CN111175495A - 一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法 - Google Patents
一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111175495A CN111175495A CN202010124959.1A CN202010124959A CN111175495A CN 111175495 A CN111175495 A CN 111175495A CN 202010124959 A CN202010124959 A CN 202010124959A CN 111175495 A CN111175495 A CN 111175495A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gastrin17
- reagent
- solution
- prepared
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 title claims abstract description 79
- 108010066264 gastrin 17 Proteins 0.000 title claims abstract description 76
- GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N gastrin-17 Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 GKDWRERMBNGKCZ-RNXBIMIWSA-N 0.000 title claims abstract description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 51
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims abstract description 37
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 30
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical group O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 57
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 54
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 52
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 44
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 44
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 43
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 22
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 22
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 19
- 239000006148 magnetic separator Substances 0.000 claims description 18
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 16
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 15
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 15
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 13
- 208000000659 Autoimmune lymphoproliferative syndrome Diseases 0.000 claims description 12
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 claims description 9
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 claims description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 8
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 claims description 7
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 claims description 7
- YLGXILFCIXHCMC-JHGZEJCSSA-N methyl cellulose Chemical compound COC1C(OC)C(OC)C(COC)O[C@H]1O[C@H]1C(OC)C(OC)C(OC)OC1COC YLGXILFCIXHCMC-JHGZEJCSSA-N 0.000 claims description 7
- 229940053050 neomycin sulfate Drugs 0.000 claims description 7
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 claims description 7
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 claims description 7
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 claims description 7
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 claims description 7
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 6
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims description 5
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 5
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 5
- KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N lucigenin Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.C12=CC=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C2)C2=C1C1=C(C=CC=C2)C2=[N+](C)C2=CC=CC=C12 KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 4
- XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N bronidox Chemical compound [O-][N+](=O)C1(Br)COCOC1 XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910018830 PO3H Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 17
