CN111141843A - 一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法 - Google Patents

一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法。本发明采用提取液(乙腈：水：乙酸＝79：20：1)提取，QuEChERS萃取包(包含有MgSO4、NaCl、柠檬酸钠和柠檬酸二钠)来净化，采用UPLC‑MS/MS方法，以UPLC HSS T3柱为色谱柱，并采用0.2％甲酸水/甲醇作为流动相进行定性和定量分析，所有的霉菌毒素、农药的平均回收率在73.37‑105.87％之间，非常适合于玉米中霉菌毒素、农药的检测，对于保障玉米产品质量安全，维护人体健康具有重要意义。

Description

一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法
技术领域
本发明涉及一种固相萃取结合UPLC-MS/MS快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，属于农产品检测技术领域。
背景技术
玉米是我国重要的粮食和工业加工原料，也是主要的动物饲料的营养来源；是山东省第二大粮食作物，种植面积5600万余亩，是重要的饲料和工业加工原料。到2013年，玉米已成为第一种主要谷物产量超过水稻的作物(2013年联合国粮食及农业组织)。玉米质量安全关乎食品安全、人畜健康，是玉米及饲料产业的生命线，还特别影响到畜牧和工业产业高质量发展，意义重大。影响玉米质量安全的风险隐患较多，在生产和储运环节，比如农业生产和收获不当，以及不适当的干燥、包装、储存和运输条件容易被各种霉菌感染，有些霉菌会产生霉菌毒素，污染玉米。
迄今已知有大约400种霉菌毒素，每种都具有致病菌、细胞毒性、神经毒性、震颤、免疫抑制、雌激素、致畸、肝毒性和肾毒性效应，从而影响人类和动物的健康。它们产生的真菌毒素，如黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、伏马菌素B1、B2、B3，脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A一直是全球关注的问题。因为它们的普遍存在和对健康的影响重大，国际癌症研究机构(2002)对黄曲霉毒素进行了分类。黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2作为已知致癌物(1组)，基于其致癌作用对人类的潜力。
污染玉米的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素B1，B2、G1、G2、伏马菌素B1、B2、B3和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)。同时为了保证玉米的产量，大量杀菌剂、杀虫剂、除草剂在种植过程中被施用，其引发的残留问题也引起了人们的广泛关注。多菌灵等杀菌剂，对玉米常见的顶腐病和黑粉病等真菌病害有很好的防治作用，它对人、畜均有一定的致癌和致突变性，具有潜在的生殖毒性、胚胎毒性以及免疫毒性；吡虫啉等杀虫剂，能有效防治玉米整个生育期蚜虫等地下害虫的危害。
许多不同的方法已被用于检测和定量真菌毒素，如薄层色谱法，酶联免疫吸附法，高效液相色谱和气相色谱-串联质谱法。薄层色谱和酶联免疫吸附剂分析是定性或半定量的，常用于样品筛选。气相色谱-串联质谱法由于通常的衍生化而有局限性。超高效液相色谱-串联质谱法，是一种流行的检测方法，由于其高灵敏度，特异性和可靠性，越来越有助于霉菌毒素分析，特别有利于多菌毒素检测方法的发展。然而，这些检测方法仅适用于一些传统的真菌毒素，如黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、伏马菌素B1、B2、B3。
目前，国内尚无同时测定玉米农残和毒素的检测方法，而相关的检测研究也多集中在粮油类的黄曲霉毒素或者农药测定上。因此，为保障玉米产品质量安全，维护人体健康，建立玉米中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、T-2毒素、伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、青霉酸等霉菌毒素和吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、毒死蜱、噻虫嗪、苯醚甲环唑、戊唑醇、抗蚜威、三唑酮、丙环唑、咪鲜胺、氟虫腈、三唑磷、克百威、3-羟基克百威、辛硫磷、异丙威、水胺硫磷、噻嗪酮、嘧菌酯、甲胺磷、吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺、噻虫胺、肟菌酯及乐果等农药残留量的检测方法非常必要。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种快速测定玉米中14种毒素和26种农药残留的方法。本发明采用提取液(乙腈：水：乙酸＝79：20：1)提取，QuEChERS萃取包来净化，采用UPLC-MS/MS方法，以UPLC HSS T3柱为色谱柱，并采用0.2％甲酸水/甲醇作为流动相进行定性和定量分析，所有的霉菌毒素、农药的平均回收率在73.37-105.87％之间，非常适合于玉米中霉菌毒素、农药的检测，对于保障玉米产品质量安全，维护人体健康具有重要意义。
本发明的技术方案是：一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，包括以下步骤：
1)玉米样品处理
将玉米样品，加入乙腈、水和乙酸的混合提取液进行超声提取，并加入QuEChERS萃取包(含有MgSO4、NaCl、柠檬酸钠和柠檬酸二钠)进行萃取，离心；取上清液加水混合，过滤，得到样品分析液；
2)检测
采用UPLC-MS/MS对步骤1)中获得的样品分析液进行14种霉菌毒素和26种农药残留的定性、定量分析。
其色谱条件：waters I-class超高液相色谱仪，UPLC HSS T3柱(100×2.1mm2I.D，1.7μm)。
流动相A：0.2％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，流速：0.3mL/min。
梯度洗脱程序如下：0-0.5min：流动相B从10％线性增加到20％，平衡0.5min；1-2min，流动相B从20％线性增加到30％，平衡0.5min；2.5-3.5min：流动相B从30％线性增加到40％，平衡1min；4.5-5.5min：流动相B从40％线性增加到50％，平衡1min；6.5-7.5min：流动相B从50％线性增加到60％，平衡1min；8.5-9.5min：流动相B从60％线性增加到70％，平衡1min；10.5-11.5min：流动相B从70％线性增加到80％；11.5-12.5min：流动相B从80％线性增加到90％，平衡1.5min；14-15.5min：流动相B从90％线性减少到10％，平衡1.5min。
质谱条件：AB5500型三重四级杆串联质谱仪，电喷雾(ESI)离子源，正负离子扫描模式；各参数如下：离子喷雾电压：4.5kV，气帘气压力：15psi，雾化气压力：50psi，辅助加热气压力：50psi，离子源加热温度：600℃。去簇电压及碰撞能量见表1。
所述14种霉菌毒素为：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、B2、B3、呕吐毒素、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素和青霉酸。
所述26种农药为：啶虫脒、多菌灵、吡虫啉、毒死蜱、噻虫嗪、苯醚甲环唑、戊唑醇、三唑酮、丙环唑、咪鲜胺、氟虫腈、三唑磷、克百威、辛硫磷、异丙威、水胺硫磷、噻嗪酮、抗蚜威、嘧菌酯、甲胺磷、吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺、噻虫胺、肟菌酯、乐果和3-羟基克百威。
进一步的，所述步骤1)，混合提取液中，按体积比计，乙腈：水：乙酸＝79：20：1。
本发明所使用的QuEChERS萃取包(10g)，购自安捷伦，含有4g MgSO4、1g NaCl、1g柠檬酸钠和0.5g柠檬酸氢二钠。
进一步的，所述步骤1)具体为：将玉米磨碎、均质，取5.0g磨碎均质的样品加入到20mL混合提取液(乙腈：水：乙酸＝79：20：1)中，匀浆，高速搅拌2min，超声提取15min，并加入QuEChERS萃取包快速震荡混匀，涡旋2分钟，4000rpm下离心；待分层后取1ml上清液和1ml水混合，使用0.22μm的针式过滤器过滤，得到样品分析液。
进一步的，本发明采用标准曲线法对14种霉菌毒素和26种农药残留进行定量分析，标准曲线如表2所示。
本发明的有益效果是：
1)本发明采用提取液(乙腈：水：乙酸＝79：20：1)提取，14种毒素和26种农药的提取率都能满足标准(73.37～105.87％)。用QuEChERS萃取包来净化玉米杂质，QuEChERS萃取包中含有MgSO4/NaCl，柠檬酸钠和柠檬酸二钠，柠檬酸钠作为缓冲剂，主要利于伏马毒素(极性较大的两性有机化合物)的提取；同时其它霉菌毒素和农药的提取率也满足标准。用萃取包代替分别添加填料的方法，大大提高了效率，缩短了提取时间，适用于大量样品的预处理。
2)本发明采用UPLC HSS T3色谱柱，并采用0.2％甲酸水/甲醇作为流动相，14种霉菌毒素和26种农药都能达到很好的灵敏度，14种霉菌毒素的检出限为0.02～1μg/kg，定量限为0.15～2μg/kg；26种农药的检出限为0.01～0.5μg/kg，定量限为0.1～1.0μg/kg。
总之，本发明的方法简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确度高，检出限和定量限大大低于中国标准限量GB2761 2017，GB2763 2016，非常适用于玉米中霉菌毒素、农药残留的测定，对于保障玉米产品质量安全，维护人体健康具有重要意义。
附图说明
图1为部分霉菌毒素和农药的标准曲线，其中A表示黄曲霉毒素B1，B表示伏马毒素B1，C表示抗蚜威，D表示多菌灵，E表示水胺硫磷，F表示肟菌酯；
图2为14种霉菌毒素和26种农药的质谱图，其中：(1)吡蚜酮；(2)甲胺磷；(3)多菌灵；(4)呕吐毒素；(5)噻虫嗪；(6)青霉酸；(7)抗蚜威；(8)吡虫啉：(9)噻虫胺；(10)乐果；(11)3-羟基克百威；(12)啶虫脒；(13)15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇；(14)3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇；(15)黄曲霉毒素G2；(16)黄曲霉毒素G1；(17)黄曲霉毒素B2；(18)黄曲霉毒素B1；(19)克百威；(20)异丙威；(21)水胺硫磷；(22)氯虫苯甲酰胺；(23)伏马毒素B1；(24)嘧菌酯；(25)T2毒素；(26)伏马毒素B3；(27)三唑酮；(28)玉米赤霉烯酮；(29)三唑磷；(30)赭曲霉毒素A；(31)伏马毒素B2；(32)咪鲜胺；(33)氟虫腈；(34)噻嗪酮；(35)戊唑醇；(36)丙环唑；(37)辛硫磷；(38)苯醚甲环唑；(39)肟菌酯；(40)毒死蜱。
具体实施方式
实施例1：
1材料和方法
1.1材料和试剂
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的标准品购自美国SigmaAldrich公司，伏马毒素B1、B2、B3、呕吐毒素、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、青霉酸的标准品购自Romer Labs公司，QuEChERS萃取包(10g，安捷伦)。所用化学药品和溶剂均为ACS等级，用于HPLC分析的甲醇、乙腈和甲酸均为HPLC级。农药吡虫啉、啶虫脒、多菌灵、毒死蜱、噻虫嗪、苯醚甲环唑、戊唑醇、抗蚜威、三唑酮、丙环唑、咪鲜胺、氟虫腈、三唑磷、克百威、辛硫磷、异丙威、水胺硫磷、噻嗪酮、3-羟基克百威、嘧菌酯、甲胺磷、吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺、噻虫胺、肟菌酯及乐果标准品购自First Standard公司(天津，中国)。农药贮备原液(1000mg/L)，保存于-20℃。制备了一系列用乙腈稀释的含有各种标准混合物的标准溶液(10mg/L)。来自Millipore公司的MilliQ-Plus超纯水系统(米尔福德，美国)，在整个研究过程中所有用水均来自MilliQ-Plus超纯水。其它溶剂均来自上海国药化工试剂(上海，中国)。
1.2标准溶液配制
将14种霉菌毒素和26种农药加入到乙腈中，制备浓度为5μg/ml的14种霉菌毒素和1μg/ml的26种农药混合标准储备液，-18℃保存，每3个月更新一次。并用乙腈稀释制备了一系列的标准工作液，使用标准工作液制备相应标准溶液的标准曲线。
1.3样品提取和净化
玉米样品的制备：将玉米磨碎均质，取5.0g磨碎均质的样品加入20mL(乙腈：水：乙酸＝79：20：1)，在50ml的离心管中匀浆，高速搅拌2min，超声提取15min，并加入QuEChERS萃取包快速震荡混匀，涡旋2分钟，高速离心机4000rpm下离心5min。待分层后取1ml上清液和1ml水混合，使用0.22μm的Biosharp BS-QT-013(13mm*0.22μm)针头过滤器过滤，装瓶待上机。
1.4仪器方法
色谱条件：waters I-class超高液相色谱仪，UPLC HSS T3柱(100×2.1mm2 I.D，1.7μm)，柱温：35℃，样品室温度20℃；进样体积：1.0μL；
流动相A：0.2％甲酸水溶液，流动相B：甲醇，流速：0.3mL/min。
梯度洗脱程序如下：0-0.5min：流动相B从10％线性增加到20％，平衡0.5min；1-2min，流动相B从20％线性增加到30％，平衡0.5min；2.5-3.5min：流动相B从30％线性增加到40％，平衡1min；4.5-5.5min：流动相B从40％线性增加到50％，平衡1min；6.5-7.5min：流动相B从50％线性增加到60％，平衡1min；8.5-9.5min：流动相B从60％线性增加到70％，平衡1min；10.5-11.5min：流动相B从70％线性增加到80％；11.5-12.5min：流动相B从80％线性增加到90％，平衡1.5min；14-15.5min：流动相B从90％线性减少到10％，平衡1.5min。
质谱条件：AB5500型三重四级杆串联质谱仪，电喷雾(ESI)离子源，正负离子扫描模式；各参数如下：离子喷雾电压：4.5kV，气帘气压力：15psi，雾化气压力：50psi，辅助加热气压力：50psi，离子源加热温度：600℃。
去簇电压及碰撞能量见表1，使用Analyst1.6.2软件进行优化。采用多反应监测(MRM)模式采集数据，保证采集点充足(每个峰至少有12个点)。14种霉菌毒素和26种农药的定量离子对和定性离子对如表1所示。
表1 14种霉菌毒素和26种农药的MRM参数
Figure BDA0002344693650000051
Figure BDA0002344693650000061
Figure BDA0002344693650000071
2方法验证
2.1分析方法
分析14种霉菌毒素和26种农药需要建立标准曲线，每种毒素的标准曲线选用5个浓度(5.0、50、100、250、500ng/mL)；为分析26种农药的标准曲线选用5个浓度(1.0、10、20、50、100ng/mL)的标准溶液，通过绘制LC/MS/MS中每种毒素/农药的峰面积(y轴)与浓度(x轴)的关系曲线，建立了每种毒素/农药的标准曲线(部分标准曲线图见图1)。
将14种霉菌毒素和26种农药的混合标准溶液添加到未被霉菌毒素和农药污染的玉米样品中，以在霉菌毒素和农药感染的情况下分析方法的精密度，图2中各霉菌毒素和农药的添加量如下：14种毒素100.0ng/g：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、T2毒素、伏马毒素B1、伏马毒素B2、伏马毒素B3、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、青霉酸；26种农药20.0ng/g：啶虫脒、多菌灵、吡虫啉、毒死蜱、噻虫嗪、苯醚甲环唑、戊唑醇、三唑酮、丙环唑、咪鲜胺、氟虫腈、三唑磷、克百威、3-羟基克百威、辛硫磷、异丙威、水胺硫磷、噻嗪酮、抗蚜威、嘧菌酯、甲胺磷、吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺、噻虫胺、肟菌酯、乐果。用LOD和LOQ测定LC/MS/MS分析方法的灵敏度。
2.2方法验证
在5、50、100、250、500ng/ml浓度水平上进行添加不同的霉菌毒素建立标准曲线，及在1、10、20、50、100ng/ml浓度水平上进行添加不同的农药建立标准曲线见表2，并给出了标准曲线的线性方程和检测限，在实验浓度范围内R值高于0.9990，有良好的线性，每种毒素和农药的检测限和定量限分别是信噪比的3倍和10倍，样品中14种霉菌毒素的检出限为0.02～1μg/kg，定量限为0.1～2μg/kg；26种农药的检出限为0.01～0.5μg/kg，定量限为0.1～1.0μg/kg。结果表明：该方法对玉米中霉菌毒素、农药的检测是灵敏的。
表2 14种霉菌毒素和26种农药的线性、检出限和定量限
Figure BDA0002344693650000081
