CN111184798A - 一种基于柱层析茶多酚提纯方法 - Google Patents

一种基于柱层析茶多酚提纯方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种基于柱层析茶多酚提纯方法，通过在真空的环境中冷冻干燥并粉碎茶叶，能够避免茶叶在常规加热干燥中茶多酚被氧化造成损失，在浸提过程中添加有超声波和微波的辅助处理，利用超声波和微波的空化作用和机械波震动提升了浸提获得率，充分提取茶多酚，同时采用硅胶进行柱层析提取，脱除咖啡因的同时简化提纯流程，本发明提供的茶多酚提纯方法具有获得率高和纯度高的优点。

Description

一种基于柱层析茶多酚提纯方法
技术领域
本发明属于植物成分提取技术领域，尤其涉及一种基于柱层析茶多酚提纯方法。
背景技术
茶多酚(Green Tea Polyphenols，简写为GTP)又名抗氧灵、维多酚、防哈灵，是茶叶中多羟基酚类化合物的复合物，由30种以上的酚类物质组成，其主体成分是儿茶素及其衍生物，是茶叶中具有保健功能的主要化学成分。茶多酚具有抗氧化、防辐射、抗衰老、降血脂、降血糖、抑菌抑酶等多种生理活性。
但是目前的茶多酚提取方法中，提取效率低，提取后的茶叶中仍然存有较多的茶多酚成分，造成一定的浪费，而且在提取过程中茶多酚的损失较多，纯度不高。
发明内容
基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种基于柱层析茶多酚提纯方法，通过在真空的环境中冷冻干燥并粉碎茶叶，能够避免茶叶在常规加热干燥中茶多酚被氧化造成损失，在浸提过程中添加有超声波和微波的辅助处理，利用超声波和微波的空化作用和机械波震动提升了浸提获得率，充分提取茶多酚，同时采用硅胶进行柱层析提取，脱除咖啡因的同时简化提纯流程，本发明提供的茶多酚提纯方法具有获得率高和纯度高的优点。
本发明通过以下详细技术方案达到上述目的：
一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其包括如下步骤：
步骤S10备料：称取适量鲜茶叶，在真空环境下冷冻干燥鲜茶叶，并粉碎，在真空环境下回复常温，过20-40目筛；
步骤S20浸提：按固液质量比为1：15的比例向已经过筛的茶叶粉中加入无水乙醇进行浸提1h，浸提温度为60℃，过滤得到浸提液；
步骤S30超声波处理：在步骤S20浸提过程中，进行260W、30min的超声波处理；
步骤S40微波处理：步骤S30的超声波处理结束后，进行350W、5min的微波处理；
步骤S50去乙醇：按体积比1：1的比例向步骤S20中获得的浸提液中加入去离子水，一个标准大气压下的氮气环境中，加热到70℃，蒸发酒精，真空环境下冷却到室温；
步骤S60浓缩：按体积比1-2：1的比例向酸解液中加入乙酸乙酯，即添加1-2倍的乙酸乙酯，在40-50℃中萃取2-3次，每次20-30min，将多次萃取的乙酸乙酯合并，浓缩；
步骤S70柱层析：选用硅胶GF254作为柱填料，首先使用无水乙醇浸泡活化硅胶GF254，采用湿法装柱，用弱盐酸清洗层析柱使层析柱处于弱酸环境，用去离子水浸泡溶解步骤S60中浓缩的茶多酚，然后上样，使用去离子水洗脱至无色，再用无水乙醇洗脱，合并洗脱液，再真空浓缩，得高纯度茶多酚。
其中，所述的步骤S10中的筛为30目的筛。
其中，所述的步骤S30中的超声波处理中采用两个超声波源，一个从顶部向下发射超声波，一个从底部向上发射超声波，两个超声波源的波形相差1/2∏，波形相差1/2∏能避免两个声源之间的超声波相互抵消影响，同时从两个方向提供超声波能达到相同的强度下具有更均匀的处理效果的目的。
其中，所述的步骤S60还包括步骤S61，将层析液进行冷冻干燥，得到固态提取物。
其中，所述的步骤S70还包括步骤S71硅胶再生：将硅胶依次使用乙醇、蒸馏水洗涤，过滤，再在110℃中干燥8h得到再生硅胶。
本发明具有的有益效果：
1、采用真空冷冻粉碎的方式对茶叶进行预处理，避免茶叶在常规预处理中的高温环境下与氧气接触，容易使茶多酚氧化造成损失，影响获得率。
2、采用超声波为主，微波为辅的处理，同时设置有双向的超声波源头，两个源头的超声波的波形相差1/2∏，能进一步提升提取能力，增加茶多酚的获得率。
3、采用硅胶作为层析柱的填料，具有流程简单，去除咖啡因的效果明显，同时硅胶可循环使用，节约环保。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
实施例一：茶多酚的提取。
一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其包括如下步骤：
步骤S10备料：称取适量鲜茶叶，在真空环境下冷冻干燥鲜茶叶，并粉碎，在真空环境下回复常温，过30目筛；
步骤S20浸提：按固液质量比为1：15的比例向已经过筛的茶叶粉中加入无水乙醇进行浸提1h，浸提温度为60℃，过滤得到浸提液；
步骤S30超声波处理：在步骤S20浸提过程中，进行260W、30min的超声波处理；
步骤S40微波处理：步骤S30的超声波处理结束后，进行350W、5min的微波处理；
步骤S50去乙醇：按体积比1：1的比例向步骤S20中获得的浸提液中加入去离子水，一个标准大气压下的氮气环境中，加热到70℃，蒸发酒精，真空环境下冷却到室温；
步骤S60浓缩：按体积比1.5：1的比例向酸解液中加入乙酸乙酯，在40-50℃中萃取3次，每次20min，将多次萃取的乙酸乙酯合并，浓缩；
步骤S61，将层析液进行冷冻干燥，得到固态提取物；
步骤S70柱层析：选用硅胶GF254作为柱填料，首先使用无水乙醇浸泡活化硅胶GF254，采用湿法装柱，用弱盐酸清洗层析柱使层析柱处于弱酸环境，用去离子水浸泡溶解步骤S60中浓缩的茶多酚，然后上样，使用去离子水洗脱至无色，再用无水乙醇洗脱，合并洗脱液，再真空浓缩，得高纯度茶多酚；
S71硅胶再生：将硅胶依次使用乙醇、蒸馏水洗涤，过滤，再在110℃中干燥8h得到再生硅胶。
作为优选实施例，所述的步骤S30中的超声波处理中采用两个超声波源，一个从顶部向下发射超声波，一个从底部向上发射超声波，两个超声波源的波形相差1/2∏。
实施例二：提取方法的获得率的测试。
将实施例一中的茶多酚提取物作为实验组1，再按表1的条件制作对照组和其他实验组，再检测各组获得的茶多酚含量。
表1，各对照组和实验组的处理参数差异表。
实验组2 实验组3 实验组4 实验组5 对照组6
预处理方法 加热干燥 真空冷冻干燥 真空冷冻干燥 真空冷冻干燥 加热干燥
浸提辅助 超声波+微波 超声波 微波 超声波+微波 不辅助
层析柱填料 硅胶 硅胶 硅胶 聚酰胺树脂 聚酰胺树脂
茶多酚含量检测方法：
分别量取0、2、4、6、8和10ml的浓度为0.1mg/mL的标准溶液，置于50mL容量瓶中，定容至刻度线，在波长274nm处测定吸光度，根据浓度和吸光度绘制标准曲线，得到标准曲线方程：Y＝0.097X+0.0062，R＝0.0992。
茶多酚的获得率＝VCN/(1000*W)*100％，式中：V为步骤S60中得到的提纯后样品的体积，单位mL；C为稀释后提取液中茶多酚质量浓度，单位mg/mL；N为提取液稀释倍数；W为茶叶质量，单位g，测定结果如表2。
表2，茶多酚含量测定结果表
实验组1 实验组2 实验组3 实验组4 实验组5 对照组6
获得率(％) 27.9 25.4 23.1 26.8 25.9 20.4
纯度(％) 97.2 96.8 96.3 96.8 92.3 93.1
从表2中看出，真空冷冻的预处理方式有助于提升获得率，结合超声波和微波处理能显著提升获得率，同时使用硅胶层析柱能有效提升纯度。
以上所述实施例仅表达了本发明的一种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (5)