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 abstract 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanetriol Chemical compound CNC(O)(O)O FYFFGSSZFBZTAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108090001072 Gastricsin Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108010047320 Pepsinogen A Proteins 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000003626 gastrointestinal polypeptide Substances 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001000 lipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明公开了生物化学相关技术领域的一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法,包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物;其中抗试剂异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体和碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体;磁微粒试剂为磁微粒与羊抗FITC连接物;本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合,提供了一种接近均相的反应体系,并且采用了一步法反应模式,使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大,反应时间大大缩短,从开始加样到检测结果,时间少于35min,明显快于同类试剂盒;并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本,实现胃泌素17的高通量快速化测定,准确度高,特异性强,精确度和检测效率有了较大的提高。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学相关技术领域,特别涉及一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法。
背景技术
胃泌素17(gastrin17,G17)是一种重要的胃肠道肽类激素,于1905年由英国学者Edkins首先发现并命名。它主要由G细胞分泌。G细胞是典型的开放型细胞,以胃窦部最多,其次是胃底、十二指肠和空肠等处。人胰岛的D细胞亦能分泌胃泌素。
胃泌素17能刺激胃酸分泌,促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,也对癌细胞生长及细胞恶性转化产生影响。同时胃泌素能够促进胃肠道内胃蛋白酶、促胰液素、胰液、胆汁的分泌,促进降钙素和胰岛素的释放,也可以加强胃肠道运动和胆囊收缩。近年来血清胃泌素17、胃蛋白酶原I/II、幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.Pylori)抗体等胃粘膜“血清学活检”指标凭借其低成本、简便易行、无创、可动态随访等特点,在临床胃肠疾病的辅助诊断中受到广泛重视。
目前已知的胃泌素17测定方法有荧光免疫层析法(FICA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法等。荧光免疫层析法的有机染料标记物光照下易分解,易发生光漂白现象,具有浓度猝灭特征,会影响分析结果的准确性和可靠性。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。
发明内容
针对现有技术存在的检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要的技术问题,本发明提供一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法。
为实现上述目的,本发明的技术方案为:
一种测定胃泌素17含量的试剂盒,包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物;所述校准品、所述质控品、所述抗试剂、所述磁微粒试剂和所述发光底物分别独立地包装;
所述校准品通过在1L新生牛血清中加入0.01~0.05g的四环素和0.1~0.5g的硫酸新霉素,完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成;
所述质控品通过用所述校准品溶解胃泌素17抗原制备而成;
所述抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sa1:将10~20g的Na2PO3H·12H2O、1~2g的NaPO3H2·12H2O、1~5g的绵羊血清、3~10g的新生牛血清、1~5g的马血清加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用4M的HCl调节pH至5~6,制得抗试剂缓冲液;
Sa2:用所述抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0~5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液,向胃泌素17抗体中加入所述胃泌素17抗体质量1.1~1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合,使用pH为8~9的碳酸盐缓冲液平衡,然后使用凝胶层析分离纯化,制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体:
Sa3:用所述抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0~5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液,用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为所述碱性磷酸酶:所述胃泌素17抗体为1:1~1:3的反应比,在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应,充分反应后,使用pH为8~9的Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体;
Sa4:将所述异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与所述碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中,充分混合即得;
所述磁微粒试剂通过将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制备而成;
所述发光底物通过将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制备而成。
进一步的,还包括清洗液,所述清洗液通过将150~170gNaCl、3~5gKCl、24~24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8~1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中,再用HCl调整至pH7.2~7.6,最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
优选的,Sa4中所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种,所述表面活性剂的添加量为0.01%~0.5%。
进一步的,所述磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sb1:将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15~20min,待羧基磁珠全部沉降后吸去上清,向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2~5倍的磁微粒缓冲液,震荡清洗20~30min后在磁场内放置15~20min再吸去上清;重复清洗羧基磁珠1~3遍;最后将羧基磁珠混合液定容到10~50mg/mL,制得羧基磁珠溶液;
Sb2:向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8%~1.2%的抗异硫氰酸荧光素抗体,在2~8℃内保持混匀状态反应16~20h;
