高其稳定性是目前研究热点。
玉米醇溶蛋白是为数不多的疏水性水不溶性生物聚合物之一，已被食品药品监督管理局批准用于口服。因为非极性氨基酸(亮氨酸、丙氨酸和脯氨酸)含量占玉米醇溶蛋白氨基酸总量的50％以上，所以玉米醇溶蛋白疏水性很强。根据玉米醇溶蛋白自身的疏水性，通过调节溶解玉米醇溶蛋白溶剂的溶解性，可以将玉米醇溶蛋白重构成纳米颗粒，用于包裹水溶性差、但溶于乙醇水溶液的生物活性成分。褐藻酸盐是一种从褐藻中提取的天然多糖类物质，在微胶囊制备中应用广泛，具有无毒、可生物降解、生物相容性好优点。褐藻酸盐在酸性条件下能够形成稳定的凝胶结构，但在温和的碱性条件下易被降解，这是其用于递送体系的一个重要特征。
专利CN201580013088.3公开了一种用于经皮递送的方法和组合物，具体公开了活性成份辅助组合物包含活性成份化合物(例如虾青素)以及一种或多种辅助酯。该活性成份辅助组合物可用于将活性成份化合物有效地经皮递送给对象。该发明所述活性成份辅助组合物用于治疗例如但不限于以下疾病的用途：皮肤疾病、胃食道逆流、癌症、免疫性疾病、心血管疾病、抑郁、季节性情绪失调(SAD)、昼夜节律睡眠障碍、失眠、阿兹海默病、妄想症、头痛、肥胖、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、耳鸣、肠易激综合征、衰老及自闭症谱系障碍(ASD)。
但是上述专利中只是公开了可将虾青素与辅助酯组合后经皮递送给对象，并非是经过食道传递。同时现有技术中也未有将虾青素与玉米醇溶蛋白-海藻酸钙递送体系进行结合的相关报道，因此对于本领域技术人员来说制备虾青素的玉米醇溶蛋白-海藻酸钙递送体系需要经过大量摸索以及克服诸多困难。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法，本发明首次将虾青素制备为玉米醇溶蛋白-海藻酸钙递送体系，制备的虾青素递送体耐受胃液消化，包埋体玉米醇溶蛋白可在肠液中降解，释放出虾青素在小肠吸收，从而最大化地提高虾青素的生物利用度。
本发明的具体技术方案为：一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法，包括以下步骤：
1)虾青素的提取：将虾壳和/或蟹壳蒸熟，然后破碎处理；向虾壳和/或蟹壳中加入无水乙醇使所得液体中乙醇浓度大于84vol％)，水浴下避光振荡提取，滤出滤液，沉淀再用同样方法提取多次，然后滤液合并，1-5℃下离心除去细小沉淀或用纱布过滤除去细小沉淀，滤液经旋转蒸发至成粘稠状，取出，加入石油醚充分震荡混合，将位于上层的石油醚提取层(沉淀层为不溶于石油醚的少量蛋白提取物)收集，旋转蒸发除去石油醚，再用乙醇溶液复溶得到虾青素醇溶液，记作溶液A。
2)玉米醇溶蛋白溶液的制备，记作溶液B。
3)海藻酸钠水溶液的制备，记作溶液C。
4)虾青素递送体的制备：将溶液A和溶液B混合，均质处理，加入溶液C，然后再次均质处理，迅速倒入CaCl2溶液中，室温静置，收集沉淀，用蒸馏水洗涤，沉淀经冷冻或烘箱烘干方式干燥，得到颗粒状的虾青素递送体。
本发明结合蛋白质的溶解特性，采用特定浓度的无水乙醇作为提取剂，有效提取虾蟹壳中虾青素，再用石油醚进一步纯化得到高活性虾青素用于耐胃液消化型虾青素递送体的制备。最终，将脂溶性虾青素分散到玉米醇溶蛋白溶液中，然后加入海藻酸钠，通过玉米醇溶蛋白与海藻酸钠电荷间相互作用自主装形成微型包埋体，加入CaCl2溶液进行包埋体适度固化。本发明整个制备过程条件温和、安全性高，制备的虾青素递送体耐受胃液消化，包埋体玉米醇溶蛋白可在肠液中降解，释放出虾青素在小肠吸收，从而最大化地提高虾青素的生物利用度。而在现有技术中，并未有将虾青素制备为玉米醇溶蛋白-海藻酸钙递送体的先例，本发明首次将虾青素制备为玉米醇溶蛋白-海藻酸钙递送体形式。
其中，本发明方法中具有以下要点：
(1)本发明在提取前对虾青素进行了蒸制，其作用在于，本发明人发现蒸制后虾青素可脱离结合蛋白质释放出来，有利于后续的提取。