1.一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其特征在于，其包括如下步骤：
步骤S10备料：称取适量鲜茶叶，在真空环境下冷冻干燥鲜茶叶，并粉碎，在真空环境下回复常温，过20-40目筛；
步骤S20浸提：按固液质量比为1：15的比例向已经过筛的茶叶粉中加入无水乙醇进行浸提1h，浸提温度为60℃，过滤得到浸提液；
步骤S30超声波处理：在步骤S20浸提过程中，进行260W、30min的超声波处理；
步骤S40微波处理：步骤S30的超声波处理结束后，进行350W、5min的微波处理；
步骤S50去乙醇：按体积比1：1的比例向步骤S20中获得的浸提液中加入去离子水，一个标准大气压下的氮气环境中，加热到70℃，蒸发酒精，真空环境下冷却到室温；
步骤S60浓缩：按体积比1-2：1的比例向酸解液中加入乙酸乙酯，在40-50℃中萃取2-3次，每次20-30min，将多次萃取的乙酸乙酯合并，浓缩；
步骤S70柱层析：选用硅胶GF254作为柱填料，首先使用无水乙醇浸泡活化硅胶GF254，采用湿法装柱，用弱盐酸清洗层析柱使层析柱处于弱酸环境，用去离子水浸泡溶解步骤S60中浓缩的茶多酚，然后上样，使用去离子水洗脱至无色，再用无水乙醇洗脱，合并洗脱液，再真空浓缩，得高纯度茶多酚。
2.根据权利要求1所述的一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其特征在于，所述的步骤S10中的筛为30目的筛。
3.根据权利要求1所述的一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其特征在于，所述的步骤S30中的超声波处理中采用两个超声波源，一个从顶部向下发射超声波，一个从底部向上发射超声波，两个超声波源的波形相差1/2∏。
4.根据权利要求1所述的一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其特征在于，所述的步骤S60还包括步骤S61，将层析液进行冷冻干燥，得到固态提取物。
5.根据权利要求1所述的一种基于柱层析茶多酚提纯方法，其特征在于，所述的步骤S70还包括步骤S71硅胶再生：将硅胶依次使用乙醇、蒸馏水洗涤，过滤，再在110℃中干燥8h得到再生硅胶。
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