CN111166879A - 一种猪免疫球蛋白口服液 - Google Patents
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Abstract
本发明实施例公开了一种猪免疫球蛋白口服液，具体涉及蛋白口服液技术领域，含有由猪血清提取的含有轮状病毒特异性中和抗体的复合免疫球蛋白，包括IgG、IgM和IgA。本发明对多种细菌具有凝集作用，凝集活性与人体丙种球蛋白相近，对小鼠痢疾杆菌及绿脓杆菌的感染模型有较好的治疗作用，对人轮状病毒感染的细胞株有抑制细胞病变的抗病毒作用，不受胃液破坏，在肠中稳定6小时以上，足以充分发挥药效，以口服方式给药，无血源性感染忧虑，口服后，不易引起过敏症，来源广，成本低，是极为理想的抗感染免疫制剂。
Description
技术领域
本发明实施例涉及蛋白口服液技术领域，具体涉及一种猪免疫球蛋白口服液。
背景技术
猪血清内的IgG的含量虽比人血清含量低，但猪血清内的IgM含量高于人3.9倍，IgA含量高于人1.65倍，后二类免疫球蛋白均可接纳分泌片，分泌片是由粘膜上皮细胞合成，可保护球蛋白免遭多种蛋白酶的水解破坏，特别是其中的IgM是五类Ig中，免疫活力最高，其凝聚作用及结合补体能力最强，一个IgM分子与抗原结合后即能活化补体，而IgG至少需要两个以上的分子与抗原结合后才能活化补体。IgM的凝聚作用比IgG大20倍，促进吞噬作用比IgG大500-1000倍，杀菌作用比IgG大100倍，IgM在防止发生菌血症与败血症中起主要作用。IgM也可在腺体组织的粘膜固有层中产生，分泌液中也有IgM存在，当患有IgA缺乏时分泌液中的IgM可代偿性增加，而IgA更是呼吸道、消化道等局部粘膜抗感染的主要免疫球蛋白。Ig口服后能在消化道粘膜面中留存，可阻止病原微生物向宿主细胞粘附，担负着局部屏障作用而具有抗感染能力。
常规沿用的人丙球，人胎球的成分单一，其中主要为IgG，而IgM含量极少，来源于人血的材料不易获得，成本很高，且血制品以注射方式给药，且已成为血源性感染的主要途径，故需要一种可口服方式给药、原料来源广、成本低的抗感染免疫制剂。
发明内容
为此，本发明实施例提供一种猪免疫球蛋白口服液，本发明对多种细菌具有凝集作用，凝集活性与人体丙种球蛋白相近，对小鼠痢疾杆菌及绿脓杆菌的感染模型有较好的治疗作用，对人轮状病毒感染的细胞株有抑制细胞病变的抗病毒作用，不受胃液破坏，在肠中稳定6小时以上，足以充分发挥药效，以口服方式给药，无血源性感染忧虑，口服后，不易引起过敏症，来源广，成本低，是极为理想的抗感染免疫制剂。
为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：一种猪免疫球蛋白口服液，含有由猪血清提取的含有轮状病毒特异性中和抗体的复合免疫球蛋白，包括IgG、IgM和IgA。
本发明还包括猪免疫球蛋白口服液的制备方法，具体步骤如下：
S1、猪血浆采集：采集30头猪的全血50Kg，然后将全血放入离心机中离心，离心分离得血清量20.75Kg；
S2、组分分离：
S2.1、向得到的20.75Kg猪血浆中加入14.53Kg的蒸馏水稀释，然后再加入13.49Kg的3％利凡诺液和10.38ml辛酸搅拌均匀，然后再加入100ml的冰醋酸搅拌30min，将混合液的PH调至7.0-7.2，然后放入离心机中离心；
S2.2、将混合液静置10min后去除上浮物，澄清过滤后取滤液；
S2.3、向滤液中加入2.15Kg的氯化钠并搅拌15min，然后缓慢加入浓度为3mmol/L的三氯化铁溶液，然后调节PH至4.0-5.0，然后水浴加热保温，然后取出静置10min后使用离心机离心，离心机转速6000r/min离心20min，去除沉淀得上清液41000ml；
S2.4、向上清液中加入82.0g的活性炭搅拌均匀，然后放入含有1％硅藻土的板框过滤器过滤处理，而后澄清过滤，调PH值至7.0；
S3、超滤：使用螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式对澄清液进行超滤浓缩，超滤后得2750ml的滤液，然后将滤液在1-4℃的环境中保存7天；
S4、原液合并：合并原液，除菌过滤后总量2750ml，然后加入海藻糖，在1-4℃的环境中保存25天；
S5、原液检定：测定原液中的蛋白含量和利凡诺残留量；
S6、半成品配制：
S6.1、原料为：原液2750ml、30％的山梨醇1200ml、甘油480ml、丁香油24ml和3倍浓缩的磷酸盐缓冲液3000ml；
S6.2、将上述原料混合，然后加入蒸馏水将混合液补加到12000ml，搅拌10min，然后调PH至6.4-7.4，然后将混合液澄清过滤和除菌过滤后存放于1-4℃的环境中，半成品滤后总量为12000ml；
S7、半成品检定：检测半成品中的蛋白含量、PH值以及利凡诺残留量；
S8、分装：将12000ml的总量按照10ml/支的量进行分装，共分装1103支，然后放1-4℃的环境中保存，从而制得猪免疫球蛋白口服液。
进一步地，在步骤S1中采集全血后在全血中加入4％浓度的枸橼酸钠抗凝剂3.125Kg搅拌均匀，防止血液凝固，离心机的转速为6000r/min，离心时间为20min。
进一步地，在步骤S2.1中离心机转速为10000r/min，离心时间为30min。
进一步地，在步骤S2.3中水浴温度为35-45℃，加热保温时间为60-120min。
进一步地，在步骤S3中超滤浓缩所使用的超滤膜为10万分子量的PES膜，超滤温度为50℃，超滤压力为0.1Mpa。
进一步地，在步骤S5中使用酶联免疫吸附法测定原液中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准。
进一步地，在步骤S7中使用PH计检测半成品的PH值，使用酶联免疫吸附法检测半成品中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准。
本发明实施例具有如下优点：
1、本发明的猪免疫球蛋白口服液对多种细菌具有凝集作用，凝集活性与人体丙种球蛋白相近，对小鼠痢疾杆菌及绿脓杆菌的感染模型有较好的治疗作用，对人轮状病毒感染的细胞株有抑制细胞病变(CPE)的抗病毒作用，不受胃液破坏，在肠中稳定6小时以上，足以充分发挥药效，以口服方式给药，无血源性感染忧虑，口服后，不易引起过敏症，来源广，成本低，是极为理想的抗感染免疫制剂；
2、本发明通过利用辛酸沉淀，同时通过加入氯化钠和三氯化铁降低免疫球蛋白的溶解度，使得蛋白质分子之间聚集沉淀，并且对澄清液进行超滤浓缩，使得分离效果好，通过加入海藻糖这一对生物活性物质具有非特异性保护作用的天然糖类，有效减少的复合免疫球蛋白在低温环境下的免疫活性损失，有效提高本发明的质量。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本发明提供一种猪免疫球蛋白口服液，含有由猪血清提取的含有轮状病毒特异性中和抗体的复合免疫球蛋白，包括IgG、IgM和IgA。
猪免疫球蛋白口服液的制备具体步骤如下：
S1、猪血浆采集：采集30头猪的全血50Kg，然后在全血中加入4％浓度的枸橼酸钠抗凝剂3.125Kg搅拌均匀，防止血液凝固，然后将全血放入离心机中离心，转速为6000r/min，离心时间为20min，离心分离得血清量20.75Kg；
S2、组分分离：
S2.1、向得到的20.75Kg猪血浆中加入14.53Kg的蒸馏水稀释，然后再加入13.49Kg的3％利凡诺液和10.38ml辛酸搅拌均匀，然后再加入100ml的冰醋酸搅拌30min，将混合液的PH调至7.0，然后放入离心机中离心，转速为10000r/min，离心时间为30min；
S2.2、将混合液静置10min后去除上浮物，澄清过滤后取滤液；