Figure BDA0002344693650000091
2.3精密度和回收率
加样回收率试验，在三份玉米空白样品中进行低(5μg/kg)、中(100μg/kg)、高(500μg/kg)三个浓度水平上添加14种霉菌毒素的混合标准物质及低(1μg/kg)、中(50μg/kg)、高(100μg/kg)三个浓度水平上添加26种农药的混合标准物质进行测定，来分析方法的准确度。
计算峰面积日内和日间的变化以及相对标准偏差来分析其精密度，表3-4给出了分析物的平均回收率和相对标准偏差。表3-4中可以看出，使用该方法所有的霉菌毒素、农药的平均回收率在73.37-105.87％之间，所有相对标准偏差低于15％。
表3 14种霉菌毒素分析方法的精密度和回收率
Figure BDA0002344693650000092
表4 26种农药分析方法的精密度和回收率
Figure BDA0002344693650000101
3.结果与讨论
3.1样品处理方法的优化
在早期霉菌毒素的研究中，霉菌毒素的提取常使用甲醇和水提取，过免疫亲和柱，操作繁琐、费时费力，并且免疫亲和柱昂贵。之后有在玉米霉菌毒素的萃取中，用提取液(乙腈：水：甲酸＝79：20：1)提取，但是这个方法在同时提取真菌毒素和农药时，农药的回收率不好，有的回收率低于70％，如啶虫脒(62.3％)、嘧菌酯(65.8％)等，但是如果只用提取液(乙腈：水＝80：20)提取，伏马毒素的回收率会大大的降低，所以必须使用酸才可以。考虑用乙酸代替甲酸，毒素和农残的回收率都在70～110％之间，完全达到标准。用QuEChERS萃取包来净化玉米杂质，QuEChERS萃取包中含有MgSO4/NaCl，柠檬酸钠和柠檬酸二钠，柠檬酸钠作为缓冲剂，主要利于伏马毒素的提取，因为伏马毒素是极性较大的两性有机化合物；同时其它毒素和农药的提取率也满足标准(73.37～105.87％)。用萃取包代替分别添加填料(MgSO4/NaCl，柠檬酸钠)的方法，大大提高了效率，缩短了提取时间，适用于大量样品的预处理。实验证明：改良后的QuEChERS法是检测玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留量的最佳预处理方法。
3.2高液相色谱条件的优化
在建立MS/MS参数后，优化液相方法。之前进行霉菌毒素的提取应用UPLC BEH C18柱能很好的进行分离，并且响应值高；但是在应用流动相0.5％甲酸的条件下，农药的响应值不好，有的灵敏度低(如氟虫腈检出限是10μg/kg)。为了提高灵敏度，降低甲酸的浓度，降低到0.2％时，农药的灵敏度提高了，但是毒素的灵敏度下降了，无法达到更好的效果。将UPLC BEH C18柱换成UPLC HSS T3柱，并将流动相降低到0.2％甲酸，发现农药和毒素都能达到更好的灵敏度。因此使用0.2％的甲酸可以获得更好的灵敏度，如图2所示。用质谱法可以获得较好的分离效果。
4.结论
本发明建立一种玉米中同时快速提取并测定14种霉菌毒素T-2毒素、青霉酸、伏马毒素B1、B2、B3、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、呕吐毒素、3-乙酰脱氧雪腐镰刀烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀烯醇和玉米赤霉烯酮，26种农药啶虫脒、多菌灵、吡虫啉、毒死蜱、噻虫嗪、苯醚甲环唑、戊唑醇、三唑酮、丙环唑、咪鲜胺、氟虫腈、三唑磷、克百威、辛硫磷、异丙威、水胺硫磷、噻嗪酮、抗蚜威、嘧菌酯、甲胺磷、吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺、噻虫胺、肟菌酯、乐果、3-羟基克百威的UPLC-MS/MS方法。这种方法简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确度高，检出限和定量限大大低于中国标准限量GB2761 2017，GB2763 2016。
实施例2：实际样品的测定
使用实施例1中提供的方法测定了70个从山东地区采集的玉米样品中14种霉菌毒素和26种农药的残留量，霉菌毒素和农药的污染率，阳性样品的平均值和最大值如表5所示。结果表明：70个玉米样品中检测出6种霉菌毒素和4种农药，污染率最高可以达到100％(多菌灵)，其次是伏马毒素B1、B2(65.7％)，伏马毒素B3(54.1％)，有16个样品中检测出了黄曲霉毒素B1，最大浓度可以达到113.0μg/kg。我国制定了玉米中黄曲霉毒素B1的限量是20μg/kg，超标率达到了7.1％。
表5山东地区70个玉米样品检测结果
Figure BDA0002344693650000111
Figure BDA0002344693650000121
上述结果表明，玉米中霉菌毒素的污染水平比较高，玉米中霉菌毒素的污染应该被重视。

Claims (7)

1.一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，
所述14种霉菌毒素为：黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、B2、B3、呕吐毒素、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素和青霉酸；
所述26种农药为：啶虫脒、多菌灵、吡虫啉、毒死蜱、噻虫嗪、苯醚甲环唑、戊唑醇、三唑酮、丙环唑、咪鲜胺、氟虫腈、三唑磷、克百威、辛硫磷、异丙威、水胺硫磷、噻嗪酮、抗蚜威、嘧菌酯、甲胺磷、吡蚜酮、氯虫苯甲酰胺、噻虫胺、肟菌酯、乐果和3-羟基克百威；
包括以下步骤：
1)玉米样品处理
将玉米样品，加入乙腈、水和乙酸的混合提取液进行超声提取，并加入QuEChERS萃取包进行萃取，离心；取上清液加水混合，过滤，得到样品分析液；所述QuEChERS萃取包含有MgSO4、NaCl、柠檬酸钠和柠檬酸二钠；
2)检测
以UPLC HSS T3柱为色谱柱，采用UPLC-MS/MS方法对步骤1)中获得的样品分析液进行14种霉菌毒素和26种农药残留的定性、定量分析。
2.如权利要求1所述的一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，所述步骤2)检测采用的流动相A：0.2％甲酸水溶液，流动相B：甲醇；梯度洗脱。
3.如权利要求2所述的一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，所述梯度洗脱程序如下：0-0.5min：流动相B从10％线性增加到20％，平衡0.5min；1-2min，流动相B从20％线性增加到30％，平衡0.5min；2.5-3.5min：流动相B从30％线性增加到40％，平衡1min；4.5-5.5min：流动相B从40％线性增加到50％，平衡1min；6.5-7.5min：流动相B从50％线性增加到60％，平衡1min；8.5-9.5min：流动相B从60％线性增加到70％，平衡1min；10.5-11.5min：流动相B从70％线性增加到80％；11.5-12.5min：流动相B从80％线性增加到90％，平衡1.5min；14-15.5min：流动相B从90％线性减少到10％，平衡1.5min。
4.如权利要求1所述的一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，所述质谱条件：AB5500型三重四级杆串联质谱仪，电喷雾ESI离子源，正负离子扫描模式；各参数如下：离子喷雾电压：4.5kV，气帘气压力：15psi，雾化气压力：50psi，辅助加热气压力：50psi，离子源加热温度：600℃。
5.如权利要求1-4中任一项所述的一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，去簇电压、碰撞能量、定量离子对、定性离子对及保留时间见下表：
Figure FDA0002344693640000021
Figure FDA0002344693640000031
6.如权利要求1所述的一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，所述步骤1)，混合提取液中，按体积比计，乙腈：水：乙酸＝79：20：1。
7.如权利要求6所述的一种快速测定玉米中14种霉菌毒素和26种农药残留的方法，其特征是，所述步骤1)具体为：将玉米磨碎、均质，取5.0g磨碎均质的样品加入到20mL混合提取液中，匀浆，高速搅拌2min，超声提取15min，并加入QuEChERS萃取包快速震荡混匀，涡旋2分钟，4000rpm下离心；待分层后取1ml上清液和1ml水混合，使用0.22μm的针头过滤器过滤，得到样品分析液。
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