(2)本发明采用无水乙醇使虾蟹壳乙醇提取液中的乙醇浓度在84vol％以上。乙醇溶液是现有技术中较为常用的提取剂，但是本发明以无水乙醇作为提取剂。其原因在于：本发明人在前期经过检测发现虾蟹壳的水分含量在65-68％之间，按照1∶5比例加入无水乙醇后，使得提取体系中乙醇实际有效浓度在84vol％以上。具体原因为：乙醇具有强脱水作用，发明人发现提取体系中高浓度乙醇能与蛋白质分子争夺水化膜，破坏蛋白质的胶体性质，促进蛋白聚合沉淀。而且，水溶液中加入乙醇会降低水的介电常数，蛋白质解离度降低，所带电荷数减少，也会降低蛋白质与水分子的相互作用，导致蛋白质溶解性降低。发明人最终通过试验发现，当乙醇浓度大于84vol％时，水溶液中大部分蛋白质可被沉淀下来，可避免虾青素提取中水溶性游离蛋白被大量提取出来。
(3)本发明在用无水乙醇提取虾青素后进一步用石油醚进行提纯，可获得高活性、高浓度的虾青素醇溶液。
(4)在现有技术中，为了提高虾青素提取物中游离态虾青素含量，提取虾青素的最后一般会进行皂化处理。而本发明不进行皂化处理，其原因是本发明人发现皂化后虽然部分虾青素酯转化为游离态虾青素，但是皂化处理会降低虾青素的抗氧化效果，具体见实施例部分的实验结果。
(5)本发明可采用冷冻干燥法或烘箱干燥法对虾青素递送体进行干燥。其中，冷冻干燥条件下，虾青素递送体颗粒中虾青素总包埋量最高，烘箱干燥下虾青素的总包埋量随着烘干温度的上升而降低，说明加热处理不利于保持虾青素的稳定性。从有效包埋率来看，冷冻干燥和烘箱40℃和50℃烘干的虾青素有效包埋率比较接近。虾青素递送体经烘箱干燥后虾青素总量低于冷冻干燥法，但是经过40℃和50℃烘箱干制，包埋体颗粒表面固化程度增强，可有效地保留被包埋的虾青素，从而提高有效包埋率。另一方面，实验结果显示冷冻干燥法和烘箱30℃干制得到的虾青素递送体颗粒溶解性在10％左右，而烘箱40℃和50℃加热所得虾青素递送体颗粒的溶解性更低，且烘干温度越高，颗粒的溶解性越差。结果说明干制温度对虾青素递送体颗粒表面的固化有重要影响，温度越高虾青素递送体在CaCl2中海藻酸钠的钙化现象越严重，形成致密的包裹层，结果降低颗粒的溶解性能。
作为优选，步骤1)中，蒸熟具体为加热水蒸汽蒸制2-10min，虾壳和/或蟹壳使颜色变红。
作为优选，步骤1)中，破碎至粒径小于0.5cm。
作为优选，步骤1)中，35-40℃水浴下避光振荡提取40-80min。
作为优选，步骤1)中，1-5℃下4000-6000rpm离心5-15min除去细小沉淀或用8层纱布过滤除去细小沉淀。
作为优选，步骤1)中，除去细小沉淀后的滤液在35-45℃下滤液经旋转蒸发至成粘稠状，取出，加入沸程为30-60℃的石油醚充分震荡混合。
作为优选，步骤1)中，用60-70vol％的乙醇溶液复溶；以65vol％乙醇溶解，虾青素浓度为86.55μg/mL左右。
作为优选，步骤2)中，玉米醇溶蛋白溶液的制备方法为：用60-70vol％乙醇溶解玉米醇溶蛋白，制备浓度为15-20wt％的玉米醇溶蛋白溶液。
作为优选，步骤3)中，海藻酸钠水溶液的制备方法为：蒸馏水溶解海藻酸钠粉，用3-7％柠檬酸调节溶液pH至3.5-4.5，制备浓度为1.5-2.5％的海藻酸钠水溶液。
作为优选，步骤4)中，第一次均质处理具体为：8000-12000r/min均质至少2次，每次1-3min，中间间隔0.5-1.5min；第二次均质处理为8000-12000r/min均质1-3min。
作为优选，步骤4)中，室温静置时间为1-3min。
作为优选，步骤4)中，所述溶液A、溶液B和溶液C的体积比为(0.8-1.2)∶(0.8-1.2)∶(1.8-2.2)，CaCl2溶液的体积为均质后所得溶液的0.8-1.2倍，CaCl2溶液的浓度为13-17wt％。
三种溶液的体积比对于最终所得的递送体的成型以及其释放性能至关重要，在上述条件下所得递送体效果最佳。
此外，本发明人还发现，在玉米醇溶蛋白/海藻酸钙递送体系中添加本发明特定含量的虾青素后，可使得递送体颗粒表面生成多个凹点，表面不连续，说明玉米醇溶蛋白/海藻酸钙中加入特定含量的虾青素后，可在颗粒表面形成较为规则的不连续层，增大比表面积，有利于内部被包埋的虾青素在合适条件下有效释放出来。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
