CN111118012A - 一种抑制hsa_circ_0051680表达的siRNA及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抑制人hsa_circ_0051680环状RNA表达的核苷酸及其应用,其特征是:所述的核苷酸特异性结合于人hsa_circ_0051680环状RNA,所述核苷酸的序列是:CGUUGGUGCUGCAGGAAAG或者GCUGCAGGAAAGGUGAAGG及其互补序列。本发明抑制人hsa_circ_0051680环状RNA,能够有效抑制A549和XWLC‑05细胞中hsa_circ_0051680环状RNA表达,与抗肿瘤药物联合可以增加其抑制其生长和增殖,从而有效治疗多种肿瘤。
Description
技术领域
本发明属于医学材料技术和药物领域 ,具体地本发明涉及一种环状RNAs核苷酸,尤其是涉及人环状RNAs核苷酸。该核苷酸可与hsa_circ_0051680互补,从而抑制人hsa_circ_0051680的表达,与其他抗肿瘤药物其起到抗肿瘤的作用。
背景技术
环状RNA(circRNA)是一种高度丰富的RNA,最近被重新发现,并在生命树中广泛表达,尽管在大多数组织中广泛表达,但circRNA在永生化细胞培养物中仍以低水平表达。高分裂率与circRNA水平成反比。对几种正常和癌变组织中circRNA水平的全面评估表明,在高度分裂的细胞中,尤其是在肿瘤中,circRNA的含量通常较低。最近的研究表明,circRNA可能在不同类型的癌症中起作用此外,由于circRNA具有长的半衰期和对常见降解途径的抵抗力, circRNA可能是强大的癌症生物标志物。
RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源RNA从而沉默靶基因,从而实现干扰靶基因的功能。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够特异高效地抑制hsa_circ_0051680表达的siRNA及其应用。
本发明的目的是这样实现的,包括合成核苷酸的序列由CGUUGGUGCUGCAGGAAAG(SEQ ID NO.1)或者GCUGCAGGAAAGGUGAAGG(SEQ ID NO.2)及其互补序列。核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰、氟代修饰、硫代修饰、甲氧基修饰、胆固醇修饰的一种或几种。核苷酸和其他抗肿瘤治疗药物特别是三价无机砷。制备治疗癌症药物中的应用。癌症包括 :肝癌、贲门癌、结胃癌、、鼻咽癌、卵巢癌、前列腺癌症、慢性或急性白血病、脑瘤、食道癌、口腔癌、尿道癌、皮肤癌、直肠癌、中耳癌、骨癌、肠癌、胆囊癌、喉癌、牙龈癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、、大肠癌、 睾丸癌、内分泌系统的癌症、淋巴细胞性淋巴瘤。本研究受国家自然科学基金的支持(81860572)。
本发明(优点):发明的核苷酸具有很好的hsa_circ_0051680抑制效果,作用于特异性的靶位点,特异性强、毒性低、副作用小和修饰半衰期长,可以与多种抗肿瘤药物合用。
具体实施方式
下面对本发明作进一步的说明,但不以任何方式对本发明加以限制,基于本发明教导所作的任何变换或替换,均属于本发明的保护范围。
具体实施方式。
实施例
本实施例中的沉默RNA序列为:CGUUGGUGCUGCAGGAAAG(SEQ ID NO.1)或者GCUGCAGGAAAGGUGAAGG(SEQ ID NO.2)以及互补序列,所有的序列都是从5端到3端,所有序列都在末端加上dTdT。hsa_circ_0051680的RNA序列信息存在于UCSC数据库中。本课题受本研究受国家自然科学基金的支持(81860572)。
对照合成
首先,由上海吉玛制药技术有限公司合成核苷酸,合成包含其互补序列的双链RNA序列,对照组使用吉玛制药技术有限公司的阴性对照siRNA货号为A06001序列为对照组的阴性对照。
细胞培养:将A549或者XWLC-05细胞在含有10%胎牛血清的1640培养基于37℃,5%CO2条件下培养。以2500个每孔铺于96孔板内。RNA转染采用百代公司Rfect转染试剂进行转染,通过荧光定量PCR来经常RNA干扰的效率。以下分别为对照组、沉默组1、沉默组的沉默效率,A549细胞分别为: 1.079±0.179,0.314±0.017,0.351±0.019;XWLC-05细胞分别为1.016±0.049,0.,351±0.014, 0.262±0.017,数据使用2^-ΔΔCt表示。
荧光定量使用的引物:hsa_circ_0051680上游:ATCGGACTATGATGCCTTCG(SEQ IDNO.3)下游:GCTGGCCTGACTAATCCAGA(SEQ ID NO.4),内参采用“陈江容,张若冰,张媛,胡娟,周梅,何越峰.砷及其代谢产物对P21基因表达的影响[J].职业与健康, 2018, 34(23):3213-3216.”文章中的ACTB基因。
两个细胞使用96孔板转染转染后48小时加入砷,亚砷酸钠溶于培养基中,不加砷的加入等量培养基,亚砷酸钠的终浓度为A549为60微摩尔每升,XWLC-05细胞砷的终浓度为40微摩尔每升,再培养48小时后MTS检测细胞活力。用Promega公司MTS检测,采用490nm吸光度,计算细胞活力。
未加砷对照组:为使用阴性对照片段后不加入亚砷酸钠,本组的活力定为100.0%。未加砷实验组1:核苷酸片段1沉默的结果。未加砷实验组2:沉默核苷酸片段2沉默的结果。加砷对照组:为使用阴性对照片段后加入亚砷酸钠的结果。加砷实验组1:沉默核苷酸片段1沉默后加入亚砷酸钠的结果。加砷实验组2:沉默核苷酸片段2沉默后加入亚砷酸钠的结果。以下为各组的细胞活力均为百分比(%):
未加砷对照组:A549为99.3±3.4,XWLC-05为100.8±4.9,
未加砷实验组1: A549为90.1±2.8, XWLC-05为92.4±4.4,
未加砷实验组2: A549为92.7±4.1,XWLC-05为93.1±2.9,
加砷对照组: A549为89.4±5.0,XWLC-05为84.3±2.4,
加砷实验组1: A549为63.±3.7,XWLC-05为64.2±4.9,
加砷实验组2: A549为67.4±3.1,XWLC-05为66.2±3.1。
序列表
<110> 昆明医科大学
<120> 一种抑制hsa_circ_0051680表达的siRNA及其应用
<141> 2019-12-24
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 1
cguuggugcu gcaggaaag 19
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 2
gcugcaggaa aggugaagg 19
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 3
atcggactat gatgccttcg 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(rengongxulie)
<400> 4
gctggcctga ctaatccaga 20
Claims (9)
1.一种抑制hsa_circ_0051680环状RNA表达的核苷酸,其特征在于其特征在于其序列为CGUUGGUGCUGCAGGAAAG或者GCUGCAGGAAAGGUGAAGG及其互补序列。
2.根据权利要求1所述的核苷酸,其特征在于:所述核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。
3.根据权利要求1所述的核苷酸,其特征在于所述核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰、氟代修饰、硫代修饰、甲氧基修饰、胆固醇修饰一种或几种修饰。
4.根据权利要求1至4所述的核苷酸的应用,其特征在于在制备抗肿瘤药物中的应用。
5.根据权利要求5所述的应用,其特征在于所述肿瘤为肺癌。
6.一种药物组合物,其特征在于包含权利要求 1-4 任一项所述的核苷酸和其他抗肿瘤治疗药物。
7.根据权利要求7所述药物组合物,其特征在于其他抗肿瘤治疗药物为亚砷酸钠。
8.权利要求 7所述的药物组合物,其特征在于在制备抗肿瘤药物中的应用。
9.根据权利要求9所述的应用,其特征在于所述肿瘤为肺癌。
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