CN111117956A - 一种免疫细胞培养方法 - Google Patents

一种免疫细胞培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种免疫细胞培养方法，涉及免疫细胞培养技术领域。本发明所述方法从培养的第4d开始就转入FEP材质的细胞培养袋中，置于37℃的细胞培养箱中，同时利用联通管将细胞培养袋与装有细胞培养基的培养基保存袋连接，且将培养基保存袋置于4℃冰箱中。利用本发明所述方法进行免疫细胞的培养，培养过程从预培养后就进入封闭式培养，可以规避避免细菌污染；完全培养基在4℃保存，因子效价稳定，避免了营养物质37℃降解；细胞制品的无菌检测更加方便快捷，成本低。

Description

一种免疫细胞培养方法
技术领域
本发明属于免疫细胞培养领域，具体涉及一种免疫细胞培养方法。
背景技术
目前癌症治疗以手术和放化疗为主，复发可能性较高。医生为了更好的保护病人身体功能，手术时会尽可能的保留器官功能，但可能残留的肿瘤细胞会成为复发的隐患，放化疗对人正常细胞也有很大的破环作用，此时如果通过技术提前将患者的免疫细胞扩增纯化，等患者做完手术放化疗时，补充免疫细胞可大大的提高患者生存几率和生活品质。
现在免疫细胞大量运用于临床，传统免疫细胞培养时，多10d左右才进行一次细菌检测，不符合药典规定，且每次细菌检测时都有染菌风险，成本也高；同时培养过程中还存在生长因子37℃降解的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种免疫细胞培养方法，培养后很快开始进入密闭状态培养，保证检测结果的稳定性；保证免疫细胞充足的营养需求和合理的生长浓度；杜绝了培养基中生长因子在37℃的降解问题。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种免疫细胞培养方法，所述方法包括以下步骤：(1)分离新鲜外周血的单核细胞和血浆；
(2)调整所述单核细胞至200万个/mL后接种于培养瓶中，预培养4d，得预培养体系；
(3)将所述预培养体系无菌注入细胞培养袋中；所述细胞培养袋的材质为FEP；
(4)将细胞培养基注入培养基保存袋中，利用联通管将所述细胞培养袋和培养基保存袋进行连接，所述联通管上设置有可拆卸的三通止流阀；所述培养基保存袋的材质为PVC；
(5)将所述细胞培养袋置于培养箱中进行培养，所述培养箱内设置温度为37℃，CO2浓度为5％；将所述培养基保存袋置于4℃冰箱内；
(6)利用所述三通止流阀将所述培养基保存袋中的细胞培养基转移至所述细胞培养袋中，所述转移的频率为1～2d/次。
优选的，步骤(1)所述分离包括离心和ficoll法分离。
优选的，步骤(3)所述细胞培养袋上开设有取样口和进样口。
优选的，步骤(3)所述细胞培养袋的容积为2L。
优选的，所述无菌注入的方法包括：在无菌操作台上，取一个50mL注射器，去掉推塞后，悬挂于支架上，同时利用软管将注射器的套筒与细胞培养袋的进样口连接，然后注入所述预培养体系。
优选的，步骤(4)所述培养基保存袋为2个，每个培养基保存袋的容积均为650mL。
优选的，步骤(5)所述培养的时间为10d。
优选的，在所述培养过程中，第6d进行一次细菌检测。
本发明的提供了一种免疫细胞培养方法，从培养的第4d开始就转入FEP材质的细胞培养袋中，置于37℃的细胞培养箱中，同时利用联通管将细胞培养袋与装有细胞培养基的培养基保存袋连接，且将培养基保存袋置于4℃冰箱中。在本发明所述方法中，所述细胞培养袋具有防水透气效果，气体可借扩散原理通过细胞培养袋，液态水或水滴因其表面张力的作用无法通过，对细胞有更好的增殖效果，细胞增殖效果比普通细胞培养袋多20～40％；所述培养基保存袋整体密封，杜绝培养过程中细胞制品污染风险。利用本发明所述方法进行免疫细胞的培养，培养过程从预培养后就封闭式培养，可以规避避免细菌污染；完全培养基在4℃保存，因子效价稳定，避免了营养物质37℃降解，每天的检测更加方便快捷，成本低。
附图说明
图1为本发明所述细胞免疫培养三联袋的实物图；
图2为本发明所述细胞免疫培养三联袋的结构示意图；
图3为本发明免疫细胞培养图；
图4为本发明中三通止流阀的实物图；
图5为对比例中细胞瓶培养图。
具体实施方式
本发明提供了本发明提供了一种免疫细胞培养方法，所述方法包括以下步骤：(1)分离新鲜外周血的单核细胞和血浆；
(2)调整所述单核细胞至200万个/mL后接种于培养瓶中，预培养4d，得预培养体系；
(3)将所述预培养体系无菌注入细胞培养袋中；所述细胞培养袋的材质为FEP；
(4)将细胞培养基注入培养基保存袋中，利用联通管将所述细胞培养袋和培养基保存袋进行连接，所述联通管上设置有可拆卸的三通止流阀；所述培养基保存袋的材质为PVC；
(5)将所述细胞培养袋置于培养箱中进行培养，所述培养箱内设置温度为37℃，CO2浓度为5％；将所述培养基保存袋置于4℃冰箱内；
(6)利用所述三通止流阀将所述培养基保存袋中的细胞培养基转移至所述细胞培养袋中，所述转移的频率为1～2d/次。
利用本发明所述方法进行免疫细胞培养时，分离新鲜外周血的单核细胞和血浆。本发明对所述外周血的来源并没有特殊限定，优选来源于血库或医院采集。本发明所述分离包括离心和ficoll法分离，所述离心的转速优选为2500rpm，离心时间优选为15min。本发明对所述ficoll法分离的具体方法并没有特殊限定，利用本领域的常规方法即可。本发明得血浆后，优选的还包括灭活，所述灭活优选为在56℃下放置30min。
得单核细胞后，本发明调整所述单核细胞至200万个/mL后接种于培养瓶中，预培养4d，得预培养体系。本发明所述调整优选为利用免疫细胞基础培养基进行重悬，调整密度到200万个细胞/mL。本发明对所述基础培养基的成分并没有特殊限定，优选为本领域的常规细胞基础培养基。本发明在接种于培养瓶后，优选还包括添加所述灭活后的血浆，所述灭活后的血浆的体积为所述重悬后单核细胞体积的10％。本发明添加所述灭活血浆，可减少细胞培养过程中细胞成团。本发明所述预培养的温度优选为37℃。
得预培养体系后，本发明将所述预培养体系无菌注入细胞培养袋中；所述细胞培养袋的材质为FEP。本发明所示细胞培养袋如图1左侧大袋所示，容积优选为2L。本发明在细胞培养袋上优选开设有取样口和进样口。本发明在进行所述无菌注入时，优选在无菌操作台上，取一个50mL注射器，去掉推塞后，悬挂于支架上，同时利用软管将注射器的套筒与细胞培养袋的进样口连接，然后注入所述预培养体系。本发明所述取样口在培养过程中，只有在取样进行检测时开启，其余时间均封闭。本发明所述FEP材质的细胞培养袋，防水透气，气体可借扩散原理通过，但是液态水或水滴因其表面张力的作用无法通过，所述细胞培养袋符合细胞培养规律，可提高细胞增殖效应。
本发明将细胞培养基注入培养基保存袋中，利用联通管将所述细胞培养袋和培养基保存袋进行连接，所述联通管上设置有可拆卸的三通止流阀；所述培养基保存袋的材质为PVC。本发明所述培养基保存袋优选包括2个，即第一培养基保存袋和第二培养基保存袋，每个培养基保存袋的容积均为650mL。本发明所述培养基保存袋如图1所示右侧两个较小袋所示，优选的还开设有进样口和两个特殊状况因子补充口，本发明分别向两个培养基保存袋中注入细胞培养基，所述注入方法同上述无菌注入，在此不再赘述。本发明利用联通管将所述细胞培养袋和两个培养基保存袋进行连接，并在联通管上设置有可拆卸的三通止流阀，从而控制培养基保存袋与细胞培养袋内的物质交流。本发明中所述三通止流阀如图4所示，所述三通止流阀通过螺旋接口连接在所述联通管上。本发明所述三通止流阀具有三种状态：状态1，三袋互不相通，封闭状态；状态2，三通螺扭呈“T”形，细胞培养袋与第一培养基保存袋相通；状态3，三通螺扭呈“┥”形，细胞培养袋与第二培养基保存袋相通。本发明所述三通止流阀优选为PVC注塑而成，可调节所述免疫三联袋的联通状态，本发明所述免疫三联袋连接后实物图如图1所示，结构示意图如图2所示。
本发明如图3所示将所述细胞培养袋置于培养箱中进行培养，所述培养箱内设置温度为37℃，CO2浓度为5％；将所述培养基保存袋置于4℃冰箱内。本发明在所述预培养后就能形成一个完全封闭的培养环境，且将细胞培养袋和培养基保存袋分别放置，既保证了细胞培养的条件，又克服了培养基中的因子常温降解问题。本发明所述培养的时间优选为10d，在培养的过程中，优选还包括每5～7d进行一次细菌检测。
在进入培养后，本发明利用所述三通止流阀将所述培养基保存袋中的细胞培养基转移至所述细胞培养袋中，所述转移的频率优选为1～2d/次。本发明所述转移时，优选的先转移第一培养基保存袋内的培养基，待第一培养基保存袋内的培养基转移完后再转移第二培养基保存袋内的培养基。
本发明在所述培养的第8d，优选的还包括在细胞培养袋的取样口取样做发放前无菌检测，所述无菌检测优选为血平板和沙氏板检测。
本发明在所述培养的第10天进行临床发放，优选的包括先将细胞培养袋中的细胞转移1/2到第一培养基保存袋中，然后通过热合机热合(热合机原理，通过高频电压塑料管封口部位受热挤压，使受热部位熔合为一体，冷却后保持原有的强度和密封性)将第一天发放的细胞从体系中释放出来。另外两个袋子还是在一个封闭培养体系中。此时，将第二培养基保存袋的培养基转移到细胞培养袋中，继续保证后期营养。第二天将细胞转移一半体积到第二培养基保存袋中，细胞从体系中释放出来。第三天直接收集细胞培养袋中的细胞。
下面结合实施例对本发明提供的免疫培养三联袋及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
以生产cik免疫细胞为例
步骤1、样本处理-GMP千级实验室操作：
1.1采集外周血为标本血样，标本血样先进行第一步离心(2500rpm，15min)，将血浆和细胞分离。
1.2将步骤1.1中离心出的血浆灭火(56℃，30min)。
1.3将步骤1.1中的细胞用ficoll法分离，取单核细胞。
1.4将1.3中分离的单核细胞洗涤2遍(1400rpm,6min)，备用。
1.5将1.2中灭活的血浆离心去杂质(3000rpm，6min)，备用。
主要使用试剂如表1所示：
表1实验用试剂
Figure BDA0002123340190000051
Figure BDA0002123340190000061
步骤2、培养免疫细胞：
2.1将1.4中得到的单核细胞取一千万个单核细胞用10mL基础培养基重悬(调整密度到200万个细胞每毫升)，接种到康宁T75透气培养瓶中。
2.2在步骤2.1中的重悬液中加入1,000U/mL的重组人IFN-g，(加入1,000U/mL的重组人IFN-g，先加入IFN-g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞杀伤效果)。
2.3往步骤4.1的T75培养加入10％体积灭活的血浆，可以减少培养过程中细胞成团。
2.4第2天在培养瓶中加入50ng/mL的CD3单克隆抗体和300U/mL的重组人IL-2，刺激CIK细胞的生长和增殖。(IFN-g具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度；IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK的细胞杀伤效果。)
2.5第4天配置1L的完全培养基(免疫基础培养基+重组人IL-2，调整IL-2因子浓度为300U/mL)，取样20mL完全培养基做细菌检测备用，确保培养基为无菌。
步骤3、免疫细胞培养(如图3所示)
3.1将步骤2.1的T75培养瓶中加入10mL完全培养基补液，混匀后取2mL细胞悬液做细菌检测，将剩余细胞悬液加入细胞培养袋中。
3.2将步骤2.5中的完全培养基导入第一和第二培养基保存袋中，每个袋子400mL。
3.3将步骤3.1的细胞培养袋与步骤3.2的第一和第二培养基保存袋，通过三通止流阀封闭连接起来，形成一个封闭的培养体系。
3.4将步骤2.5和步骤3.1中的取样标本，进行封闭前的无菌测定。
步骤4、免疫培养三联袋培养过程
4.1将细胞培养袋放入二氧化碳培养箱，确保细胞生长所需要的温湿度(37℃)和二氧化碳浓度(5％)。
4.2将第一和第二培养基保存袋放入4℃药品保存箱中。
步骤5、定时补液
5.1第6天将三通止流阀调解到状态3，从第二培养基保存袋中转移20mL完全培养基补液到细胞培养袋中，然后将三通止流阀调节到状态1。
5.2第8天将三通止流阀调解到状态2，从第一培养基保存袋中转移60mL完全培养基补液到细胞培养袋中，然后将三通止流阀调节到状态1。
5.3第10天将三通止流阀调解到状态2，从第一培养基保存袋中转移100mL完全培养基到第一培养基保存袋中，然后将三通止流阀调节到状态1。
5.4第12天将三通止流阀调解到状态2，将第一培养基保存袋中转移的完全培养基全部培养基到细胞培养袋中，然后将三通止流阀调节到状态1。
5.5第14天将三通止流阀调解到状态3，将第二培养基保存袋中转移的完全培养基转移250mL到细胞培养袋中，然后将三通止流阀调节到状态1。
5.6第15天将三通止流阀调解到状态3，将第二培养基保存袋中转移的完全培养基全部转移到细胞培养袋中，然后将三通止流阀调节到状态1。
步骤6、细胞使用，可以连续三天使用(第14、15、16天)
6.1第14天，在步骤5.5开始前先将三通止流阀调节到状态2，此时第一培养基保存袋由于步骤5.4已经为空袋，从细胞培养袋中转移150mL到第一培养基保存袋中，将“第一培养基保存袋通过热合仪热合，将他从体系中分离出来，保证此后的体系还是封闭无菌的。
6.2第14天，在步骤5.6完成后先将三通止流阀调节到状态3，此时第二培养基保存袋由于步骤5.6已经为空袋，从细胞培养袋中转移250mL到第二培养基保存袋中，将第二培养基保存袋通过热合仪热合，将他从体系中分离出来，保证此后的体系还是封闭无菌的。
6.3第15天，直接将细胞培养袋里的细胞直接收集使用。
6.4每次细胞使用时，将细胞通过离心机1600rpm，离心6min，并用注射用生理盐水洗涤2次，计数、记活率。
8.5将洗涤后的细胞用生理盐水，稀释到临床应用浓度，取1mL做内毒素检测和革兰氏染色。最后再确认体系的无菌。
对比例1：按照如图5所示利用培养瓶培养cik细胞
1.1将实施例1中步骤1.4得到的单核细胞(两千万个单核细胞)用20ml基础培养基重悬(调整密度到200万个细胞每毫升)，接种到康宁T175透气培养瓶中。
1.2在步骤1.1中的重悬液中加入1,000U/ml的重组人IFN-g，(加入1,000U/ml的重组人IFN-g，先加入IFN-g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞杀伤效果)。
1.3再加入10％体积灭活的血浆，可以减少培养过程中细胞成团。
1.4第2天在培养瓶中加入50ng/ml的CD3单克隆抗体和300U/ml的重组人IL-2，刺激CIK细胞的生长和增殖。(IFN-g具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度；IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK的细胞杀伤效果。)
1.5第4天配置2L的完全培养基(免疫基础培养基+重组人IL-2，调整IL-2因子浓度为300U/ml)；培养瓶往培养瓶中加入20ml完全培养基补液。
1.6第6天培养瓶中加入40ml完全培养基补液。
1.7第8天培养瓶中加入80ml完全培养基补液。
1.8第10天培养瓶中加入160ml完全培养基补液。
1.9第12天培养瓶中加入320ml完全培养基补液。
1.10第12天培养瓶中加入640ml完全培养基补液。
1.11取样，对cik细胞计数，检测活率。
将实施例1与对比例1的实验结果进行对比，如表2所示：
表2结果对比
Figure BDA0002123340190000081
本发明提供了一种免疫细胞的培养方法，本发明所述方法可提高免疫细胞的增殖效率和成活率，同时还具有很好的抗菌性和营养物质稳定性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种免疫细胞培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)分离新鲜外周血的单核细胞和血浆；
(2)调整所述单核细胞至200万个/mL后接种于培养瓶中，预培养4d，得预培养体系；
(3)将所述预培养体系无菌注入细胞培养袋中；所述细胞培养袋的材质为FEP；
(4)将细胞培养基注入培养基保存袋中，利用联通管将所述细胞培养袋和培养基保存袋进行连接，所述联通管上设置有可拆卸的三通止流阀；所述培养基保存袋的材质为PVC；
(5)将所述细胞培养袋置于培养箱中进行培养，所述培养箱内设置温度为37℃，CO2浓度为5％；将所述培养基保存袋置于4℃冰箱内；
(6)利用所述三通止流阀将所述培养基保存袋中的细胞培养基转移至所述细胞培养袋中，所述转移的频率为1～2d/次。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)所述分离包括离心和ficoll法分离。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)所述细胞培养袋上开设有取样口和进样口。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)所述细胞培养袋的容积为2L。
5.根据权利要求3或4所述方法，其特征在于，所述无菌注入的方法包括：在无菌操作台上，取一个50mL注射器，去掉推塞后，悬挂于支架上，同时利用软管将注射器的套筒与细胞培养袋的进样口连接，然后注入所述预培养体系。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(4)所述培养基保存袋为2个，每个培养基保存袋的容积均为650mL。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(5)所述培养的时间为10d。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，在所述培养过程中，培养到第6d进行一次细菌检测。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110305789A (zh) * 2019-07-09 2019-10-08 上海华颜医药科技有限公司 一组免疫培养三联袋及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4829002A (en) * 1986-05-12 1989-05-09 Baxter International Inc. System for metering nutrient media to cell culture containers and method
CN105087487A (zh) * 2015-09-23 2015-11-25 协和干细胞基因工程有限公司 一种高效扩增cik的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4829002A (en) * 1986-05-12 1989-05-09 Baxter International Inc. System for metering nutrient media to cell culture containers and method
CN105087487A (zh) * 2015-09-23 2015-11-25 协和干细胞基因工程有限公司 一种高效扩增cik的方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110305789A (zh) * 2019-07-09 2019-10-08 上海华颜医药科技有限公司 一组免疫培养三联袋及其应用

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