(1)本发明首次将虾青素制备为玉米醇溶蛋白-海藻酸钙递送体系，具体地：本发明结合蛋白质的溶解特性，采用安全性高的无水乙醇作为提取剂，有效提取虾蟹壳中虾青素，再用石油醚进一步纯化得到高活性虾青素用于耐胃液消化型虾青素递送体的制备。将脂溶性虾青素分散到玉米醇溶蛋白溶液中，然后加入海藻酸钠，通过玉米醇溶蛋白与海藻酸钠电荷间相互作用自主装形成微型包埋体，加入CaCl2溶液进行包埋体适度钙化，形成负载虾青素的玉米醇溶蛋白/海藻酸钙递送体。整个制备过程条件温和、安全性高。
(2)经过试验表明，本发明制备的虾青素递送体颗粒能够耐受胃液消化处理，且无虾青素释放出来。玉米醇溶蛋白能够被小肠中胰蛋白酶、糜蛋白酶消化降解(玉米醇溶蛋白特性是不能被胃液中胃蛋白酶消化，但是能够被肠道中胰蛋白酶和糜蛋白酶消化)。本发明虾青素递送体微观结构在肠道中与肠液接触面积大，将会提高递送体中虾青素在小肠中释放、吸收，从而有利于提高虾青素的生物利用度。
附图说明
图1为虾蟹壳不熟制和熟制对虾青素提取影响图；
图2为不同浓度乙醇提取后提取液的紫外可见扫描图谱比较图；
图3为不同浓度乙醇提取后提取液的虾青素浓度比较图；
图4为不同浓度乙醇提取后提取液的蛋白质浓度比较图；
图5为乙醇提取和石油醚提纯后虾青素紫外可见光谱色谱图比较图；
图6为乙醇提取和石油醚提纯后虾青素浓度比较图；
图7为不同皂化处理时间对虾青素清除DPPH自由基效果影响图；
图8为玉米醇溶蛋白与海藻酸钠比例对递送体颗粒形成影响图；注：图中1表示未添加虾青素对照组；2为添加虾青素组；
图9为负载虾青素的玉米醇溶蛋白/海藻酸钙递送体微观形貌像图；
图10为虾青素递送体颗粒在模拟胃液下的稳定性结果照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
总实施例
一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法，包括以下步骤：
1)虾青素的提取：将虾壳和/或蟹壳加热水蒸汽蒸制2-10min，虾壳和/或蟹壳使颜色变红，然后破碎至粒径小于0.5cm；向虾壳和/或蟹壳中加入无水乙醇使所得液体中乙醇浓度大于84vol％，35-40℃水浴下避光振荡提取40-80min，滤出滤液，沉淀再用同样方法提取多次，然后滤液合并，1-5℃下4000-6000rpm离心5-15min除去细小沉淀或用8层纱布过滤除去细小沉淀，在35-45℃下滤液经旋转蒸发至成粘稠状，取出，加入沸程为30-60℃的石油醚充分震荡混合，将位于上层的石油醚提取层收集，旋转蒸发除去石油醚，再用60-70vol％的乙醇溶液复溶得到虾青素醇溶液，记作溶液A。
2)玉米醇溶蛋白溶液的制备：用60-70vol％乙醇溶解玉米醇溶蛋白，制备浓度为15-20wt％的玉米醇溶蛋白溶液记作溶液B。
3)海藻酸钠水溶液的制备：蒸馏水溶解海藻酸钠粉，用3-7％柠檬酸调节溶液pH至3.5-4.5，制备浓度为1.5-2.5％的海藻酸钠水溶液，记作溶液C。
4)虾青素递送体的制备：将溶液A和溶液B混合，8000-12000r/min均质至少2次，每次1-3min，中间间隔0.5-1.5min；加入溶液C，然后8000-12000r/min均质1-3min，迅速倒入CaCl2溶液中，室温静置1-3min，收集沉淀，用蒸馏水洗涤，沉淀经冷冻或烘箱烘干方式干燥，得到颗粒状的虾青素递送体。其中，溶液A、溶液B和溶液C的体积比为(0.8-1.2)∶(0.8-1.2)∶(1.8-2.2)，CaCl2溶液的体积为均质后所得溶液的0.8-1.2倍，CaCl2溶液的浓度为13-17wt％。
实施例
1.提取前虾蟹壳熟制与不熟制对虾青素提取效果影响
未熟制虾蟹壳和经过热水蒸汽蒸制5min后虾蟹壳，分别用无水乙醇提取相同时间后，测定虾青素浓度，结果见图1。从图1可以看出：虾蟹壳经过熟制后有利于虾青素提取，提取效果显著好于未熟制的虾蟹壳(p＜0.05)。虾青素是一种类胡萝卜素，在活虾蟹体内虾青素与蛋白质结合而呈现出青、蓝色。在加热条件下，虾青素与蛋白质脱离，释放出来呈现红色，利用虾青素脂溶性特性，本发明采用安全性高的乙醇用作提取剂，从熟制的虾蟹壳中提取虾青素。
