CN111153971A - 蓝萼香茶菜糖蛋白xps5-1、其制备方法及用途 - Google Patents

蓝萼香茶菜糖蛋白xps5-1、其制备方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5‑1，其包含多糖和蛋白质，其中，所述多糖的单糖组成包括鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖，所述蛋白质的氨基酸组成包括谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸。本发明还涉及了其制备方法及用途，所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5‑1可以用于制备色氨酸2,3双加氧酶抑制剂。

Description

蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1、其制备方法及用途
技术领域
本发明涉及提取植物提取领域；具体涉及一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1、其制备方法及用途。
背景技术
蓝萼香茶菜为毛叶香茶菜的原变种(拉丁名Rabdosia japonica(Burm.f.)Hara)，为唇形科(Labiatae)香茶菜属(Isodon)植物。胃复春片是由上药集团旗下胡庆余堂研制的纯中药制剂，处方含有香茶菜、枳壳及红参，以香茶菜(质量占比86.8％)为主，蓝萼香茶菜为胃复春中香茶菜的主要药材来源之一。胃复春片能够健脾益气、活血解毒，主治胃癌的前期病变，对慢性萎缩性胃炎、肠腺化生、肠上皮不典型性增生有治疗作用，此外还有助于胃癌术后辅助治疗。胃复春片是国内唯一经药品监督部门批准的，治疗胃癌前期病变的国家中药保护品种。鉴于胃复春片良好的药效作用，但物质基础尚不明确。目前对蓝萼香茶菜的化学成分研究也主要集中在小分子上，如从蓝萼香茶菜中分离出二萜、三萜、黄酮、有机酸、甾醇等成分，但蓝萼香茶菜中大分子成分却鲜有报道。
色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)通过免疫调节作用抑制杀死肿瘤细胞的免疫应答并促进肿瘤细胞的存活和增殖，所以TDO抑制剂为近年来各大药企抗肿瘤邻域研发的热点之一。
发明内容
为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供了一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其包含多糖部分和蛋白质部分，其中，所述多糖部分的单糖组成包括鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖，所述蛋白质部分的氨基酸组成包括谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸。
优选地，所述多糖部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为40～60％，所述蛋白质部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为40～60％；更优选地，所述多糖部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为55～45％，所述蛋白质部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为45～55％；进一步优选地，所述多糖部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为46.8～53.7％，所述蛋白质部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为46.3～53.2％。
优选地，单糖组成中鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖的摩尔比为10:(3-4):(0.5-1.5)，进一步优选为10.0:(3.2～3.7):(0.7～1.2)。
优选地，所述氨基酸组成中谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸的摩尔比为(6～8):(4～6):10，进一步优选为(6～6.5):(4～4.6):10。
进一步优选地，所述单糖组成中还包含半乳糖、甘露糖和木糖中的一种或多种。
优选地，所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的相对平均分子量为3000～6000Da，优选为3170～4728Da。
本发明还提供了一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的制备方法，其包括如下步骤：
(1)取蓝萼香茶菜，加水煎煮，收集滤液，加入乙醇醇沉，静置后取乙醇沉淀物，干燥得到粗多糖XPS，
(2)粗多糖XPS过阴离子交换树脂，用0.4～0.7M NaCl洗脱，得到洗脱组分XPS5；
(3)将洗脱组分XPS5以0.1～0.3M NaCl为流动相，经分子筛凝胶柱层析，得蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
优选地，步骤(2)中在用0.4～0.7M NaCl洗脱之前，还包括用0.1～0.3M NaCl洗脱。
优选地，步骤(2)所述0.4～0.7M NaCl为0.5M NaCl。
优选地，本发明还提供了一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的制备方法，其包括如下步骤：
(1)取蓝萼香茶菜，加水煎煮，收集滤液，加入乙醇醇沉，静置后取乙醇沉淀物，干燥得到粗多糖XPS，
(2)粗多糖XPS过阴离子交换树脂，用水、0.1M NaCl、0.2M NaCl、0.5M NaCl依次洗脱，收集0.5M NaCl的洗脱组分XPS5；
(3)将洗脱组分XPS5以0.2M NaCl为流动相，经分子筛凝胶柱层析，得蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
其中，
步骤(1)所述乙醇的体积分数优选为80～100％，更优选为95％；加入乙醇后，乙醇与滤液的体积比优选为2:1～5:1，更优选为4:1；
步骤(1)所述的干燥优选为真空干燥，干燥温度优选为65～70℃；
步骤(1)所述蓝萼香茶菜与水的质量比优选为1:5～1:20；煎煮时间优选为1～4小时；静置时间优选为24～72小时；
步骤(2)所述阴离子交换树脂为DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂；
步骤(3)所述分子筛凝胶柱层析为Superdex 75分子筛凝胶柱层析。
本发明还提供了上述制备方法得到的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1；其多糖及蛋白质组成如前所述。
本发明还提供了所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1在制备色氨酸2,3双加氧酶抑制剂中的用途。
TDO(色氨酸2,3双加氧酶)为催化色氨酸沿犬尿酸途径分解代谢的限速酶。生理条件下，TDO催化色氨酸生成N-甲酰犬尿氨酸。后者在三氯乙酸存在条件下，转化为犬尿氨酸。在二甲氨基苯甲醛溶液中，犬尿氨酸于480nm处有吸收峰，因而可以通过检测产物犬尿氨酸的含量反映TDO酶活性。本发明中，我们在TDO上进行了蓝萼香茶菜样品及阳性对照物对TDO酶活性抑制的IC50检测，以评价其对TDO酶活性的抑制作用。
由于色氨酸2,3-双加氧酶(TDO)通过免疫调节作用抑制杀死肿瘤细胞的免疫应答并促进肿瘤细胞的存活和增殖，因此，本发明还提供了所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1在制备抗肿瘤药物中的用途，所述肿瘤包括胃癌等。
TDO(色氨酸2,3双加氧酶)是一种同源四聚体酶，与吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和吲哚胺2,3-双加氧酶-2(IDO2)一起为色氨酸沿犬尿酸途径分解代谢的限速酶。TDO起初主要在人体肝脏中发现，随后在其它组织中被发现，并与多种癌症的发生和发展相关。同IDO抑制剂一样，TDO抑制剂被认为是新型的抗肿瘤治疗药物。胃复春片是国内唯一经药品监督部门批准的治疗胃癌前期病变的国家中药保护品种，临床研究也发现胃复春可以有效治疗胃癌前期病变，并有助于胃癌术后辅助治疗。本发明采用活性跟踪方法，成功从蓝萼香茶菜中得到一种具有TDO抑制作用的均一糖蛋白成分XPS5-1，表现出较强的TDO抑制活性，为蓝萼香茶菜的化学物质基础提供依据，鉴于香茶菜为胃复春片中的主要药材，本发明也为胃复春片治疗胃癌前期病变和胃癌术后辅助治疗的适应症提供依据。
附图说明
图1为制备实施例1中洗脱组分XPS5经Superdex 75凝胶分离图谱图谱，收集130min-170min馏分；
图2为制备实施例1得到的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的HPGCP图谱(A)和UV图谱(B)；
图3为制备实施例1得到的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1糖组成分析气相色谱图谱；其中，A为蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1；B为单糖混合对照品，1.D-鼠李糖 2.L-岩藻糖 3.D-阿拉伯糖 4.D-木糖 5.D-甘露糖 6.D-葡萄糖 7.D-半乳糖。
具体实施方式
制备实施例1
材料：蓝萼香茶菜(批次号：SPHTCMXCC01)5.0kg来源于安徽凤阳(收集于2015年11月20日)，DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂和Superdex系列分子筛凝胶柱购自通用电气GE Healthcare；普鲁兰多糖P-82标准品套装：P-5,P-10,P-20,P-50,P-100,P-200,P-400,P-800，Shodex；水为超纯水(实验室自制)；抗坏血酸、色氨酸、亚甲蓝、Catalase、二甲氨基苯甲醛、三氯乙酸、单糖标准品(D-葡萄糖、D-阿拉伯糖、L-岩藻糖、L-鼠李糖、D-甘露糖、D-木糖、D-半乳糖)和三氟乙酸购自SIGMA公司；TDO酶和NLG-919购自MCE公司；384孔化合物板购自Nunc公司；乙醇和氯化钠均购自国药集团上海试剂有限公司，95％乙醇是指体积分数95％的乙醇；其它的试剂均为分析纯。
仪器：安捷伦1260系列高效液相色谱仪(包括自动进样器、输液泵、脱气机、DAD检测器、IR检测器及安捷伦Cirrus GPC软件)；安捷伦7890B型气相色谱仪配备7693型三重四级杆质谱仪，
Figure BDA0001857455370000041
毛细管柱(0.25mm×30m,0.25μm)购自Restek公司；利穗科技多糖分离系统配置Shodex示差折光检测器；电子天平(赛托利斯-SECURA225D)；离心机(SIGMA-3K15)；旋转蒸发仪(BUCHI-Rotavapor R-300)；冷冻干燥机(LABCONCO-4.5L)；纯水仪(密理博REFRENCE)。
蓝萼香茶菜多糖XPS5-1的提取及分离纯化：
(1)蓝萼香茶菜5.0kg，加水50L，煎煮三小时，滤过，将滤渣加水50L，重复煎煮三小时，滤过，合并两次滤液，滤液浓缩至适当体积，加入浓缩液4倍体积的95％乙醇醇沉，过夜。上清液减压浓缩，65℃-70℃真空干燥，得醇沉上清液干燥粉；乙醇沉淀物冷冻干燥得粗多糖记做XPS(315g，得率6.3％)。
(2)粗多糖XPS经DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换树脂通过水、0.2M NaCl、0.5M NaCl和1.0M NaCl流动相洗脱，流速：8.0mL/min，分别对应得到洗脱组分XPSW、XPS2、XPS5和XPS10洗脱部位(图1)；
(3)活性最强洗脱组分XPS5以0.2M NaCl为流动相，经Superdex 75分子筛凝胶柱进行分离，得蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
制备实施例2
取不同批次的蓝萼香茶菜(批次号：SPHTCMXCC02)，重复制备实施例1的提取及分离纯化方法，得到制备实施例2的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
制备实施例3
取不同批次的蓝萼香茶菜(批次号：SPHTCMXCC03)，重复制备实施例1的提取及分离纯化方法，得到制备实施例3的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
测试实施例1XPS5-1纯度和相对分子量测定
采用HPGPC法测定制备实施例1～3得到的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1的纯度及相对分子量。称取样品配置成浓度为2mg/mL的溶液，标准品为不同系列普鲁兰多糖，配制成浓度为2mg/mL的混合标准品溶液。色谱柱：UltrahydrogelTM 1000(7.8×300mm)串联UltrahydrogelTM250(7.8×300mm)，Waters；流动相：0.2M NaCl；流速：0.8mL/min；柱温：40℃。分别精密吸取标准品与样品溶液各10μL，注入HPGPC进行检测，图谱通过安捷伦CirrusGPC软件数据处理。结果显示XPS5-1的HPGPC谱图呈单一峰(图2)，表明XPS5-1为均一糖蛋白。以不同分子量的普鲁兰多糖为标准品，经Cirrus GPC软件分析测得XPS5-1相对平均分子量如下表1所示：
表1相对分子量测定结果
制备实施例 批次号 分子量
制备实施例1 SPHTCMXCC01 3170Da
制备实施例2 SPHTCMXCC02 3659Da
制备实施例3 SPHTCMXCC03 4728Da
测试实施例2单糖组成分析
还原水解法进行糖组成分析，取样品约1～2mg，置15×150mm试管中，加200μL3mol/L三氟乙酸溶液和50μL 4-甲基吗啉硼烷溶液，80℃油浴水解5min，取出加入50μL 4-甲基吗啉硼烷溶液，120℃油浴水解1h，取出。再加入100μL 4-甲基吗啉硼烷溶液，转入25mL梨形烧瓶，60℃水浴减压蒸干，再加2～3mL乙腈蒸干三次，然后加200μL三氟乙酸和200μL乙酸酐，50℃水浴乙酰化10min，加3mL水终止反应，室温放置30min，用5mL氯仿萃取全乙酰化衍生物，氯仿层用水洗三次，无水硫酸钠干燥，然后用氯仿稀释至50mL溶液。
GC-MS程序升温条件：140-198℃(2℃/min)，保持4min，继续升温到217℃(1℃/min)，保持4min，最后升温到250℃(3℃/min)，保持5min，进样口温度为250℃；载气为氦气(体积流量1mL/min)。
结果表明制备实施例1～3得到的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1中多糖部分主要含鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖，三种单糖的摩尔比，还含少量的半乳糖、甘露糖和木糖。三种主要单糖的摩尔比如下表2所示：
表2单糖摩尔比测定结果
制备实施例 批次号 单糖摩尔比(鼠李糖：葡萄糖：阿拉伯糖)
制备实施例1 SPHTCMXCC01 10.0:3.5:0.9(如图1所示)
制备实施例2 SPHTCMXCC02 10.0:3.2:1.2
制备实施例3 SPHTCMXCC03 10.0:3.7:0.7
测试实施例3蛋白含量测定及氨基酸的组成分析
使用苯酚硫酸法检测，制备实施例1～3得到的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1显色明显，表明XPS5-1含糖类成分，BCA法检测XPS5-1显色明显，表明含蛋白或肽段，含量测定制备实施例1～3中的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1中蛋白含量分别如下表3所示，表明XPS5-1为糖蛋白成分。
表3蛋白含量测定结果
制备实施例 批次号 蛋白含量
制备实施例1 SPHTCMXCC01 49.9％
制备实施例2 SPHTCMXCC02 46.3％
制备实施例3 SPHTCMXCC03 53.2％
多肽蛋白的水解：取一定量的XPS5-1样品，转移至水解管中，加入1mL 6N的盐酸，充入N2约10min，密封后放置于Block Heater干式加热器模中，110℃水解反应24h。反应完毕后，将游离氨基酸溶液转移至1.5mL EP管中，抽真空浓缩至干。
氨基酸的衍生化：混合氨基酸标准品的衍生化处理：取25μL混合氨基酸标准品溶液，加入12.5μL 1moL/L三乙胺溶液，混匀，加入12.5μL 0.1M PITC，混匀，室温静置1h，加入100μL正己烷剧烈震荡混合后静置10min，取下层溶液20μL，加入180μL流动相A，混合后用0.22μm滤膜过滤，即得。
样品溶液的衍生化处理：取一定量的游离氨基酸冻干样品，加入适量流动相(0.05M乙酸钠水溶液)，复溶。取25μL样品氨基酸溶液，加入12.5μL 1M三乙胺，后续操作同混合氨基酸标准品的衍生化处理。
样品的检测：将氨基酸衍生物通过HPLC进行分离、检测，相关参数如下：色谱柱：Diamonsil AAA氨基酸分析柱(Dikma，250mm×4.6mm,5μM)；流动相A：0.05M乙酸钠水溶液，流动相B：甲醇/乙腈/水(体积比20:60:20)；流速：1.0mL/min；柱温：35℃，紫外检测波长：254nm。仪器系统平衡后，取待测样品注入高效液相色谱仪，梯度洗脱：0～39min，流动相B占5％～48％；39～40min，流动相B占39％～40％；40～45min，流动相B占100％；45～46min，流动相B占100％～5％；46～60min，流动相B占5％。
高效液相色谱数据分析：高效液相色谱产生的原始数据由仪器自带软件LCsolution进行手动积分标峰处理，首先对氨基酸混合标准品进行积分标峰并建立外标法对应方法，之后调用所建方法对供试品色谱图进行自动积分标峰处理，并得到供试品的氨基酸组成摩尔百分比。
得到的原始数据经过Labsolution经外标法自动积分标峰，计算得制备实施例1～3得到的蓝萼香茶菜多糖XPS5-1中蛋白部分的氨基酸主要由谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸组成，三种氨基酸的摩尔比如下表4所示：
表4氨基酸摩尔比测定结果
制备实施例 批次号 氨基酸摩尔比(谷氨酸：丝氨酸：甘氨酸)
制备实施例1 SPHTCMXCC01 6.27:4.48:10.0
制备实施例2 SPHTCMXCC02 6.22:4.39:10.0
制备实施例3 SPHTCMXCC03 6.35:4.53:10.0
测试实施例4TDO酶的体外抑制作用检测
(1)化合物的配制与转移
1)将化合物INCB024360和NLG-919分别用DMSO配制为10mM的储存液，取部分进行10倍梯度稀释，此时DMSO浓度为100％，将各浓度化合物用MES缓冲液稀释40倍，形成化合物初始浓度为5倍的使用浓度，使用时稀释5倍，此时DMSO浓度为5×0.5％，酶反应时DMSO终浓度为0.5％；
2)XPSW、XPS2、XPS5、XPS10、XPS5-1(均由制备实施例1制备得到)用灭菌水配制成溶液，浓度为5.0mg/mL，取部分储存液稀释到1.0mg/mL为初始浓度，用灭菌水将之再进行多次3倍梯度稀释进行活性IC50测试：
(2)酶反应阶段
1)配制底物混合液
取0.4M Tris Ph8.0配80mM抗坏血酸维C(a)；用MES缓冲液配抗氧化酶保护液(b)，各成分如下：800μM L-色氨酸，9000μnits/mL过氧化氢酶，40μM亚甲蓝；等体积混合a和b配制成底物混合液(c)，各成分浓度如下：40mM抗坏血酸维生素C，400μM L-色氨酸，4500μnits/mL过氧化氢酶，20μM亚甲蓝
2)用MES缓冲液将TDO酶稀释为40ng/μL；
3)384孔板中加入12.5μL底物混合液c；
4)加入5μL 5倍浓度的各化合物，并设置DMSO和灭菌水对照组，DMSO组加入等体积的DMSO，灭菌水对照组加入等体积的灭菌水；
5)加入7.5μL TDO酶；
6)37℃反应60min；
7)向384孔板中加入5μL三氯乙酸，50℃作用30min，将产物N-甲酰犬尿氨酸转化为犬尿氨酸。
(3)反应终止阶段
每孔加入30μL 2％p-dimethylaminobenzaldehyde(对二甲氨基苯甲醛)(M/V)。
(4)检测与数据处理
将384孔板放于MD Flexstation 3上，进行OD480读数；采用Graphpad Prism 5.0对数据进行Log(inhibitor)vs.response-Variable slope(fourparameters)曲线拟合，计算相应的IC50。
实验结果显示，蓝萼香茶菜水提醇沉沉淀部分-粗多糖XPS对TDO酶的抑制活性较好，IC50为118.6±6.8μg/mL，醇沉上清液干燥粉对TDO的抑制活性较粗多糖差，因此对粗多糖XPS进行进一步的活性跟踪研究，对XPSW、XPS2、XPS5和XPS10进行TDO酶抑制活性测试，实验结果显示XPS5和XPS10表现出TDO抑制活性，其中XPS5的活性最强，TDO酶抑制IC50为36.8±2.5μg/mL(表1)，XPS5经Superdex75凝胶纯化后的均一糖蛋白XPS5-1经TDO酶抑制活性检测后，计算得IC50为14.02±0.8μg/mL(表1)。
表5蓝萼香茶菜中样品及阳性对照物对TDO酶活性的抑制作用
Figure BDA0001857455370000081
Figure BDA0001857455370000091

Claims (13)

1.一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其特征在于：包含多糖部分和蛋白质部分，其中，所述多糖部分的单糖组成包括鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖，所述蛋白质部分的氨基酸组成包括谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸。
2.如权利要求1所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其特征在于：所述多糖部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为40～60％，所述蛋白质部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为40～60％；更优选地，所述多糖部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为55～45％，所述蛋白质部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为45～55％；更优选地，所述多糖部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为46.8～53.7％，所述蛋白质部分占蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的质量分数为46.3～53.2％。
3.如权利要求1所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其特征在于：单糖组成中鼠李糖、葡萄糖和阿拉伯糖的摩尔比为10:(3-4):(0.5-1.5)，优选为10.0:(3.2～3.7):(0.7～1.2)。
4.如权利要求1所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其特征在于：所述氨基酸组成中谷氨酸、丝氨酸和甘氨酸的摩尔比为(6～8):(4～6):10，优选为(6～6.5):(4～4.6):10。
5.如权利要求1所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其特征在于：所述单糖组成中还包含半乳糖、甘露糖和木糖中的一种或多种。
6.如权利要求1所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，其特征在于：所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的相对平均分子量为3000～6000Da，优选为3170～4728Da。
7.一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
(1)取蓝萼香茶菜，加水煎煮，收集滤液，加入乙醇醇沉，静置后取乙醇沉淀物，干燥得到粗多糖XPS，
(2)粗多糖XPS过阴离子交换树脂，用0.4～0.7M NaCl洗脱，得到洗脱组分XPS5；
(3)将洗脱组分XPS5以0.1～0.3M NaCl为流动相，经分子筛凝胶柱层析，得蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
8.根据权利要求7所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的制备方法，其特征在于：步骤(2)中在用0.4～0.7M NaCl洗脱之前，还包括用0.1～0.3M NaCl洗脱。
9.根据权利要求7或8所述的蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述0.4～0.7M NaCl为0.5M NaCl。
10.一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取蓝萼香茶菜，加水煎煮，收集滤液，加入乙醇醇沉，静置后取乙醇沉淀物，干燥得到粗多糖XPS，
(2)粗多糖XPS过阴离子交换树脂，用水、0.1M NaCl、0.2M NaCl、0.5M NaCl依次洗脱，收集0.5M NaCl的洗脱组分XPS5；
(3)将洗脱组分XPS5以0.2M NaCl为流动相，经分子筛凝胶柱层析，得蓝萼香茶菜多糖XPS5-1。
11.一种蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1，由权利要求7～10中任一项所述的制备方法得到。
12.权利要求1～6、11中任一项所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1在制备色氨酸2,3双加氧酶抑制剂中的用途。
13.权利要求1～6、11中任一项所述蓝萼香茶菜糖蛋白XPS5-1在制备抗肿瘤药物中的用途，优选地，所述肿瘤为胃癌。
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