CN111135165B - 秦皮乙素及其组方在制备治疗家畜腹泻药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及秦皮乙素及其组方在制备治疗家畜腹泻药物中的应用。腹泻是威胁家畜幼崽生长和发育常见的病症，大肠杆菌是引发家畜幼崽腹泻的最常见的传染性病原菌之一，开发有效的、可以预防与治疗家畜幼崽腹泻的中药，同时控制和减少抗生素的危害也已成为畜牧业研究中的一大重点。发明人通过反复的实验摸索，发现秦皮乙素单体、秦皮乙素和黄芩素的组方在治疗家畜幼崽大肠杆菌性腹泻的具有非常好的疗效，具有非常好的应用前景。

Description

秦皮乙素及其组方在制备治疗家畜腹泻药物中的应用
技术领域
本发明属于兽药技术领域，具体涉及秦皮乙素单体、及其组方在制备治疗家畜腹泻的药物中的应用。
背景技术
养猪业已经成为世界上畜牧业主要产业之一。据不完全统计，我国有约超过68.9％的农民对养殖业有所涉略，而其中有接近60％的人选择养殖家猪。2015年我国生猪存栏量已达4亿多头，并且繁殖母猪数量为4000万，猪肉产量超过5000多万吨。腹泻是危害仔猪生长和发育的常见病症，根据引发腹泻的病因不同分为传染性腹泻和非传染性腹泻，其中大肠杆菌是引发仔猪腹泻的最常见的传染性病原菌之一。仔猪大肠杆菌性腹泻是由产肠毒素性大肠杆菌引起的一种高度接触性、急性、致死性疾病，是影响养猪业发展的主要疾病之一。考虑到广大养猪企业和个人的收益，开发有效的、可以预防与治疗仔猪腹泻的中药，同时控制和减少抗生素的危害也已成为畜牧业研究中的一大重点。
秦皮为常用中药，始载于神农本草经，为木犀科植物苦枥白蜡树(Fraxinusrhynchop hyllaHance)的干燥枝皮或干皮。现代药理学研究表明，秦皮具有抗肿瘤、抗炎镇痛、抗病原微生物、抗氧作用以及神经保护和血管保护等作用。秦皮乙素(Esculetin，Esc)是香豆素的衍生物，又称为6，7-二羟基香豆素，是木犀科的苦枥白蜡树的树皮中提取的主要单体活性成分之一。现已发现秦皮乙素具有良好的抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤活性，同时还有化痰平喘、保肝、治疗糖尿病等多种药理作用。
黄芩是我国传统中草药唇形科植物黄芩的干燥根，其主要发挥药理作用的是黄芩中的黄酮类化合物，其中黄酮类化合物黄芩素是黄芩的主要活性成分之一，也是其发挥药理学作用的基础。黄芩素又名三羟基黄酮，是从黄芩根中提取的有效成分，是黄芩中含量最高的黄酮类化合物之一。随着国内外学者对黄芩素研究的深入发现，黄芩素具有抗菌、抗病毒、利肝、抗肿瘤、抗糖尿病、清除氧自由基、神经保护等广泛作用，特别是在抗菌方面，对大肠杆菌、尖孢镰刀菌、白色念珠菌等有显著抑制作用。
中草药在我国兽医临床中使用已有数千年历史，并且具有资源广、价格低廉、毒副作用极小和不易导致耐药性产生等优点。当前迫切需要应用中兽医理论和临床实践，研制新的中药组方配伍制剂，抽取中药的有效部位或单体成分，去除影响药效的成分，以推进中兽药的现代化研究。本申请中，发明人通过反复的实验摸索，发现秦皮乙素单体、秦皮乙素和黄芩素的组方在治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的具有非常好的疗效，尤其是秦皮乙素和黄芩素的组方药表现了非常好的协同作用效果，在低剂量浓度时即具有非常显著的治疗效果。本申请具有非常好的兽药临床应用前景。
发明内容
本申请的目的在于提供中药单体在制备治疗家畜腹泻的药物中的应用，所述中药单体为秦皮乙素或黄芩素。
进一步，腹泻为大肠杆菌性腹泻。
优选的，中药单体的使用浓度为0.5-8μg/g。
家畜是被人类高度驯化的动物，是人类长期劳动的社会产物，具有独特的经济性状，能满足人类的需求，主要包括猪、牛、羊、马、家兔、猫、狗等。
优选的，家畜为家畜幼崽。
优选的，秦皮乙素的使用浓度为0.5-8μg/g；黄芩素的使用浓度为0.5-8μg/g。
更优选的，秦皮乙素的使用浓度为0.5-4μg/g；黄芩素的使用浓度为0.5-4μg/g。
更优选的，秦皮乙素的使用浓度为0.5-2μg/g；黄芩素的使用浓度为0.5-2μg/g。
本申请的目的在于提供一种治疗家畜腹泻的药物组合物，所述药物组合物包括黄芩素单体和秦皮乙素单体。
黄芩素和秦皮乙素配比可制备成各种形式的组合物。优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1-4:4-1；更优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1-2:4-1；更优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1-2:2-1。。
优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1-4:1；更优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1-2:1。
优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1:1-4；更优选的，黄芩素单体和秦皮乙素单体的比例为1:1-2。
优选的，秦皮乙素的使用浓度为0.5-8μg/g；黄芩素的使用浓度为0.5-8μg/g。
更优选的，秦皮乙素的使用浓度为0.5-4μg/g；黄芩素的使用浓度为0.5-4μg/g。
更优选的，秦皮乙素的使用浓度为0.5-2μg/g；黄芩素的使用浓度为0.5-2μg/g
优选的，家畜为家畜幼崽。
进一步，药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
所述药学上可接受的辅料包括但不限于药用载体、赋形剂、稀释剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、防腐剂、着色剂、矫味增强剂、表面活性剂、润湿剂、崩解剂、助悬剂、等渗剂或溶剂等。
本发明的药物组合物可制备成片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂或凝胶剂。
给予本发明的药物组合物的途径包括但不限于口服、直肠、透粘膜、局部、经皮、吸入、胃肠外、舌下、阴道内、鼻内、肌内、皮下或静脉内给药。
黄芩素和秦皮乙素还可以制备成缓释制剂、固体分散体等剂型达到长效或速效，并提高吸收的效果。
上述药物组合物在制备治疗家畜腹泻的药物中的应用。
进一步，腹泻为大肠杆菌性腹泻。
优选的，轻度腹泻时药物组合物的使用浓度为0.5-2μg/g；更优选的，药物组合物的使用浓度为0.5-1μg/g。
本发明的技术优势：
1本发明发现了秦皮乙素和黄芩素单体在治疗猪仔腹泻的新用途；
2本发明发现了秦皮乙素和黄芩素的药物组合物及其在治疗猪仔腹泻的新用途；
3本发明发现秦皮乙素和黄芩素单体用药时，在高剂量时治疗效果明显，在低剂量或中剂量时效果不如高剂量，同时发现二者的药物组合物在低剂量或中剂量时效果优于高剂量，并表现出协同的效果。
附图说明
图1是黄芩素单体不同给药量治疗结果图；
图2是秦皮乙素单体不同给药量治疗结果图；
图3是黄芩素和秦皮乙素组方药不同给药量治疗结果图；
图4是秦皮乙素和黄芩素不同比例配伍治疗效果图；
图5是低剂量组方药对不同腹泻模型治疗效果图；
图6是肠道切片HE染色图(400×)；A：对照组；B：轻度模型组；C：中度模型组；D：重度模型组；E：轻度模型治疗组；F：中度模型治疗组；G：重度模型治疗组；
图7是各给药组仔猪治疗天数散点图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。
实施例1黄芩素和秦皮乙素组方注射液
处方：黄芩素 300mg
秦皮乙素 300mg
注射用水 100ml
溶于注射用水，调pH至单体全部溶解，得澄清溶液，pH最后调为9，加注射用水至全量，过滤灭菌。分装至西林瓿中，每支注射液10ml含30mg黄芩素和30mg秦皮乙素。
实施例2.注射用黄芩素和秦皮乙素组方粉针
处方：
黄芩素 6mg
秦皮乙素 6mg
甘露醇 3g
取黄芩素和秦皮乙素溶于20ml注射用水，调pH至单体全部溶解，与80ml甘露醇水溶液混合，过滤灭菌，分装至西林瓶中，冻干。每瓶含0.6mg黄芩素和0.6mg秦皮乙素。临用前加10ml注射用水振摇，迅速溶解。
实施例3.注射用黄芩素和秦皮乙素组方口服液
处方：黄芩素 300mg
秦皮乙素 300mg
蔗糖 10g
注射用水 100ml
溶于注射用水，调pH至单体全部溶解，得澄清溶液，pH最后调为9，与蔗糖水溶液混合，加注射用水至全量，过滤灭菌。分装至西林瓿中，每支口服液10ml含30mg黄芩素和30mg秦皮乙素。
实施例4.注射用黄芩素和秦皮乙素组方颗粒剂
处方：黄芩素 0.3g
秦皮乙素 0.3g
β-环糊精 10.8g
将上述试剂混合，制软材，期间加入适量95％乙醇作润湿剂，软材标准为捏之成团，触之即散，将软材过16目筛网制粒，60℃烘干40min，在通过20目筛网整粒，即得颗粒制剂。
实施例5.以乳鼠为腹泻模型，试验黄芩素和秦皮乙素组方治疗腹泻效果
5.1.黄芩素和秦皮乙素组方有效性试验结果
将1-3日龄的乳鼠(乳鼠体重约为2g)饥饿4h后进行随机分组，设置对照组、模型组、不同剂量治疗组几个组别，6只/组对照组给予乳鼠100μl CAYE培养基；模型组分别给予50μl肠毒素；治疗组分别给予相同剂量肠毒素，并加入高中低剂量黄芩素单体(0.25μg/g、0.5μg/g、1μg/g、2μg/g)或秦皮乙素单体(0.25μg/g、0.5μg/g、1μg/g、2μg/g)，或黄芩素单体:秦皮乙素单体(1:1)给予高剂量(1μg/g：1μg/g)、中剂量(0.5μg/g：0.5μg/g)、低剂量(0.25μg/g：0.25μg/g)和更低剂量(0.125μg/g：0.125μg/g)组方药；给药4h后解剖，通过乳鼠的肠体重量(G)和尸体余重(C)比值确定乳鼠的腹泻及治疗效果。腹泻模型(0.09<G/C)为阳性，0.083<G/C为阴性。
表1黄芩素、秦皮乙素单体及其组方组方有效性试验结果
Figure BDA0002360714080000061
由图1至3及表1可知，两个单体的治疗作用均随给药剂量的增加而增加，黄芩素在低剂量时(0.25μg/g)与秦皮乙素在低中剂量时(0.25μg/g和0.5μg/g)没有治疗作用，但两者在高剂量时均有显著的治疗作用，对比两者的组方药可见，两者配伍之后在更低、低和中剂量时(0.125μg/g：0.125μg/g，0.25μg/g：0.25μg/g，0.5μg/g：0.5μg/g)都有显著的治疗作用，通过采用金正均q值法进行判定，q值由以下的公式求得：q＝PA+B/(PA+PB-PA×PB)，黄芩素和秦皮乙素在低剂量和中剂量时，表现出明显的协同效果，但是在高剂量时(1μg/g：1μg/g)，反而没有治疗效果，由此可见二者的组方药治疗作用在一定浓度区间优于各单体的单一治疗作用。
5.2.秦皮乙素和黄芩素不同比例配伍对中度腹泻模型治疗效果
将1-3日龄的乳鼠(乳鼠体重约为2g)饥饿4h后进行随机分组，设置对照组、模型组(中度腹泻模型：0.100<G/C<0.120)、不同剂量治疗组几个组别，3只/组对照组给予乳鼠100μl CAYE培养基；模型组分别给予50μl肠毒素；治疗组分别给予相同剂量肠毒素，并加入不同比例秦皮乙素单体和黄芩素单体(1：0.25(0.5μg：0.125μg)、1：0.5(0.5μg：0.25μg)、1：1(0.5μg：0.5μg)、1：2(0.5μg：1μg)、1：4(0.5μg：2μg))；给药4h后解剖，通过乳鼠的肠体重量(G)和尸体余重(C)比值确定乳鼠的腹泻及治疗效果。
Figure BDA0002360714080000062
Figure BDA0002360714080000071
由图4可知，秦皮乙素和黄芩素两者配伍比例在1:1(0.5μg/g：0.5μg/g)和1:2(0.5μg/g：1μg/g)有非常好的治疗效果。
5.3.低剂量组方用药对不同乳鼠腹泻模型治疗试验结果
通过建立不同腹泻模型，考察低剂量(0.5μg/g：0.5μg/g)黄芩素和秦皮乙素组方治疗大肠杆菌性腹泻的效果。轻度腹泻模型：0.09<G/C<0.099、中度腹泻模型：0.100<G/C<0.120；以及重度腹泻模型：0.120<G/C。
5.2.1表观治疗效果
观察组方用药后的模型组与给药组的乳鼠G/C比值，确定其治疗效果，结果见图5。
由上图可知，轻度、中度重度模型G/C比值均为0.09以上，证明造模成功；给药后，轻度、中度模型治疗组可以将G/C比值降低至0.09以下，证明该剂量的配伍，可以治疗乳鼠轻度和中度模型，对重度模型治疗效果不稳定。
5.2.2肠道切片HE染色
将配伍治疗后的肠道进行HE染色，结果见图6。
比较图6A与6B、6C、6D组，各组模型建立成功；如图6A可见，正常乳鼠的肠道结构完整，肠绒毛排列整齐规则，固有层和黏膜下层有少量固有的细胞成分存在。图6B为轻度模型，图中可见肠道结构损伤，部分肠绒毛断裂，长短不一，黏膜固有层和黏膜下层有一定量炎性细胞浸润，同时黏膜下层与肌层及浆膜层之间空隙增大有淡红色液体潴留，血管可见充血。图6C为中度模型，图中可见肠道损伤明显，多数肠绒毛断裂、崩解和溶解消失，数量明显减少；黏膜固有层和黏膜下层炎性细胞增多，黏膜下层与肌层及浆膜层之间也发生水肿。图6D为重度模型组，可见肠道损伤最为严重，大多数肠绒毛断裂崩解和消失，仅残存黏膜下层结构，留存肠绒毛黏膜上皮细胞变性坏死严重，固有层炎性细胞增加明显，可见红细胞存在，同时也可见水肿病变由此判断三种模型肠道损伤程度逐步增加，模型建立成功。
各程度的模型组与治疗组比较，可见治疗组肠道组织结构损伤明显减轻，证明药物具有较好的治疗作用，其中以轻度和中度模型治疗组效果更为明显。如图6E与图6B比较，轻度模型治疗组与对照组无明显差别，肠道结构比较完整，肠绒毛排列整齐规则，固有层和黏膜下层炎性细胞未见增加。与模型组比较黏膜下层和肌层及浆膜层之间水肿明显消失。图6F与图6C比较，可见中度模型治疗组的药物治疗作用明显，治疗组肠绒毛数量较模型组显著增多，虽可见一定程度的绒毛断裂和损伤，但排列较规则，结构较完整，固有层和黏膜下层有较多量的炎性细胞浸润。图6G与图6D比较可见，治疗组肠绒毛数量和结构出现部分恢复，但与对照组比较绒毛数量少，排列疏松，仍可见肠黏膜上皮细胞变性坏死和暴露黏膜下层的区域。
实施例6.以仔猪为腹泻模型，试验黄芩素和秦皮乙素组方治疗腹泻效果
选取两窝仔猪共17只，其中10头仔猪(日龄17天)进行攻菌。攻菌类型：大肠杆菌C233；攻菌总量是：1.7×1012cfu；攻菌方式：腹腔注射1ml，通过灌胃4ml。攻菌后造模的效果依据下列评分标准，其中大于2视为阳性，说明仔猪腹泻造模成功。
粪便计分指标：
0分：粪便为黑棕色或黄色成型颗粒状或条状(无腹泻情况)
1分：粪便条形细软，发白或发黄，较0分更松软(微腹泻)
2分：粪便粘稠，白色或黄色，不成型(轻度腹泻)
3分：粪便为白色(白痢)或黄色(黄痢)粥状或浆糊状，但尾臀部无白色或黄色粪污(中度腹泻)
4分：粪便为白色(白痢)或黄色(黄痢)液体状，肛门松弛，臀部有较多粪污(重度腹泻)
8头仔猪(日龄17天)造模成功后，给予不同剂量(低剂量5mg/kg,中剂量6mg/kg,高剂量8mg/kg,)，进行灌胃给药，结果发现(见表2和图7)，对于模型仔猪腹泻评分2～3之间，口服5mg/kg组方后，1天就痊愈；口服6mg/kg，给药1～3天痊愈；8mg/kg，给药3～8天痊愈，说明口服低剂量组方抗模型仔猪腹泻最好。
表2不同给药剂量对治疗效果(依据通过粪便计分指标打分)的影响
组别 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d 8d 9d
5mg/kg 2.3 0
5mg/kg 2.5 0
6mg/kg(1号猪) 2.5 0
6mg/kg(3号猪) 3 2.5 1.5 0
6mg/kg(8号猪) 4 4 1 0
8mg/kg(2号猪) 2.5 2.5 4 1.5 3 4 2 1 0.5
8mg/kg(6号猪) 3 2.8 2.5 2 1 1
8mg/kg(9号猪) 3.7 3 2.5 0
0～1：微腹泻，1～2：轻度腹泻，2～3：中度腹泻，3～4：重度腹泻
实施例7.黄芩素和秦皮乙素组方注射液实际使用情况介绍
案例一介绍：
黑龙江省，哈尔滨市，新立屯，生猪养殖户刘某饲养的一头母猪产下8头仔猪。仔猪出生后11日龄，发现有1头仔猪出现腹泻症状，拉白色稀便(评分：3)，询问体重大约2.1kg。
药物使用方法：使用黄芩素和秦皮乙素组方注射液1mg/kg,每天一次，连用3天，仔猪痊愈。
案例二介绍：
辽宁省，凌海市，沈家台镇，生猪养殖户黄某饲养的一头母猪产下11头仔猪。仔猪出生后10日龄，发现有4头仔猪出现腹泻症状，拉黄色稀便(评分：3)，询问体重大约3kg左右。
药物使用方法：使用黄芩素和秦皮乙素组方注射液4mg/kg,同时口服液8mg/kg，每天一次，连用4天，仔猪全部好转。
案例三介绍、
辽宁省，凌海市，沈家台镇，张某家饲养了一只1.5岁的看家犬，由于饲喂不当出现腹泻，拉黄色面糊样的稀便(评分：2-3)，询问体重大约15斤左右。药物使用方法：使用黄芩素和秦皮乙素组方注射液，皮下注射给药3mg/kg,口服7.5mg/kg，给药3天康复。
通过使用该药物对细菌性引起腹泻的治愈率较高，效果很好，并建议使用低剂量组方。

Claims (3)

1.中药单体组合物在制备治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的药物中的应用，所述中药单体组合物为秦皮乙素和黄芩素，秦皮乙素和黄芩素的比例为1:1-2。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，中药单体组合物还包括药学上可接受的辅料。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的辅料选自稀释剂、稳定剂、乳化剂、分散剂、防腐剂、着色剂、矫味增强剂、润湿剂、崩解剂、助悬剂、等渗剂。
CN202010020917.3A 2019-12-31 2020-01-09 秦皮乙素及其组方在制备治疗家畜腹泻药物中的应用 Active CN111135165B (zh)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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《黄芩素和黄芩苷的药理作用及机制研究进展》;辛文妤;《中国新药杂志》;20130630;第22卷(第6期);第647-648页 *

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