2.提取体系中乙醇浓度对虾青素提取效果影响
分别采用无水乙醇、80％、60％、40％(v/v)乙醇提取虾青素(提取体系中乙醇实际浓度分别为88vol％、70vol％、53vol％和35vol％)，提取液的紫外可见扫描结果见图2，提取液中虾青素浓度和蛋白质浓度比较分别见图3和图4。
由图2可以看出用80％乙醇和无水乙醇为提取剂时(即：提取体系中乙醇浓度70～88vol％)，提取液在477nm有明显的虾青素特征吸收峰。乙醇浓度越低，提取液在477nm处的吸光值越低，即：提取的虾青素越少。比较不同浓度乙醇提取液的虾青素浓度和蛋白质浓度(见图3和图4)可知：熟制虾蟹壳经无水乙醇提取(提取体系中乙醇浓度为88vol％)，虾青素浓度显著高于其他组(p＜0.05)，而蛋白质浓度则显著低于其他组(p＜0.05)。综合图2～4结果可以得出：以无水乙醇为提取剂时，通过控制提取体系中乙醇的实际有效浓度，可以有效提取出虾青素，且降低同时提取出来的蛋白质含量。
3.虾青素提取物经石油醚提纯前后虾青素浓度和抗氧化效果比较分别采用两种方式提取虾青素：
(1)未经过石油醚提纯：将虾蟹壳加热水蒸汽蒸制5min，虾蟹壳使颜色变红，然后破碎至粒径小于0.5cm；向虾蟹壳中加入无水乙醇使所得液体中乙醇浓度为88vol％，37℃水浴下避光振荡提取60min，滤出滤液，沉淀再用同样方法提取2次，然后滤液合并，4℃下5000rpm离心10min除去细小沉淀。
(2)经过石油醚提纯：将虾蟹壳加热水蒸汽蒸制5min，虾蟹壳使颜色变红，然后破碎至粒径小于0.5cm；向虾蟹壳中加入无水乙醇使所得液体中乙醇浓度为88vol％，37℃水浴下避光振荡提取60min，滤出滤液，沉淀再用同样方法提取2次，然后滤液合并，4℃下5000rpm离心10min除去细小沉淀，在40℃下滤液经旋转蒸发至成粘稠状，取出，加入沸程为30-60℃的石油醚充分震荡混合，将位于上层的石油醚提取层收集，旋转蒸发除去石油醚，再用65vol％的乙醇溶液复溶得到虾青素醇溶液。
比较石油醚提纯前后虾青素的紫外可见光谱，如图5所示，虾青素浓度比较如图6所示。从图5可以看出虾青素乙醇提取物经过石油醚提纯后，在220～280nm与蛋白质有关吸收峰的峰值急剧降低，而在477nm左右虾青素特征吸光值则是增加明显，表明经过石油醚提纯后提取物中蛋白质会进一步被去除，有效地提高了虾青素的纯度。由图6可知：石油醚提纯后虾青素的浓度达到22.55μg/mL，显著高于未提纯组的虾青素浓度13.75μg/mL(p＜0.05)。
综上，实验将无水乙醇提取后的虾青素提取物进一步用石油醚提纯，可以有效提高虾青素纯度。
4.虾青素皂化处理对DPPH自由基清除(抗氧化性)影响
取虾青素无水乙醇溶液2mL和0.105mol/L氢氧化钠-甲醇溶液0.5mL混合，在5℃水浴下进行皂化反应，在0min、2h、6h和12h时分别终止皂化反应(在总体系中加1mL娃哈哈水)，然后1∶1(v∶v)比例加入30-60℃(沸程)石油醚萃取，取上层石油醚氮气吹干，再用2mL无水乙醇复溶，测定对DPPH自由基清除效果(虾青素为脂溶性，所以实验选取醇溶性DPPH模型测定虾青素的抗氧化效果)，结果如图7所示。图7结果显示：虾青素经过碱液皂化处理会降低对DPPH自由基的清除率，即：体外抗氧化性降低。采用皂化处理可将虾青素酯中的脂肪酸释放下来，促进游离型虾青素的生成，来增加游离虾青素含量。但是，本实验结果表明虾青素乙醇提取物经过皂化处理不利于其保持较高的DPPH自由基清除效果。因此，本实验选用未经碱液皂化处理的虾青素来制备递送体。
5.海藻酸钠溶液加入量对虾青素递送体颗粒形成影响
虾青素玉米醇溶蛋白液(玉米醇溶蛋白浓度为16wt％)与2wt％海藻酸钠溶液(pH＝4)分别按照体积比2∶1、1∶1、1∶2(v∶v)混合，即：玉米醇溶蛋白：海藻酸钠质量比分别为8∶1、4∶1、2∶1(w∶w)，测定上述混合液经均质后在等体积的15wt％的CaCl2溶液中颗粒形成情况，结果见图8(图中由左至右体积比依次为2∶1、1∶1、1∶2)。
从图8可以看出：当玉米醇溶蛋白和海藻酸钠质量比为4∶1时，均质后混合物在CaCl2中分散性较好，无大块聚集物形成，说明该比例下负载虾青素的玉米醇溶蛋白和海藻酸钠复合体系将会与CaCl2溶液充分接触、固化，有助于形成分散性递送体。而在其他比例下，形成坨状物，实用性差。
6.干燥方式对递送体颗粒虾青素的包埋效果影响
将溶液A和溶液B混合10000r/min均质2次，每次2min，中间间隔1min；将含虾青素的玉米醇溶蛋白和海藻酸钠在质量比为4∶1条件下混合，均质(10000r/min均质2min)后在CaCl2溶液中固化2min，然后分别采用冷冻干燥法、低温烘箱30℃、40℃和50℃烘干，分别测定颗粒中虾青素的总包埋量、表面包埋量和有效包埋率，结果见表1。
表1-不同干燥方式对虾青素包埋效果影响
| 冷冻干燥 | 30℃烘干 | 40℃烘干 | 50℃烘干 | |
| 总包埋量/(μg/mg) | 1.453±0.128 | 0.439±0.011 | 0.406±0.140 | 0.362±0.049 |
| 表面包埋量/(μg/mg) | 0.195±0.043 | 0.421±0.025 | 0.075±0.034 | 0.032±0.001 |
| 有效包埋率/％ | 86.50±1.25 | 4.15±2.44 | 80.22±5.69 | 91.05±1.13 |
注：总包埋量(μg/mg)＝虾青素总量(μg)/取样质量(mg)，表面包埋量(μg/mg)＝表面虾青素总量(μg)/取样质量(mg)，有效包埋率/％＝(总包埋量-表面包埋量)/总包埋量×100。
从表1结果可以看出：冷冻干燥条件下，虾青素递送体颗粒中虾青素总包埋量最高，烘箱干燥下虾青素的总包埋量随着烘干温度的上升而降低，说明加热处理不利于保持虾青素的稳定性。从有效包埋率来看，冷冻干燥和烘箱40℃和50℃烘干的虾青素有效包埋率比较接近。虾青素递送体经烘箱干燥后虾青素总量低于冷冻干燥法，但是经过40℃和50℃烘箱干制，包埋体颗粒表面固化程度增强，可有效地保留被包埋的虾青素，从而提高有效包埋率。
7.不同干燥方法制备的虾青素递送体颗粒的理化性质分析
分别测定了冷冻干燥法、烘箱30℃、40℃和50℃烘干制备的虾青素递送体颗粒的溶解性和色差值，结果见表2。
表2-不同干燥方法制备的虾青素递送体颗粒的溶解性和色差值比较
| 冷冻干燥 | 30℃烘干 | 40℃烘干 | 50℃烘干 | |
| 溶解性/％ | 10.19±3.03 | 11.55±2.19 | 8.88±0.45 | 7.90±1.51 |
| 色差值ΔE | 62.70±2.64 | 58.12±0.84 | 53.85±2.36 | 49.68±0.35 |
表2结果显示冷冻干燥法和烘箱30℃干制得到的虾青素递送体颗粒溶解性在10％左右，而烘箱40℃和50℃加热所得虾青素递送体颗粒的溶解性更低，且烘干温度越高，颗粒的溶解性越差。表2结果说明干制温度对虾青素递送体颗粒表面的固化有重要影响，温度越高虾青素递送体在CaCl2中海藻酸钠的钙化现象越严重，形成致密的包裹层，结果降低颗粒的溶解性能。此外，从色差值也能够看出冷冻干燥法制备的虾青素递送体ΔE值最高，而50℃烘箱干制法递送体ΔE值最低，表2中虾青素递送体色差值变化与虾青素不耐高温处理有关，即：冷冻干燥低温处理有利于虾青素保持原有色泽。
综合表1～2结果，可以得出：冷冻干燥法制备的虾青素递送体包埋量最高，且有效包埋率达到86％以上。
进一步采用扫描电镜法观察冷冻干燥条件下制备的虾青素递送体的微观形貌，结果如图9所示。图9扫描电镜结果显示，玉米醇溶蛋白/海藻酸钙颗粒表面光滑、连续。相比下，负载虾青素的玉米醇溶蛋白/海藻酸钙组颗粒表面具有多个凹点，表面不连续，提示在玉米醇溶蛋白/海藻酸钙中加入虾青素后，可在颗粒表面形成较为规则的不连续层，增大比表面积，有利于内部被包埋的虾青素在合适条件下有效释放出来。
8.负载虾青素的玉米醇溶蛋白/海藻酸钙递送体在模拟胃液条件下稳定性将冷冻干燥法制备的虾青素递送体在模拟胃液环境下37℃下避光保温2h，观察递送体颗粒变化，未包埋虾青素为对照，结果如图10所示。图10结果显示：未包埋的虾青素在模拟胃液下2h后出现明显聚集现象，说明虾青素在偏酸性条件下易形成沉淀聚集。相比较下，本发明制备的虾青素递送体颗粒经过胃液消化处理2h后，与消化前状态基本无外观上差别，说明该虾青素递送体颗粒能够耐受胃液消化处理，且无虾青素释放出来。玉米醇溶蛋白能够被小肠中胰蛋白酶、糜蛋白酶消化降解(玉米醇溶蛋白特性是不能被胃液中胃蛋白酶消化，但是能够被肠道中胰蛋白酶和糜蛋白酶消化)，结合图9虾青素递送体微观结构可推测该结构在肠道中与肠液接触面积大，将会提高递送体中虾青素在小肠中释放、吸收，从而有利于提高虾青素的生物利用度。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）虾青素的提取：将虾壳和/或蟹壳蒸熟，然后破碎处理；向虾壳和/或蟹壳中加入无水乙醇使所得液体中乙醇浓度大于84vol%，水浴下避光振荡提取，滤出滤液，沉淀再用同样方法提取多次，然后滤液合并，1-5°C下离心除去细小沉淀或用纱布过滤除去细小沉淀，滤液经旋转蒸发至成粘稠状，取出，加入石油醚充分震荡混合，将位于上层的石油醚提取层收集，旋转蒸发除去石油醚，再用乙醇溶液复溶得到虾青素醇溶液，记作溶液A；
2）玉米醇溶蛋白溶液的制备，记作溶液B；
3) 海藻酸钠水溶液的制备，记作溶液C；
4) 虾青素递送体的制备：将溶液A和溶液B混合，均质处理，加入溶液C，然后再次均质处理，迅速倒入CaCl2溶液中，室温静置，收集沉淀，用蒸馏水洗涤，沉淀经冷冻或烘箱烘干方式干燥，得到颗粒状的虾青素递送体。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，蒸熟具体为加热水蒸汽蒸制2-10min，虾壳和/或蟹壳使颜色变红。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，破碎至粒径小于0.5cm。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，35-40℃水浴下避光振荡提取40-80min。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，1-5°C下4000-6000 rpm离心5-15min除去细小沉淀或用8层纱布过滤除去细小沉淀。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中，除去细小沉淀后的滤液在35-45℃下滤液经旋转蒸发至成粘稠状，取出，加入沸程为30-60℃的石油醚充分震荡混合。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
步骤1）中，用60-70 vol %的乙醇溶液复溶；
步骤2）中，玉米醇溶蛋白溶液的制备方法为：用60-70vol%乙醇溶解玉米醇溶蛋白，制备浓度为15-20wt%的玉米醇溶蛋白溶液；
步骤3）中，海藻酸钠水溶液的制备方法为：蒸馏水溶解海藻酸钠粉，用3-7%柠檬酸调节溶液pH至3.5-4.5，制备浓度为1.5-2.5%的海藻酸钠水溶液。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中，第一次均质处理具体为：8000-12000r/min均质至少2次，每次1-3min，中间间隔0.5-1.5min；第二次均质处理为8000-12000r/min均质1-3min。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中，室温静置时间为1-3min。
10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）中，所述溶液A、溶液B和溶液C的体积比为（0.8-1.2）: （0.8-1.2）:（1.8-2.2），CaCl2溶液的体积为均质后所得溶液的0.8-1.2倍，CaCl2溶液的浓度为13-17wt%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911014790.8A CN111184870A (zh) | 2019-10-23 | 2019-10-23 | 一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911014790.8A CN111184870A (zh) | 2019-10-23 | 2019-10-23 | 一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111184870A true CN111184870A (zh) | 2020-05-22 |
Family
ID=70684349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911014790.8A Pending CN111184870A (zh) | 2019-10-23 | 2019-10-23 | 一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111184870A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113170885A (zh) * | 2021-04-06 | 2021-07-27 | 大连工业大学 | 一种基于岩藻多糖提高虾青素释放率的微球制备方法 |
| CN115300481A (zh) * | 2022-08-10 | 2022-11-08 | 王立强 | 一种负载虾青素复合纳米颗粒及其制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008291150A (ja) * | 2007-05-25 | 2008-12-04 | Cyclochem:Kk | アスタキサンチンーシクロデキストリン包接化合物 |
| CN104496873A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-04-08 | 渤海大学 | 一种从鲜虾壳中提取虾青素的方法 |
| CN110301558A (zh) * | 2019-08-06 | 2019-10-08 | 河南师范大学 | 一种富含天然虾青素的微胶囊鱼类饲料添加剂及其制备方法 |
| CN110301643A (zh) * | 2019-08-01 | 2019-10-08 | 大连工业大学 | 一种虾青素-海藻酸钙微球的制备方法 |
| CN112048080A (zh) * | 2020-09-14 | 2020-12-08 | 陕西科技大学 | 一种微胶囊填充型海藻酸钠基水凝胶及其制备方法 |
-
2019
- 2019-10-23 CN CN201911014790.8A patent/CN111184870A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008291150A (ja) * | 2007-05-25 | 2008-12-04 | Cyclochem:Kk | アスタキサンチンーシクロデキストリン包接化合物 |
| CN104496873A (zh) * | 2014-12-15 | 2015-04-08 | 渤海大学 | 一种从鲜虾壳中提取虾青素的方法 |
| CN110301643A (zh) * | 2019-08-01 | 2019-10-08 | 大连工业大学 | 一种虾青素-海藻酸钙微球的制备方法 |
| CN110301558A (zh) * | 2019-08-06 | 2019-10-08 | 河南师范大学 | 一种富含天然虾青素的微胶囊鱼类饲料添加剂及其制备方法 |
| CN112048080A (zh) * | 2020-09-14 | 2020-12-08 | 陕西科技大学 | 一种微胶囊填充型海藻酸钠基水凝胶及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 吴克刚编著: "《食品微胶囊技术》", pages: 121 * |
| 谈佳玉: "不同蒸煮方式对南极磷虾虾粉虾青素含量的影响", 《安徽农业科学》, vol. 47, no. 1, pages 190 - 193 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113170885A (zh) * | 2021-04-06 | 2021-07-27 | 大连工业大学 | 一种基于岩藻多糖提高虾青素释放率的微球制备方法 |
| CN115300481A (zh) * | 2022-08-10 | 2022-11-08 | 王立强 | 一种负载虾青素复合纳米颗粒及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101292020B (zh) | 一种从丙三醇油中去除固醇和其他化合物的方法 | |
| Song et al. | Layer-by-layer self-assembly of hollow dextran sulfate/chitosan-coated zein nanoparticles loaded with crocin: Fabrication, structural characterization and potential biological fate | |
| WO2016045309A1 (zh) | 新型低钠盐的组成、制备和用途 | |
| CN111184870A (zh) | 一种耐胃液消化型虾青素递送体的制备方法 | |
| CN113750120B (zh) | 一种蜂胶提取物及其生产工艺和应用 | |
| MXPA04009770A (es) | Compuestos de dextrina de hierro para el tratamiento de la anemia por deficiencia de hierro. | |
| CN108741100B (zh) | 一种螯合铁阿胶糖肽的制备方法及应用 | |
| CN110559352B (zh) | 一种山楂黄酮微胶囊及其制备方法和应用 | |
| CN110577976A (zh) | 一种绿豆低聚肽粉及其制备方法 | |
| CN112063676B (zh) | 酪蛋白纯化方法和蛋白琥珀酸铁的制备方法 | |
| CN116807942A (zh) | 一种积雪草提取物及愈创木天蓝烃微凝珠及其制备方法 | |
| WO2019218103A1 (zh) | 一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物及其制备方法 | |
| KR101982288B1 (ko) | 천연항균물질을 함유한 pH 의존 방출형 마이크로캡슐 및 그 제조방법 | |
| JPS6154389B2 (zh) | ||
| Zhou et al. | Self‐Assembled Integrative Nutrient Carrier Platform Containing Green Tea Catechin for Short Bowel Syndrome Treatment | |
| WO2022179050A1 (zh) | 一种防治酒精性肝损伤的组合物及其制备方法与应用 | |
| CN110229857A (zh) | 燕窝肽及其解聚耦合酶解的制备方法 | |
| CN110664785B (zh) | 一种山楂黄酮微胶囊及其制备方法和应用 | |
| CN111568876A (zh) | 一种叶黄素酯纳米微粒及其制备方法 | |
| TWI726184B (zh) | 褐藻多醣及其製造方法暨應用 | |
| JP3522186B2 (ja) | プロポリス製剤及びその製造方法 | |
| CN114517218A (zh) | 一种沙棘低聚肽粉及其制备方法和用途 | |
| CN115531347B (zh) | 一种基于茶多酚介导的虾青素纳米颗粒及其制备方法 | |
| JP2574657B2 (ja) | イカの甲羅を原料とする健康食品の製造方法 | |
| CN115669942B (zh) | 一种姜黄素-竹燕窝多糖复合微胶囊及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200522 |