Sb3:将Sb2制得的溶液在磁场中放置12~18min,待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1~3遍,随后定容至8~12mg/mL,2~8℃保存。
进一步的,所述磁微粒缓冲液通过将12.12~15.26mg的Tris、5.82~8.58mg的NaCl和50~60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解制备而成。
进一步的,所述发光底物通过将ALPS体积4~10倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成;所述发光底物缓冲液通过将12.12~121.14g的Tris、5.82~8.58g的NaCl和0.03~0.05g的光泽精加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用盐酸调节pH至9.3~9.5制备而成。
一种上述任一项所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法,包括以下步骤:
Sc1:取三支试管分别加100μL所述校准品、100μL所述质控品、100μL待测样本;
Sc2:每支所述试管中加入60μL所述抗试剂,用塑料薄膜覆盖所述试管,轻轻振荡30s,置于37℃下水浴15min;
Sc3:每支所述试管中加入30μL所述磁微粒试剂,用所述塑料薄膜覆盖所述试管,轻轻振荡30s,置37℃下水浴5min;
Sc4:将所述试管在磁分离器上沉淀3min,缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器,倒出上清液;把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起,放在滤纸上,拍击所述磁分离器底部以除去粘在所述试管的管壁上的所有液滴;
Sc5:每支所述试管中加入200μL所述发光底物,振荡混匀3s,用化学发光仪检测发光强度。
进一步的,Sc4操作后还包括Sc4.1:向每支所述试管中加入300μL所述清洗液,用塑料薄膜覆盖试管,轻轻振荡试管30s,混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器,倒出上清液,把倒转的试管连同磁分离器一起,放在滤纸上,用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴。
进一步的,Sc4.1操作后还包括Sc4.2:重复Sc4.2的操作1~2次。
本发明具有如下优点:
1.该试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合,提供了一种接近均相的反应体系,并且采用了一步法反应模式,使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大,反应时间大大缩短,从开始加样到检测结果,时间少于35min,明显快于同类试剂盒;
2.发明了一种新的FITC抗体与磁微粒偶联方法,该方法偶联效率高,结合牢固,且工艺稳定,在提高产品性能的同时,大大降低了产品成本;
3.试剂盒中抗试剂、磁微粒试剂、校准品、质控品、发光底物液和浓缩洗液均是该反应体系下的最优配方,给该试剂盒的使用效期及检测性能提供了有力保障;
4.本发明可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本,实现胃泌素17的高通量快速化测定,准确度高,特异性强,精确度和检测效率有了较大的提高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明的试剂盒与其他市售试剂盒检测临床血清的相关性;其中横坐标为其他市售试剂盒的检测结果,纵坐标为本发明试剂盒的检测结果。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是,对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明,但并不构成对本发明的限定。此外,在以下说明中,省略了对公知结构、技术及操作的描述,以避免不必要地混淆本发明的概念。另外,下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明中,未特别注明单位的比例与含量,固体组分为质量比例与含量,液体组分为体积比例与含量。
一种测定胃泌素17含量的试剂盒,包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液;其中,校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物和清洗液分别独立地包装,组成测定胃泌素17含量的试剂盒,具体实施例如下:
实施例1
校准品通过在1L新生牛血清中加入0.01g的四环素和0.1g的硫酸新霉素,完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成;
质控品通过用校准品溶解胃泌素17抗原制备而成;
抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sa1:将10g的Na2PO3H·12H2O、1g的NaPO3H2·12H2O、1g的绵羊血清、3g的新生牛血清、1g的马血清加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用4M的HCl调节pH至5,制得抗试剂缓冲液;
Sa2:用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液,向胃泌素17抗体中加入胃泌素17抗体质量1.1倍的异硫氰酸荧光素溶液并充分混合,使用pH为8的碳酸盐缓冲液平衡,然后使用凝胶层析分离纯化,制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体:
Sa3:用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液,用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为碱性磷酸酶:胃泌素17抗体为1:1的反应比,在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应,充分反应后,使用pH为8的Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体;
Sa4:将异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中,充分混合即得;
其中,表面活性剂为Tween20,表面活性剂的添加量为0.01%;
磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sb1:将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15min,待羧基磁珠全部沉降后吸去上清,向羧基磁珠中加入述羧基磁珠体积2倍的磁微粒缓冲液,震荡清洗20min后在磁场内放置15min再吸去上清;重复清洗羧基磁珠1遍;最后将羧基磁珠混合液定容到10mg/mL,制得羧基磁珠溶液;
Sb2:向羧基磁珠溶液中加入羧基磁珠溶液质量0.8%的抗异硫氰酸荧光素抗体,在2℃内保持混匀状态反应16h;
Sb3:将Sb2制得的溶液在磁场中放置12min,待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1遍,随后定容至8mg/mL,2℃保存;
其中,磁微粒缓冲液通过将12.12mg的Tris、5.82mg的NaCl和50g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解制备而成;
发光底物通过将ALPS体积4倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成;发光底物缓冲液通过将12.12g的Tris、5.82g的NaCl和0.03g的光泽精加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用盐酸调节pH至9.3制备而成;
清洗液通过将150gNaCl、3gKCl、24g三羟甲基氨基甲烷、0.8mL吐温20溶于900ml双蒸水中,再用HCl调整至pH7.2,最后用双蒸水定容至1000ml。
实施例2
校准品通过在1L新生牛血清中加入0.03g的四环素和0.3g的硫酸新霉素,完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成;
质控品通过用校准品溶解胃泌素17抗原制备而成;
抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sa1:将15g的Na2PO3H·12H2O、1.5g的NaPO3H2·12H2O、3g的绵羊血清、6g的新生牛血清、3g的马血清加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用4M的HCl调节pH至5.5,制得抗试剂缓冲液;
Sa2:用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为3.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液,向胃泌素17抗体中加入胃泌素17抗体质量1.3倍的异硫氰酸荧光素溶液并充分混合,使用pH为8.5的碳酸盐缓冲液平衡,然后使用凝胶层析分离纯化,制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体:
Sa3:用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为3.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液,用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为碱性磷酸酶:胃泌素17抗体为1:2的反应比,在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应,充分反应后,使用pH为8.5的Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体;
Sa4:将异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中,充分混合即得;
其中,表面活性剂为TritonX-100,表面活性剂的添加量为0.3%;
磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sb1:将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置18min,待羧基磁珠全部沉降后吸去上清,向羧基磁珠中加入述羧基磁珠体积4倍的磁微粒缓冲液,震荡清洗25min后在磁场内放置18min再吸去上清;重复清洗羧基磁珠2遍;最后将羧基磁珠混合液定容到30mg/mL,制得羧基磁珠溶液;
Sb2:向羧基磁珠溶液中加入羧基磁珠溶液质量1%的抗异硫氰酸荧光素抗体,在5℃内保持混匀状态反应18h;
Sb3:将Sb2制得的溶液在磁场中放置15min,待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗2遍,随后定容至10mg/mL,5℃保存;
其中,磁微粒缓冲液通过将14.26mg的Tris、6.58mg的NaCl和55g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解制备而成;
发光底物通过将ALPS体积7倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成;发光底物缓冲液通过将40.14g的Tris、6.58g的NaCl和0.04g的光泽精加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用盐酸调节pH至9.4制备而成;
清洗液通过将160gNaCl、4gKCl、24.2g三羟甲基氨基甲烷、1mL吐温20溶于900ml双蒸水中,再用HCl调整至pH7.4,最后用双蒸水定容至1000ml。
实施例3
校准品通过在1L新生牛血清中加入0.05g的四环素和0.5g的硫酸新霉素,完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成;
质控品通过用校准品溶解胃泌素17抗原制备而成;
抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sa1:将20g的Na2PO3H·12H2O、2g的NaPO3H2·12H2O、5g的绵羊血清、10g的新生牛血清、5g的马血清加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用4M的HCl调节pH至6,制得抗试剂缓冲液;
Sa2:用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液,向胃泌素17抗体中加入胃泌素17抗体质量1.5倍的异硫氰酸荧光素溶液并充分混合,使用pH为9的碳酸盐缓冲液平衡,然后使用凝胶层析分离纯化,制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体:
Sa3:用抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液,用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为碱性磷酸酶:胃泌素17抗体为1:3的反应比,在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应,充分反应后,使用pH为9的Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体;
Sa4:将异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中,充分混合即得;
其中,表面活性剂为Bronidox,表面活性剂的添加量为0.5%;
磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sb1:将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置20min,待羧基磁珠全部沉降后吸去上清,向羧基磁珠中加入述羧基磁珠体积5倍的磁微粒缓冲液,震荡清洗30min后在磁场内放置20min再吸去上清;重复清洗羧基磁珠3遍;最后将羧基磁珠混合液定容到50mg/mL,制得羧基磁珠溶液;
Sb2:向羧基磁珠溶液中加入羧基磁珠溶液质量1.2%的抗异硫氰酸荧光素抗体,在8℃内保持混匀状态反应20h;
Sb3:将Sb2制得的溶液在磁场中放置18min,待羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗3遍,随后定容至12mg/mL,8℃保存;
其中,磁微粒缓冲液通过将15.26mg的Tris、8.58mg的NaCl和60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解制备而成;
发光底物通过将ALPS体积10倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成;发光底物缓冲液通过将121.14g的Tris、8.58g的NaCl和0.05g的光泽精加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用盐酸调节pH至9.5制备而成;
清洗液通过将170gNaCl、5gKCl、24.4g三羟甲基氨基甲烷、1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中,再用HCl调整至pH7.6,最后用双蒸水定容至1000ml。
用实施例1~3任一项制备的测定胃泌素17含量的试剂盒来测定胃泌素17含量的具体操作如下:
1、样本采集
采用正确医用技术收集血清(严重溶血或脂血的样本不能用于测定),收集后的样本在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样本放置于2~8℃的冰箱中;若需72小时以上保存或运输,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。使用前回复到室温,轻轻摇动混匀。
2、实验前准备
2.1取一瓶洗液用蒸馏水进行15倍稀释;
2.2将恒温箱或水浴锅温度调至37℃,待温度稳定后使用;
2.3将磁微粒混悬液充分混匀至无肉眼可见沉淀。
3实验方法
Sc1:取三支试管,编号;分别加100μL校准品、100μL质控品、100μL待测样本;
Sc2:每支试管中加入60μL抗试剂,用塑料薄膜覆盖试管,轻轻振荡30s,置于37℃下水浴15min;
Sc3:每支试管中加入30μL磁微粒试剂,用塑料薄膜覆盖试管,轻轻振荡30s,置37℃下水浴5min;
Sc4:将试管在磁分离器上沉淀3min,缓慢地倒转试管和磁分离器,倒出上清液;把倒转的试管连同磁分离器一起,放在滤纸上,拍击磁分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;
