CN111132663A

CN111132663A - 包含高浓度核酸的制剂

Info

Publication number: CN111132663A
Application number: CN201880061131.7A
Authority: CN
Inventors: M.迪米特罗瓦; W.J.本内特; Q.王
Original assignee: Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd
Current assignee: Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd
Priority date: 2017-08-03
Filing date: 2018-08-03
Publication date: 2020-05-08
Also published as: JP2020530004A; US20200261489A1; AR112403A1; CO2020001873A2; WO2019028340A9; EP3661484A1; US20210338707A1; ZA202000676B; MX2020001337A; AU2018309068A1; KR20200121780A; IL272405A; SG11202000952PA; BR112020002289A2; CA3071544A1; WO2019028340A1; TW201909904A; AU2018309068A8

Abstract

可以通过多种肠胃外途径施用的低粘度的高浓度核酸组合物，可以允许与目前市场上的核酸产品相比更少的给药频率。具体地，用于皮下、肌内和腹膜内施用的低粘度去纤苷制剂对患者更方便和/或在医院环境外施用。本发明的制剂可以用于治疗多种病状，包括例如治疗外周动脉疾病、治疗急性肾功能不全、治疗急性心肌缺血以及治疗和预防肝窦阻塞综合征或VOD。

Description

包含高浓度核酸的制剂

1.相关申请的交叉引用

本申请要求2017年8月3日提交的美国临时申请号62/540,657的优先权的权益，所述临时申请的内容以引用的方式整体并入本文。

2.背景技术

去纤苷是一种核酸盐，是随机序列的复杂混合物，其主要是来源于动物粘膜DNA的单链多脱氧核糖核苷酸。它对血管内皮细胞(特别是那些小血管的内皮细胞)具有保护作用，并具有抗血栓形成、抗炎和抗局部缺血的特性。

去纤苷的钠盐以商品名

(Gentium S.r.L.,Villa Guardia,Italy)出售，并且目前已被批准用于治疗患有造血干细胞移植(HSCT)后出现的肝静脉闭塞性疾病(VOD)(也称为肝窦阻塞综合征(SOS))合并肾或肺功能障碍的成人和小儿患者。它通过每6小时一次2小时静脉内输注向患者施用，持续至少21天。输注方案的频率和大体积要求患者具有用于去纤苷施用的第二条IV线，以避免将去纤苷与必须IV给药的其他药物混合。治疗方案在门诊给药中可能与去纤苷可能表现出治疗作用的其他疾病适应症不兼容。因此，以一种对患者更方便的方式来施用去纤苷是有利的，以允许在门诊环境中给药，允许患者通过兼容的施用装置在家中自身施用，或减少医院环境中的给药持续时间和液体体积。因此，需要新的去纤苷制剂，其将允许新的和更多的对患者方便的给药方案，用于在家中施用药物有效剂量。

3.发明内容

本发明涵盖广泛的核酸及其盐(包括去纤苷)，以及制备这些分子的高浓度制剂同时将粘度和渗透度保持在生理上相关的水平的能力。这些高浓度制剂为患者提供了许多益处，包括例如皮下施用和由患者在医院环境外施用的能力。患者及其家属以及医院都感受到了自身施用和通过IV以外途径施用的优点。医院治疗和监测这些患者所需的时间和资源大大减少，这为医院和患者减少了经济负担。本文提供的制剂特别涉及去纤苷；然而，应当理解，本发明适用于广泛的核苷酸产物，例如单链和双链DNA或RNA产物，诸如DNA和RNA疫苗。

本文提供了用于治疗性施用的核酸组合物，其可以通过多种肠胃外途径来施用，并且可以通过与目前市场上类似的核酸产品相比的更少的给药频率和/或更短的给药持续时间来改善患者的生活质量。更具体地，提供了低粘度的高浓度核酸制剂，其也可以通过包括例如皮下、肌内和/或腹膜内途径在内的静脉内以外的途径来施用。在某些实施方案中，高浓度核酸制剂是自身施用的和/或在门诊患者的基础上施用的。在具体的实施方案中，核酸为去纤苷。本发明的制剂可以用于治疗和/或预防多种病状，包括例如造血干细胞移植(HSCT)相关并发症，诸如肝窦阻塞综合征或肝静脉闭塞性疾病(VOD)、移植物抗宿主病(GvHD)、移植相关血栓性微血管病(TA-TMA)或特发性肺炎综合征。其他病状包括例如其他TMA(包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒综合征(HUS))、急性心肌缺血、缺血性中风、实体器官移植中的缺血再灌注损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、镰状细胞血管闭塞性危象(VOC)、镰状细胞相关急性胸综合症、弥散性血管内凝血(DIC)、败血症、肾功能不全、其他冠状或外周动脉疾病、血液恶性肿瘤或实体瘤。

在一些方面，本公开提供了包含浓度为至少80mg/mL的核酸的低粘度药物制剂。在一些实施方案中，核酸浓度在约85mg/mL与约400mg/mL之间。在一些实施方案中，制剂的粘度为：a)小于约70cP；b)在约5cP与65cP之间；或c)在约10cP与约65cP之间。在一些实施方案中，粘度：a)在室温下；b)在约15℃与约35℃之间；或c)在约21℃与约23℃之间进行测量。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂还包含甘氨酰甘氨酸。在一些实施方案中，甘氨酰甘氨酸浓度：a)在约5mM与约100mM之间；b)在约5mM与60mM之间；或c)在约10mM与约40mM之间

在一些实施方案中，低粘度药物制剂具有：a)在约240mOsm/kg与约600mOsm/kg之间；或b)在约300mOsm/kg与约550mOsm/kg之间的渗透度。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂中的核酸包含核糖核酸或脱氧核糖核酸的多核苷酸或寡核苷酸。在一些实施方案中，核酸的分子量：a)在约5,000至约50,000道尔顿之间；b)在约13,000至约30,000道尔顿之间；或c)在约16,000至约20,000道尔顿之间。

在一些实施方案中，核酸包含多分散性随机序列。在一些实施方案中，核酸主要作为单链多脱氧核糖核苷酸存在。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂包含单链多脱氧核糖核苷酸，其为对应于下式的随机序列：

P1-5,(dAp)12-24,(dGp)10-20,(dTp)13-26,(dCp)10-20

其中：P＝磷酸基团

dAp＝脱氧腺苷单体

dGp＝脱氧鸟苷单体

dTp＝脱氧胸苷单体

dCp＝脱氧胞苷单体

在一些实施方案中，低粘度药物制剂包含选自柠檬酸钠、琥珀酸钠、组氨酸、TRIS缓冲剂、HEPES缓冲剂、氯化钠、精氨酸、利多卡因和/或聚山梨酸酯-80的缓冲剂或赋形剂。在一些实施方案中，低粘度药物制剂包含缓冲剂或赋形剂，使得核酸呈碱金属盐的形式。在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂包括钠盐。在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂是柠檬酸钠、琥珀酸钠或氯化钠。在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂是浓度小于约80mM钠盐的柠檬酸钠、琥珀酸钠或氯化钠。

在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂是浓度在20-34mM之间的柠檬酸钠。

在一些方面，本发明提供了低粘度药物制剂，其包含在85mg/mL至约400mg/mL之间的组合物以及浓度在约5mM与约100mM之间的甘氨酰甘氨酸，所述组合物包含高于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸，其中每个多脱氧核糖核苷酸包含在45与65个之间的碱基并且具有在13kDa与20kDa之间的平均分子量。

在一些方面，本公开提供了低粘度药物制剂，其包含在150mg/mL至约250mg/mL之间的核酸组合物以及浓度在约5mM与约60mM之间的甘氨酰甘氨酸，所述核酸组合物包含高于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸的核酸，其中每个多脱氧核糖核苷酸包含在45与65个之间的碱基并且具有在13kDa与20kDa之间的平均分子量，其中当在15℃与25℃之间测量时，所述制剂具有在约5与约70cP之间的粘度以及在约300mOsm/kg与550mOsm/kg之间的渗透度，并且其中所述制剂被配制用于向患者肠胃外施用。

在一些方面，本公开提供了低粘度药物制剂，其包含在100mg/mL至约400mg/mL之间的去纤苷以及浓度在约5mM与约60mM之间的甘氨酰甘氨酸，其中当在15℃与25℃之间测量时，所述制剂具有在约5与约60cP之间的粘度以及在约240mOsm/kg与700mOsm/kg之间的渗透度，并且其中所述制剂被配制用于向患者肠胃外施用。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂的粘度随时间推移而降低。在一些实施方案中，粘度在储存过程中降低。在一些实施方案中，粘度在剪切、搅拌和/或压力增加下降低。在一些实施方案中，剪切在药物制剂的施用过程中增加。在一些实施方案中，剪切在通过针头或装置施用药物制剂过程中增加。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂被配制用于皮下、肌内或腹膜内施用。在一些实施方案中，与通过静脉内施用递送的制剂相比，所述制剂表现出延长的全身性半衰期。在一些实施方案中，与通过静脉内施用递送的制剂相比，皮下递送的制剂表现出较低的血浆浓度峰谷比。在一些实施方案中，与通过静脉内施用递送的制剂相比，皮下递送的制剂表现出改善的功效和/或改善的安全性特征。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂是等渗的或触变的。

在一些实施方案中，低粘度药物制剂可以由患者自身施用。

在一些方面，本公开提供了一种用于皮下施用低粘度制剂的装置，所述制剂包含浓度为至少80mg/mL的核酸。

在一些方面，本公开提供了治疗疾病的方法，其包括施用如权利要求1-33中任一项所述的低粘度制剂，其中所述疾病选自血栓、造血干细胞移植(HSCT)相关并发症(包括肝窦阻塞综合征或肝静脉闭塞性疾病(VOD))、移植物抗宿主病(GvHD)、移植相关血栓性微血管病(TA-TMA)或特发性肺炎综合征、其他TMA(包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒综合征(HUS))、急性心肌缺血、缺血性中风、实体器官移植中的缺血再灌注损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、镰状细胞血管闭塞性危象(VOC)、镰状细胞相关急性胸综合症、弥散性血管内凝血(DIC)、败血症、肾功能不全、其他冠状或外周动脉疾病、血液恶性肿瘤或实体瘤。

在一些实施方案中，低粘度制剂以通过需要减少施用体积和/或允许更少的施用频率以提供改善的患者生活质量的给药方案来施用。

因此在一个实施方案中，提供了一种用于向患者进行治疗性施用的低粘度制剂，其包含核酸；其中所述核酸以至少80mg/mL的浓度存在。在一些实施方案中，核酸以在85与400mg/mL之间的浓度存在。在一些实施方案中，核酸以至少85、90、95或100mg/mL的浓度存在。核酸可以以100与400mg/mL之间或100与300mg/mL之间的浓度存在。在一些实施方案中，核酸具有在45与65个之间的碱基和/或在13与20kDa之间的平均分子量。在某些实施方案中，核酸主要是单链的。因此，优选地，核酸中至少70％、75％、80％、85％、90％或95％是单链的。在一些实施方案中，核酸中多达5％、10％、15％、20％、25％或多达30％的碱基是配对的。在其他实施方案中，核酸多达5％、10％、15％、20％、25％或多达30％是双链的。

在一些实施方案中，核酸作为碱金属盐存在。在某些实施方案中，碱金属盐是钠盐。在具体的实施方案中，核酸主要是单链多脱氧核糖核苷酸。在一些优选的实施方案中，核酸主要是单链多脱氧核糖核酸钠盐。在具体的实施方案中，核酸为去纤苷。

为了改善患者的便利性，重要的是将注射剂作为低粘度、等渗和/或触变的治疗性制剂向患者施用。在去纤苷的情况下，随着浓度的增加，浓度的很小变化会导致粘度的很大变化，并且这种变化还会受到温度的影响。本发明允许浓度增加，同时仍然满足耐受性良好的可注射生物制剂的标准。

因此，在一个实施方案中，上述制剂具有小于70厘泊(cP)的粘度。在一个实施方案中，粘度在5与65cP之间或在10与60cP之间。优选地，粘度在室温条件下(诸如15℃至35℃下)测量。更优选地，粘度在18℃至25℃之间测量。甚至更优选地，粘度在21℃至23℃之间测量。

在另一个实施方案中，上述制剂具有在240与700mOsm/kg之间的渗透度。在其他实施方案中，上述制剂具有在300与500mOsm/kg之间的渗透度。在具体的实施方案中，上述制剂具有在6.8与8.5或7与8之间的pH。

某些缓冲剂或赋形剂可以用于控制稳定性、粘度和/或渗透度。在一个实施方案中，上述制剂包含一种或多种缓冲剂或赋形剂。在某些实施方案中，赋形剂选自由以下组成的组：柠檬酸钠、琥珀酸盐、氯化钠、精氨酸、赖氨酸、利多卡因或聚山梨酸酯-80(“PS-80”)。在一些实施方案中，缓冲剂选自由以下组成的组：甘氨酰甘氨酸、组氨酸、三羟甲基氨基甲烷(“TRIS”)、柠檬酸钠或4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(“HEPES”)缓冲剂。在一个优选的实施方案中，缓冲剂是二肽，例如像L-肌肽或甘氨酰甘氨酸。单独的和与其他赋形剂组合的甘氨酰甘氨酸可以通过使给定浓度的核酸的粘度和/或渗透度最小化来改善制剂的溶液特性。含有甘氨酰甘氨酸的制剂表现出针对已知改善耐受性并使注射时不适感最小化的生理相关条件最佳优化的溶液属性。因此，在一个实施方案中，提供了一种用于向患者治疗性施用的低粘度制剂，其包含核酸以及甘氨酰甘氨酸；其中所述核酸以至少80mg/mL的浓度存在。在一些优选的实施方案中，核酸为去纤苷。去纤苷在液体制剂中表现出非牛顿剪切致稀和触变性质，并且这种性质在高浓度液体制剂中尤为明显。因此，在某些实施方案中，提供了一种用于向患者治疗性施用的低粘度制剂，其包含至少80mg/mL的去纤苷溶液；以及甘氨酰甘氨酸。在一些实施方案中，甘氨酰甘氨酸以在5与100mM之间的量存在。更优选地，甘氨酰甘氨酸以在5与60mM或10与40mM之间的量存在。

在另一个实施方案中，提供了一种用于向患者治疗性施用的低粘度制剂，其包含：在100与300mg/mL之间的核酸，所述核酸包含大于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸，其具有在45与65个之间的碱基以及在13与20kDa之间的平均分子量；以及包含在10与60mM之间的甘氨酰甘氨酸的赋形剂。在又一实施方案中，提供了一种用于向患者治疗性施用的低粘度制剂，其包含：在150与250mg/mL之间的核酸，所述核酸包含大于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸，其具有在45与65个碱基之间的平均长度以及在13与20kDa之间的平均分子量；包含在10与100mM之间的量的甘氨酰甘氨酸的赋形剂；并且其中所述制剂具有在5与70cP之间的粘度和/或在240与550mOsm/kg之间的渗透度，并且适用于向患者肠胃外施用。在一些优选的实施方案中，核酸为去纤苷。

在一个实施方案中，提供了一种用于向患者治疗性施用的低粘度制剂，其包含：在100与300mg/mL之间的去纤苷，所述去纤苷包含大于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸，其具有在45与65个碱基之间的平均长度以及在13与20kDa之间的平均分子量；包含在10与100mM之间的量的甘氨酰甘氨酸的赋形剂；其中所述制剂具有在5与70cP之间的粘度，在240与500mOsm/kg之间的渗透度，并且适用于向患者肠胃外施用。

在一个实施方案中，提供了一种肠胃外施用本发明的低粘度制剂的方法。在一些实施方案中，制剂适用于皮下施用。在某些实施方案中，制剂包含用于包括自身施用在内的皮下递送装置。在一个优选的实施方案中，提供了一种在5与50mL之间的水性流体中在5分钟至3小时内皮下递送一定剂量的去纤苷的方法。

在其他方面，本文提供了制备本文公开的制剂的方法。在另外的方面，提供了包装本发明的制剂的方法。在某些方面，提供了将本发明的制剂包装在能够皮下施用的装置中的方法。

在一个实施方案中，上述制剂可以用于由患者自身施用。在某些实施方案中，上述制剂可以用于医院环境外施用。

在一些实施方案中，所述病状或疾病是造血干细胞移植后出现的肝VOD合并肾或肺功能障碍。

4.附图说明

图1A是示出不同制剂的粘度随去纤苷浓度变化的图，所述制剂使用了3种制剂缓冲剂：柠檬酸钠(菱形)、甘氨酰甘氨酸(正方形)或柠檬酸钠和甘氨酰甘氨酸的混合物(三角形)。

图1B是示出制剂的粘度随温度变化的图，所述制剂含有：柠檬酸钠(蓝色菱形)、GlyGly(红色正方形)或GlyGly和柠檬酸钠(绿色三角形)。

图1C是示出制剂的粘度随时间推移而降低的图，所述制剂含有：20mM GlyGly(蓝色圆形)、20mM GlyGly和34mM柠檬酸钠(橙色正方形)、20mM GlyGly和100mM琥珀酸钠(蓝色三角形)和20mM GlyGly和20mM氯化钠(红色菱形)。

图1D是示出使用柠檬酸钠(菱形)或甘氨酰甘氨酸(正方形)的各种制剂的渗透度随去纤苷浓度变化的图。

图2A是示出在各种缓冲剂或赋形剂存在下200mg/mL去纤苷制剂的粘度的图表。

图2B是示出在各种缓冲剂或赋形剂的存在下200mg/mL去纤苷制剂的渗透度的图。

图3A是示出渗透度随钠盐变化而增加的图。

图3B是示出在甘氨酰甘氨酸缓冲剂和柠檬酸钠溶液(含有0、20、34、80或100mM柠檬酸钠)的存在下180mg/mL去纤苷制剂的粘度随时间推移的图。

图4是示出温度对含有甘氨酰甘氨酸缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的粘度的影响随时间推移的图。

图5A是示出温度对含有柠檬酸盐缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的渗透度的影响随时间推移的图。

图5B是示出温度对含有甘氨酰甘氨酸缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的渗透度的影响随时间推移的图。

图6是示出与皮下和静脉内施用可商购获得的的

相比，使用动物模型皮下施用的本发明的三种不同的200mg/mL去纤苷制剂的药代动力学的图。

图7是示出在假定70％的生物利用度的情况下在每天4次2小时输注6.25mg/kg和每天2次皮下施用18mg/kg之后去纤苷的模拟药代动力学曲线的图。

5.具体实施方式

去纤苷(CAS号83712-60-1)是一种来源于天然来源材料的物质。它是分子量相对较低的多脱氧核糖核苷酸的钠盐，可通过从动物粘膜中提取获得。去纤苷具有不同的粒度范围，并且已知具有在13与20kDa之间的平均分子量(MW)。去纤苷可以根据美国专利号4,985,552和美国专利号5,223,609获得，并且/或者表现出在同一美国专利号4,985,552和美国专利号5,223,609中描述的物理/化学特征，所述专利各自以引用的方式并入本文。US20110092576中描述了合成的去纤苷，其作为模拟去纤苷的治疗性作用的磷酸二酯寡核苷酸存在，所述专利以引用方式整体并入本文。

去纤苷具有许多治疗性应用，包括用作抗血栓形成剂(美国专利号3,829,567)、治疗外周动脉疾病、治疗急性肾功能不全(美国专利号4,694,134)和治疗急性心肌局部缺血(美国专利号4,693,995)。最近，去纤苷已被用于治疗和预防肝窦阻塞综合征/静脉闭塞性疾病(欧盟临床试验EudraCT:2004-000592-33、美国临床试验2005-01(ClinicalTrials.gov识别号：NCT00358501)。患者用每六小时一次两小时静脉内输注给予的6.25mg/kg的剂量来治疗，直至VOD的体征和症状得到缓解。如上文所述，去纤苷目前以商品名

作为单瓶出售(可从Gentium S.r.L.,Villa Guardia,Italy商购获得；参见dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/search.cfm？labeltype＝all&query＝defibro tide的包装说明书)。

可通过在5％右旋糖注射液(USP)或0.9％氯化钠注射液(USP)中稀释而制备成静脉内输注液。如果在室温下储存，则静脉内制剂在4小时内使用；如果在冷藏条件下储存，则静脉内制剂在24小时内使用。静脉内输注4次，共8小时来施用。

通过静脉内(IV)、皮下(SC)、肌内(IM)或口服(PO)施用途径施用的新型去纤苷制剂和/或剂型的开发可以为患者提供改善的生活质量。例如，将频率从每天4次减少到每天一次或两次以及减少输注的持续时间，可以为正在接受治疗的患者提供改善的生活质量。去纤苷的SC施用途径可以显著减少临床施用的时间，并且只要在需要的时间内就能够提供产品的门诊给药。包括大体积SC递送装置在内的组合产品还可以为医疗保健专业人员(HCP)、护理人员甚至患者自身施用提供增加的便利和更快的施用。口服施用途径可能与剂量制备和施用方便相关联，减少疼痛并且通常是患者优选的。上文列出的制剂、药物递送和剂型开发研究的实例着重于改善生活质量和患者在使用去纤苷治疗时的体验。

在一些实施方案中，施用途径影响本公开的制剂的功效和/或寿命。在一些实施方案中，与静脉内施用的相同制剂相比，皮下、肌内和/或腹膜内施用与延长的全身性半衰期相关联。在一些实施方案中，与静脉内施用的相同制剂相比，制剂的皮下施用提供了较低的血浆浓度峰谷比。在一些实施方案中，与静脉内施用的相同制剂相比，皮下施用提供了改善的功效和/或改善了制剂的安全性特征。

5.1定义

为了更好地理解本发明，给出以下定义：

如本文所用，术语“核酸”包括“核酸及其盐”，并且是指由核苷酸组成的分子，包括由链中连接在一起的核苷酸单元组成的聚合物或大生物分子；这包括多核苷酸和寡核苷酸，包括由核糖和/或脱氧核糖单体组成的那些；它们的大小和/或顺序可以是均一的，或者它们也可以是多分散性的；它们可以具有任何长度，包括不同长度的混合物，但是一些实施方案通常在10-400个碱基、20-200个碱基或45-60个碱基之间的长度；在一些实施方案中，平均MW在5与50千道尔顿(“kDa”)之间，在13与30kDa之间，或在13与20kDa之间，或在16与20kDa之间；它们可以是单链或双链的，但是一些实施方案主要是在本申请中其他地方所述的限度内的单链多脱氧核糖核苷酸盐。这也包括从动物肠粘膜基因组DNA的受控解聚获得的DNA序列，并且作为一个实施方案，包括去纤苷。

如本文所用，术语“去纤苷”是指去纤苷的天然和合成来源，包括如美国专利申请号20110092576中所述的合成的磷酸二酯寡核苷酸。术语去纤苷表示通过从动物和/或植物组织中提取而获得的但也可以通过合成产生的多脱氧核糖核苷酸；多脱氧核糖核苷酸通常以碱金属盐(通常为钠盐)的形式使用，并且通常具有13至30kDa的分子量(CAS注册号：83712-60-1)。优选地，去纤苷根据美国专利号4,985,552和美国专利号5,223,609获得，并且/或者表现出在同一美国专利号4,985,552和美国专利号5,223,609中描述的物理/化学特征，所述专利各自以引用的方式并入本文。更具体地，去纤苷是具有随机序列的下式的多脱氧核糖核苷酸的混合物：P1-5,(dAP)_12-24,(dGP)_10-20,(dPp)_13-26,(dCP)_10-20，其中：P＝磷酸基团；dAp＝脱氧腺苷单体；dGp＝脱氧鸟苷单体；dTp＝脱氧胸苷单体；dCp＝脱氧胞苷单体；并且/或者显示以下化学/物理特征：电泳＝均匀的阳极迁移率，和/或消光系数，在260±1nm nm处的E₁cm^1％＝220±10，和/或E₂₃₀/E₂₆₀＝0.45±0.04，和/或摩尔消光系数(以磷计)ε(P)＝7.750±500，和/或旋光率[α]_D ^20°＝53°±6；和/或可逆的增色性，表示为天然DNA中的％和/或h＝15±5。

如本文所用，术语“多脱氧核糖核苷酸”是指其构成单体是脱氧核糖核苷酸的聚合物。

如本文所用，术语“寡脱氧核糖核苷酸”是指由脱氧核糖单体构成的任何寡核苷酸。

如本文所用，术语“平均MW”是指聚合物的平均或平均分子量。

如本文所用，术语“甘氨酰甘氨酸”或“Gly-Gly”或“GlyGly”或“glygly”是指由两个甘氨酸分子组成的简单肽(甘氨酸是一种简单的非必需氨基酸)；上述二肽用于合成更复杂的肽。甘氨酰甘氨酸，一种两性电解质，有时也称为双甘氨酸、二甘氨酸、甘氨酸二肽、N-甘氨酰甘氨酸。它可以通过诸如中国专利申请101759767中描述的那些方法来制备，上述专利申请以引用的方式整体并入本文。

如本文所用，术语“赋形剂”是指可以与去纤苷一起配制的任何物质，并且可以出于以下目的被包括在内：提高最终剂型中的去纤苷，诸如促进其生物利用度、降低粘度和/或渗透度、提高组合物的溶解度或增强长期稳定性。赋形剂也可以用于制造过程中，以帮助处理活性物质。合适的赋形剂的选择还取决于施用途径和剂型以及活性成分和其他因素。因此，去纤苷可以与本领域已知的任何赋形剂组合，所述赋形剂允许在制造或施用过程中调整其性能以及其体外和体内性能。这些赋形剂中的许多可以用于调整去纤苷制剂的药代动力学曲线。

如本文所用，术语“缓冲剂(buffer)”或“缓冲剂(buffering agent)”是指加入少量酸或碱来抵抗氢离子浓度变化的溶液。这包括例如一种弱酸或弱碱，其用于在添加另一种酸性或碱性化合物之后将溶液的pH保持在选定的pH值附近。当将酸或碱加入到所述溶液中时，此类缓冲剂的功能是防止溶液的pH变化。

如本文所用，术语“pH调节剂”是指用于将溶液的pH改变为选定的pH值的酸或碱。这种试剂的功能是在添加酸性或碱性化合物之后将溶液的pH值调节为所需的值。

如本文所用，术语“制剂”是指用于治疗性用途的组合物，包括例如本文所公开的药物组合物或制剂的稳定的且药学上可接受的制剂。

如本文所用，术语“低粘度制剂”是指具有小于约70厘泊(cP)的粘度的制剂。通常，粘度在环境温度/室温(例如15℃至35℃；在18℃至25℃之间或21℃至23℃之间)下测量，取决于正在进行测量房间的地理区域和/或天气条件。

如本文所用，术语“水性制剂”是指基于水的制剂，特别是作为水性溶液的制剂。

如本文所用，术语“高浓度制剂”或“高浓度液体制剂”或“HCLF”是指其中核酸浓度为约80mg/mL或更高；或约85mg/mL或更高的那些制剂。

如本文所用，术语“高浓度去纤苷制剂”是指其中去纤苷浓度为约80mg/mL或更高的那些制剂。

如本文所用，术语“药代动力学”或“PK”是指单个药剂在体内的体内运动，包括血浆浓度时间曲线和动力学参数，像最大浓度(Cmax)、曲线下面积(AUC)，以及达到所述试剂的最大浓度的时间(Tmax)。

如与本发明的组合物结合所用，短语“药学上可接受的”或“可接受的”是指在生理上可耐受并且当施用于动物和/或人时通常不产生不良反应的组合物的分子实体和其他成分。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”意指由联邦监管机构或州政府批准的或者在美国药典或其他通常认可的药典上列出，以用于哺乳动物并且更具体地用于人。

如本文所用，术语“生理上相关的”是指适合用于以药物、治疗或其他剂型施用于动物受试者(特别是人类受试者)的量度、水平或量。

如本文所用，术语“肠胃外”是指任何非口服施用方式。它包括静脉内(i.v.或IV)输注、IV弹丸式注射、皮下(s.c.或SC)和肌内(i.m.或IM)注射。

如本文所用，术语“施用(administering)”或“施用(administration)”旨在涵盖用于将化合物直接和间接递送至其预期作用位点的所有方式。

如本文所用，术语“动物”意指任何动物，包括哺乳动物，并且特别是人。

如本文所用，术语“患者”是指哺乳动物，特别是人。出于兽医学目的，通过公开的实施方案的方法治疗的患者包括人类受试者和动物受试者(例如，狗、猫、猴、黑猩猩等等)。患者可以是男性或女性，并且可以是任何合适的年龄，例如，新生儿、婴儿、少年、青少年、成人或老人。

如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”等是指减轻或消除疾病和/或其伴随症状的方法。例如，在本发明的含义内，术语“治疗”还表示停止、延迟发作(即疾病的临床表现之前的时期)和/或降低疾病发展或恶化的风险。

当用于修饰组合物的成分，诸如活性剂、缓冲剂和渗透剂时，术语“一个(a)”和“一种(an)”不表示数量限制，而是表示存在以下引用条目中的至少一个。术语“或”或“和/或”作为功能词使用来表示两个词或表达将被合在一起或单独地使用。术语“包含(comprising)”、“具有(having)”、“包括(including)”和“含有(containing)”意图解释为开放式的术语(即，意味着“包括但不限于”)。涉及相同的组分或特性的所有范围的端点包括端值在内并且可独立组合。

在整个说明书中，术语“约(about)”和/或“大致(approximately)”可以与数值和/或范围结合使用。术语“约(about)”应理解为意指接近所述值的那些值。例如，“约1200[单位]”表示在1200的±10％内，在±10％、±9％、±8％、±7％、±7％、±5％、±4％、±3％，±2％、±1％、小于±1％或介于其间的任何其他值或值的范围内。此外，应鉴于本文所提供的术语“约”的定义来理解短语“小于约[某个值]”或“大于约[某个值]”。术语“约”和“大致”可互换使用。

在整个本说明书中，提供了一定数量的数值范围。应当理解，这些范围包括其中的所有子范围。因此，范围“从50至80”包括在其中的全部可能的范围(例如，51-79、52-78、53-77、54-76、55-75、70-70等)。此外，给定范围内的全部值可以是用于由此涵盖的范围的端点(例如，范围50-80包括具有诸如55-80、50-75等的端点的范围)。

5.2包含核酸的药物制剂

本发明的一个实施方案是开发核酸及其盐的低粘度的高浓度液体制剂(HCLF)，以便于向患者递送药物。特别地，研究了可以皮下施用和/或与目前市场上的核酸产品相比需要更少的给药频率的核酸组合物。在某些实施方案中，高浓度核酸制剂是在门诊患者基础上自身施用的。本发明的一些制剂具有触变和剪切致稀性质，这对于皮下和/或肌内施用是特别优选的。与目前可商购获得的核酸制剂相比，本文提供的制剂提供了改善的耐受性、治疗过程中的患者便利性以及门诊给药的机会。在一些实施方案中，本文提供的高浓度核酸制剂的粘度随时间推移而降低。在某些实施方案中，本文提供的高浓度核酸制剂的粘度和/或流动性在剪切应变的增加下降低。应当理解，此类特性对于注射剂和递送装置(诸如注射器或预加载的皮下装置)是优选的，其中当制剂穿过注射器/装置的针筒到达减小的针头小孔时，制剂所承受的应变或剪切应力增加。在某些实施方案中，核酸是去纤苷。本发明的制剂，特别是包含去纤苷的那些制剂，可以用于治疗多种病状，包括例如治疗外周动脉疾病、治疗急性肾功能不全、治疗急性心肌缺血、治疗和预防移植物抗宿主病(GvHD)、治疗和预防移植相关血栓性微血管病(TA-TMA)、治疗例如像在实体器官移植(例如肾脏I RI)中的缺血再灌注损伤、治疗和预防细胞因子释放综合征(CRS)或嵌合抗原受体(CAR)-T细胞相关脑病综合征(CRES)、以及治疗和预防肝窦阻塞综合征或VOD。在一些实施方案中，可以将本发明的制剂，特别是包含去纤苷的那些制剂，施用于已经进行、正在进行或将要进行化学疗法、干细胞消融和/或造血干细胞移植(HSCT)的患者。在以下专利、专利申请和文章中描述了去纤苷的其他用途、其生产和测试方法，所述专利、专利申请和文章各自以引用的方式并入本文：美国专利号3,770,720；3,829,567；3,899,481；4,693,134；4,693,995；4,938,873；4,985,552；5,081,109；5,116,617；5,223,609；5,646,127；5,646,268；5,977,083；6,046,172；6,699,985；6,767,554；7,338,777；8,551,967；8,771,663，美国专利公布号20080194506；20090131362；20110092576；20130231470；20140005256，美国专利申请号14/019,674；14/323,918；14/408,272；62/656,486；62/657,161；62/664,657；以及国际申请WO2013/190582和PCT/EP2015/077355。还参见Palme r和Boa的Defibrotide.A Review ofits pharmacodynamic and phar macokinetic properties,and therapeutic use invascular disorders，Dr ugs,1993,Feb；45(2):259-94；其以引用的方式并入本文。全文引用的其他参考文献也以引用的方式整体并入本文。

在某些实施方案中，通过本文所述方法评估的去纤苷是通过诸如美国专利号4,985,552和5,223,609中所述的方法制造的，所述专利以引用的方式整体并入本文。在本发明的一个优选的实施方案中，去纤苷是一种多脱氧核糖核苷酸，对应于具有随机序列的下式：

P1-5,(dAp)12-24,(dGp)10-20,(dTp)13-26,(dCp)10-20

其中：P＝磷酸基团

dAp＝脱氧腺苷单体

dGp＝脱氧鸟苷单体

dTp＝脱氧胸苷单体

dCp＝脱氧胞苷单体

如本文所用，去纤苷可具有以下化学物理特性中的一种或多种或全部：电泳＝均匀的阳极迁移率；消光系数，在260±1nm处的E1cm1％＝220±10；消光比，E230/E260＝0.45±0.04；摩尔消光系数(以磷计)，ε(P)＝7.750±500；旋光率[α]D20°＝53°±6；可逆的增色性，表示为天然DNA中的％，h＝15±5；以及嘌呤:嘧啶比为0.95±0.5。

本发明的一个实施方案包括具有各种缓冲剂或赋形剂的核酸制剂，诸如在Remington,The Science and Practice of Pharmacy(Remington the Science andPractice of Pharmacy)第二十二版,2013Pharmaceutical Press中找到的那些，所述文献以引用的方式整体并入本文。尤其参见从1837页开始的关于赋形剂的专著。优选地，核酸是去纤苷。在一些实施方案中，使用除去纤苷以外的核酸。

在一些实施方案中，本发明包括二肽缓冲剂(例如L-肌肽或甘氨酰甘氨酸)。本发明的一个优选的实施方案包括甘氨酰甘氨酸，其是甘氨酸的二肽。它可以从供应商(诸如Sigma-Aldrich)处商购获得，并且可用作生物系统的赋形剂。在本发明的具体的实施方案中，甘氨酰甘氨酸以约1mM至约50mM之间的浓度存在。在一些实施方案中，甘氨酰甘氨酸以约5mM至约100mM、约10至约60mM或约10至约40mM之间的浓度存在。在一些具体的实施方案中，甘氨酰甘氨酸以约1mM、约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM的浓度存在。

其他缓冲剂或赋形剂可以存在于本制剂中。在一些实施方案中，低粘度药物制剂包含选自柠檬酸钠、琥珀酸钠、组氨酸、TRIS缓冲剂、HEPES缓冲剂、氯化钠、精氨酸、利多卡因和/或聚山梨酸酯-80的缓冲剂或赋形剂。在一些实施方案中，低粘度药物制剂包含缓冲剂或赋形剂，使得核酸呈碱金属盐的形式。在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂包括钠盐。在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂是柠檬酸钠、琥珀酸钠或氯化钠。

在一些实施方案中，缓冲剂或赋形剂是浓度小于约80mM钠盐的柠檬酸钠、琥珀酸钠或氯化钠。在一些实施方案中，制剂包含约1-80mM的钠盐。在一些实施方案中，制剂包含约1mM、约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM的钠盐。

在一些实施方案中，制剂包含柠檬酸钠。在一些实施方案中，柠檬酸钠以在约5至约50mM之间、在约5至约60mM之间、约10至约60mM、或约10至约40mM的浓度存在。在一些实施方案中，柠檬酸钠以约1mM、约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、约50mM、约55mM或约60mM的浓度存在。

可以将其他赋形剂(诸如防腐剂、盐或pH调节剂)添加到本发明的制剂中。

在本发明的一些实施方案中，低粘度制剂的粘度在约1至约70cP之间。在一些实施方案中，低粘度制剂的粘度在约5cP至约65cP或约10cP至约65cP之间。在一些实施方案中，低粘度制剂的粘度为约5cP、约10cP、约15cP、约20cP、约25cP、约30cP、约35cP、约40cP、约45cP、约50cP、约55cP、约60cP、约65cP、或约70cP。

在本发明的一些实施方案中，低粘度制剂的粘度随时间推移而降低。在一些实施方案中，粘度在制剂储存过程中降低。在一些实施方案中，本文提供的低粘度核酸制剂的粘度随核酸平均分子量的降低而降低。在一些实施方案中，本文提供的低粘度核酸制剂的粘度在核酸的给定浓度下随所述核酸平均分子量的降低而降低。在一些实施方案中，当在室温条件下(诸如在15℃至35℃下)测量粘度时，本文提供的低粘度核酸制剂的粘度在核酸的给定浓度下随所述核酸平均分子量的降低而降低。在一些实施方案中，粘度在剪切、搅拌和/或压力增加下降低。在一些实施方案中，粘度在低粘度制剂的施用过程中(例如，当通过针头时)降低。在一些实施方案中，低粘度制剂的粘度的确定根据其测量时的温度而变化。在一些实施方案中，本文提供的高浓度核酸制剂的粘度随核酸平均分子量的降低而降低。在一些实施方案中，本文提供的高浓度核酸制剂的粘度随核酸平均分子量的增加而增加。在优选的实施方案中，粘度在室温条件下(诸如15℃至35℃下)测量。更优选地，粘度在18℃至25℃之间测量。甚至更优选地，粘度在21℃至23℃之间测量。

在一些实施方案中，本公开的低粘度制剂具有在约200mOsm/kg与约1000mOsm/kg之间的渗透度。在一些实施方案中，本公开的低粘度制剂具有在约240mOsm/kg至约600mOsm/kg或约300mOsm/kg至约550mOsm/kg之间的渗透度。在一些实施方案中，本公开的低粘度制剂具有约200mOsm/kg、约240mOsm/kg、约250mOsm/kg、约300mOsm/kg、约350mOsm/kg、约400mOsm/kg、约450mOsm/kg、约500mOsm/kg、约600mOsm/kg、约650mOsm/kg、约700mOsm/kg、约750mOsm/kg、约800mOsm/kg、约850mOsm/kg、约900mOsm/kg、或约950mOsm/kg的渗透度。

在一些实施方案中，本公开提供了用于递送本公开的制剂的方法。在某些实施方案中，本发明的制剂是皮下递送的。在一些实施方案中，本发明的制剂通过可被患者使用的装置皮下施用。在一些实施方案中，低粘度制剂是去纤苷制剂。在一些实施方案中，制剂是高浓度液体制剂(HCLF)。

用于皮下施用的装置可预先填充有例如预先确定的成人或小儿剂量，或者可以用于施用对个体患者特定的基于体重的剂量。在一些实施方案中，患者确定剂量并进行施用。在某些实施方案中，本发明的制剂通过可商购获得的装置(例如像

泵或类似装置(RMS^TM Medical Products))皮下施用。在一些具体的实施方案中，本发明的制剂在少于约两小时、少于约一小时、或少于约30分钟内进行皮下施用。在一些具体的实施方案中，本发明的制剂在约5分钟至约1小时、约10分钟至约1小时、或约15分钟至约45分钟内进行皮下递送。

制剂剂量可以通过对技术人员显而易见的多种因素来确定。在一些实施方案中，剂量基于患者的基线体重。在一些实施方案中，制剂以每天每千克体重约1至约100mg的量施用。例如，制剂以每天每千克体重1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100mg的量施用。在一些实施方案中，制剂以每天每千克体重约25mg的量施用。在一些实施方案中，对于超过35kg的患者，基于患者体重的剂量应四舍五入至最接近的10mg。在一些实施方案中，对于35kg以下的患者，基于患者体重的剂量应四舍五入至最接近的5mg。在一些实施方案中，制剂是去纤苷制剂。

制剂可以单个日剂量或每天多个剂量施用。在一些实施方案中，制剂每天施用一次。在一些实施方案中，制剂以每天多个剂量施用。例如，制剂可以每天2、3、4、5、6、7、8、9或10个剂量施用。在一些实施方案中，制剂以每天四个剂量施用。在一些实施方案中，制剂以每天每6小时四个剂量施用。

在一些实施方案中，施用的剂量和频率根据施用途径而变化。在一些实施方案中，本公开的低粘度制剂的皮下施用允许较小频率的施用和/或较低的剂量。在一些实施方案中，本公开的低粘度制剂的皮下施用允许减少的施用体积。

如本领域技术人员将理解的，治疗期可以根据患者的不同而变化。例如，在一些实施方案中，治疗期通过监测肝VOD的体征和症状来确定。例如，如果在初始治疗期之后仍存在肝VOD的体征和症状，则继续进行去纤苷治疗直至VOD消失。在一些实施方案中，如果21天之后仍存在肝VOD的体征和症状，则继续进行去纤苷治疗直至VOD消失最高多达60天。因此，在某些实施方案中，治疗期可能持续21至60天的任何时间。例如，治疗期持续21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60天。在一些实施方案中，治疗期持续21天。

在一些实施方案中，与未经治疗的患者或在制剂施用之前的同一患者相比，本公开的制剂的施用治疗或改善VOD和/或VOD症状的发展。在一些实施方案中，患者的VOD和/或VOD症状在第1天与第10年之间得到治疗或改善。在一些实施方案中，与未经治疗的患者或在去纤苷施用之前的同一患者相比，制剂的施用在约第1天、约第2天、约第3天、约第4天、约第5天、约第6天、约第1周、约第2周、约第3周、约第4周、约第5周、约第6周、约第7周、约第8周、约第9周、约第10周、约第20周、约第30周、约第40周、约第50周、约第60周、约第70周、约第80周、约第90周、约第100周、约第1年、约第2年、或约第3年治疗或改善VOD和/或VOD症状的发展。在一些实施方案中，与未经治疗的患者或在制剂施用之前的同一患者相比，制剂的施用治疗或改善VOD和/或VOD症状的发展持续约1天、约1周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约1年、约2年、约5年、或约10年或更长。

在一些实施方案中，与未经治疗的患者或在制剂施用之前的同一患者相比，本公开的制剂的施用将VOD和/或VOD症状治疗或改善约1％、约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％。在一些实施方案中，与未经治疗的患者或在制剂施用之前的同一患者相比，制剂的施用在约第1天、约第2天、约第3天、约第4天、约第5天、约第6天、约第1周、约第2周、约第3周、约第4周、约第5周、约第6周、约第7周、约第8周、约第9周、约第10周、约第20周、约第30周、约第40周、约第50周、约第60周、约第70周、约第80周、约第90周、约第100周、约第1年、约第2年、或约第3年将VOD和/或VOD症状的发展治疗或改善约1％、约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％。在一些实施方案中，与未经治疗的患者或在制剂施用之前的同一患者相比，制剂的施用将VOD和/或VOD症状的发展治疗或改善约1％、约5％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％，持续约1、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约1周、约2周、约3周、约4周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约1年、约2年、约5年、或约10年或更长。

包括以下实施例以示范本发明的优选实施方案。本领域技术人员应当理解以下实施例中公开的技术表示由本发明人发现的在本发明实践中发挥良好作用的技术，并且因此可以被认为构成本发明实践的优选模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可在已公开并仍获得类似或相似结果的特定实施方案中做出许多改变。

6.实施例

6.1实施例1–限制溶液属性的鉴定

为了开发核酸的高浓度液体制剂(HCLF)，重要的是要鉴定会限制制剂的溶液的关键物理化学特性。为了研究这一点，使用两种不同的配方产生多种去纤苷浓度(多达大致300mg/mL)不同的溶液，并且每种溶液的溶液特性均被表征为随去纤苷浓度变化。外观、溶解度、粘度、渗透度、溶液中的聚合物结构(远紫外和近紫外圆二色谱)、热特性(差示扫描量热法)和分子量/聚集度(DLS、FTIR和SEC-MALS)是针对多种去纤苷溶液分析的特性中的一些。

样品制备：通过离心浓缩或以80、150、200、250和300mg/mL溶解去纤苷API在34mM柠檬酸钠(pH 7.3)或34mM甘氨酰甘氨酸(“Gly-Gly”)(pH 7.5)中配制去纤苷。通常通过紫外-可见光谱法测量产品浓度。使用35μL样品在其各自的制剂缓冲剂中按重量一式三份地将去纤苷样品稀释至目标浓度0.1mg/mL。使用为0.2cm的比色皿路径长度测量A₂₆₀和A₃₂₀。校正在320nm处的光散射的A₂₆₀值，并使用22.2mL*mg^-1cm^-1的消光系数确定浓度。确定稀释倍数时，使用1.08g/mL的样品密度和1.0g/mL的稀释剂密度校正样品的质量。通过以下方法分析每种溶液的物理化学特性随浓度的变化：

外观和浊度：由Core Module 3(“CM3”)机器人执行数字颜色匹配。去纤苷样品的颜色也使用欧洲药典(EP)颜色匹配分析进行了评估，其中使用了七种EP颜色标准BY1-BY7，其中BY1是最强烈的着色标准。分析是在具有白色背景的灯箱下进行的(Eisai机械观察灯型号MIH-DX，Fisher照度计型号06-662-63)。Gly-Gly和柠檬酸盐制剂的颜色评估没有显著差异；所有溶液均为透明浅黄色或棕黄色溶液，其着色强度比标准溶液更明显。另外，未检测到可见颗粒(评估了≥80μm的粒度)。还根据七个浊度标准测量浊度。与EP颜色标准相比，所有制剂的颜色在初始时间点以及在25±2℃/60±5％RH下储存一个月后均为BY4，这表明所有制剂可在25±2℃/60±5％RH下保持稳定多达至少三个月。

溶解度：使用CM3机器人通过聚乙二醇(PEG)沉淀法评估去纤苷在溶液中的溶解度。在整个研究中，即使在大量PEG的存在下，观察到的沉淀也极少量，因此表明产物的溶液溶解度很高。

溶液粘度：在大致80、150、200、250和300mg/mL的浓度下对去纤苷样品的溶液粘度进行分析。通常，使用Brookfield DV-III超可编程流变仪来测量粘度。在22℃下使用大致550μL对样品进行纯净分析。

的粘度为3.9cP，与剪切速率无关。结果表明

显示出牛顿流体性质。在柠檬酸盐和Gly-Gly缓冲剂中以300mg/mL配制的本发明的去纤苷制剂证明粘度取决于剪切速率和产品浓度。配制的去纤苷的粘度似乎随产品浓度变化呈指数增加。与在pH 7.3的34mM柠檬酸钠中的去纤苷相比，在pH 7.5的34mM Gly-Gly中的去纤苷的粘度随产品浓度变化而显著降低，这证明了Gly-Gly改善本发明的HCLF中的去纤苷的溶液特性的能力。

渗透度：通过至少两种不同的方法测量渗透度，并且结果在整个附图中报告(参见例如图1D)。通常，将Vapro蒸气压渗透计用于一个测量。与在pH 7.3的34mM柠檬酸钠中的去纤苷相比，在pH 7.5的34mM Gly-Gly中去纤苷的渗透度较低，这证明了Gly-Gly改善本发明的HCLF中的去纤苷的溶液特性的能力。

远紫外和近紫外圆二色谱：溶液中去纤苷制剂的二级和三级结构(随产品浓度变化)通过圆二色谱进行评估，并在Jasco J-810分光旋光仪上进行分析。

游离核碱基分析：样品用流动相(50mM CH₃COONH₄，pH 5.0)以1.6mg/mL定量制备，并通过RP-HPLC使用254nm的检测波长进行分析。使用Synergi Fusion 4μm-RP

色谱柱以1mL/min的流速分离核酸碱基。

用作参考，并在流动相中以1.6mg/mL制备。

傅立叶变换红外光谱：使用标准技术执行FTIR分析以评估去纤苷HCLF的结构。FTIR分析表明，与

相比，两种300mg/mL的去纤苷制剂(柠檬酸盐和Gly-Gly)显示出相似的曲线。

差示扫描量热法：使用标准技术通过差示扫描量热法测量去纤苷溶液的热特性。结果表明，浓度和/或缓冲剂基质(包括Gly-Gly)可以影响去纤苷的热特性。

粒度分布：测量每种制剂随产品浓度的变化，以便将构成结构的分子量计入分子量平均值。使用多分散性指数(Mw/Mn)来测量制剂的不均匀性，并基于结果推断出样品是多分散性的。结果表明，在柠檬酸盐和Gly-Gly中以300mg/mL配制的去纤苷可与

相当。

总体而言，使用上述方法的结果表明，溶液的渗透度和粘度是重要的制剂属性，在限制可以很好地耐受的多高的产品浓度方面起着至关重要的作用。含Gly-Gly的制剂中的这些属性显示出显著的溶液特性改善，这也与溶液中的热属性(ΔH，Tm)相关。

图1A中的图示出了在柠檬酸钠、Gly-Gly或两者的混合物的存在下，使用增加的去纤苷浓度制备的制剂的粘度。结果表明，去纤苷制剂的粘度很大程度上取决于其浓度，并且与80mg/mL溶液相比，200mg/mL溶液的粘度大约高10倍。

图1B中的图示出了在包括柠檬酸钠、Gly-Gly或两者的混合物的三种不同制剂中粘度随温度的变化。

图1C中的图示出了这些选定制剂中粘度随时间的推移而降低：20mM GlyGly(蓝色圆形；与橙色正方形重叠)、20mM GlyGly和34mM柠檬酸钠(橙色正方形)、20mM GlyGly和100mM琥珀酸钠(蓝色三角形)和20mM GlyGly和20mM氯化钠(红色菱形)。含GlyGly的制剂在给定的时间点示出最低的粘度。

图1D中的图示出了在Gly-Gly或柠檬酸钠缓冲剂的存在下，使用增加的去纤苷浓度制备的制剂的渗透度。

6.2实施例2–缓冲剂对制剂特性的影响

6.2.1实施例2.1–缓冲剂和赋形剂对粘度和渗透度的影响

实施例1中示出了增加去纤苷浓度以增加粘度和渗透度两者。对于肠胃外施用的药物制剂，低粘度和/或等渗是重要的。为了鉴定可能降低去纤苷制剂的粘度和/或渗透度的缓冲剂或赋形剂，使用200mg/mL的去纤苷制剂对各种缓冲剂和赋形剂(包括GRAS赋形剂)执行了宽板筛选。

如下表1所示，将测试制剂制备成目标200mg/mL。

表1：使用各种缓冲剂和赋形剂的去纤苷制剂

表2：与柠檬酸钠相比，去纤苷在含Gly-Gly的缓冲剂中的溶液粘度和渗透度随产品浓度的变化

如表1和2以及图1B、1C和2A中的图所示，与其他制剂相比，并且与柠檬酸盐缓冲剂相比在不同的pH、产品浓度和温度条件下进行测试(参见图2A)时，含有Gly-Gly的HCLF制剂具有显著较低的总体粘度。值得注意的是，TRIS和组氨酸缓冲剂在200mg/mL去纤苷下也具有较低的粘度(小于40cP)。对于给定的产品浓度和环境温度条件，几乎所有Gly-Gly中的制剂的粘度均比柠檬酸盐缓冲剂低多达50％。环境温度可根据区域而变化，并且因此，粘度优选在约15℃至30℃之间测量；然而，考虑到不同的天气条件，可能略高或略低。例如，当在25℃下测量时，一种含有180mg/mL去纤苷(具有14kDA的平均分子量)并且含有20mM Gly-Gly和pH 7.0的34mM柠檬酸钠的优选制剂具有12cP的粘度。当在相同条件下使用具有17kDa的平均分子量的去纤苷时，其他制剂具有27cp的粘度。在所筛选的赋形剂中，只有利多卡因示出进一步降低粘度的潜力；然而，它增加的渗透压>900mOsm/kg(参见图2B)，并且因此认为进一步研究是不可行的。鉴定了示出最低总体粘度的Gly-gly缓冲剂作为200mg/mL HCLF去纤苷制剂的优选缓冲剂。

6.2.2实施例2.2–不同钠离子源对储存过程中缓冲能力和稳定性的影响

为了比较各种缓冲溶液在含有Gly-Gly缓冲体系的高浓度去纤苷(“DF”)制剂中的缓冲能力，使用利用三种不同的钠离子源的十六种不同的缓冲剂来评估DF制剂的稳定性、杂质特征和溶液特性。这些制剂的概述在表3中示出。

表3-去纤苷制剂的概述

基于外观、颜色和澄清度结果，在Gly-Gly缓冲剂中配制的去纤苷在25±2℃/60±5％RH下储存多达至少三个月之后是稳定的。

UV和pH分析表明，当在25±2℃/60±5％RH下储存多达三个月时，所有制剂的去纤苷浓度保持恒定。

所有制剂的粘度均随时间变化而降低(例如，参见图3B)。对于所有180mg/mL的制剂，在初始时间点的粘度在23.8cP-34.4cP的范围内，并且在25±2℃/60±5％RH下储存三个月后，粘度降低多达大致52％。上表3描述了图3B中列出的制剂F1-F5。

观察到渗透度的小的增加趋势是与钠盐浓度有关的储存时间的函数。随着盐浓度的增加，渗透度增加的变化更大(参见图3A)。总钠盐少于80mM的制剂随时间推移的渗透度变化最低，并且低于500mOsm/kg。

指示FNB测定的稳定性表明，储存一个月后，总杂质和游离核酸碱基略有增加。总体而言，制剂F2和F3具有最低量的游离核酸碱基。

执行体积排阻色谱(SEC)-多角度光散射(MALS)分析，以确定去纤苷的粒度分布和分子量随产品浓度的变化。将DF制剂和API标准物质在玻璃螺帽管(10mL)中的SEC流动相中稀释至4mg/mL。溶液在室温下保持一小时不搅动。随后，将样品溶液加热至大致100℃(沸水)，并在该温度下保持15分钟。最后，使用水和冰将样品溶液冷却五分钟。在室温下稳定(约15分钟)之后，用0.20μm SFCA注射器式过滤器过滤样品。样品溶液在制备一小时内通过SEC-MALS进行分析。在流动相中以4mg/mL的去纤苷API制备标准物质。分析表明，所有制剂均具有相似的粒度和多分散性

基于这些组合结果，在20mM Gly-Gly中的180mg/mL去纤苷和小于80mM的钠盐(以及优选地20-34mM的柠檬酸钠)是HCLF制剂的优选缓冲剂组合。

6.3实施例3–粘度随时间推移以及随温度的变化

对于药品而言，重要的是要随时间的推移保持其完整性，以允许合适的保质期。因此，测量了使用Gly-Gly缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的粘度随时间和温度的变化。

如上文所述制备样品。

图4中的图示出，使用20mM Gly-Gly缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的粘度随时间推移而降低，并且还随着温度的升高而降低(在25℃、40℃和60℃下测量)。粘度随温度和时间的变化而降低，对于药物递送和产品制造，特别是对于高浓度产品(诸如HCLF)而言，是有利的。粘度随时间推移的降低，即触变性质是特别有利的，并使得这些制剂改善了患者的便利性和耐受性。去纤苷是温度稳定的产品，因此在较高温度下粘度的降低为改善患者的便利性提供了另外的机会。例如，如果患者在施用前对制剂进行加热，则粘度将降低，从而允许持续的施用方便，特别是对于皮下和/或肌内施用。

6.4实施例4–使用强制降解随时间推移的渗透度

对于医药产品而言，随时间的推移以及在各种条件下保持低渗透度也很重要。因此，使用强制降解研究，测量了使用Gly-Gly和柠檬酸盐缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的渗透度随时间和温度的变化。

如上文所述制备样品。在25℃、40℃和60℃下测量制剂的渗透度。

图5A中的图示出了使用柠檬酸钠缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的渗透度。

图5B中的图示出了使用Gly-Gly缓冲剂的200mg/mL去纤苷制剂的渗透度。从这些图中可以看出，与具有柠檬酸盐缓冲剂的制剂相比，Gly-Gly制剂的渗透度降低。重要的是，在每个时间点和每个温度下，Gly-Gly制剂的渗透度始终保持较低(低于约400mOsm/kg)。

6.5实施例5–强制降解下的物理稳定性和产品特征

使用强制降解研究评估了本发明的HCLF的物理稳定性和产品特征。在25±2℃/60±5％相对湿度(“RH”)、40±2℃/75±5％RH和60℃下储存多达3个月后，对在pH 3至pH 10下的Gly-Gly和/或柠檬酸钠中配制的浓度范围在180mg/mL和220mg/mL的去纤苷进行评估。所测试的制剂列于下表4。

表4：制剂概述

基于强制降解稳定性研究得出的外观、颜色、透明度、pH和颗粒数，在预期在25±2℃/60±5％RH和压力条件下储存多达三个月之后，在20mM Gly-Gly中配制的pH在7与8之间的200mg/mL(FD3)的去纤苷是最稳定的制剂。

6.6实施例6-使用各种施用途径的核酸制剂的药代动力学

6.6.1实施例6.1-去纤苷的静脉内(IV)输注、IV弹丸式注射、皮下(SC)注射和肌内 (IM)注射

将在通过单个2小时静脉内(IV)输注、IV弹丸式注射、皮下(SC)注射、肌内(IM)注射或口服(PO)灌胃法的剂量向雄性哥廷根猪施用时的各种去纤苷制剂的药代动力学(PK)进行比较。另外，相对于IV输注确定各种血管外施用途径的生物利用度。

雄性哥廷根猪或小型猪是探索皮下递送的行业标准，是用于研究去纤苷皮下制剂和递送选项的可接受的模型。如表5的治疗组中所列出的，每只动物接受单次去纤苷的施用。如下所示，将哥廷根猪(n＝3只雄猪每组)分配到治疗组：

表5：研究设计

^a第1至第5组的剂量体积分别为6.25、1.0、0.3125、0.3125和1.25mL/kg

收集血液样品并将其处理成血浆。使用Quant-iT OliGreen ssDNA测定试剂盒(Life Technologies)来定量猪血浆样品中的去纤苷浓度。简要地说，所述测定方法包括将样品(一式两份)等分到96孔板中，添加OliGreen试剂，在搅拌下孵育(5分钟，避光)，并直接进行荧光测量(485激发，515nm截止和525nm发射)。测定范围为2.5至60μg/mL(高范围)和0.05至2.5μg/mL(低范围)。测定的定量下限(LLOQ)为0.05μg/mL。

将各个动物的去纤苷血浆浓度相对于时间的数据下载到WinNonlin Phoenix软件6.3版(Pharsight,Cary,NC)中进行PK分析。适当使用非房室IV输注、IV弹丸式注射或血管外注射模型来确定每只动物的单剂量PK参数。标称剂量和样品收集时间(参见表5)用于估算PK参数。在剂量前时间点在所有动物中观察背景值(范围＝0.115至0.903μg/mL)。因此，将低于1μg/mL的浓度值视为<LLOQ，并且不在分析中使用。尽可能估算以下参数：

Tmax达到最大观察浓度的时间

Cmax最大观察浓度

AUC0-t通过线性梯形法则估算的从时间＝0到最后可测量浓度的时间点的浓度-时间曲线下面积

MRT0-t从时间＝0至最后可测量浓度的时间点的平均停留时间

Cmax/D最大观察浓度除以剂量水平

AUC0-t/D由线性梯形法则除以剂量水平估算的从时间＝0至最后可测量浓度的浓度-时间曲线下的面积

CL针对IV组计算为剂量除以AUC0-t

如下基于AUC0-t/D值，相对于IV输注剂量组，计算每只动物的生物利用分数(F)，以百分比表示：

(各个动物SC、IM或PO AUC0-t/D)/(组平均IV输注AUC0-t/D)x100％

去纤苷血浆分析：在向雄性哥廷根猪进行IV、SC、IM或PO给药之后的总结的去纤苷血浆浓度示出如下：单次IV输注施用25mg/kg或单次IV弹丸式注射施用2.5mg/kg去纤苷之后，剂量后8小时的平均血浆浓度高于1μg/mL。在SC或IM施用25mg/kg去纤苷之后，剂量后24小时(最后测量时间点)的平均血浆浓度大于1μg/mL。在之后100mg/kg PO剂量，一只动物在一个时间点(动物14M剂量后4小时)和一只动物在三个时间点(动物13M剂量后5、6和12小时)的去纤苷血浆浓度大于1μg/mL，但第三只动物(15M)在所有时间点均小于1μg/mL。

药代动力学分析：还测量了单个动物并总结了PK参数，并且示出如下：在2小时IV输注25mg/kg去纤苷之后，平均Cmax/D为1.52(μg/mL)/(mg/kg)并且平均AUC0-t/D值为3.56(hr*μg/mL)/(mg/kg)。IV弹丸式注射施用2.5mg/kg去纤苷之后，平均Cmax/D为14.4(μg/mL)/(mg/kg)，并且平均AUC0-t/D值为8.30(hr*μg/mL)/(mg/kg)。

尽管在血浆PK曲线中观察到多个峰，但是在SC施用25mg/kg去纤苷之后的Tmax在剂量后0.25至8小时的范围内。平均SC生物利用度(％F)为81.3％。IM施用25mg/kg去纤苷之后的Tmax在剂量后0.25至0.50小时的范围内。平均IM生物利用度为108％。相比之下，口服施用100mg/kg去纤苷之后的可测量浓度极少。PO施用之后的平均生物利用度小于7.2％。

这些结果表明，相对于IV施用，在SC和IM施用之后，去纤苷的暴露时间延长了。SC和IM剂量组的平均MRT最后值分别为9.26和7.36小时，相比IV输注和IV弹丸式注射剂量组分别为1.30和2.16小时。

6.6.2实施例6.2-HCLF去纤苷制剂的皮下施用

为了进一步研究皮下施用的高浓度去纤苷液体制剂的药代动力学，将200mg/mL的三种不同HCLF制剂与Defitelio的单次2小时静脉内(IV)输注或SC注射进行了比较。另外，相对于IV输注，确定了它们通过SC施用途径的生物利用度。

如上所述，使用柠檬酸钠、Gly-Gly或这些缓冲剂的组合如上所述制备200mg/mL的HCLF制剂。使用下表6所示的剂量以4mg/mL IV或80mg/mL SC施用Defitelio。雄性哥廷根猪(n＝3只雄猪每组)接受了表6所列的测试制品的单次施用。使用实施例6.1中的分析方法分析去纤苷。与实施例6.1类似地确定PK参数。

表6：各种制剂的施用

注：HCLF1：34mM柠檬酸钠，pH 7.3；HCLF2：20mM GlyGly，pH 7.3；HCLF3：20mMGlyGly，10mM柠檬酸钠，pH 7.3

如上报告的计算以百分比(％F)表示的生物利用度，并且结果在下表7中示出。

表7：SC和IV施用之后的去纤苷的PK参数

报告了除T_max以外的平均值和％CV值，其中报告了观察值的中位数和范围(最小值-最大值)。

F(生物利用度)：计算为SC给药情况下的AUC_0-t除以IV治疗的几何平均AUC_0-t

N/A：不适用

如上确定血浆去纤苷浓度和血浆浓度-时间数据，并在图6中示出。图6中可见的单个小型猪中的PK曲线示出了所有四种SC治疗(Defitelio和3种HCLF)的多个吸收峰。由于去纤苷是寡核苷酸的混合物，所以多个峰可能是由于去纤苷的各个组分的吸收速率的变化。合在一起，结果表明在所有制剂中，包括在高浓度液体制剂中，SC给药情况下去纤苷的生物利用度是有利的。

另外，四个SC组的平均停留时间(MRT)为9.28-10.9小时；然而IV组的MRT仅为2.41小时(表7)；因此，SC施用可提供去纤苷的缓释，大致为IV输注的四倍半。这与实施例6.1中所示的一致，因为与IV施用相比，低粘度的HCLF中的去纤苷的SC施用延长了去纤苷的血浆暴露。

尽管不希望受到任一理论的束缚，但SC途径延长的循环时间很可能是由于去纤苷HCLF的性质，这会导致吸收的缓释模式。SC施用HCLF延长的去纤苷的循环可能为研究具有较少给药频率的替代方案提供机会并改善患者的生活质量。

6.6.3实施例6.3–IV和SC施用的药代动力学曲线的比较

为了证明SC HCLF施用的PK比较，使用房室建模技术建立SC和IV输注后的PK曲线。使用具有或不具有一阶吸收过程的简单一室模型分别模拟IV输注或SC施用的PK曲线。在此模型练习中，IV输注施用后的平均PK参数取自

的包装说明书。对于PK研究，通常将药物的清除率和分布体积报告为生物利用度的函数；它们分别是CL/F和V/F。对于此处使用的PK模拟，在SC HCLF施用之后，通过假设生物利用度为70％由IV参数计算平均CL/F和V/F。假设吸收速率常数为0.22h^-1，这与在小型猪中观察到的相似。IV输注的剂量和方案为6.25mg/kg/输注(总日剂量为25mg/kg/天)，通过2小时IV输注，每天4次。SC施用的日剂量和方案为18mg/kg/SC施用(总日剂量为36mg/kg/天)，每天2次。模拟是针对体重70kg的人进行的。在模拟过程中，SC施用之后的总AUC保持与IV输注相同。

如图7所示，血浆浓度随时间推移的曲线证明，在SC施用之后去纤苷的缓慢、持续释放与每次IV输注之后的快速清除相反。重要的是，SC施用之后去纤苷的最低血浆浓度远高于IV输注的最低血浆浓度；而SC施用的Cmax与IV输注的Cmax相似。

SC施用的药代动力学表示允许连续血浆暴露的去纤苷的曲线，这对于其药理活性可能是重要的。SC施用之后的峰血浆浓度比为约8，相比IV输注的峰血浆浓度比为约700。

总之，这些结果证明，去纤苷的皮下施用提供了新颖的药代动力学曲线，其与IV输注的PK(诸如当前可得的去纤苷制剂所要求的那些PK)显著不同。去纤苷的缓慢且稳定的释放可能对其获益风险曲线至关重要，并且独特的皮下药代动力学允许开发新的剂量和/或给药方案，这可以产生更好的功效和改善的安全性特征。

Claims

1.一种低粘度药物制剂，其包含浓度为至少80mg/mL的核酸。

2.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸包含多分散性随机序列。

3.如权利要求2所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸主要作为单链多脱氧核糖核苷酸存在。

4.如权利要求3所述的低粘度药物制剂，其中所述单链多脱氧核糖核苷酸是对应于下式的随机序列：

P1-5,(dAp)12-24,(dGp)10-20,(dTp)13-26,(dCp)10-20

其中：P＝磷酸基团

dAp＝脱氧腺苷单体

dGp＝脱氧鸟苷单体

dTp＝脱氧胸苷单体

dCp＝脱氧胞苷单体

5.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸的浓度在约85mg/mL与约400mg/mL之间。

6.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中所述制剂的粘度小于约70cP。

7.如权利要求6所述的低粘度药物制剂，其中所述制剂的粘度在约5cP与65cP之间。

8.如权利要求7所述的低粘度药物制剂，其中所述制剂的粘度在约10cP与约65cP之间。

9.如权利要求6-8中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述粘度在室温下测量。

10.如权利要求6-8中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述粘度在约15℃与约35℃之间测量。

11.如权利要求6-8中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述粘度在约21℃至约23℃之间测量。

12.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其还包含甘氨酰甘氨酸。

13.如权利要求12所述的低粘度药物制剂，其中所述甘氨酰甘氨酸的浓度在约5mM与约100mM之间。

14.如权利要求13所述的低粘度药物制剂，其中所述甘氨酰甘氨酸的浓度在约5mM与60mM之间。

15.如权利要求14所述的低粘度药物制剂，其中所述甘氨酰甘氨酸的浓度在约10mM与约40mM之间

16.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中所述制剂具有在约240mOsm/kg与约600mOsm/kg之间的渗透度。

17.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中所述制剂具有在约300mOsm/kg与约550mOsm/kg之间的渗透度。

18.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸包含核糖核酸或脱氧核糖核酸的多核苷酸或寡核苷酸。

19.如权利要求18所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸的分子量在约5,000至约50,000道尔顿之间。

20.如权利要求18所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸的分子量在约13,000至约30,000道尔顿之间。

21.如权利要求18所述的低粘度药物制剂，其中所述核酸的分子量在约16,000至约20,000道尔顿之间。

22.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其还包含选自柠檬酸钠、琥珀酸钠、组氨酸、TRIS缓冲剂、HEPES缓冲剂、氯化钠、精氨酸、利多卡因和/或聚山梨酸酯-80的缓冲剂或赋形剂。

23.如权利要求1所述的低粘度药物制剂，其中制剂包含缓冲剂或赋形剂，使得所述核酸呈碱金属盐的形式。

24.如权利要求23所述的低粘度药物制剂，其中所述缓冲剂或赋形剂包括钠盐。

25.如权利要求22-24中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述缓冲剂或赋形剂是柠檬酸钠、琥珀酸钠或氯化钠。

26.如权利要求22-25中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述缓冲剂或赋形剂是浓度小于约80mM钠盐的柠檬酸钠、琥珀酸钠或氯化钠。

27.如权利要求26所述的低粘度药物制剂，其中所述缓冲剂或赋形剂是浓度在20-34mM之间的柠檬酸钠。

28.一种低粘度药物制剂，其包含在85mg/mL至约400mg/mL之间的组合物以及浓度在约5mM与约100mM之间的甘氨酰甘氨酸，所述组合物包含高于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸，其中每个多脱氧核糖核苷酸包含在45与65个之间的碱基并且具有在13kDa与20kDa之间的平均分子量。

29.一种低粘度药物制剂，其包含在150mg/mL至约250mg/mL之间的核酸组合物以及浓度在约5mM与约60mM之间的甘氨酰甘氨酸，所述核酸组合物包含高于70％的单链多分散性多脱氧核糖核苷酸的核酸，其中每个多脱氧核糖核苷酸包含在45与65个之间的碱基并且具有在13kDa与20kDa之间的平均分子量，其中当在15℃与25℃之间测量时，所述制剂具有在约5与约70cP之间的粘度以及在约300mOsm/kg与550mOsm/kg之间的渗透度，并且其中所述制剂被配制用于向患者肠胃外施用。

30.一种低粘度药物制剂，其包含在100mg/mL至约400mg/mL之间的去纤苷以及浓度在约5mM与约60mM之间的甘氨酰甘氨酸，其中当在15℃与25℃之间测量时，所述制剂具有在约5与约60cP之间的粘度以及在约240mOsm/kg与700mOsm/kg之间的渗透度，并且其中所述制剂被配制用于向患者肠胃外施用。

31.如前述权利要求中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述粘度随时间推移而降低。

32.如权利要求31所述的低粘度药物制剂，其中所述粘度在储存过程中降低。

33.如前述权利要求中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述粘度在剪切、搅拌和/或压力增加下降低。

34.如权利要求33所述的低粘度药物制剂，其中所述剪切在施用过程中增加。

35.如权利要求34所述的低粘度药物制剂，其中所述剪切在通过针或装置施用的过程中增加。

36.如前述权利要求中任一项所述的低粘度药物制剂，其中所述制剂被配制用于皮下、肌内或腹膜内施用。

37.如权利要求37所述的低粘度药物制剂，其中与通过静脉内施用递送的制剂相比，所述制剂表现出延长的全身性半衰期。

38.如权利要求37所述的低粘度药物制剂，其中与通过静脉内施用递送的制剂相比，所述皮下递送的制剂表现出较低的血浆浓度峰谷比。

39.如权利要求37所述的低粘度药物制剂，其中与通过静脉内施用递送的制剂相比，所述皮下递送的制剂表现出改善的功效和/或改善的安全性特征。

40.如前述权利要求中任一项所述的低粘度药物制剂，其是等渗的或触变的。

41.如前述权利要求中任一项所述的低粘度药物制剂，其能够由患者自身施用。

42.一种装置，其用于如前述权利要求中任一项所述的低粘度制剂的皮下施用。

43.一种治疗疾病的方法，其包括施用如权利要求1-42中任一项所述的低粘度制剂，其中所述疾病选自血栓、造血干细胞移植(HSCT)相关并发症包括肝窦阻塞综合征或肝静脉闭塞性疾病(VOD)、移植物抗宿主病(GvHD)、移植相关血栓性微血管病(TA-TMA)或特发性肺炎综合征、其他TMA包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和溶血性尿毒综合征(HUS)、急性心肌缺血、缺血性中风、实体器官移植中的缺血再灌注损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、镰状细胞血管闭塞性危象(VOC)、镰状细胞相关急性胸综合症、弥散性血管内凝血(DIC)、败血症、肾功能不全、其他冠状或外周动脉疾病、血液恶性肿瘤或实体瘤。

44.如权利要求43所述的方法，其中所述低粘度制剂以通过减少施用体积和/或允许更少的施用频率以提供改善的患者生活质量的给药方案施用。