S2.3、向滤液中加入2.15Kg的氯化钠并搅拌15min，然后缓慢加入浓度为3mmol/L的三氯化铁溶液，然后调节PH至4.0，然后35℃水浴加热保温60min，然后取出静置10min后使用离心机离心，离心机转速6000r/min离心20min，去除沉淀得上清液41000ml；
S2.4、向上清液中加入82.0g的活性炭搅拌均匀，然后放入含有1％硅藻土的板框过滤器过滤处理，而后澄清过滤，调PH值至7.0；
S3、超滤：使用螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式对澄清液进行超滤浓缩，所使用的超滤膜为10万分子量的PES膜，超滤温度为50℃，超滤压力为0.1Mpa，超滤后得2750ml的滤液，然后将滤液在1℃的环境中保存7天；
S4、原液合并：合并原液，除菌过滤后总量2750ml，然后加入海藻糖，在1℃的环境中保存25天；
S5、原液检定：使用酶联免疫吸附法测定原液中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准；
S6、半成品配制：
S6.1、原料为：原液2750ml、30％的山梨醇1200ml、甘油480ml、丁香油24ml和3倍浓缩的磷酸盐缓冲液3000ml；
S6.2、将上述原料混合，然后加入蒸馏水将混合液补加到12000ml，搅拌10min，然后调PH至6.4，然后将混合液澄清过滤和除菌过滤后存放于1℃的环境中，半成品滤后总量为12000ml；
S7、半成品检定：使用PH计检测半成品的PH值，使用酶联免疫吸附法检测半成品中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准；
S8、分装：将12000ml的总量按照10ml/支的量进行分装，共分装1103支，然后放1℃的环境中保存，从而制得猪免疫球蛋白口服液。
实施例2：
本发明提供一种猪免疫球蛋白口服液，含有由猪血清提取的含有轮状病毒特异性中和抗体的复合免疫球蛋白，包括IgG、IgM和IgA。
猪免疫球蛋白口服液的制备具体步骤如下：
S1、猪血浆采集：采集30头猪的全血50Kg，然后在全血中加入4％浓度的枸橼酸钠抗凝剂3.125Kg搅拌均匀，防止血液凝固，然后将全血放入离心机中离心，转速为6000r/min，离心时间为20min，离心分离得血清量20.75Kg；
S2、组分分离：
S2.1、向得到的20.75Kg猪血浆中加入14.53Kg的蒸馏水稀释，然后再加入13.49Kg的3％利凡诺液和10.38ml辛酸搅拌均匀，然后再加入100ml的冰醋酸搅拌30min，将混合液的PH调至7.1，然后放入离心机中离心，转速为10000r/min，离心时间为30min；
S2.2、将混合液静置10min后去除上浮物，澄清过滤后取滤液；
S2.3、向滤液中加入2.15Kg的氯化钠并搅拌15min，然后缓慢加入浓度为3mmol/L的三氯化铁溶液，然后调节PH至4.5，然后40℃水浴加热保温90min，然后取出静置10min后使用离心机离心，离心机转速6000r/min离心20min，去除沉淀得上清液41000ml；
S2.4、向上清液中加入82.0g的活性炭搅拌均匀，然后放入含有1％硅藻土的板框过滤器过滤处理，而后澄清过滤，调PH值至7.0；
S3、超滤：使用螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式对澄清液进行超滤浓缩，所使用的超滤膜为10万分子量的PES膜，超滤温度为50℃，超滤压力为0.1Mpa，超滤后得2750ml的滤液，然后将滤液在2.5℃的环境中保存7天；
S4、原液合并：合并原液，除菌过滤后总量2750ml，然后加入海藻糖，在2.5℃的环境中保存25天；
S5、原液检定：使用酶联免疫吸附法测定原液中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准；
S6、半成品配制：
S6.1、原料为：原液2750ml、30％的山梨醇1200ml、甘油480ml、丁香油24ml和3倍浓缩的磷酸盐缓冲液3000ml；
S6.2、将上述原料混合，然后加入蒸馏水将混合液补加到12000ml，搅拌10min，然后调PH至7，然后将混合液澄清过滤和除菌过滤后存放于2.5℃的环境中，半成品滤后总量为12000ml；
S7、半成品检定：使用PH计检测半成品的PH值，使用酶联免疫吸附法检测半成品中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准；
S8、分装：将12000ml的总量按照10ml/支的量进行分装，共分装1103支，然后放2.5℃的环境中保存，从而制得猪免疫球蛋白口服液。
实施例3：
本发明提供一种猪免疫球蛋白口服液，含有由猪血清提取的含有轮状病毒特异性中和抗体的复合免疫球蛋白，包括IgG、IgM和IgA。
猪免疫球蛋白口服液的制备具体步骤如下：
S1、猪血浆采集：采集30头猪的全血50Kg，然后在全血中加入4％浓度的枸橼酸钠抗凝剂3.125Kg搅拌均匀，防止血液凝固，然后将全血放入离心机中离心，转速为6000r/min，离心时间为20min，离心分离得血清量20.75Kg；
S2、组分分离：
S2.1、向得到的20.75Kg猪血浆中加入14.53Kg的蒸馏水稀释，然后再加入13.49Kg的3％利凡诺液和10.38ml辛酸搅拌均匀，然后再加入100ml的冰醋酸搅拌30min，将混合液的PH调至7.2，然后放入离心机中离心，转速为10000r/min，离心时间为30min；
S2.2、将混合液静置10min后去除上浮物，澄清过滤后取滤液；
S2.3、向滤液中加入2.15Kg的氯化钠并搅拌15min，然后缓慢加入浓度为3mmol/L的三氯化铁溶液，然后调节PH至5.0，然后45℃水浴加热保温120min，然后取出静置10min后使用离心机离心，离心机转速6000r/min离心20min，去除沉淀得上清液41000ml；
S2.4、向上清液中加入82.0g的活性炭搅拌均匀，然后放入含有1％硅藻土的板框过滤器过滤处理，而后澄清过滤，调PH值至7.0；
S3、超滤：使用螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式对澄清液进行超滤浓缩，所使用的超滤膜为10万分子量的PES膜，超滤温度为50℃，超滤压力为0.1Mpa，超滤后得2750ml的滤液，然后将滤液在4℃的环境中保存7天；
S4、原液合并：合并原液，除菌过滤后总量2750ml，然后加入海藻糖，在4℃的环境中保存25天；
S5、原液检定：使用酶联免疫吸附法测定原液中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准；
S6、半成品配制：
S6.1、原料为：原液2750ml、30％的山梨醇1200ml、甘油480ml、丁香油24ml和3倍浓缩的磷酸盐缓冲液3000ml；
S6.2、将上述原料混合，然后加入蒸馏水将混合液补加到12000ml，搅拌10min，然后调PH至7.4，然后将混合液澄清过滤和除菌过滤后存放于4℃的环境中，半成品滤后总量为12000ml；
S7、半成品检定：使用PH计检测半成品的PH值，使用酶联免疫吸附法检测半成品中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准；
S8、分装：将12000ml的总量按照10ml/支的量进行分装，共分装1103支，然后放4℃的环境中保存，从而制得猪免疫球蛋白口服液。
实施例4：
取上述实施例1-3所制得的分装好的90支猪免疫球蛋白口服液，使用酶联免疫吸附法检测其中蛋白含量和蛋白纯度，得到以下数据：
由上表可知，实施例2中所制得的口服液蛋白含量以及蛋白纯度最高，口服后，不易引起过敏症，来源广，成本低，是极为理想的抗感染免疫制剂。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (8)
1.一种猪免疫球蛋白口服液，其特征在于：含有由猪血清提取的含有轮状病毒特异性中和抗体的复合免疫球蛋白，包括IgG、IgM和IgA。
2.根据权利要求1所述的一种猪免疫球蛋白口服液，其特征在于：还包括猪免疫球蛋白口服液的制备方法，具体步骤如下：
S1、猪血浆采集：采集30头猪的全血50Kg，然后将全血放入离心机中离心，离心分离得血清量20.75Kg；
S2、组分分离：
S2.1、向得到的20.75Kg猪血浆中加入14.53Kg的蒸馏水稀释，然后再加入13.49Kg的3％利凡诺液和10.38ml辛酸搅拌均匀，然后再加入100ml的冰醋酸搅拌30min，将混合液的PH调至7.0-7.2，然后放入离心机中离心；
S2.2、将混合液静置10min后去除上浮物，澄清过滤后取滤液；
S2.3、向滤液中加入2.15Kg的氯化钠并搅拌15min，然后缓慢加入浓度为3mmol/L的三氯化铁溶液，然后调节PH至4.0-5.0，然后水浴加热保温，然后取出静置10min后使用离心机离心，离心机转速6000r/min离心20min，去除沉淀得上清液41000ml；
S2.4、向上清液中加入82.0g的活性炭搅拌均匀，然后放入含有1％硅藻土的板框过滤器过滤处理，而后澄清过滤，调PH值至7.0；
S3、超滤：使用螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式对澄清液进行超滤浓缩，超滤后得2750ml的滤液，然后将滤液在1-4℃的环境中保存7天；
S4、原液合并：合并原液，除菌过滤后总量2750ml，然后加入海藻糖，在1-4℃的环境中保存25天；
S5、原液检定：测定原液中的蛋白含量和利凡诺残留量；
S6、半成品配制：
S6.1、原料为：原液2750ml、30％的山梨醇1200ml、甘油480ml、丁香油24ml和3倍浓缩的磷酸盐缓冲液3000ml；
S6.2、将上述原料混合，然后加入蒸馏水将混合液补加到12000ml，搅拌10min，然后调PH至6.4-7.4，然后将混合液澄清过滤和除菌过滤后存放于1-4℃的环境中，半成品滤后总量为12000ml；
S7、半成品检定：检测半成品中的蛋白含量、PH值以及利凡诺残留量；
S8、分装：将12000ml的总量按照10ml/支的量进行分装，共分装1103支，然后放1-4℃的环境中保存，从而制得猪免疫球蛋白口服液。
3.根据权利要求2所述的一种猪免疫球蛋白口服液的制备方法，其特征在于：在步骤S1中采集全血后在全血中加入4％浓度的枸橼酸钠抗凝剂3.125Kg搅拌均匀，防止血液凝固，离心机的转速为6000r/min，离心时间为20min。
4.根据权利要求2所述的一种猪免疫球蛋白口服液的制备方法，其特征在于：在步骤S2.1中离心机转速为10000r/min，离心时间为30min。
5.根据权利要求2所述的一种猪免疫球蛋白口服液的制备方法，其特征在于：在步骤S2.3中水浴温度为35-45℃，加热保温时间为60-120min。
6.根据权利要求2所述的一种猪免疫球蛋白口服液的制备方法，其特征在于：在步骤S3中超滤浓缩所使用的超滤膜为10万分子量的PES膜，超滤温度为50℃，超滤压力为0.1Mpa。
7.根据权利要求2所述的一种猪免疫球蛋白口服液的制备方法，其特征在于：在步骤S5中使用酶联免疫吸附法测定原液中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准。
8.根据权利要求2所述的一种猪免疫球蛋白口服液的制备方法，其特征在于：在步骤S7中使用PH计检测半成品的PH值，使用酶联免疫吸附法检测半成品中的蛋白含量和蛋白纯度，使用荧光分光光度法检测利凡诺残留量符合标准。
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