CN111166748B - 吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用 - Google Patents

吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111166748B
CN111166748B CN201911287236.7A CN201911287236A CN111166748B CN 111166748 B CN111166748 B CN 111166748B CN 201911287236 A CN201911287236 A CN 201911287236A CN 111166748 B CN111166748 B CN 111166748B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pirfenidone
angiogenesis
promoting
drug
10nmol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911287236.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111166748A (zh
Inventor
张鹏
甘东浩
成文翔
柯丽青
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Original Assignee
Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS filed Critical Shenzhen Institute of Advanced Technology of CAS
Priority to CN201911287236.7A priority Critical patent/CN111166748B/zh
Publication of CN111166748A publication Critical patent/CN111166748A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111166748B publication Critical patent/CN111166748B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用，所述吡非尼酮的化学结构式如下式1所示，或者为下式1所示的盐
Figure DDA0002318368240000011
所述吡非尼酮在一定浓度下可能通过促进MMP‑2和P‑SRC表达，具有显著促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的成血管作用。

Description

吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用，以及一种用于促血管生成的药物。
背景技术
血管生成是指小血管(毛细血管)的生长，主要是从以前形成的毛细血管系统长出。血管生成是一个复杂的过程，其中形成血管壁所需的内皮细胞、周细胞和平滑肌细胞被各种生成血管的生长因子(例如成纤维细胞生长因子(FGF)和血管内皮生长因子(VEGF))活化。血管生成具有巨大的生物学和医学意义。在现代医学中，按血管生成的原理划分了两种形式的治疗用途：抗血管生成疗法和促血管生成疗法。促血管生成蛋白疗法使用具有生成血管潜能的生长因子，主要是成纤维细胞生长因子1(FGF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)；对这些生长因子存在最多的临床经验。但是，表皮生长因子(EGF)、血小板-衍生的内皮细胞生长因子(PD-ECGF)和血小板-衍生的生长因子(PDGF)和转化生长因子(TGF)等生长因子也具有一定的血管生成潜能。目前干预成血管药物多为抑制血管生成的药物，促成血管药物相对较少，且开发成熟的干预成血管药物周期和资金耗费巨大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用，旨在解决目前干预成血管药物多为抑制血管生成的药物，促成血管药物相对较少的问题。
本发明的另一目的在于提供用于促血管生成的药物。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
第一方面，提供了一种吡非尼酮在制备促血管生成的药物中的应用，所述吡非尼酮的化学结构式如下式1所示，或者为下式1所示的盐，其中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-10umol/L；
Figure BDA0002318368220000021
在一些实施例中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-1umol/L。
在一些实施例中，所述促血管生成药物为股骨头坏死治疗药物、骨质疏松药物、骨折治疗药物、血管新生医用生物材料中的一种。
在一些实施例中，所述药物为由所述吡非尼酮作为活性成分，与药学上可接受的辅助剂制成的药物组合物。
在一些实施例中，所述药物组合物作为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、液剂、乳剂、悬浮剂、软膏剂、注射剂、皮肤贴剂的口服或非口服用药物制备。
第二方面，提供了一种用于促血管生成的药物，包括吡非尼酮，且所述吡非尼酮的化学结构式如下式1所示，或者为下式1所示的盐，其中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-10umol/L；
Figure BDA0002318368220000022
在一些实施例中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-1umol/L。
在一些实施例中，还包括药学上可接受的辅助剂。
在一些实施例中，所述药物的剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、液剂、乳剂、悬浮剂、软膏剂、注射剂、皮肤贴剂中的一种。
在一些实施例中，所述辅助剂包括填充剂、崩解剂、粘合剂、乳化剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、矫嗅剂、着色剂中的一种或几种。
本申请实施例提供的吡非尼酮在制备促血管生成的药物中的应用的有益效果在于：所述吡非尼酮在10nmol/L-10umol/L浓度下可能通过促进MMP-2和P-SRC表达，具有显著促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的成血管作用。