Sc4.1:向每支试管中加入300μL清洗液,用塑料薄膜覆盖试管,轻轻振荡试管30s,混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器,倒出上清液,把倒转的试管连同磁分离器一起,放在滤纸上,用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴;为了提高检测数据的准确性,具体实施时,可以重复本步骤1~2次;
Sc5:每支试管中加入200μL发光底物,振荡混匀3s,用化学发光仪检测发光强度。
采用四参数拟合方式,以校准品浓度值为X轴,以校准品发光强度值为Y轴,建立定标曲线。根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。
将本发明试剂盒按照方法学鉴定,可达到如下指标:
标准曲线线性:R>0.9900;
最低检测限:≤0.5ng/ml;
准确度:添加回收率85%-115%;
重复性:变异系数CV≤8%;
批间差:变异系数≤15%;
线性稀释:R大于0.9900。
将100份血清样本测值与市售胃泌素17检测试剂盒A对比,比较本发明试剂盒与市售胃泌素17试剂盒检测结果的相关性,结果如图1所示。
以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明,以上仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种测定胃泌素17含量的试剂盒,其特征在于:包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物;所述校准品、所述质控品、所述抗试剂、所述磁微粒试剂和所述发光底物分别独立地包装;
所述校准品通过在1L新生牛血清中加入0.01~0.05g的四环素和0.1~0.5g的硫酸新霉素,完全溶解后经过滤膜处理制备而成;
所述质控品通过用所述校准品溶解胃泌素17抗原制备而成;
所述抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sa1:将10~20g的Na2PO3H·12H2O、1~2g的NaPO3H2·12H2O、1~5g的绵羊血清、3~10g的新生牛血清、1~5g的马血清加入1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用HCl调节pH至5~6,制得抗试剂缓冲液;
Sa2:用所述抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0~5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液,向胃泌素17抗体中加入所述胃泌素17抗体质量1.1~1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合,使用pH为8~9的碳酸盐缓冲液平衡,然后使用凝胶层析分离纯化,制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体:
Sa3:用所述抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0~5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液,用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为所述碱性磷酸酶:所述胃泌素17抗体为1:1~1:3的反应比,在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应,充分反应后,使用Tris缓冲液平衡,凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化,制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体;
Sa4:将所述异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与所述碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中,充分混合即得;
所述磁微粒试剂通过将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制备而成;
所述发光底物通过将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制备而成。
2.根据权利要求1所述的测定胃泌素17含量的试剂盒,其特征在于:还包括清洗液,所述清洗液通过将150~170gNaCl、3~5gKCl、24~24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8~1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中,再用HCl调整至pH7.2~7.6,最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。
3.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒,其特征在于:Sa4中所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种,所述表面活性剂的添加量为0.01%~0.5%。
4.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒,其特征在于:所述磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成:
Sb1:将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15~20min,待羧基磁珠全部沉降后吸去上清,向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2~5倍的磁微粒缓冲液,震荡清洗20~30min后在磁场内放置15~20min再吸去上清;重复清洗羧基磁珠1~3遍;最后将羧基磁珠混合液定容到10~50mg/mL,制得羧基磁珠溶液;
Sb2:向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8%~1.2%的抗异硫氰酸荧光素抗体,在2~8℃内保持混匀状态反应16~20h;
Sb3:将Sb2制得的溶液在磁场中放置12~18min,待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1~3遍,随后定容至8~12mg/mL,2~8℃保存。
5.根据权利要求4所述的测定胃泌素17含量的试剂盒,其特征在于:所述磁微粒缓冲液通过将12.12~15.26mg的Tris、5.82~8.58mg的NaCl和50~60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解制备而成。
6.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒,其特征在于:所述发光底物通过将ALPS体积4~10倍的发光底物缓冲液充分溶解ALPS制备而成;所述发光底物缓冲液通过将12.12~121.14g的Tris、5.82~8.58g的NaCl和0.03~0.05g的光泽精加入到1L纯化水中,充分搅拌至完全溶解,用盐酸调节pH至9.3~9.5制备而成。
7.一种如权利要求1~6任一项所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法,其特征在于:包括以下步骤:
Sc1:取三支试管分别加100μL所述校准品、100μL所述质控品、100μL待测样本;
Sc2:每支所述试管中加入60μL所述抗试剂,用塑料薄膜覆盖所述试管,轻轻振荡30s,置于37℃下水浴15min;
Sc3:每支所述试管中加入30μL所述磁微粒试剂,用所述塑料薄膜覆盖所述试管,轻轻振荡30s,置37℃下水浴5min;
Sc4:将所述试管在磁分离器上沉淀3min,缓慢地倒转所述试管和所述磁分离器,倒出上清液;把倒转的所述试管连同所述磁分离器一起,放在滤纸上,拍击所述磁分离器底部以除去粘在所述试管的管壁上的所有液滴;
Sc5:每支所述试管中加入200μL所述发光底物,振荡混匀3s,用化学发光仪检测发光强度。
8.根据权利要求7所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法,其特征在于:Sc4操作后还包括Sc4.1:向每支所述试管中加入300μL清洗液,用塑料薄膜覆盖试管,轻轻振荡试管30s,混匀后缓慢的倒转试管和磁分离器,倒出上清液,把倒转的试管连同磁分离器一起,放在滤纸上,用力拍击分离器底部以除去粘在管壁上的所有液滴。
9.根据权利要求8所述的测定胃泌素17含量的试剂盒的使用方法,其特征在于:Sc4.1操作后还包括Sc4.2:重复Sc4.2的操作1~2次。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010124959.1A CN111175495A (zh) | 2020-02-27 | 2020-02-27 | 一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010124959.1A CN111175495A (zh) | 2020-02-27 | 2020-02-27 | 一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111175495A true CN111175495A (zh) | 2020-05-19 |
Family
ID=70656674
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010124959.1A Pending CN111175495A (zh) | 2020-02-27 | 2020-02-27 | 一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111175495A (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104614536A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-05-13 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 一种用于检测胃泌素-17的试剂盒及其制备方法和应用 |
CN104914251A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-16 | 必欧瀚生物技术(合肥)有限公司 | 一种胃泌素-17酶促化学发光检测试剂盒 |
CN108205059A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-06-26 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法 |
US20180231540A1 (en) * | 2015-02-10 | 2018-08-16 | Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co., Ltd. | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit |
-
2020
- 2020-02-27 CN CN202010124959.1A patent/CN111175495A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104614536A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-05-13 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 一种用于检测胃泌素-17的试剂盒及其制备方法和应用 |
US20180231540A1 (en) * | 2015-02-10 | 2018-08-16 | Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co., Ltd. | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit |
CN104914251A (zh) * | 2015-05-22 | 2015-09-16 | 必欧瀚生物技术(合肥)有限公司 | 一种胃泌素-17酶促化学发光检测试剂盒 |
CN108205059A (zh) * | 2017-11-28 | 2018-06-26 | 泰州泽成生物技术有限公司 | 一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10472400B2 (en) | Cardiac troponin I ultra-sensitive detection reagent kit, and ultra-sensitive detection method therefor | |
WO2011012053A1 (zh) | 检测血液抗环瓜氨酸多肽抗体的试纸条及制备方法 | |
CN101377490A (zh) | 用于检测疾病相关标志物的磁微粒分离化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法 | |
CN107543932A (zh) | 一种降钙素的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法 | |
EP3258266B1 (en) | Reagent kit used for detecting gastrin-17, and preparation method and application for reagent kit | |
EP3315969B1 (en) | Method of detecting test substance by immune complex transfer method | |
CN111175494A (zh) | 一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法 | |
CN113391076A (zh) | 一种25-羟基维生素d的免疫检测方法及其应用 | |
JPH08145998A (ja) | インスリン様成長因子の免疫学的測定方法ならびにインスリン様成長因子測定用キット | |
EP0724726B1 (en) | Method for the determination of an analyte and its use for the determination of anti-tsh receptor autoantibodies in a patient serum | |
CN109187971A (zh) | 神经元特异性烯醇化酶化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
CN108896773A (zh) | 一种胃泌素17检测试剂盒及其制备和使用方法 | |
CN108444988A (zh) | 甲状腺球蛋白化学发光检测试剂盒 | |
CN113933521A (zh) | 磁微粒化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN109239368A (zh) | 测定孕酮的方法及试剂盒 | |
CN109342718A (zh) | 一种磁微粒化学发光检测方法 | |
CN108982835A (zh) | 一种雌二醇磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
CN109633163B (zh) | 降钙素原/c反应蛋白二合一检测试剂盒 | |
CN111175495A (zh) | 一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法 | |
EP0460097A4 (en) | Method and diagnostic test kit for detection of anti-cardiolipin | |
CN111175492A (zh) | 一种用于检测血清中降钙素原含量的试剂盒及其使用方法 | |
CN102628871B (zh) | 甲状腺激素固定载体的液体试剂及其用途 | |
CN113109325A (zh) | 一种胃蛋白酶原i酶促化学发光检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
CN114702572B (zh) | 25-羟基维生素d3抗原制备方法及免疫层析试纸条 | |
CN111208291A (zh) | 检测血清中幽门螺旋杆菌抗体含量的试剂盒及其使用方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200519 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |