CN111148515B

CN111148515B - 2,6-二氧杂螺[4,5]癸烷类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

Info

Publication number: CN111148515B
Application number: CN201880063806.1A
Authority: CN
Inventors: 张杨; 伍文韬; 杨广文; 李志祥; 孙继奎; 李婕; 黎健; 陈曙辉
Original assignee: Shandong Luye Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shandong Luye Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-10-13
Filing date: 2018-10-12
Publication date: 2022-07-19
Anticipated expiration: 2038-10-12
Also published as: CN111148515A; AU2018349930A1; US20200255444A1; CN115093428B; US11124523B2; CN115093428A; WO2019072235A1

Abstract

本发明涉及一系列的2,6‑二氧杂螺[4,5]癸烷类化合物，及其在制备阿片受体μ激动剂相关疾病的药物中的应用。具体涉及式(Ι)所示衍生化合物、其互变异构体或其药学上可接受的组合物。

Description

2,6-二氧杂螺[4,5]癸烷类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

相关申请的引用

本申请主张如下优先权：

CN201710954727.7，申请日2017-10-13；

CN201711377788.8，申请日2017-12-19；

CN201810387066.9，申请日2018-04-26；

CN201810904945.4，申请日2018-08-09。

技术领域

本发明涉及一系列的2,6-二氧杂螺[4,5]癸烷类化合物，及其在制备阿片受体μ受体激动剂相关疾病的药物中的应用。具体涉及式(Ι)所示衍生化合物、其互变异构体或其药学上可接受的组合物。

背景技术

本发明的2,6-二氧杂螺[4,5]癸烷类化合物是Gi蛋白“偏向性”阿片受体μ受体激动剂，具有多种治疗应用，特别是用于治疗疼痛和疼痛相关的紊乱。

阿片受体是一类以阿片样肽为配体的G蛋白偶联受体，μ、κ和δ受体是经典的三类阿片受体。阿片受体在体内分布广泛，但在神经系统的分布不均匀。在脑内、丘脑内侧、脑室及导水管周围灰质阿片受体密度较高，这些结构与痛觉的整合及感受有关。

阿片类药物是目前临床上最有效的镇痛药物，但通常容易引起一些与靶点相关的副作用，如：呼吸抑制，便秘等。阿片类GPCR受体与配体结合后可以同时影响多条下游信号通路，包括Gi蛋白信号通路及β-Arrestin信号通路。目前研究表明，阿片类药物的镇痛作用来源于μ受体的Gi蛋白信号通路，而相关的副作用，如：呼吸抑制，便秘等，则与μ受体下游的β-Arrestin信号通路相关。与野生型小鼠相比，在β-Arrestin-2基因敲除的小鼠上注射吗啡后镇痛作用增强，且药效时间延长，而相关不良反应减弱。因此，Gi蛋白偏向性μ受体激动剂可以选择性激活Gi信号通路，而对β-Arrestin通路没有影响，或影响较小。因此，可以预期Gi蛋白偏向性μ受体激动剂在临床上有更好的镇痛作用，而阿片类相关不良反应则大大减少。

Travena公司的Gi蛋白偏向性μ受体激动药物TRV-130(Oliceridine)目前已经完成临床3期实验。在已经公布的二期临床数据中，TRV-130展现出了良好的镇痛效果，并且副作用相对于吗啡显著减少。在专利WO2012129495A1中公开了TRV-130(对照化合物1)和对照化合物2的结构。

发明内容

本发明提供了式(Ⅰ)所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，

其中，

环A选自6-10元芳基和5～10元杂环基，所述6-10元芳基或5～10元杂环基任选被1、2或3个R取代；

环B选自苯基和吡啶基，所述苯基或吡啶基任选被1、2或3个R取代；

R分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、C_1-3烷基和C_1-3烷氧基，所述C_1-3烷基或C_1-3烷氧基任选被1、2或3个R’取代；

R’选自：F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

带“*”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在；

带“#”碳原子为手性碳原子，以(R)或(S)单一对映体形式或富含一种对映体形式存在；

所述5-10元杂环基包含1、2、3或4个独立选自-NH-、-O-、-S-和N的杂原子或杂原子团。

本发明的一些方案中，上述R分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、Me、Et和

所述Me、Et或

任选被1、2或3个R’取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述R分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、OH、NH₂、CN、Me、CH₂F、CHF₂、CF₃、Et和

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自苯基、噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊二烯并[c]噻吩基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基、4,5,6,7-四氢苯并[c]噻吩和1,2,3,4-四氢萘基，所述苯基、噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊二烯并[c]噻吩基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基、4,5,6,7-四氢苯并[c]噻吩和1,2,3,4-四氢萘基任选被1、2或3个R取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

其中，

环A选自苯基和5～10元杂环基，所述苯基或5～10元杂环基任选被1、2或3个R取代；

R’选自：F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

所述Me、Et或

任选被1、2或3个R’取代，其他变量如本发明所定义。

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自苯基、噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊二烯并[c]噻吩基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基和1,2,3,4-四氢萘基，所述苯基、噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊二烯并[c]噻吩基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基和1,2,3,4-四氢萘基任选被1、2或3个R取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

其中，

R’选自：F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

所述Me、Et或

任选被1、2或3个R’取代，其他变量如本发明所定义。

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

其中，

R’选自：F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

所述Me、Et或

任选被1、2或3个R’取代，其他变量如本发明所定义。

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自苯基、噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊二烯并[c]噻吩基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基、2,3-二氢-1H-茚、4,5,6,7-四氢苯并[c]噻吩和1,2,3,4-四氢萘基，所述苯基、噻吩基、5,6-二氢-4H-环戊二烯并[c]噻吩基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基、1,3-二氢噻吩并[3,4-c]呋喃基、2,3-二氢-1H-茚、4,5,6,7-四氢苯并[c]噻吩和1,2,3,4-四氢萘基任选被1、2或3个R取代，其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

其中，

R’选自：F、Cl、Br、I、OH和NH₂；

所述Me、Et或

任选被1、2或3个R’取代，其他变量如本发明所定义。

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环A选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

本发明的一些方案中，上述环B选自

其他变量如本发明所定义。

本发明还有一些方案由上述变量任意组合而来。

本发明的一些方案中，上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自

其中，

T选自N和CH；

D选自O和CH₂；

R如本发明所定义。

其中，

D选自O和CH₂；

R如本发明所定义。

本发明还提供了下列化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其选自

本发明还提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的上述的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的载体。

本发明还提供了上述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐或者上述组合物在制备阿片受体μ受体激动剂相关药物上的应用。

本发明的一些方案中，上述阿片受体μ受体激动剂相关药物是用于治疗疼痛和疼痛相关紊乱的药物是用于治疗肿瘤和自身免疫类疾病的药物。

定义和说明

除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。

术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。

本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。

本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。

除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。

除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。

除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。

除非另有说明，“(D)”或者“(+)”表示右旋，“(L)”或者“(-)”表示左旋，“(DL)”或者“(±)”表示外消旋。

除非另有说明，用楔形实线键

和楔形虚线键

表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键

和直形虚线键

表示立体中心的相对构型，用波浪线

表示楔形实线键

或楔形虚线键

或用波浪线

表示直形实线键

和直形虚线键

本发明的化合物可以存在特定的。除非另有说明，术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指在室温下，不同官能团异构体处于动态平衡，并能很快的相互转化。若互变异构体是可能的(如在溶液中)，则可以达到互变异构体的化学平衡。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称质子转移互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移来进行的互相转化，如酮-烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键异构体(valencetautomer)包括一些成键电子的重组来进行的相互转化。其中酮-烯醇互变异构化的具体实例是戊烷-2,4-二酮与4-羟基戊-3-烯-2-酮两个互变异构体之间的互变。

除非另有说明，术语“富含一种异构体”、“异构体富集”、“富含一种对映体”或者“对映体富集”指其中一种异构体或对映体的含量小于100％，并且，该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或者大于等于99.9％。

除非另有说明，术语“异构体过量”或“对映体过量”指两种异构体或两种对映体相对百分数之间的差值。例如，其中一种异构体或对映体的含量为90％，另一种异构体或对映体的含量为10％，则异构体或对映体过量(ee值)为80％。

可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。又例如，可用重氢取代氢形成氘代药物，氘与碳构成的键比普通氢与碳构成的键更坚固，相比于未氘化药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。

“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。

术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。

当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个R所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CRR)₀-，表示该连接基团为单键。

当其中一个变量选自单键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表单键时表示该结构实际上是A-Z。

当一个取代基为空缺时，表示该取代基是不存在的，比如A-X中X为空缺时表示该结构实际上是A。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，吡啶基作为取代基可以通过吡啶环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。当所列举的连接基团没有指明其连接方向，其连接方向是任意的，例如，

中连接基团L为-M-W-，此时-M-W-既可以按与从左往右的读取顺序相同的方向连接环A和环B构成

也可以按照与从左往右的读取顺序相反的方向连接环A和环B构成

所述连接基团、取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。

除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(C)和氢(H)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、硅(Si)、锗(Ge)、铝(Al)、硼(B)、-O-、-S-、＝O、＝S、-C(＝O)O-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-S(＝O)、-S(＝O)₂-，以及任选被取代的-C(＝O)N(H)-、-N(H)-、-C(＝NH)-、-S(＝O)₂N(H)-或-S(＝O)N(H)-。

除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基、吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。

除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中S及O原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中S及O原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香杂环上S和O原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即C、O、N或S)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。

杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异二氢吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1H-1,2,3-三唑基、2H-1,2,3-三唑基、1H-1,2,4-三唑基、4H-1,2,4-三唑基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。

除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的(如烷基)、单元或多元不饱和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是单取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如C₁-C₁₂表示1至12个碳，C_1-12选自C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂；C_3-12选自C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂。)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烃基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烃基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。

除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示由一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成的，稳定的直链、支链或环状的烃原子团或其组合。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示由一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成的，稳定的直链或支链的烷基原子团或其组合物。在一个典型实施例中，杂原子选自B、O、N和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子或杂原子团可以位于杂烃基的任何内部位置，包括该烃基与分子其余部分的连接位置，但术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。实例包括但不限于-CH₂-CH₂-O-CH₃、-CH₂-CH₂-NH-CH₃、-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃、-CH₂-S-CH₂-CH₃、-CH₂-CH₂、-S(O)-CH₃、-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃、-CH＝CH-O-CH₃、-CH₂-CH＝N-OCH₃和–CH＝CH-N(CH₃)-CH₃。至多两个杂原子可以是连续的，例如-CH₂-NH-OCH₃。

除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烃基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。

除非另有规定，术语“杂环烷基”本身或者与其他术语联合分别表示环化的“杂烷基”，此外，就该“杂环烷基”而言，杂原子可以占据杂环烷基与分子其余部分的连接位置。在一些实施方案中，所述杂环烷基为4～6元杂环烷基；在另一些实施方案中，所述杂环烷基为5～6元杂环烷。杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢噻吩基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、二恶烷基、二噻烷基、异恶唑烷基、异噻唑烷基、1,2-恶嗪基、1,2-噻嗪基、六氢哒嗪基、高哌嗪基、高哌啶基或氧杂环庚烷基。

除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基,可以是单取代(如-CH₂F)或多取代的(如-CF₃)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。

除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。

除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(C₁-C₄)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有规定，卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。

“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基，除非另有规定，C_1-6烷氧基包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。

除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自B、N、O和S，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、萘基、联苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、恶唑基、苯基-恶唑基、异恶唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、吲哚基、异喹啉基、喹喔啉基、喹啉基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。

除非另有规定，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。

术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。

术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，对甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等等。

本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。

本发明所使用的溶剂可经市售获得。本发明采用下述缩略词：aq代表水；HATU代表O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐；EDC代表N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐；m-CPBA代表3-氯过氧苯甲酸；eq代表当量、等量；CDI代表羰基二咪唑；DCM代表二氯甲烷；PE代表石油醚；DIAD代表偶氮二羧酸二异丙酯；DMF代表N，N-二甲基甲酰胺；DMSO代表二甲亚砜；EtOAc代表乙酸乙酯；EtOH代表乙醇；MeOH代表甲醇；CBz代表苄氧羰基，是一种胺保护基团；BOC代表叔丁氧羰基是一种胺保护基团；HOAc代表乙酸；NaCNBH₃代表氰基硼氢化钠；r.t.代表室温；O/N代表过夜；THF代表四氢呋喃；Boc₂O代表二-叔丁基二碳酸酯；TFA代表三氟乙酸；DIPEA代表二异丙基乙基胺；SOCl₂代表氯化亚砜；mp代表熔点；DEA代表二乙胺；ACN代表乙腈；HEPES代表4-羟乙基哌嗪乙磺酸。

化合物经手工或者

软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。

技术效果：本发明实施例的优选化合物对μ受体cAMP信号通路具有明显的激动作用，而对β-arrestin信号通路没有激动作用，或激动性较微弱。与TRV-130相比，本发明实施例的优选化合物Gi信号通路偏向性得到了显著提高，预示着在体内与β-arrestin信号通路相关的不良反应会更少。

附图说明

图1：大鼠热板测试中的镇痛效应百分比(％)。

镇痛效应百分比＝(测试组-溶剂对照组)/(20-溶剂对照组)×100％

图中数据展示为平均值±标准误,n＝10/组,*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与溶剂组比较，使用单因素方差分析附加Dunnett's多重比较检验。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

参考例1:合成中间体L1

步骤1：化合物L1-2的制备

25℃下，将化合物L1-1(17.4g,201.7mmol)溶到二氯甲烷(500.0mL)中，加入3-丁烯-1-醇(14.54g,201.65mmol)，再向体系缓慢滴加甲磺酸(58.1g,605.0mmol)。加完后，继续反应16小时。向反应液中加入饱和的碳酸氢钠水溶液至pH＝8，水相用二氯甲烷(200mL×3)萃取。合并的有机相在真空下浓缩得到棕色油状液体粗产物L1-2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.00-4.88(m,1H),3.98-3.88(m,4H),3.58-3.55(m,2H),3.05(s,3H),2.14-1.80(m,6H)。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤2：化合物L1-3的制备

将氢化铝锂(9.6g,253.9mmol)溶解于四氢呋喃(200.0mL)中。向体系缓慢滴加L1-2(20.0g,84.6mmol)的四氢呋喃(200.0mL)溶液。加完后，升温至70℃后继续反应2小时。反应完毕后，向反应液中依次缓慢加入10.0mL水，10.0mL 15％氢氧化钠水溶液和30.0mL水淬灭反应。搅拌十分钟后，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。滤液在真空下浓缩后得到棕黑色的油状粗产物L1-3(粗品)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.96-3.87(m,5H),3.58-3.49(m,2H),2.16-2.06(m,1H),2.01-1.86(m,2H),1.60-1.49(m,3H)。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤3：化合物L1-4的制备

将化合物L1-3(22.0g,139.1mmol)溶解于二氯甲烷中(280.0mL)。冷却至0℃后，加入戴思-马丁氧化剂(70.8g,166.9mmol)。0℃反应1小时后，升温至25℃继续反应16小时。往体系中加入500mL饱和亚硫酸钠水溶液和500mL饱和碳酸氢钠水溶液后搅拌1小时。过滤除去固体，水相用乙酸乙酯(500mL×3)萃取。合并后的有机相在真空下浓缩得到黄色油状粗产物L1-4。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.03-3.90(m,5H),3.57-3.54(m,1H),2.62-2.47(m,4H),2.21-2.14(m,1H),1.87-1.79(m,1H)。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤4：化合物L1-5的制备

将化合物L1-4(17.0g,108.9mmol)溶于甲苯(550.0mL)中，向体系依次加入氰乙酸甲酯(16.2g,163.3mmol)，醋酸铵(2.5g,32.7mmol)和醋酸(1.3g,21.8mmol)。升温至120℃后，继续反应16小时。反应液冷却至室温，加入500mL甲苯和500mL水，分液，分离水相和有机相。水相再用乙酸乙酯(500mL×3)萃取。合并后的有机相依次用400mL饱和碳酸氢钠溶液和400mL饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、真空浓缩得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到黄色油状产物L1-5。其顺式构型和反式构型的摩尔比例为1:1。MS m/z:237.9[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ3.99-3.40(m,10H),3.10-2.71(m,3H),2.14-2.07(m,1H),1.89-1.83(m,1H)。

步骤5：化合物L1-6的制备

25℃，氮气保护下，向2-溴吡啶(15.8g,100.0mmol)和镁粉(2.7g,110.0mmol)的四氢呋喃(26.0mL)悬浮溶液中，缓慢滴加异丙基氯化镁四氢呋喃溶液(2M,3.8mL)。加完后，在25℃下反应3小时。在另一反应瓶中，氮气保护下，将化合物L1-5(2.0g,8.4mmol)和碘化亚铜(481.6mg,2.5mmol)的四氢呋喃(20.0mL)混合物降温至-78℃，缓慢滴加上述新制备的格氏试剂。滴加完毕后升温至0℃，反应三小时。升温25℃后，继续反应16小时。然后向反应液中加入100mL饱和氯化铵溶液和100mL乙酸乙酯，分离有机相和水相。水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并后的有机相用100mL饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥、真空浓缩得到粗产物。粗产物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝3/5)得到黄色油状L1-6。MS m/z:317.0[M+1]⁺.1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.66-8.60(m,1H),7.77-7.73(m,1H),7.45-7.30(m,1H),7.26-7.24(m,1H),3.97-3.63(m,9H),3.07-2.80(m,1H),2.70-2.60(m,1H),2.40-1.95(m,4H),1.35-0.85(m,1H)。

步骤6：化合物L1-7的制备

将化合物L1-6(580.0mg,1.8mmol)溶解于乙二醇(25.0mL)中，加入氢氧化钾(102.9mg,1.8mmol)。升温至120℃后，反应12小时。冷却至室温后，向反应液中加入25mL水，水相用乙酸乙酯(20mL×4)萃取。合并后的有机相在真空下浓缩得到粗产物。粗产物经柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝2/3)得到黄色油状L1-7。MS m/z:258.9[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.57-8.54(m,1H),7.69-7.66(m,1H),7.36-7.33(m,1H),7.18-7.16(m,1H),3.81-3.75(m,4.5H),3.49(d,J＝9.2Hz,0.5H),3.20(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.78(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.70-2.47(m,4H),2.00-1.78(m,3H),1.45-1.37(m,0.5H),1.22-1.10(m,0.5H)。

步骤7：化合物L1的制备

25℃下将氢化铝锂(104.3mg,2.8mmol)悬浮于四氢呋喃(4.0mL)中，缓慢加入L1-7(355.0mg,1.4mmol)的四氢呋喃溶液(4.0mL)。加完后，反应16小时。向反应液中依次加入0.1ml水，0.1ml 15％浓度的氢氧化钠和0.3ml水淬灭反应，搅拌10分钟后过滤，用30mL乙酸乙酯洗涤滤饼。将得到滤液在真空下浓缩得到黄色油状的粗产物L1。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.60-8.57(m,1H),7.68-7.63(m,1H),7.33-7.29(m,1H),7.16-7.13(m,1H),3.89-3.72(m,4.5H),3.55(d,J＝9.2Hz,0.5H),3.17(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.84(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.59-1.50(m,9H),1.87-1.73(m,0.5H),1.19-1.11(m,0.5H)。

参考例2:合成手性中间体(+)-L1的盐酸盐

步骤1：化合物L1-8的制备

25℃下将化合物L1(1.5g,5.6mmol)溶于二氯甲烷溶液(30.0mL)，向体系加入Boc₂O(1.5g,6.8mmol)和三乙胺(1.1g,11.3mmol)，反应10小时。将反应液真空浓缩，残余物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝1:1)分离纯化得到浅黄色油状液体L1-8。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.64-8.55(m,1H),7.73-7.61(m,1H),7.36-7.29(m,1H),7.21-7.10(m,1H),4.25(br s,1H),3.92-3.67(m,4.5H),3.55(d,J＝9.4Hz,0.5H),3.17(dd,J＝0.9,10.0Hz,0.5H),3.05-2.80(m,1H),2.84(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.70-2.42(m,3H),2.12-1.62(m,5H),1.39(s,9H),1.20-1.07(m,0.5H),0.98-0.86(m,0.5H)。步骤2：化合物L1-8的SFC拆分

化合物L1-8(1.8g,4.5mmol)为外消旋体，经两次SFC分离(分离条件，第一次：柱子:OJ(250mm*30mm,5μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O EtOH]；B％:15％；第二次：柱子:AD(250mm*30mm,10μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O EtOH]；B％:30％)得到4个非对映异构体化合物(-)-L1-8a(100.0％de),化合物(+)-L1-8a(100.0％de),化合物(-)-L1-8b(86.0％de)和(+)-L1-8b(98.0％de)：

(-)-L1-8a(270.0mg),MS m/z＝363.3[M+1]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.184min；100％de.

(+)-L1-8a(250.0mg),MS m/z＝363.3[M+1]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.262min；100％de.

(-)-L1-8b(300.0mg),MS m/z＝363.3[M+1]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.361min；86％de.

(+)-L1-8b(360.0mg),MS m/z＝363.3[M+1]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.523min；98.0％de.

步骤3：化合物(+)-L1盐酸盐的制备

25℃下，将化合物(+)-L1-8b(80.0mg,199.9μmol)溶于二氧六环(3.0mL)中，加入盐酸/二氧六环溶液(4M,3.0mL)，反应1小时。将反应液真空浓缩，得到(+)-L1的盐酸盐(130mg)。MS m/z＝363.3[M+1]⁺.粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

参考例3:合成手性中间体(+)-L1

步骤1：化合物L1-7的SFC分离

L1-7(5.8g，22.6mmol)经SFC分离(柱子:Chiralpak AD-H 250*30mm,5μm；流动相:A:CO₂；B:[EtOH]；B％:40％)得到(+)-L1-7。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.57(dd,J＝0.8,4.8Hz,1H),7.70-7.64(m,1H),7.39-7.32(m,1H),7.18-7.13(m,1H),3.89-3.58(m,5H),3.53-3.45(m,1H),2.73-2.54(m,2H),2.51-2.42(m,2H),1.90-1.85(d,J＝13.6Hz,2H),1.37-1.28(m,1H),1.10-1.00(m,1H).SFC:柱子：Chiralpak IC-3(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％异丙胺EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝3.399min；100.0％de.旋光：[α]_D ²⁵＝+29.0(C＝0.4,MeOH).

步骤2：化合物(+)-L1的制备

将化合物(+)-L1-7(450.0mg，1.7mmol)溶于乙醇(6.0mL)中，加入雷尼镍(89.6mg,522.6μmol,纯度：50％)和氨水(1.85mL,浓度：27％)，氢气置换三次，在氢气氛围中(15Psi)，25℃下反应2小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩得到(+)-L1。MS m/z:263.2[M+1]⁺。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.63-8.56(m,1H),7.71-7.61(m,1H),7.36-7.29(m,1H),7.19-7.12(m,1H),3.89-3.81(m,3H),3.76-3.73(m,2H),3.58-3.50(m,1H),2.61-2.51(m,1H),2.46-2.40(m,2H),2.23-2.10(m,1H),1.96-1.87(m,2H),1.80-1.73(m,1H),1.71-1.64(m,1H),1.45-1.41(m,1H),1.20-1.08(m,1H)。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

参考例4:合成手性中间体(+)-L2

步骤1：化合物L2-1的制备

氮气保护下，将4-氟苯基溴化镁(2M,15.81mL,31.6mmol)溶于四氢呋喃(50.0mL)中，加入碘化亚铜(240.8mg,1.3mmol)后，降温至0℃，向反应体系中加入化合物L1-5(3.0g,12.6mmol)的四氢呋喃(30.0mL)溶液，搅拌10分钟。升温至25℃，搅拌3小时。向反应液中加入80.0ml饱和氯化铵溶液淬灭，加入30.0ml水稀释，用乙酸乙酯(100ml×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水(80ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。浓缩物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到浅黄色油状液体L2-1。MS m/z:334.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.48-7.29(m,2H),7.17-7.06(m,2H),3.96-3.51(m,9H),3.19(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.94(dd,J＝10.2,18.2Hz,0.5H),2.77-2.28(m,3H),2.24-1.93(m,2H),1.41-1.47(m,0.5H),1.41-1.47(m,0.5H),1.10-0.95(m,0.5H)。

步骤2：化合物L2-2的制备

将化合物L2-1(3.3g,9.9mmol)溶解于乙二醇(40.0mL)溶液中，向体系加入氢氧化钾(833.1mg,14.9mmol)，升温至120℃，反应3小时。向反应中加入40mL水，体系用乙酸乙酯(70ml×3)萃取，将得到的有机相合并，用饱和食盐水(60ml×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到浅黄色油状液体L2-2。MS m/z:276.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.43-7.33(m,2H),7.17-7.08(m,2H),3.95-3.73(m,4.5H),3.60(d,J＝9.4Hz,0.5H),3.31(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.97(d,J＝10.2Hz,0.5H),2.68-2.28(m,4H),2.23-1.87(m,3H),1.59-1.50(m,0.5H),0.98-0.86(m,0.5H)。

步骤3：化合物L2的制备

将化合物L2-2(2.5g,9.1mmol)溶解于四氢呋喃(30.0mL)中，0℃下加入氢化铝锂(689.3mg,18.2mmol)，25℃下反应3小时。向反应液中缓慢依次加入0.7ml水，0.7ml 15％氢氧化钠水溶液和2.1ml水淬灭反应。搅拌十五分钟后，过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到浅黄色油状液体L2(粗品),MS m/z:280.0[M+1]。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤4：化合物L2-3的制备

将化合物L2(2.3g,8.2mmol)溶于二氯甲烷(30.0mL)，依次加入Boc₂O(2.3g,10.7mmol)和三乙胺(1.7g,16.5mmol)后，25℃反应12小时。将反应液真空浓缩，浓缩物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到粗产物。粗产物经制备高效液相色谱分离纯化(柱子:Phenomenex Gemini C18 250*50mm,10μm；流动相:[水(0.05％氢氧化铵v/v)-乙腈]；B％:40％-65％)得到浅黄色油状液体L2-3。MS m/z:402.3[M+23]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.19-7.13(m,2H),7.01-6.92(m,2H),4.11(br s,1H),3.84-3.61(m,4.5H),3.51-3.39(m,0.5H),3.21(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.93-2.79(m,1H),2.80(d,J＝10.4Hz,0.5H),2.58-2.44(m,1H),2.25-2.18(m,1H),2.11-1.58(m,6H),1.51-1.41(m,0.5H),1.32(s,9H),1.21-1.10(m,0.5H)。

步骤5：化合物L2-3的SFC拆分

化合物L2-3(1.05g,2.77mmol)经SFC拆分(柱子:OJ(250mm*30mm,5μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O EtOH]；B％:30％)，得到4个非对映异构体化合物(-)-L2-3a(86.0％de),化合物(+)-L2-3a(97.3％de),化合物(-)-L2-3b(87.8％de)和化合物(+)-L2-3b(96.4％de)：

(-)-L2-3a(210.0mg),MS m/z＝402.3[M+23]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.362min；86％de.

(+)-L2-3a(280.0mg),MS m/z＝402.3[M+23]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.491min；97.3％de.

(-)-L2-3b(200.0mg),MS m/z＝402.3[M+23]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.589min；87.8％de.

(+)-L2-3b(190.0mg),MS m/z＝402.3[M+23]⁺.SFC:柱子：Chiralcel OJ-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％；Rt＝1.799min；96.4％de.

步骤6：手性化合物(+)-L2盐酸盐的制备

25℃下将化合物(+)-L2-3b(190.0mg,488.0μmol)溶于二氧六环(3.0mL)中，加入盐酸/二氧六环溶液(4M,3mL)，反应0.5小时后。将反应液真空浓缩，得到(+)-L2盐酸盐(340.0mg)。MS m/z:280.0[M+1]⁺.

参考例5:合成手性中间体(+)-L3

步骤1：化合物L3-2的制备

0℃氮气保护下，将2-溴-5-氟吡啶(16.0g,91.0mmol)的无水四氢呋喃(64.0mL)溶液滴加到搅拌的异丙基氯化镁的四氢呋喃溶液(2M,45.5mL)中，反应液在4-20℃继续搅拌3小时。然后将碘化亚铜(1.7g,9.1mmol)加入到上述反应体系中。搅拌20分钟后，降温至℃，将L3-1(7.2g,30.4mmol)的无水四氢呋喃(30.0mL)溶液滴加加入，反应液升至30℃后，继续搅拌16小时。反应完毕后，将反应液倒入到80mL冷的饱和氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯(90mL×3)萃取。将合并后的有机相，用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。浓缩物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝9/1至1/1)得到棕黑色油状液体L3-2。MS m/z:335.1[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.48-8.30(m,1H),7.52-7.27(m,2H),3.92-3.45(m,9H),3.06-2.94(m,0.5H),2.80-2.46(m,2.5H),2.34-2.01(m,2H),1.97-1.79(m,1H),1.28-1.20(m,0.5H),1.10-0.79(m,0.5H)。

化合物L4-2的合成参照L3-2的合成路线：

步骤2：化合物L3-3的制备

将化合物L3-2(3.7g,11.1mmol)溶于乙二醇(70.0mL)中，加入氢氧化钾(1.2g,22.1mmol)，将反应液加热至120℃，继续搅拌5小时。将反应液冷却至室温后，将其倒入到60.0mL水中，用乙酸乙酯(40.0mL×3)萃取。合并后的有机相，用30.0mL饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到黄色粗产物。粗产物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝9/1至1/1)得到淡黄色油状液体L3-3。MS m/z＝277.0[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.52-8.47(m,1H),7.56-7.35(m,2H),3.95-3.79(m,5H),3.63-3.52(m,1H),3.25(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.88(d,J＝10.0Hz,0.5H),2.80-2.70(m,1H),2.67-2.41(m,3H),2.04-1.85(m,3H),1.47-1.40(m,0.5H),1.21-1.10(m,0.5H)。

步骤3：化合物L3-3的SFC分离

L3-3(850.0mg)为外消旋体，经两次SFC分离(第一次：柱子:C2(250mm*50mm,10μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O MeOH]；B％:30％；第二次：柱子:AY(250mm*30mm,10μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O EtOH]；B％:25％)得到四个非对映异构体化合物(+)-L3-3a(100.0％de),化合物(-)-L3-3a(97.4％de),化合物(+)-L3-3b(90.7％de)和化合物(-)-L3-3b(100.0％de)：

(+)-L3-3a(250.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]⁺.SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA MeOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝3.545min,100.0％de.旋光：[α]_D ²⁵＝+18.5(C＝1,MeOH).

(-)-L3-3a(160.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]⁺.SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA MeOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝4.198min,97.4％de.旋光：[α]_D ²⁵＝-19.6(C＝1,MeOH).

(+)-L3-3b(150.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.51(d,J＝2.8Hz,1H),7.64-7.35(m,2H),3.99-3.69(m,5H),3.59(d,J＝9.6Hz,1H),2.84-2.70(m,1H),2.68-2.45(m,3H),2.03-1.89(m,2H),1.47-1.40(m,1H),1.21-1.10(m,1H)。SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA MeOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝4.599min；90.7％de.旋光：[α]_D ²⁵＝+22.4(C＝1,MeOH).

(-)-L3-3b(120.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]⁺.SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA MeOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝4.781min；100.0％de.旋光：[α]_D ²⁵＝-22.0(C＝1,MeOH).

步骤4：化合物(+)-L3的制备

将(+)-L3-3b(150.0mg,542.9μmol)溶于乙醇(20.0mL)中，将氨水(0.66mL,纯度：28％)和雷尼镍(0.1g,纯度：50％)加入，氢气置换三次，在氢气氛围中(15Psi)，30℃下反应16小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩得到(+)-L3(粗品)。MS m/z＝281.0[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.37(d,J＝2.4Hz,1H),7.40-7.21(m,2H),3.86-3.58(m,5H),3.52-3.42(m,1H),2.47(dt,J＝5.2,11.6Hz,1H),2.39-2.24(m,2H),2.09(dt,J＝5.0,11.6Hz,1H),1.85-1.54(m,4H),1.39-1.27(m,1H),1.11-0.99(m,1H)。

参考例6:合成手性中间体(+)-L4

步骤1：化合物L4-3的制备

将化合物L4-2(2.2g,6.6mmol)溶于二甲亚砜(40.0mL)中，加入水(0.4mL)和氯化钠(115.4mg,2.0mmol)加热至160℃，继续搅拌1小时。冷却至室温后，将反应液倒入到80mL水中,用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，用40mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩除去有机溶剂，得到黄色粗产品。粗产品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝1/10至45/100)得到L4-3。MS m/z＝277.0[M+1]⁺。

步骤2：化合物L4-3的SFC分离

L4-3(1.4g,5.1mmol)经SFC分离(柱子:C2(250mm*50mm,10μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O EtOH]；B％:25％)得到四个非对映异构体化合物(+)-L4-3a(99.4％de),化合物(-)-L4-3a(97.1％de),化合物(+)-L4-3b(97.4％de)和化合物(-)-L4-3b(96.6％de)：

(+)-L4-3a(350.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]+.SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝3.203min,99.4％de.[α]_D ²⁵＝+32.0(C＝1,MeOH).

(-)-L4-3a(250.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]+.SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝3.690min,97.1％de.[α]_D ²⁵＝-22.5(C＝1,MeOH).

(+)-L4-3b(250.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]+.1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.54(dd,J＝5.6,8.8Hz,1H),7.08(dd,J＝2.4,10.0Hz,1H),6.96-6.89(m,1H),3.93-3.58(m,5H),3.49(d,J＝9.2Hz,1H),2.68(d,J＝16.6Hz,1H),2.60-2.33(m,3H),1.96-1.84(m,2H),1.45-1.36(m,1H),1.14-1.04(m,1H)。SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝4.074min,97.4％de.[α]_D ²⁵＝+30.2(C＝1,MeOH).

(-)-L4-3b(360.0mg),MS m/z＝277.2[M+1]+.SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.5min,40％3.0min,5％1.5min；Rt＝4.455min,96.6％de.[α]_D ²⁵＝-17.9(C＝1,MeOH).

步骤3：化合物(+)-L4的制备

将(+)-L4-3b(250.0mg,904.8μmol)溶于乙醇(20.0mL)中，将氨水(1.10mL,纯度：28％)和雷尼镍(0.3g,纯度：50％)加入，氢气置换三次，在氢气氛围中(15Psi)，30℃下反应16小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩得到(+)-L4(250mg,粗品)。MS m/z＝281.1[M+1]⁺.1HNMR(400MHz,CDCl₃)δ＝8.61-8.36(m,1H),7.01-6.75(m,2H),3.84-3.58(m,5H),3.48(d,J＝9.3Hz,1H),2.53-2.24(m,3H),2.17-2.03(m,1H),1.91-1.54(m,4H),1.41-1.34(m,1H),1.27-1.04(m,1H)。

参考例7:合成手性中间体(+)-L5b

步骤1：化合物L3的制备

将化合物L3-3(1.8g,6.5mmol)溶解于乙醇中(60.0mL)中，将氨水(2.0mL,14.5mmol,纯度：28％)和雷尼镍(1.2g,纯度：50％)加入。在氢气气氛下(15psi)，30℃继续搅拌16小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩得到L3(粗品),MS m/z:281.1[M+1]⁺。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤2：化合物L5的制备

将原料L3(1.8g,6.42mmol)，三乙胺(325mg,3.2mmol)和Boc₂O(1.68g,7.71mmol)加入到溶剂二氯甲烷(50.0mL)中，反应液25℃继续反应16小时。将反应液倒入50mL水中，水相用二氯甲烷(40mL×3)萃取。合并有机相，用20mL水,20mL饱和食盐水各洗涤1次。无水硫酸钠干燥。过滤，除去有机溶剂，得粗产品。粗产品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝1/20至1/2)得到L5。MS m/z:381.2[M+1]⁺.

步骤3：化合物L5的SFC拆分

化合物L5(1.8g,4.7mmol)经SFC拆分(柱子:DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*50mm,10μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂O EtOH]；B％:30％)，得到4个非对映异构体化合物(+)-L5a(99.6％de),化合物(+)-L5b(93.2％de),化合物(-)-L5b(94.6％de)和化合物(-)-L5a(98.5％de)：

(+)-L5a(309mg),MS m/z＝381.2[M+1]⁺.SFC:柱子：CHIRALPAK AD(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.0min,40％2.5min,5％2.5min；Rt＝3.121min；99.6％de.

(+)-L5b(315mg),MS m/z＝381.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.45(d,J＝3.0Hz,1H),7.43-7.35(m,1H),7.35-7.29(m,1H),4.21(br s,1H),3.89-3.66(m,5H),3.54(d,J＝9.6Hz,1H),3.04-2.86(m,1H),2.68-2.58(m,1H),2.50-2.29(m,2H),1.99-1.86(m,2H),1.84-1.73(m,1H),1.70-1.62(m,1H),1.45-1.40(m,1H),1.38(s,9H),1.17-1.07(m,1H).SFC:柱子：CHIRALPAK AD(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.0min,40％2.5min,5％2.5min；Rt＝3.385min；93.2％de.

(-)-L5b(350mg),MS m/z＝381.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.44(d,J＝3.0Hz,1H),7.42-7.35(m,1H),7.34-7.29(m,1H),4.21(br s,1H),3.95-3.65(m,5H),3.53(d,J＝9.6Hz,1H),3.03-2.85(m,1H),2.72-2.51(m,1H),2.47-2.33(m,2H),1.99-1.84(m,2H),1.83-1.59(m,2H),1.45-1.39(m,1H),1.38(s,9H),1.16-1.06(m,1H).SFC:柱子：CHIRALPAK AD(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.0min,40％2.5min,5％2.5min；Rt＝3.623min；94.6％de.

(-)-L5a(380mg),MS m/z＝381.2[M+1]⁺.SFC:柱子：CHIRALPAK AD(100mm*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％-40％5.0min,40％2.5min,5％2.5min；Rt＝4.366min；98.5％de.

参考例8:合成中间体R1

步骤1：化合物R1-2的制备

将化合物R1-1(10.0g,118.9mmol)的二甲亚砜(50.0mL)溶液加入到叔丁醇钾(26.7g,237.8mmol)的二甲亚砜(100.0mL)溶液中，在15-20℃下，搅拌0.5小时后，加入二硫化碳(9.1g,118.9mmol)，在20-50℃下搅拌1小时。加入溴乙酸乙酯(39.7g,237.8mmol)后，在25℃下继续搅拌16小时。然后向上述反应体系中加入碳酸钾(16.4g,118.9mmol)，加完后升温至50℃，继续搅拌2小时。反应完毕，向反应液中加入水(450mL),并用乙酸乙酯(400mL×3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水(300mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。浓缩物经硅胶柱层析(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝100/1至50/1)分离纯化得到浅黄色油状化合物R1-2。MS m/z:315.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.31(q,J＝7.2Hz,2H),4.25-4.17(m,2H),3.56(s,2H),2.96(t,J＝7.4Hz,2H),2.73-2.66(m,2H),2.42(t,J＝7.2Hz,2H),1.39-1.33(m,3H),1.32-1.26(m,3H)。

化合物R2-2，R3-2的合成参照R1-2的合成路线：

步骤2：化合物R1-3的制备

将化合物R1-2(15.2g,45.8mmol)溶解于四氢呋喃(150.0mL)中，向体系加入二氯化钯(405.9mg,2.3mmol)，然后缓慢加入三乙基硅烷(10.7g,91.6mmol)，加完后反应液升温至70℃，继续搅拌16小时。反应完毕，将反应液过滤，滤液真空浓缩。浓缩物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝100/1至80/1)得到白色固体R1-3。MS m/z:197.1[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.90(s,1H),4.24(q,J＝7.2Hz,2H),2.86(t,J＝7.4Hz,2H),2.61(dt,J＝1.2,7.2Hz,2H),2.34(t,J＝7.2Hz,2H),1.29(t,J＝7.2Hz,3H)。

化合物R2-3，R3-3的合成参照R1-3的合成路线：

步骤3：化合物R1-4的制备

将化合物R1-3(1.0g,4.7mmol)溶解于无水四氢呋喃(10.0mL)中，0℃下加入氢化铝锂(357.4mg,9.4mmol)，加完后，升温至25℃，反应1小时。反应完毕，向反应液中依次加入水0.36mL,0.36mL 15％氢氧化钠水溶液,水1.0mL淬灭反应。然后将反应液过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。浓缩物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝50/1至10/1)得到R1-4。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.64(s,1H),4.62(s,2H),2.57(t,J＝7.2Hz,4H),2.39-2.22(m,2H),1.66(br s,1H)。化合物R2-4，R3-4的合成参照R1-4的合成路线：

步骤4：化合物R1的制备

25℃下，将化合物R1-4(540.0mg,3.5mmol)溶到二氯甲烷(15.0mL)中，向体系加入二氧化锰(3.0g,35.0mmol)，搅拌反应5小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩。浓缩物经硅胶薄层层析制备板(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)分离纯化得到R1。MS m/z:153.1[M+1]⁺.

化合物R2，R3的合成参照化合物R1合成路线：

实施例1:手性化合物(+)-1a、(-)-1a、(+)-1b和(-)-1b盐酸盐的制备

步骤1：化合物1的制备

25℃下将化合物L1(305.0mg,1.2mmol)溶于二氯甲烷(8.0mL)，依次加入化合物3-甲氧基-2-噻吩甲醛(247.9mg,1.7mmol)和无水硫酸钠(165.1mg,1.2mmol)，反应48小时后，将反应液真空浓缩。向浓缩物中加入甲醇(8.0mL)，降温至0℃后，加入硼氢化钠(52.8mg,1.4mmol)，25℃继续反应16小时。反应完毕，加入5ml水淬灭反应，将反应液过滤，用乙酸乙酯(30mL)洗涤滤渣，滤液真空浓缩。浓缩物经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1至二氯甲烷/甲醇＝5/1)得到化合物1。MS m/z:389.1[M+1].¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.58-8.55(m,1H),7.67-7.62(m,1H),7.32-7.28(m,1H),7.15-7.12(m,1H),7.06-7.04(d,J＝8Hz,1H),6.79-6.77(d,J＝8Hz,1H),3.87-3.67(m,9.5H),3.55-3.53(d,J＝8.0Hz,0.5H),3.18-3.15(d,J＝12.0Hz,0.5H),2.85-2.83(d,J＝8.0Hz,0.5H),2.55-2.42(m,2H),2.20-2.12(m,1H),2.05-1.77(m,6H),1.41-1.35(m,0.5H),1.27-1.11(m,0.5H)。

步骤2：化合物1的SFC分离

化合物1经SFC分离(柱子:OJ(250mm*30mm,5μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.1％NH₃H₂OEtOH]；B％:15％)得到4个化合物，分别都加入0.2ml盐酸甲醇溶液(4M)，加水冻干后得到4个非对映异构体化合物(+)-1a盐酸盐(92.4％de),化合物(+)-1b盐酸盐(54.9％de),化合物(-)-1b盐酸盐(86.0％de)和化合物(-)-1a盐酸盐(86.0％de)：

(+)-1a盐酸盐：MS m/z＝389.1[M+1]+.¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.87-8.84(m,1H),8.59-8.55(m,1H),8.11(d,J＝8.4Hz,1H),8.00-7.97(m,1H),7.47(d,J＝4.2Hz,1H),7.00(d,J＝4.2Hz,1H),4.19(s,2H),3.95-3.77(m,7H),3.35-3.33(m,1H),3.07-3.04(d,J＝9.2Hz,1H),2.99-2.92(m,1H),2.56-2.19(m,7H),2.07-1.93(m,2H)。SFC：柱子：ChiralcelOJ-3(100*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％to 40％4.5min,40％2.5min,5％1min；Rt＝2.255min；92.4％de.旋光：

[α]_D ²⁵＝+7.0(C＝1,MeOH).

(+)-1b盐酸盐：MS m/z＝389.1[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.92-8.88(m,1H),8.71-8.65(m,1H),8.26-8.18(m,1H),8.11-8.06(m,1H),7.47(d,J＝4.2Hz,1H),7.00(d,J＝4.2Hz,1H),4.20(s,2H),3.95-3.73(m,8H),3.61(d,J＝9.2Hz,1H),3.10-2.94(m,1H),2.60-2.40(m,3H),2.36-2.20(m,3H),2.06-1.94(m,1H),1.60-1.54(m,1H),1.37-1.29(m,1H)。SFC：柱子：Chiralcel OJ-3(100*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％to 40％4.5min,40％2.5min,5％1min；Rt＝2.377min；54.9％de.旋光：[α]_D ²⁵＝+25.6(C＝1,MeOH).

(-)-1b盐酸盐：MS m/z＝389.1[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.92(d,J＝4.2Hz,1H),8.74-8.70(m,1H),8.28(d,J＝8.4Hz,1H),8.14-8.11(m,1H),7.47(d,J＝4.2Hz,1H),7.01(d,J＝4.2Hz,1H),4.20(s,2H),3.96-3.73(m,8H),3.61(d,J＝9.2Hz,1H),3.05-2.98(m,1H),2.62-2.49(m,3H),2.36-2.22(m,3H),2.08-2.01(m,1H),1.60-1.55(m,1H),1.39-1.31(m,1H)。SFC：柱子：Chiralcel OJ-3(100*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEAEtOH]；B％:5％to 40％4.5min,40％2.5min,5％1min；Rt＝2.545min；86.0％de.旋光：[α]_D ²⁵＝-14.4(C＝1,MeOH).

(-)-1a盐酸盐：MS m/z＝389.1[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.80-8.77(m,1H),8.50-8.40(m,1H),7.99-7.95(m,1H),7.89-7.84(m,1H),7.48-7.47(d,J＝4.2Hz,1H),7.02-7.00(d,J＝4.2Hz,1H),4.18(s,2H),3.88-3.79(m,7H),3.39-3.32(m,1H),3.00-2.91(m,2H),2.52-2.17(m,7H),2.07-1.96(m,2H)。SFC：柱子：Chiralcel OJ-3(100*4.6mm,3μm)；流动相:A:CO₂；B:[0.05％DEA EtOH]；B％:5％to 40％4.5min,40％2.5min,5％1min；Rt＝2.708min；86.0％de.旋光：[α]_D ²⁵＝-12.9(C＝1,MeOH).

化合物1非对映异构体的盐酸盐通过碳酸钾水溶液碱化，乙酸乙酯萃取，有机相真空浓缩即可得到实施例1中化合物(+)-1a、(-)-1a、(+)-1b和(-)-1b的游离碱。

实施例2:化合物(+)-2的制备

步骤1：化合物(+)-2的制备

将化合物(+)-L1的盐酸盐(170.0mg,568.9μmol)和化合物R1(129.9mg,853.4μmol)溶于甲醇(5.0mL)中,加入硫酸钠(80.8mg,568.9μmol)和三乙胺(363.5mg,3.59mmol)，在50℃下搅拌12小时。然后冷却至0℃，加入硼氢化钠(28.0mg,739.6μmol)后，升温至25℃，继续搅拌2小时。反应完毕，加入10mL水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。浓缩物经制备高效液相色谱分离纯化(柱子:Phenomenex Gemini 150*25mm,10μm；流动相:[水(0.05％氢氧化铵v/v)-乙腈]；B％:39％-69％)得到化合物(+)-2。MS m/z:399.3[M+1].¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.55(dd,J＝0.8,4.8Hz,1H),7.79-7.75(m,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.27-7.23(m,1H),6.67(s,1H),3.84-3.75(m,3H),3.72-3.62(m,4H),3.54(d,J＝9.2Hz,1H),2.66-2.56(m,2H),2.55-2.41(m,5H),2.37-2.26(m,2H),2.07-1.86(m,3H),1.79-1.65(m,2H),1.45-1.39(m,1H),1.21-1.16(m,1H)。

以下化合物使用与化合物(+)-2类似的方法合成得到，其中实施例4通过制备高效液相色谱甲酸体系分离纯化(柱子:Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4μm；流动相:[水(0.225％甲酸)-ACN]；B％:15％-45％,10.5min))得到化合物(+)-4的甲酸盐。化合物(+)-4的甲酸盐通过碳酸钾水溶液碱化，乙酸乙酯萃取，有机相真空浓缩即可得到化合物(+)-4的游离碱。

实施例5:化合物(+)-5的制备

将化合物(+)-L3(50.0mg,178.4μmol)和R1(35.3mg,231.9μmol)加入到溶剂二氯甲烷中(3.0mL)中，然后将无水硫酸钠(126.7mg,891.8μmol)加入，反应液30℃搅拌16小时。然后将硼氢化钠(8.9mg,231.9μmol)加入，搅拌10分钟后，将甲醇(1.0mL)加入，反应液继续搅拌2小时。将反应液倒入到20mL水中，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水(25mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。浓缩物经制备高效液相色谱分离纯化(柱子:Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相:[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％:45％-55％)得到化合物(+)-5。MS m/z:417.1[M+1].¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(d,J＝2.8Hz,1H),7.42-7.29(m,2H),6.62(s,1H),3.94-3.64(m,7H),3.55(d,J＝9.2Hz,1H),2.68-2.56(m,2H),2.54-2.25(m,7H),2.17-2.08(m,1H),1.99-1.88(m,2H),1.83-1.64(m,2H),1.45-1.35(m,1H),1.21-1.05(m,1H).

以下化合物使用与化合物(+)-5类似的方法合成得到，其中实施例12通过制备高效液相色谱盐酸体系分离纯化(柱子:Waters Xbridge 150*25mm,5μm；流动相:[水(0.05％盐酸)-ACN]；B％:10％-30％,12min)得到化合物(+)-12的盐酸盐。化合物(+)-12的盐酸盐通过碳酸钾水溶液碱化，乙酸乙酯萃取，有机相真空浓缩即可得到化合物(+)-12的游离碱。

实施例22:化合物(+)-22盐酸盐的制备

步骤1：化合物(+)-22-1的制备

将(+)-L5b(150.0mg,394.3μmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中，0℃下将NaH(18.9mg,473.1μmol,纯度：60％)加入，搅拌30分钟，然后将3-甲基卞基氯(72.1mg,512.6μmol)加入，反应液缓慢升至15℃后，继续反应16小时。将反应液倒入到20mL冰水中，用乙酸乙酯(20ml*3)萃取，合并后的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得到粗品。粗产品经硅胶柱层析分离纯化(洗脱液：石油醚/乙酸乙酯＝1/10至1/2)得到(+)-22-1。MS m/z:485.1[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.42(d,J＝3.0Hz,1H),7.39-7.30(m,1H),7.26-7.10(m,2H),7.04(d,J＝7.6Hz,1H),6.88-6.79(m,2H),4.34-3.96(m,2H),3.85-3.63(m,5H),3.51(d,J＝9.4Hz,1H),3.18-2.83(m,1H),2.61-2.23(m,3H),2.30(s,3H),2.01-1.61(m,4H),1.43(s,9H),1.40-1.37(m,1H),1.15-1.05(m,1H).

步骤2：化合物(+)-22盐酸盐的制备

将(+)-22-1(190.0mg,392.1umol)溶于二氧六环(2.0mL)中，然后将盐酸/二氧六环(2mL，4M)加入，反应液在15℃继续反应16小时。将反应液真空浓缩后，加水冻干，得到(+)-22盐酸盐。MS m/z:385.2[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.63(d,J＝1.8Hz,1H),7.97-7.67(m,2H),7.37-7.10(m,4H),4.09-3.97(m,2H),3.89-3.65(m,5H),3.56(d,J＝9.2Hz,1H),3.08-2.87(m,1H),2.58-2.41(m,3H),2.35(s,3H),2.18(br d,J＝4.4Hz,1H),2.04-1.92(m,2H),1.88-1.74(m,1H),1.49-1.40(m,1H),1.26-1.15(m,1H).化合物(+)-22的盐酸酸盐通过碳酸钾水溶液碱化，乙酸乙酯萃取，有机相真空浓缩即可得到化合物(+)-22的游离碱。

以下化合物(+)-23-1、(+)-24-1以及(+)-16-1使用与化合物(+)-22-1类似的方法合成得到：

以下化合物(+)-23、(+)-24和(+)-16的盐酸盐使用与化合物(+)-22盐酸盐类似的方法合成得到，化合物(+)-23、(+)-24和(+)-16的盐酸盐通过碳酸钾水溶液碱化，乙酸乙酯萃取，有机相真空浓缩即可得到其相应的游离碱。

实施例25:化合物(+)-25的制备

步骤1：化合物(+)-25-1的制备

-78℃氮气气氛下，将DIBAL-H(1M甲苯溶液,2.32mL)滴加加入到化合物(+)-L1-7(200.0mg,0.77mmol)的甲苯(3mL)溶液中，-78℃继续反应2h。往此反应液中依次加入甲醇(0.16mL)和水(0.06mL)，慢慢恢复至室温后，继续搅拌10分钟，加入无水硫酸钠(160mg)搅拌30分钟。然后将反应液过滤，将滤液真空浓缩。将得到的浓缩物溶于THF(4.0mL)中，加入盐酸(2M,1.0mL)，20℃搅拌30分钟后，将反应液真空浓缩得到(+)-25-1(粗品)。MS m/z:262.2[M+1]⁺.粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步反应。

步骤2：化合物(+)-25的制备

20℃下，将化合物(+)-25-1(100.0mg)和(S)-(+)-1-氨基茚(76.5mg,0.57mmol)溶于MeOH(3.0mL),然后依次将乙酸(0.1mL)和氰基硼氢化钠(72.1mg,1.15mmol)加入至反应体系中，20℃搅拌反应12h。将此反应液过滤，滤液通过制备高效液相色谱分离纯化(柱子:Xtimate C18 150*25mm*5m；流动相:[水(0.04％NH₃H₂O+10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％:30％-60％,10.5min)得到化合物(+)-25。MS m/z:379.3[M+1]⁺.

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.60(dd,J＝0.8,4.8Hz,1H),7.68-7.64(m,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,1H),7.19-7.11(m,5H),4.06(t,J＝6.4Hz,1H),3.86-3.62(m,5H),3.55(d,J＝9.2Hz,1H),2.95-2.88(m,1H),2.77-2.765(m,1H),2.60-2.40(m,3H),2.29-2.18(m,2H),2.01-1.88(m,2H),1.83-1.71(m,2H),1.70-1.50(m,2H),1.48-1.38(m,1H),1.25-1.10(m,1H).

以下化合物(+)-26-1使用与化合物(+)-25-1类似的方法合成得到：

以下化合物使用与化合物(+)-25类似的方法合成得到：

实施例28:化合物(+)-28的制备

步骤1：化合物(+)-28的制备

将化合物(+)-L3(0.30g,1.07mmol,盐酸盐)、4-溴-1-茚酮(282.86mg,2.14mmol)、乙酸(198.5mg,3.30mmol)加入到溶剂MeOH(3.0mL)中，然后将氰基硼氢化钠(201.7mg,3.21mmol)加入，60℃继续反应16小时。将反应液倒入10.0mL水中，用乙酸乙酯(15.0mL×3)萃取。合并有机相，用5.0mL饱和食盐水洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，除去有机溶剂，得到粗品。粗品经制备高效液相色谱分离纯化(柱子:Waters Xbridge 150*25mm*5m；流动相:[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％:27％-57％,7min)得到化合物(+)-28。

步骤2：化合物(+)-28b的制备

化合物(+)-28经SFC分离(柱子:ChiralPak AD-3150×4.6mm I.D.,3m；流动相:A:CO₂；B:Ethanol(0.05％DEA))得到2个化合物，化合物(+)-28a(100％de)和化合物(+)-28b(100％de)：

(+)-28a：MS m/z＝397.3[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.44(d,J＝2.8Hz,1H),7.42-7.29(m,2H),7.23-7.10(m,4H),4.06(t,J＝6.4Hz,1H),3.91-3.66(m,5H),3.54(d,J＝9.4Hz,1H),2.98-2.85(m,1H),2.80-2.68(m,1H),2.62-2.51(m,1H),2.49-2.34(m,2H),2.31-2.12(m,2H),2.01-1.92(m,3H),1.81-1.65(m,3H),1.48-1.36(m,1H),1.19-1.07(m,1H)。SFC：柱子:ChiralPak AD-3150×4.6mm I.D.,3m；流动相:A:CO₂；B:乙醇(0.05％DEA)；B％:5％-40％5.5min,40％3min,5％1.5min；Rt＝4.787min；100％de.

(+)-28b：MS m/z＝397.3[M+1]⁺.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.35(d,J＝2.8Hz,1H),7.35-7.22(m,2H),7.16-7.02(m,4H),4.09-4.01(m,1H),3.84-3.58(m,5H),3.46(d,J＝12.0Hz,1H),2.98-2.80(m,1H),2.75-2.62(m,1H),2.54-2.44(m,1H),2.38-2.28(m,2H),2.26-2.06(m,2H),1.94-1.66(m,6H),1.38-1.28(m,1H),1.12-1.00(m,1H)。SFC：柱子:ChiralPak AD-3150×4.6mm I.D.,3m；流动相:A:CO₂；B:乙醇(0.05％DEA)；B％:5％-40％5.5min,40％3min,5％1.5min；Rt＝5.412min；100％de.生物学评价

测试1：MOR cAMP激动活性测试

1.1实验目的：测试本发明化合物对于人μ亚型阿片受体(hMOR)的cAMP激动活性。

1.2实验步骤：

1.2.1化合物配制

a.化合物样品用DMSO溶解至10mM的保存浓度。

b.在384孔LDV板上配制样品稀释序列。3.162倍梯度稀释，总计11个浓度点。

c.使用Echo机器将样品稀释序列转移至实验板(Corning-3824)，对应每孔转移30nL。

d.使用Echo机器向实验板的相应位置转移30nL的333μM DAMGO(脑啡肽)(作为阳性对照孔)及30nL的DMSO(作为阴性对照孔)。

1.2.2MOR cAMP激动活性检测

实验采用Cisbio公司的cAMP检测试剂盒(Cisbio#62AM4PEJ)。

a.配制实验所需的试验缓冲液(Assay Buffer)及刺激缓冲液(StimulationBuffer,STB).

试验缓冲液：1×HBSS(+/+)(Invitrogen#14025-126)

20mM HEPES(Invitrogen#15630-130)

刺激缓冲液：用试验缓冲液配制，含5μM NKH477(CAS：138605-00-2)以及200μMIBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)

在10μL反应体系中，IBMX终浓度为100μM，NKH477终浓度为2.5μM

b.先向实验板(孔内已有30nL化合物)各孔加入5μL刺激缓冲液，之后再加入5μL细胞悬浮液。孔内细胞数为10000个/孔。

c.将实验板置于37℃恒温孵箱内孵育。孵育时间为40分钟。

d.配制cAMP标准浓度曲线。首浓度点2848nM，4倍梯度稀释，总计16个检测浓度。每个浓度点3个重复。

e.Cisbio cAMP检测试剂盒内自带d2标记的cAMP试剂(d2 reagent)及Eu标记的cAMP抗体试剂(Crypate reagent)，按照试剂盒说明书配制好上述两种试剂后，分别加入样品实验板及cAMP标准浓度实验板。各孔须先加入5μL d2 reagent，再加入5μL Cryptatereagent。

f.实验板于室温静置60分钟后，在Envision上读数。

1.3测试结果

本发明化合物对于人μ亚型阿片受体(hMOR)的cAMP激动活性EC₅₀和E_max见表1，Emax为化合物在测试浓度下引起cAMP水平变化的最大效应(脑啡肽DAMGO的最大效应为100％)。

表1.MOR cAMP活性测试结果

1.4结论

本发明化合物对μ受体cAMP信号通路具有明显的激动作用。

测试2：β-arrestin-2激动活性测试

2.1实验目的：测试本发明化合物对于人μ亚型阿片受体(hMOR)的β-arrestin-2激动活性。

2.2实验步骤：

2.2.1化合物配制

a.所有样品用DMSO溶解至10mM的保存浓度。

c.使用Echo机器将样品稀释序列转移至实验板，化合物对应每孔转移60nL。

d.使用Echo机器向实验板的相应位置转移进60nL的3.33mM DAMGO(作为HPE)及60nL的DMSO(作为ZPE)。

2.2.2MORβ-arrestin-2激动活性实验操作

实验采用DiscoveRX公司的PathHunter检测试剂盒(DiscoveRX#93-0213C3)

a.配制实验所需的试验缓冲液(Assay Buffer)及PathHunter检测试剂(Detection Reagent)

试验缓冲液：1×DPBS buffer

PathHunter检测试剂:试剂盒内自带三种组成成分。根据试剂盒说明书，将Galacton Star，Emerald II和PathHunter Cell Assay Buffer按照1:5:19的比例混合来配制检测试剂

b.向实验板(孔内已含有化合物)各孔加入20μL MORβ-arrestin-2细胞悬浮液，每孔内细胞数为7500个/孔。

c.300rpm离心30s，室温孵育2小时。

d.向实验板各孔加入6μL PathHunter检测试剂。

e.实验板300rpm离心30s，然后室温静置60分钟，之后在Envision上读数。

2.3测试结果

本发明化合物对于人μ亚型阿片受体(hMOR)的β-arrestin-2激动活性EC₅₀和E_max见表2，E_max为化合物在测试浓度下引起cAMP水平变化的最大效应(脑啡肽DAMGO的最大效应为100％)。

表2.MORβ-arrestin-2活性测试结果

*化合物在检测浓度范围内并无实际的激动剂活性，计算得到的作用百分比数值在0上下小范围内无序波动。因此在此实验中将EC₅₀均记为大于最高检测浓度(>30000nM)，将激动作用均记为约0％2.4结论

本发明化合物对μ受体β-arrestin信号通路没有激动作用，或激动作用较微弱。

本发明化合物与对照化合物1相比，本发明化合物Gi信号通路偏向性得到了显著提高，预示着在体内与β-arrestin信号通路相关的不良反应会更少。

测试3：肝微粒体代谢稳定性

3.1实验目的：测试本发明化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性

3.2实验步骤：

3.2.1化合物配制

a.所有样品以及对照品睾酮、双氯芬酸和普罗帕酮用DMSO溶解至10mM的保存浓度。

b.中间体溶液：采用45μL DMSO(带有450μL 1:1甲醇/水)来稀释5μL供试品或对照品。

c.工作液：采用450μL 100mM磷酸钾缓冲溶液(pH 7.4)来稀释中间体溶液。

3.2.2肝微粒体代谢稳定性检测

a.准备实验所需的材料

试验缓冲液：100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)

10mM MgCl₂

NADPH(还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)再生体系：

β-磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸，来源于Sigma，Cat.No.N0505

异柠檬酸，来源于Sigma，Cat.No.I1252

异柠檬酸脱氢酶，来源于Sigma，Cat.No.I2002

终止液：

含100ng/mL Tolbutamide和100ng/mL Labetalol的冷乙腈作为内标物。

肝微粒体溶液(最后浓度：0.5mg蛋白/mL)：

人肝微粒体，来源于BD，Cat No.452117，Lot No.38291

b.加10μL供试品或对照品工作液到所有板中(T0,T5,T10,T20,T30,T60,NCF60)。

c.分配680μL/well肝微粒体溶液到96孔板上，然后添加80，然后添加T到每块板上，将上述孵育板放置于37℃预孵育大约10分钟。

d.在NCF60板上每孔添加10μL 100mM磷酸钾缓冲液。

e.预孵育结束后，分配90μL/well NADPH再生体系工作液到96孔板上，然后添加10μL/well到每块板上以启动反应。

f.孵化适当的时间(如5、10、20、30和60分钟)。

g.分别在每个样品孔中加入300μL/well终止液(于4℃冷藏，含100ng/mLTolbutamide和100ng/mL Labetalol)。

h.样品板摇匀约10分钟并在4度下4000转离心20分钟。离心时，加300μL HPLC水到每孔中，取100μL上清液用于LC-MS/MS分析。

3.3数据分析

通过下面公式中计算T_1/2和Cl_int(mic)

当

每克肝含45mg微粒体蛋白，人的肝重为20g/kg。

C_t为时间t时的浓度，t为孵育时间，C₀为0时的浓度，K_e为消除速率常数，Cl_int(mic)为肝微粒固有清除率，Cl_int(liver)为肝固有清除率。

CL_int(mic)＝0.693/半衰期/mg微粒体蛋白每mL(孵育时微粒体浓度)

CL_int(liver)＝CL_int(mic)×mg微粒体蛋白/g肝重×肝重体重比

3.4测试结果

本发明化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性结果见表3。

表3.人肝固有清除率CL_int(liver)

3.5结论

本发明化合物相比对照化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性显著提高，预示着其在人体内可能具有较高的稳定性。

测试4：细胞色素P450同工酶抑制性研究

4.1实验目的：测试本发明化合物对人细胞色素P450同工酶不同亚型的抑制作用

4.2.实验方法

1)采用标准底物法测定CYP1A2,2C9,2C19,2D6和3A4的活性。在每个反应中，测定存在和不存在受试物时的酶活，共8个测试浓度，单样本测定。使用5合1混合抑制剂。

2)孵育基质包括微粒体、底物、抑制剂或受试化合物，在37℃预孵育5分钟后加入NADPH启动反应。

3)孵育后，加入含内标的乙腈终止反应。

4)采用LC-MS/MS法测定底物生成的代谢物，并评估各代谢物与内标的峰面积比，计算抑制率和IC₅₀。

4.3测试结果

本发明化合物对人细胞色素P450同工酶不同亚型的抑制作用IC₅₀见表4

表4.细胞色素P450同工酶不同亚型的抑制作用的IC₅₀值

>50μM指该化合物抑制效应在50μM时小于50％。

4.4结论

本发明化合物相比对照化合物对人细胞色素P450同工酶亚型2D6和3A4的抑制作用显著减弱，预示着其在人体内发生药物相互作用的可能性较小。

测试5：对hERG钾通道作用测试

5.1实验目的：测试本发明化合物对于对hERG钾电流的阻断作用。

5.2实验方法：

5.2.1细胞准备

a.CHO-hERG细胞培养于175cm²培养瓶中，待细胞密度生长到60～80％，移走培养液，用7mL PBS(磷酸盐缓冲液)洗一遍，然后加入3mL细胞消化液(Detachin)消化。

b.待消化完全后加入7mL培养液中和，然后离心，吸走上清液，再加入5mL培养液重悬，以确保细胞密度为2～5×10⁶/mL。

5.2.2溶液配制

表5细胞内液和外液的组成成分

注:”-”代表没有添加。

5.2.3电生理记录过程

单细胞高阻抗封接和全细胞模式形成过程全部由Qpatch仪器自动完成，在获得全细胞记录模式后，细胞钳制在-80毫伏，在给予一个5秒的+40毫伏去极化刺激前，先给予一个50毫秒的-50毫伏前置电压，然后复极化到-50毫伏维持5秒，再回到-80毫伏。每15秒施加此电压刺激，记录2分钟后给予细胞外液记录5分钟，然后开始给药过程，化合物浓度从最低测试浓度开始，每个测试浓度给予2.5分钟，连续给完所有浓度后，给予阳性对照化合物3μMCisapride。每个浓度至少测试3个细胞(n≥3)。

5.2.4化合物配制

a.将20mM的化合物母液用细胞外液进行稀释，取5μL 20mM的化合物母液加入2495μL细胞外液，500倍稀释至40μM，然后在含0.2％DMSO的细胞外液中依次进行3倍连续稀释得到需要测试的最终浓度。

b.最高测试浓度为40μM，依次分别为40，13.33，4.44，1.48，0.49，0.16μM共6个浓度。

c.最终测试浓度中的DMSO含量不超过0.2％，此浓度的DMSO对hERG钾通道没有影响。

5.2.5数据分析

实验数据由XLFit软件进行分析。

5.2.6质量控制

环境：湿度20～50％，温度22～25℃

试剂：所用实验试剂购买于Sigma公司，纯度>98％

报告中的实验数据必须满足以下标准：

全细胞封接阻抗>100MΩ

尾电流幅度>400pA

药理学参数：

多浓度Cisapride对hERG通道的抑制效应设为阳性对照。

5.3测试结果

本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用的IC₅₀值见表6

表6.hERG钾电流的阻断作用的IC₅₀

实施例编号	IC<sub>50</sub>(μM)
		对照化合物1	5.5
(+)-2	>40*
		(+)-16盐酸盐	22.8
(+)-22盐酸盐	18.8

>40*μM指该化合物抑制效应在40μM时IC₅₀值小于50％。

5.4结论

相比对照化合物1，本发明化合物对hERG的抑制作用更弱，预示着由hERG引起副作用的可能性更小。

测试6：化合物在大鼠体内的药代动力学测试

6.1实验目的：以7-9周雄性SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定单次静脉注射(IV)给予化合物后，不同时刻测定血浆和特定组织中化合物的药物浓度，研究本发明的化合物在大鼠鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。

6.2化合物配制

化合物TRV-130(对照化合物1)和(+)-23盐酸盐以生理盐水为溶媒配成澄清溶液；化合物(+)-5以5％DMSO+25％PEG400+70％生理盐水为溶媒配成澄清溶液；化合物(+)-16以10％DMSO+30％PEG400+60％水为溶媒配成澄清溶液。浓度均为1mg/mL，用于IV(静注)给药。

6.3动物给药

给药当天称量大鼠实际体重并计算给药体积。将上述配制的给药溶液通过大鼠尾静脉注射给药。

6.4样品采集和制备

通过颈静脉穿刺方式在实验方案设定的时间采集全血样品约0.2mL，并在试验记录中记录实际采血时间。所有血样均加入预先加好K2-EDTA抗凝剂标记好的塑料离心管。血样采集后，4℃，3000g离心10分钟制备上清血浆，将血浆保存在-20℃或更低温度，用于LC-MS/MS分析。

6.5样品分析

利用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定化合物在大鼠血浆中的浓度。化合物和内标的保留时间、色谱图采集和色谱图的积分采用软件Analyst(AppliedBiosystems)进行处理，数据的统计采用软件Watson LIMS(Thermo Fisher Scientific)或Analyst(Applied Biosystems)进行处理。采用WinNonlin^TM Version 6.3(Pharsight,Mountain View,CA)药动学软件的非房室模型处理血浆浓度，使用线性对数梯形法方法计算药动学参数。

6.6测试结果

本发明化合物大鼠药代动力学参数结果见表7和表8：

表7.大鼠体内药代动力学测试结果1

表8.大鼠体内药代动力学测试结果2

6.7结论

相比对照化合物1，本发明化合物在大鼠体内具有相当的药代动力学性质，且化合物在大鼠B/P ratio上有显著的提高，预示着进脑能力可能更强。

测试7:化合物在大鼠热板测试中的药效

7.1实验目的：评估化合物在SD大鼠热板测试中的药效。

7.2化合物配制

化合物TRV-130(对照化合物1)，(+)-16盐酸盐和(+)-22盐酸盐以生理盐水为溶媒配成澄清溶液，浓度为0.1mg/mL和0.02mg/mL，用于IV(静注)给药。

吗啡(批号：150906-2，供应商：东北制药集团公司沈阳第一制药厂)：以生理盐水为溶媒配成澄清溶液，浓度为1.2mg/ml溶液。

7.3实验方法过程

7.3.1热板测试

a.将动物运到待测实验室中，在测试环境中适应15分钟以上。

b.使用50％乙醇清洁仪器。

c.打开仪器，设置加热程序，加热至52℃。

d.将测试动物放在热板表面上，同时压下脚踏板启动计时器记录从开始到动物感觉到疼痛后的时间。

e.当动物表现出任何对热的反应时(爪的震颤，舔爪，急跃，缩腿等)松开脚踏板停止计时。如果动物在20秒内没有表现出对热刺激的反应，将动物从热板上取下以避免烫伤。

f.使用50％乙醇清洁仪器，待仪器温度回复至52℃后测试下一只动物。

7.3.2基线测试和分组

给药前一天测试热痛阈值基线，根据测试结果将动物平均分组。

7.3.3给药与测试

大鼠给药后按时间点测试热痛阈值。

7.3.4数据收集和分析

使用Excel软件收集数据。使用Prism 6.01(Graph pad software,Inc.)软件分析数据。

7.4测试结果

本发明化合物在大鼠热板测试中的药效见图1。

7.5结论

在0.5mg/kg给药下，本发明化合物比TRV-130展现出更好的镇痛效果；在两个不同剂量下，本发明化合物都比TRV-130具有更长久的镇痛作用。

Claims

1.下式所示化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其选自：

3.一种药物组合物，包括治疗有效量的根据权利要求1-2任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的载体。

4.根据权利要求1-2任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或者权利要求3的组合物在制备阿片受体μ受体激动剂相关药物上的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述阿片受体μ受体激动剂相关药物是用于治疗疼痛和疼痛相关紊乱的药物。