本申请实施例提供的一种用于促血管生成的药物的有益效果在于：以所述吡非尼酮作为活性成分，所述吡非尼酮在10nmol/L-10umol/L浓度下可能通过促进MMP-2和P-SRC表达，具有显著促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的成血管作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本申请实验例1提供的采用不同浓度梯度的吡非尼酮干预人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的增殖活性时，吡非尼酮梯度与吸光度的关系图；
图2-1是本申请实验例2提供的吡非尼酮干预人脐静脉内皮细胞6-8小时后的显微结果图；
图2-2是本申请实验例2提供的吡非尼酮干预人脐静脉内皮细胞6-8小时后，吡非尼酮梯度浓度与mesh网眼数和branch血管分支长度的关系图；
图3是本申请实验例3提供的吡非尼酮干预EA.hy926基质金属蛋白酶-2，干预24小时和48小时后蛋白免疫印迹试验结果图；
图4是本申请实验例4提供的吡非尼酮干预EA.hy926细胞磷酸化蛋白15min和30min后蛋白免疫印迹试验结果图。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
本发明实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量，也可以表示各组分间重量的比例关系，因此，只要是按照本发明实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本发明实施例说明书公开的范围之内。具体地，本发明实施例说明书中所述的重量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
第一方面，本申请实施例提供了一种吡非尼酮在制备促血管生成的药物中的应用，所述吡非尼酮的化学结构式如下式1所示，或者为下式1所示的盐，其中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-10umol/L；
Figure BDA0002318368220000041
本申请实施例中，所述吡非尼酮在一定浓度下促进MMP-2和P-SRC表达，具有显著促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的成血管作用。
所述吡非尼酮通过上述方式在制备促血管生成的药物中的应用时，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-10umol/L。即在该浓度范围内，所述吡非尼酮通过促进MMP-2和P-SRC表达，具有显著促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的成血管作用。
在优选实施例中，所述吡非尼酮通过上述方式在制备促血管生成的药物中的应用时，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-1umol/L。在该浓度范围内，所述吡非尼酮促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)成血管的作用更显著。
本申请实施例中，所述促血管生成药物为股骨头坏死治疗药物、骨质疏松药物、骨折治疗药物、血管新生医用生物材料中的一种，即所述吡非尼酮作为所述促血管生成药物，有希望用于股骨头坏死、骨质疏松、骨折等骨性疾病或复合到生物医用材料里改善血管新生不足相关疾病。
在一些实施例中，吡非尼酮在制备促血管生成的药物中的应用时，所述药物为由所述吡非尼酮作为活性成分，与药学上可接受的辅助剂制成的药物组合物。即可以理解为所述促血管生成的药物，包括活性成分和要学上可接受的辅助剂，其中，活性成分为所述吡非尼酮。
在一些实施例中，吡非尼酮在制备促血管生成的药物中的应用时，所述药物组合物的剂型可以根据给药方式灵活设置，可以作为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、液剂、乳剂、悬浮剂、软膏剂、注射剂、皮肤贴剂的口服或非口服用药物制备。
第二方面，本申请实施例提供了一种用于促血管生成的药物，包括吡非尼酮，且所述吡非尼酮的化学结构式如下式1所示，或者为下式1所示的盐，其中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-10umol/L；
Figure BDA0002318368220000051
本申请实施例提供的用于促血管生成的药物，以所述吡非尼酮作为活性成分，所述吡非尼酮在一定浓度下可能通过促进MMP-2和P-SRC表达，具有显著促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的成血管作用。
所述用于促血管生成的药物中，上式1所示的吡非尼酮，或者为上式1所示的吡非尼酮的盐，作为促血管生成的活性成分发挥作用。
本发明实施例中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-10umol/L。此时，所述吡非尼酮更多地通过抑制转化生长因子-β靶点(TGF-β)，进而影响下游炎症信号通路，发挥促血管生成的作用。
在优选实施例中，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-1umol/L。在该浓度范围内，所述吡非尼酮促进人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)成血管的作用更显著。
在一些实施例中，所述用于促血管生成的药物，除了包括所述吡非尼酮或所述吡非尼酮的盐以外，还包括药学上可接受的辅助剂，以方便其制备成满足各种给药途径的剂型。
在一些实施例中，所述药物的剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、液剂、乳剂、悬浮剂、软膏剂、注射剂、皮肤贴剂中的一种。
在一些实施例中，所述辅助剂包括填充剂、崩解剂、粘合剂、乳化剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、矫嗅剂、着色剂中的一种或几种，但不限于此。
为了说明本申请所述的技术方案，以下结合具体附图及实施例进行详细说明。
实验例1
采用CCK-8法检测吡非尼酮对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)进行活性实验测试：
选生长状态良好的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)，计数后以3000个/孔种植于96孔板中，设置六组实验组，每组设3个复孔，24h后在六组实验组中分别添加药物浓度为1mmol/L、100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmmol/L和10nmol/L的吡非尼酮，空白对照组不添加，采用不同浓度梯度的吡非尼酮干预人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的增殖活性。72h后每孔加10ul CCK-8液，30min-2h内使用酶标仪于450nm处检测各孔吸光度，重复两次，以实验结果吻合为准。吡非尼酮梯度与吸光度的关系图如图1所示(图中，Con为空白对照组，P1-P5浓度依次为：100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmol/L、10nmol/L)。图1表明：在10nmol/L-100umol/L浓度范围内，吡非尼酮对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)增殖活性无明显抑制，而1mmol/L浓度的吡非尼酮明显抑制人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的增殖活性，因此选定10nmol/L-100umol/L为吡非尼酮对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)的安全浓度范围。
实验例2
人脐静脉内皮细胞基质胶成血管实验：
铺基质胶，30分钟后接种等量细胞悬液，实验分别选用100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmol/L、10nmol/L梯度的吡非尼酮干预人脐静脉内皮细胞，6-8小时后镜下观察其对成血管的干预作用，结果如图2-1所示；吡非尼酮浓度与mesh网眼数和branch血管分支长度的关系图如图2-2所示(图中，P1-P5分别表示吡非尼酮药物浓度为100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmol/L、10nmol/L)。图2-1、2-2表明：在10nmol/L-1umol/L安全浓度范围内吡非尼酮显著促进脐静脉内皮细胞的成血管作用。
实验例3
吡非尼酮干预EA.hy926基质金属蛋白酶-2表达：
选生长状态良好的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)，计数后以10000个/孔种植于6孔板中，设置六组实验组，每组设3个复孔，待细胞长满80％时在六组实验组中分别添加药物浓度为100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmmol/L和10nmol/L的吡非尼酮，空白对照组不添加。分别于24h和48h后提取细胞蛋白，进行蛋白免疫印迹试验，检测6组EA.hy926细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达。结果如图3所示(图中，GAPDH为内参，P1-P5分别表示吡非尼酮药物浓度为100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmol/L、10nmol/L)。图3表明：在10nmol/L-10umol/L安全浓度范围内吡非尼酮显著促进脐静脉内皮细胞中MMP-2的表达。
实验例4
吡非尼酮干预EA.hy926细胞信号通路的表达：
选生长状态良好的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)，计数后以10000个/孔种植于6孔板中，设置六组实验组，每组设3个复孔，待细胞长满80％时在六组实验组中分别添加药物浓度为100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmmol/L和10nmol/L的吡非尼酮，空白对照组不添加。分别于15min和30min后提取细胞磷酸化蛋白，进行蛋白免疫印迹试验，检测6组EA.hy926细胞P-SRC蛋白的表达，结果如图4所示(图中，GAPDH为内参，P1-P5分别表示吡非尼酮药物浓度为100umol/L、10umol/L、1umol/L、100nmol/L、10nmol/L)，图4表明：在10nmol/L-1umol/L安全浓度范围内吡非尼酮显著促进脐静脉内皮细胞中P-SRC蛋白的磷酸化。
综上可见，吡非尼酮在10nmol/L-1umol/L安全浓度范围内具有明显的促成血管作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用，所述药物为由所述吡非尼酮作为唯一活性成分，与药学上可接受的辅助剂制成的药物组合物，所述吡非尼酮的化学结构式如下式1所示，或者为下式1所示的盐；
Figure 41516DEST_PATH_IMAGE001
式1。
2.按权利要求1所述的应用，其特征在于，所述吡非尼酮的有效浓度为10nmol/L-1umol/L。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述促血管生成药物为股骨头坏死治疗药物、骨质疏松药物、骨折治疗药物、血管新生医用生物材料中的一种。
4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述药物组合物作为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、液剂、乳剂、悬浮剂、软膏剂、注射剂、皮肤贴剂的口服或非口服用药物制备。
CN201911287236.7A 2019-12-14 2019-12-14 吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用 Active CN111166748B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911287236.7A CN111166748B (zh) 2019-12-14 2019-12-14 吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911287236.7A CN111166748B (zh) 2019-12-14 2019-12-14 吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111166748A CN111166748A (zh) 2020-05-19
CN111166748B true CN111166748B (zh) 2022-06-21

Family

ID=70622333

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911287236.7A Active CN111166748B (zh) 2019-12-14 2019-12-14 吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111166748B (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101151043B (zh) * 2004-12-21 2013-09-04 南卡罗来纳州医科大学研究发展基金会 促进伤口愈合和组织再生的组合物和方法
US9320755B2 (en) * 2009-06-05 2016-04-26 Centenary Institute Of Cancer Medicine And Cell Biology Therapeutic and diagnostic molecules
KR20150068427A (ko) * 2012-10-08 2015-06-19 코매트릭스 카디오바스컬라 인코포레이티드 생물학적 조직을 치료하기 위한 방법 및 시스템
CA2937365C (en) * 2016-03-29 2018-09-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Granulate formulation of 5-methyl-1-phenyl-2-(1h)-pyridone and method of making the same

Also Published As

Publication number Publication date
CN111166748A (zh) 2020-05-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI649081B (zh) 治療固態腫瘤之方法
Liu et al. Effects of the tyrosine protein kinase inhibitor genistein on the proliferation, activation of cultured rat hepatic stellate cells
US20090162440A1 (en) Sodium alginate microsphere vascular embolus containing water-soluble drug and preparation and application thereof
JP2021169534A (ja) 化学療法の改善
Francescato et al. Treatment with a p38 MAPK inhibitor attenuates cisplatin nephrotoxicity starting after the beginning of renal damage
CN111166748B (zh) 吡非尼酮在制备促血管生成药物中的应用
WO2013071696A1 (zh) 人体五种正常碱基在制备肿瘤药物中的应用
AU2018287810B2 (en) Licofligozin for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis
Long et al. Epoxymicheliolide inhibits osteoclastogenesis and resists OVX-induced osteoporosis by suppressing ERK1/2 and NFATc1 signaling
KR20160015113A (ko) 골다공증 예방 및 치료용 조성물
Kuhlmann Effects of nifedipine and diltiazem on plasma levels and renal excretion of beta‐acetyldigoxin
CN111803488B (zh) 白术内酯ⅱ在制备抗肾纤维化药物中的应用及抗肾纤维化药物
JP2006515276A (ja) 骨粗鬆症の予防及び治療効果を有するフラン誘導体並びにこれを含む薬学的組成物
CN110446494A (zh) 周围神经病变的治疗剂或预防剂
CN100404039C (zh) 一种红花药物组合物、其制备方法及其用途
CN104042574B (zh) 一种含有更昔洛韦的冻干药物组合物
CN110917197A (zh) 一种替诺福韦酯与恩曲他滨的药物组合物及其制备方法
WO2018147516A1 (ko) 홍합단백질 유래 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 조성물
CN110063988A (zh) 一种治疗神经母细胞瘤的药物组合物及其制备方法
CN101669935B (zh) 一种含樱黄素的药物组合物及其在制药中的应用
CN105561310B (zh) 一种含有银杏内酯B和Xa因子抑制剂的药物组合物及其制备方法和用途
KR19990087396A (ko) 재협착 치료 또는 예방용 의약의 제조를 위한 2-(3,4-디메톡시신남오일)아미노벤조산의 사용
CN101669936B (zh) 一种含红车轴草素的药物组合物及其在医药上的应用
CN115400145B (zh) 治疗和预防骨质疏松症的方法
CN107802632B (zh) 一种治疗风湿、类风湿关节炎的中药有效成分组合物及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant