CN111073898B - 小麦条锈病抗性基因YrU1及其克隆与应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了小麦条锈病抗性基因YrU1及其克隆与应用，属于植物基因工程技术领域。所述小麦条锈病抗性基因包括自身启动子和5′‑UTR、3′‑UTR在内的基因全长的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码的蛋白其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。小麦条锈病抗性基因YrU1在小麦抗性育种中具有广阔的应用价值。

Description

小麦条锈病抗性基因YrU1及其克隆与应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域。具体涉及从乌拉尔图小麦材料中，定位、克隆、验证小麦条锈病抗性基因YrU1以及该基因在条锈病抗性育种中的应用。

背景技术

小麦是重要的粮食作物，为世界上大约35%的人提供主食(Huang and Röder,2004; Zhou et al., 2014)。小麦条锈病是由条形柄锈菌（Puccinia striiformis.）引起的危害中国以及世界其他小麦主产国小麦生长的最严重病害之一，每年都会导致小麦大量减产，在大部分小麦生产地条锈病的流行能导致10%~70%的减产，如果发病较早且持续感染时间长，甚至能导致100%的减产(Chen, 2010; Fu et al., 2009)。由于条锈病的发病区域的扩大和产量损失的增加，小麦条锈病已成为所有作物锈病中最严重的病害(Beddow etal., 2015)。种植具有条锈病抗性的小麦品种是防治条锈病非常有效的、经济节约并且环境友好的措施(Chen, 2005; Line et al., 1995; Roebbelen and Sharp, 1978;Schwessinger, 2016)。

迄今为止，已经有超过80个小麦条锈病抗性位点被鉴定(Pakeerathan et al.,2019)，仅有少数基因被克隆，其中Yr5, Yr7和YrSP是一个基因簇，编码BED-NLR蛋白，Yr15具有两个类激酶结构域，Yr18/Lr34编码一个ABC转座蛋白，Yr36具有一个激酶结构域和一个脂类结合结构域，Yr46编码一个己糖转运蛋白，YrAS2388编码一个NLR蛋白(Fu et al.,2009; Klymiuk et al., 2018; Krattinger et al., 2009; Marchal et al., 2018;Moore et al., 2015; Zhang et al., 2019)。Yr5, Yr7，YrSP和YrAS2388编码NLR蛋白，是全生育期抗性基因，Yr15，Yr18/Lr34，Yr36和Yr46编码不同的蛋白家族且具有广泛的条锈病抗性。由于条锈菌的进化，小麦抗病基因的持久性不断受到挑战。

植物通过细胞内NLR受体监控各种病原菌的侵染(Jones et al., 2016)。大部分NLR受体包含三个结构域：C端可变结构域，NB-ARC结构域和LRR结构域，但是少数NLR受体除了这三个结构域外，还具有额外的结构域作为整合的诱饵结构域(Li et al., 2015)。已经发现的NLR受体中，拟南芥的RRS1蛋白包含一个C端的WRKY结构域，水稻RGA5蛋白包含一个C端的RATX1结构域，小麦基因簇Yr5, Yr7和YrSP包含一个N端BED结构域(Cesari et al.,2014; Marchal et al., 2018; Sarris et al., 2015)。

由于小麦的育种方式，现在种植的小麦品种90%以上都对条锈病感病。乌拉尔图小麦是六倍体小麦A基因组的祖先种，可以为小麦育种提供更多的抗病基因资源。乌拉尔图小麦G1812的精细基因组序列已经发表，为克隆基因提供了便利(Ling et al., 2018; Linget al., 2013)。我们以乌拉尔图小麦为材料，定位和克隆新的条锈病抗性基因，并对发现的条锈病抗性基因的抗病机理进行初步探索，为小麦抗病育种提供新的基因资源和理论基础。

发明内容

本发明提供了小麦条锈病抗性基因YrU1的克隆与应用，为小麦条锈病抗性育种提供新颖、高效的抗性基因，培育更加持久高效的条锈病抗性小麦品种，拓展对植物应对病原菌的抗病机制的研究。

为了解决上述问题，本发明克隆了一个来源于乌拉尔图小麦PI428309的条锈病抗性基因YrU1，其编码区核苷酸序列如SEQ ID NO.2中的第1-4731位核苷酸所示。

条锈病抗性基因YrU1的启动子区核苷酸序列如SEQ ID NO.1 中的第1-2104位核苷酸所示。

条锈病抗性基因YrU1的5′-UTR和3′-UTR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 中的第2105-2714位和第9773-10537位核苷酸所示。

乌拉尔图小麦的条锈病抗性基因YrU1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，通过对该序列进行一个或者多个核苷酸的替换、缺失或插入后得到的仍能编码相同或是相似功能蛋白的核苷酸序列也属于本发明内容。

本发明还提供了条锈病抗性基因YrU1编码的蛋白，其氨基酸序列SEQ ID NO.3所示。

本发明还提供了含有基因YrU1的载体。

本发明还提供了所述小麦条锈病抗性基因YrU1在制备条锈病抗性转基因小麦中的运用。

文中所述抗病或是感病如无特殊说明即指条锈病。所述条锈病是指小麦条锈病，由小麦条锈菌即条形柄锈菌小麦专化型所引起，下文中如无特殊标识小麦条锈菌则具体指广泛流行于中国的小麦条锈菌菌株CYR33， CYR17，CYR31，CYR32和V26（Pst CYR33，PstCYR17，Pst CYR31，Pst CYR32和Pst V26）。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明通过图位克隆的方法在乌拉尔图小麦中克隆了一个条锈病抗性基因YrU1，该抗性基因不仅在乌拉尔图小麦中具有条锈病抗性，而且通过转基因方式将自身启动子序列启动的YrU1基因转入普通小麦中同样具有条锈病抗性，说明在不同的麦属植物中具有类似的条锈病抗性应答网络。

(2)源于乌拉尔图小麦的条锈病抗性基因YrU1对我国流行的条锈菌生理小种CYR33，CYR32，CYR17和V26都具有抗性，说明YrU1基因在小麦抗性育种中具有重要的应用价值。

附图说明

图

乌拉尔图小麦PI428309中的小麦条锈病抗性基因YrU1的初定位和精细定位。

图 2条锈病抗性基因YrU1编码一个新的CC-NNS-LRR蛋白，在其氨基端连接一个额外的ANK结构域，羧基端连接一个额外的WRKY结构域。

图3 乌拉尔图小麦PI428309和G1812中YrU1和CG2基因在接种条锈菌CYR33前后的表达量变化图。

图4在乌拉尔图小麦材料PI428309中以大麦花叶条纹病毒诱导沉默YrU1，可导致该材料对PstCYR33感病。

图5以YrU1基因稳定转化普通小麦感病品种Bobwhite，转基因植株获得了对PstCYR33的抗性。

具体实施方式

下述实施例用于阐述、解释本发明，而并非用来局限本发明的范围。

本发明申请人在对一百多个乌拉尔图小麦材料进行条锈病抗性鉴定中，发现了PI427328，PI428294，PI428209，PI428214和PI428309等5个材料对条锈菌生理小种CYR33具有抗性，其中PI428309对条锈菌生理小种CYR17，CYR31，CYR32和V26也具有抗性，另外还发现已经测序的乌拉尔图小麦材料G1812对5个条锈菌生理小种呈现高感的表型。我们构建了PI428309和G1812的杂交群体，通过分析杂交F2群体接种PstCYR33后的抗感分离比，发现在PI428309材料中存在一个显性的条锈病抗性位点（暂命名为Yr）。利用普通小麦A基因组已公布的分子标记和依据G1812的序列设计的分子标记，将此抗性位点初步定位在5AL上0.2cM范围内，并发现一个共分离标记SCF20 (图1a)，遗传图谱上的标记引物如表1所示。随后我们进行了更精细的定位、候选基因的克隆和验证，并分析了抗性基因YrU1所编码的蛋白结构。为了便于读者深入理解本发明的内容和目的，将通过以下实施例来详细介绍本发明的具体技术实施步骤。实施例中所述技术手段为本领域内人员所熟悉的常规手段。

表 1引物序列表

实施例1条锈病抗性基因的精细定位

为了更精细的定位条锈病抗性基因，我们通过二穗短柄草基因组序列与共分离分子标记SCF20的共线性序列BLSATN乌拉尔图小麦材料G1812的序列，设计SSR标记和CAPs标记。最终通过3,034个PI428309×G1812 F2纯合群体，将条锈病抗性基因位点Yr定位在G1812基因组的65 Kb范围内（图1）。G1812的基因组序列在该区域内有三个候选基因，TuG1812G0500003718, TuG1812G0500003719和TuG1812G0500003720，且都编码NLR蛋白，这三个基因序列可在

上获取。

条锈病抗性位点定位实验中所涉及的SSR分子标记是通过SSR Locator软件设计的，CAPs标记是通过在线软件http://helix.wustl.edu/dcaps/dcaps.html dCAPS Finder2.0设计产生的。分子标记的PCR扩增反应体系为10 μL PCR体系（康为世纪2×Taq MasterMix 5 μL，10μM 的正反向引物各0.5 μL，灭菌去离子水2 μL，DNA 模版2 μL），扩增反应在Eppendorf PCR仪上进行。PCR程序为：95℃预变性5 min，95℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 、30 s，变性、退火、延伸三个步骤35个循环，最后72℃充分延伸10 min，结束程序，转入4℃保存阶段。SSR分子标记扩增产物以8.0% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，CAPs标记扩增片段的酶切产物以4%的琼脂糖凝胶电泳，检测标记在F2群体单株间的多态性。

实施例2 条锈病候选抗性基因的克隆

G1812中的TuG1812G0500003718, TuG1812G0500003719和TuG1812G0500003720均编码R蛋白，为了克隆抗条锈病基因，我们根据这三个基因的序列设计扩增引物，通过根据TuG1812G0500003718和TuG1812G0500003719设计的引物YrU1-C和CG2-C得到了PI428309材料中的两个等位基因，分别命名为YrU1和CG2。我们也通过引物YrU1-C在PI428309的cDNA中扩增得到了YrU1的编码序列（SEQ ID NO.2），其编码的蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。CG2在PI428309中不能检测到表达，从而未得到CG2的编码序列。由于G1812和PI428309两个材料之间的序列多态性，在PI428309中不存在TuG1812G0500003720的等位基因。我们比较分析了YrU1和CG2基因在PI428309和G1812之间的序列差异，结果表明YrU1在PI428309中存在额外的~1 Kb的序列，而CG2在PI428309和G1812之间只存在SNP的差异。PI428309中YrU1的~1 Kb额外序列编码一个WRKY结构域，而该结构域在G1812中不存在（图2）。我们检测了PI428309和G1812中YrU1和CG2基因在接种条锈菌CYR33前后的表达量变化，结果表明YrU1基因轻微的受到条锈菌侵染的影响，而CG2基因在接菌前后均未检测到表达（图3）。基于以上结果，我们选定YrU1基因作为候选条锈病抗性基因进行后续功能验证。

实施例3 条锈病抗性基因YrU1的基因功能验证

为了确定乌拉尔图小麦PI428309中是否由YrU1来响应对条锈菌CYR33的抗性，通过大麦花叶条纹病毒介导的基因沉默试验（VIGS）和转基因互补试验进行验证。

通过VIGS试验对YrU1的功能进行验证，首先通过引物YrU1-VIGS将一段247 bp的序列（SEQ ID NO.4所示）反向构建到大麦花叶条纹病毒RNAγ链中组成重组质粒BSMV:YrU1，然后通过大麦条纹花叶病毒将YrU1片段导入小麦叶片中（具体的实验方法参照Zhang, Y., Bai, Y., Wu, G., Zou, S., Chen, Y., Gao, C., and Tang, D. (2017).Simultaneous modification of three homoeologs of TaEDR1 by genome editingenhances powdery mildew resistance in wheat. Plant J. 91, 714-724），结果表明在PI428309中瞬时沉默YrU1基因后，降低了PI428309对Pst CYR33的抗性（图4）。

由于乌拉尔图小麦转化技术还不成熟，我们将YrU1基因转入普通感病小麦Bobwhite中。根据TuG1812G0500003718的上下游序列设计引物YrU1-XbaI/PstI，以PI428309基因组DNA为模板，扩增得到YrU1 全长基因组序列（SEQ ID NO.1）（包括自身启动子和5′-UTR、3’-UTR序列），然后通过XbaI和PstI双酶切连接导入到双元表达载体pCAMBIA1300中。包含YrU1基因片段的pCAMBIA1300载体通过基因枪轰击的方法导入到普通感病小麦Bobwhite中，获得了稳定的转基因植株。通过PCR和qRT-PCR验证了转基因植株中YrU1基因的存在。稳定的转基因植株表现出对PstCYR33抗病，证明了候选基因YrU1就是PI428309中的条锈病抗性功能基因（图5）。

以上内容通过一般性的说明和具体的实施方案对本发明进行了详尽的阐述。对于本领域内的工作人员而言，对本发明进行某些更改和衍生是轻而易举的，因此在不偏离本发明基本内容而做任何改动都属于本发明要求保护的范畴。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建农林大学

<120> 小麦条锈病抗性基因YrU1及其克隆与应用

<130> 78

<160> 78

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 11858

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gtgatgtttg atagcacaca aggtattcct ccggtattcg ggagttgcat aatctcatag 60

tcgaaggaat atgtatttga catgaagaaa gcaatagcaa taaactgaac gatcattatg 120

ctaagctaac ggatgggtct tgtccatcac atcattctcc taatgatgtg ctctcgttat 180

caaatgacaa cacatgtcta tggttaggaa accttgacca tatttgatca acgagctagt 240

ctagtagagg cttactaggg acacggtatt tgtctatgta ttcacacatg tatttaagtt 300

tccggtcaat acaattatag catgaataat aaacctttat catggttaag gaaatatagt 360

aataaccatt ttattattgc ctctagggca tatttccatc agaaggaata tgtatttgac 420

atgaagaaag caatagcaat aaactgaacg atcaatatgc taagctaatg aatgggtctt 480

gtccatcaca tcattctcct aatgatgtga tcccgttatt aaatgacaac tcatgtctat 540

ggttaggaaa ccttaaccat ctttgatcaa cgagatagtc tactagaggc tcactaggga 600

cacggtattt gtttatgtat ccacgcatgt atttaagttt ccggtcaaca caattctaac 660

atgaataata aacctttatc atgatttagg aaatataata ataaccattt tattattgcc 720

tctacggcat atttccatca gcgggtcctt gcaatgtccc ttcctcgatg acatgttgga 780

ttttgtccct tggagctatt caaaaaatag aaagtttcct gttcaatcaa cctatgctat 840

ggagtggaaa cacgaacatg ggagaaaact tagaagaatt gataatatgg gacatctaat 900

tattaatcct atttggagtg agatttggaa gttatcttgc ccgttggagg tatttttttt 960

cttcatattt tgcatggaac tctttggcaa atagacacat aaaagtttct cccaattttc 1020

cttcatgttc ctttggatca gaagatacaa aacatatgtt atttcaatgt cacaaagcaa 1080

atgaggtttg gaaagtggcc aggctggatc aagtcattaa aatagcttgc aaagttgatt 1140

atgctggtga ggctgtccta gaatatttac tttcgatacc tgaacatgag ttggctatct 1200

tgggtattca gaatgttcgt gggatgattg caattgctac ttggtatttg tggtgggaaa 1260

ggcgaaaatt ggtccataag gagaaaaccc aagatgctaa ccagatttct atggggattc 1320

acgctattac attaaactat gttataacta tatcacctaa ggctactatg aaaagagggg 1380

gttggacaca acctccgagg gggtttgtaa aacttaatgt ggtatatgct catgtgtcgc 1440

cgagtacaac tgcaacattg ccggatattc aagaaaacag tctaaacgac ccttaaaacc 1500

ttcttatctg ttatcctagg taaatgggac ttctgtaagt cccatactct cattaaccaa 1560

gtgtttgctt cattgttgta ctgtaaatct catactctca ttaaccaagt gtttgcttca 1620

ttgttatact ttaaggttgg ctgcaactgg aacacgtggg tcttcttaat ggtgttttcc 1680

ctaggctttt gatttaagtg tgcatttttg ctgcctctat acatggacct acctctagca 1740

aaaaattctt gacatcgcct tcaagctttt ggttttatta aaatatccat cagtccctac 1800

atgtcatccc ttctgttgag cctcccaaca aaaaaaatga ggctcctaca tgtcatcatg 1860

tcatcggtgc gagccggttg acgtttggga gcaatcagct ggtggatgct aatcatttgc 1920

atctgtattg cggtaccggg ctggatatga ctgagcaggt ggggtgcggc acagggggcc 1980

cggaaggaga aaggagagga gatgaggact gagtggctcc gcatgtagta cagtaatgcg 2040

ttcttccctt cgatttccta cagacctaca tactattcgt agtcgccccc ttttatcgag 2100

ctgtgatgca gatgcttgcg cattggcttt ggcttcagag ggatcgacca agaaaatgaa 2160

gagcacaaga tcgaagactg ccaacgtgcg cgggctcctc tgttcaagca gttatcgtct 2220

tccgctgata agcagcaagc gtggtgactg agacggacgg gaggaagttt ggaggctccc 2280

gacaaggcga caagtgagta cgttcaattt gtttgctgtt tcagtgggat tacccgcgga 2340

actcgttgta atgttaaatt tctgactggt atgcagttcg atgtgtatgt gccgtggggc 2400

agaaggatcc gcctcttggc ctggttgcag cgggagatct ctattgggaa attgagaatt 2460

ttccgtagtg tgtgcggaag tgtcgttctt ctgaatcgag cgaagggagt tataaaggaa 2520

gatcttgccc tattctttga gttgaagctt ggtttcccaa tgttaaccta gatctgcaag 2580

aacacgatct tgcagttttg gacttcgtca caatatatca ccaaaattaa tcaagttctt 2640

gtatttggag atagagaggc acaatccagg ctccgcgctc tagagaaatt gaagaccttc 2700

tggggttctt atccatggag cagcagcaga gcttcgagga gaggacgagc aaagatagcc 2760

ccgagaagat gggtgacagt gcgctccacc ttgcagcaag ggccggaaat gttgcccttg 2820

tgcagaagat ctttgcggac tgcgatccgg agctggtcgc ggaattgact gaccatcaga 2880

accaggacgg tgagacagcg ctgtatgttt ccgcggagat ggggcatgtc gaggttgtgt 2940

gtgaaattct gaaggtttgt gatctgcatt cagcatttct caaggcacac aacagctttg 3000

atgcattcca tattgcagca aagcagggcc atctaggtta gttctttact tctttccttt 3060

catcactaat tcttgtatat tgttgagttt aaccacaatg tgctatgttt gtcaagtcat 3120

tgattggacg attatggttg tgtgaattgg aattcttcag tactccttag ttggattgtt 3180

tatagttgtg attttctttg tcttgtatac agtgacttgt atttcattac ctttgtcccc 3240

aaagcattta ccaggtgtcc gcttttgcat tcaatgttta agaaatttat ctgggtgatt 3300

tggtccatat tccagcctat attgcctggt tttcttggta tggcaggcaa aagtgaccat 3360

ggattcacag ttttatgtag gatttgttgc tgtcgcgata tgcttataaa atattgatgt 3420

tgatgtatcc aaatcagggt atctgatatg attgattagc gagataatta aatgttgcat 3480

cttcgtgctt tttttttgtg ccagcaattt gtgctagaac aaatcagctc atgcaattta 3540

taatagaagg cagtggagaa gagcaaacca ctgtcctact cctgatccta agttcctaac 3600

tactactccc tcttccataa ttttgaacta aaaccatgac aagaattatg ggacggaggg 3660

agtatgatag ttgtatcttt gtggatgttt ggcttaatgt tattgtcaag ttatttcggc 3720

tcatatacat gtcccatgct ttgtttcgca gttgttttgc aggagctact gaaggctttt 3780

cctgcattag ctatgacaac aaattcagta aatgccacag ctttatacac tgccacactt 3840

cactgccaca ttggtattgt caatcttcta ctggatacag acccaagact tgccaggatt 3900

gcaagaaata atgggaagac agctctgcat atagcagcaa ggctgggcaa tgtggaggtg 3960

gtagtgttgt tgttgaataa agatccggcg actgttttca gaatagacag gaagggacaa 4020

acagcagtgc acatggcttc caaaggccac aatgctgaaa ttctgcttga gctactgaag 4080

cccgatgtct cagtaatcca tttggaagat aacaaggggg acaggccact gcatgttgca 4140

acgcggaagg gaaaaaccat tgtaggttac catatctcta aaatatcttc tgttttcttc 4200

attatttcat tcttcagatg ttaacaattt gttgttgcat attatttctt gttcatccta 4260

tgttcatttg caaagtttgc ctgcttaaac cagcaatatt agattttcta gaacataaag 4320

tatctaaagc aatttacact acattatgta cacaaataat gaaaagactt cctttcatag 4380

acttgagaga actatgaagt tctaagcagt ttcaaccaga atttcagtgg acttatgtat 4440

atgtacttac gattttaaga ttttttctta gtaatttgat cctttttctg atattcgcat 4500

aattccttac agatagttca gacgctaata tccattgaag agattgatat caatgcaatc 4560

aatggagctg gagagaccgc ttttgccatt gcagagaaac tgggtaatga agagcttgta 4620

aacatcctga gggaggctgg tggagtaacc gcagaagagc aagtaaatcc tccgaaatca 4680

atcaagcgtt ttaagcaaac acatgatgtc caatcgcaga tcaagcaaaa gcgtcggaca 4740

aatatgcatt tccacacgat caggaagagt agtcaaaagc tccacactga ggctccagtc 4800

tgcgctttgg cagacgccat gttcagactt cctgcaaagc tcgatgagct actgattagc 4860

cacgtccaca tgcttcctag gggtgcggag gatgagatac ctctcatcaa gcaagatctg 4920

gaagagataa tggccattct gcaggagcac gaccacccag ggagagcgga agaccgtgct 4980

atgacgagca agtgcctgac caaggaggtg cgcgagctgt catacgacat ggaggatagt 5040

gtcgaccagt atgtgcacgc cgtcgacacc aagagaagga ttgttcctcg ccgtaaaaag 5100

tacaagatca cctgtcgtag gggcaagacc actgcgcggc tcccggagaa gcttaagtgg 5160

cgtatatgga tggccaacaa gatcagggag ttcagtgtgc gctcgcaaga ggcgctgcag 5220

cggtacagcc tatttaacca ccctggtgct catgacatca gcacgtctgc tacttctacg 5280

agacatgatg tgtgttttgg ctcttggtat cccacaccgt gtggggagct tgtcggtata 5340

gatggacatt tgaatactct tgaagcgtgg ttgggtaagg atggggagca gcagctcaag 5400

gtggtatctg ttgttggatc tggaggggtt ggtaagacca cactttccaa agagctgtac 5460

cgtagaatca gagggcaatt cgagtgccag gcatttgtga ggacgtcccg gaagcccgac 5520

atcaggaggc ttctcatcag cttgctctca caagtccggc cacaccaaac ccctcacact 5580

tggaaattgc atagtctaat tgccgatatc aggacacatc tccacgataa gaggtataca 5640

tgtctcttga ttcataagaa ttacattttc tggacaggaa tttaatcttg tgagcaggcc 5700

cttagtgtga tttttccatt atacaaacat gttactgcgg catcttagtg caccaaaatg 5760

gtttgcggtt cgatttcttc cttagttcaa cgatatttcg gtggtggtga agatttgaag 5820

tcactgataa tatttttgta tgcagctatg ctgagccact tttttttcct tccagtccag 5880

taagtataga gtggcagatt tccaatgcgt tattaggctg acaactgtgc taaaacattc 5940

ctcaggtact tgatcgtcat tgatgatgta tgggctacac aaacatggga tatcattaat 6000

cgtgctttgc cggctggtaa tctttgcagt agaattctaa taacaacaga agtcgaagat 6060

gtagctctga aatgttgtgg ttatgactct aggcatgttc ttatggtgaa accacttggt 6120

tacgatgatt caagcaaatt atttttcagc acagcttttg gactacaata tgaatgtcct 6180

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atggttactg tggctagtct tttagtaagc cagattggca aaccagagaa atgggattat 6300

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gtactaaacc ttagttacaa caatcttcct cattatttga aggcatgtgt gatgtatctc 6420

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gatgagctta tcagtagcag aatgatccta cctgtgtata caaatgacaa cgatgatgtt 6600

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aattttgtca tcccaataga tcatagtcag acaactgcac cactcgcaga caaggttcgt 6720

cgactgtctc tccactttgg taattcagaa gcaacgccac caacaaatat gagactatca 6780

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ttagaagtac cacaaactca gatgcgaggt ttacaatatt tggagacact gaaaatagat 7020

gcaagagtaa gtgcagttcc gtcggacatt gttcatttgc cgagcttgtt gcacctcagt 7080

cttcctgttg ggacaaatct accaaatggt attgaccata tgacatcgct ttgcacactt 7140

gaatattttg atataaatgt taactcaatg gagaatgtgc acagccttgg tgagctgacc 7200

aatcttcagg atcttcggct cacatgttct acagttcctt cttcttactt aaagagtaaa 7260

atcgatagta tgggctctat tcttgcgaac ctcagcaacc tcaggtctgt aactctgaag 7320

tcttcaggta ttctggagag tgaaccttac agcatgatca tttcctgtga tggcttgagc 7380

agcgtttcct ctcctccagc tcttcttcaa agatttgagt ggttgccacg catttgtacc 7440

ttctccagca tccctaagtg gattagccat ctcaacaagc tctgcatttt aaagattggg 7500

cttagggaat tagtgagcaa tgatgtcgct gctctgagag gattgcctgc actaactgtt 7560

ttgtcgttat atgtccgagc aaagcccgca gaaaaaattg tctttagtag ggcaggattc 7620

ttggttctca agtgcttcaa gttcaggtgc agtgtacctt ggctggaatt tgaggtggat 7680

gcaatgccta atctcttgaa actcaagcta agtttcgatg cccatggagt agatcaacat 7740

ggtactatac ctgtcggcat agtgcactta acaggcctta aggaaatctc tacaaaaatt 7800

tggggtgctg gttacaatga aagaagggct gcaaaatcag cgctgattgc cgctattaag 7860

atgcattcgg gatgtcccac cgccagcata cagtgtttag atgggatgtt cagtggtaag 7920

gatgataata atagcgggat acaagaggaa gaacacatgg ctctgcaaaa gcagcaatac 7980

aatatcatgg aggaagactt gatggaacag cataaagtcc gtcaaaaagg cacgtgggaa 8040

gatgctcaca gaaggtatga tgatgatctc tctcattcat gtgctttgct aagtgagttt 8100

tggtggtggc taaacgcttt gctgccatta ggttttctgc attttcagat tggaaagctg 8160

ttgcggacaa gcaacctaac agtaggtatg tatttgtcag tagtaattaa ttataactga 8220

aataaacata ttttgttctt gctcttgctt cgttcaatat cctaatagat gctaaagcta 8280

ctcagggatg ccacgtctgt tgccttttaa atcctccatg ttttctgatg ggcagagtgc 8340

accatccgtg ccgggttggg aagacgaccg gactgtcaac atcaaggaag tggacagcat 8400

ggctgaagac agagacacag aaatacaaga gcatggataa agactccaat aaacagcatg 8460

gaggtcttcc aaaggaccac atggatgttg cagacaaaca agctgccagt aggtatgtat 8520

ttgtccgttg taactaatta actaacgaat cttctcttct cgctatagct ccgttccata 8580

ccctaatgga tgctaaagct gctcatggat gtcacttgtt ttgcttttta taacttctgt 8640

gtctttggaa cggcagatca cagcacctaa taaccagcat gtagttcttc aaaaggacaa 8700

cgtgcttata ataatccatt agggttcaca aagctatact ctgagaattt atggcatgtt 8760

cctgtttatc tcttagcaac cataaaatag taatagaaga agatttcatg tatttcttta 8820

attactatct atatctatac atgtatatat tgcttttgag agtttatggc atgtttctgt 8880

ttatctcgta gcaacaatcg taggattccc aggcggacca ggaagatgag tagtcggagg 8940

atgcaggtga gggtaggatc cttgcaggac ttgggtttcc tcgacgatgg cttcagctgg 9000

aggaagtacg gccagaagga taccatgggc tccacgtacc caaggtcaga aggaactctc 9060

gcctcaagcg caccaagtat ttctaggccc tgtttgtttg ggcttttgct tttgcttctg 9120

cttttgcagt ttttttcatt ttggccaaaa agccataaaa gctcctaaat agatgctttt 9180

ggagccaaat attgttatat tgattcatca aaatccataa aagctccaaa agcgtctatt 9240

taggagtttt tatgtctttt tggtcaaagc ggaaaagctg caaaagcaga aataaataaa 9300

ggcccaaaca aacagggcct aatcttttcg ctgcacctga cagagactga ctcgaggcac 9360

ttgttgaaat tgaattctca attgcagagc ttatttccgg tgcacgcaca ggcacgttaa 9420

gggctgccta gcgaccaagc aggtgcagcg cacgtctaac gacccgctgc tctttgacgt 9480

ggtgcataac ggggagcaca cgtgcttgga ctctgtcgga tcccctgcga cgtccgggag 9540

ccaggttacc tacgagggga taaatgcaac cgcggcaacg tcttgtggcc aggtcacctt 9600

ggaggaggtg agcagaggta cgcccggagt tggattcatg tccccggcgg tgttcagtag 9660

ccaggttatg tccgaggtgg taagcggaag cgggagtacg gcgggatttt ctggtgatga 9720

ggttggcatg ccagacccgg accgcgatgg ctacgaattt gaccgagttt gaggtcagcg 9780

ctttcttggc ctagtgagat ttgatcatct cctcgcaggg ggcgggcggg gccacgattt 9840

gagcacacgg agggccaagc catgttagta tttatataag gccatgcata tcccatggtg 9900

ccttgttatc ggttctatgg gttgttctgc ttggggcgat ggtgtgtggt tgacccatgg 9960

tgccttgtca gtggggaggg aggaatccgt tgatccaatg tgctcggagg ctaagtgccc 10020

cggcgactgc tcctcttcca ttgctcagtc cccagcacgt ccgatgctta gtccagagga 10080

gccgcttgtt ttcgacgcag ggcgcatgat gggggccttc ggcatgcccg atgttctagt 10140

tgagcctccg gttggggtgt gcggtgttgt tgcgaagggg acacagacta aagcaacgcc 10200

attatctcta gaggattctc tcaccaaggt tacttgtgca ctaccacaac ctctgcttgg 10260

caccccggcg cctttgcacg gggagaagga tgacgagcga caaagtaggc gtctggaaaa 10320

gaagaacaag gtgtgcaaca ttctgacgtc caagtacgca gagcacaggt tgttagagac 10380

ttttggtgag ctgccggagg tcagcgatgc ggagggccct aagcaaaaga tgaaagcata 10440

tctagacatg tataaaaaac cgctctcacc gcaagtgatc aaggggttga ggactttggc 10500

gggcatcaca gaaaagtcaa agttgaacct ttcagcatgt tttccacttg ataatgttcg 10560

cacgtaatgc tttcaggctg agacagaagt gtcatcgata tgtacgattt aatcaccgat 10620

accataatta gagcaactcc aacaattcct tcaaaaaact tcccgatttc gctgaatttt 10680

agaggaagtt tcccgcaaag tactttcgtc gcatcccgta aaacatctgc ccctaaattt 10740

gtttttattt tatttttcat taaacaaaac gaaataatgg cctagggcct gccaacaagt 10800

gacacgcgtg atggccttcg gcggggcgac agtggcaagg tggcgttccg acggcggggc 10860

aatggaaagg cggcgttccg aaggcatggc ggcggcaagg tggtgttctt gcaacgggca 10920

gggcggcggc gatgaagcga tgttccagcg gcgacgacga gcgagtggcg cgtcgagagg 10980

tttcaggtgg ttaccttgcc gccaaaagtt tatgggaaac aaaacttccc ctagacctga 11040

aggaagttgg ggtcaaattt acaagatcct gtaaatttat tgcacgttta cggggttttc 11100

tgaagatgat ttttggccta aattttactt tacggataca tgatctgtta gggttgctct 11160

taggccgggg cataaaagac gagagctcct agttgacgct cgtgcgtcaa ccaggtgtag 11220

atttgctaaa gcctacatga atgggcccac ttcaccaaga acttgttttt taaatatttt 11280

tctctttggt tatttagtca gtttttcagt gaaaaaccag ctattgtttt tcagaagata 11340

gaaaatttta taacctatta aaataggaaa atatattttc aaaaaaatta tattatatgt 11400

tttataaaag ttcaatgtat attaaaaaat tattcaccgt gtattaaaaa tatgttcggt 11460

ttgtataaag aatggtcatc atatgttaaa aaatgttcag tgtatataac aaaaatgttc 11520

atcatatata aaaatatata ttcagtttat gttttgaaga aaatttacct tatgctaaaa 11580

aaagttcagt gtgcttttga aaaatgttca ttgcatgcta aaataggttc agtgtgcatt 11640

tgaaaaagtt caccatatac tgcaaaccta taaaatgcaa aaatataaaa caaaagaaaa 11700

cacaacatct gagaaaagaa aacgtaaaaa acaaaataga agcagctagt taagtgggct 11760

ggcccatctg aaggttcctt cagtgaagtc tcccttatat cacgcactcg ggcgtcacct 11820

aggattgacc ataaaagacc gagtagagag gatggcat 11858

<210> 2

<211> 4731

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

atggagcagc agcagagctt cgaggagagg acgagcaaag atagccccga gaagatgggt 60

gacagtgcgc tccaccttgc agcaagggcc ggaaatgttg cccttgtgca gaagatcttt 120

gcggactgcg atccggagct ggtcgcggaa ttgactgacc atcagaacca ggacggtgag 180

acagcgctgt atgtttccgc ggagatgggg catgtcgagg ttgtgtgtga aattctgaag 240

gtttgtgatc tgcattcagc atttctcaag gcacacaaca gctttgatgc attccatatt 300

gcagcaaagc agggccatct agttgttttg caggagctac tgaaggcttt tcctgcatta 360

gctatgacaa caaattcagt aaatgccaca gctttataca ctgccacact tcactgccac 420

attggtattg tcaatcttct actggataca gacccaagac ttgccaggat tgcaagaaat 480

aatgggaaga cagctctgca tatagcagca aggctgggca atgtggaggt ggtagtgttg 540

ttgttgaata aagatccggc gactgttttc agaatagaca ggaagggaca aacagcagtg 600

cacatggctt ccaaaggcca caatgctgaa attctgcttg agctactgaa gcccgatgtc 660

tcagtaatcc atttggaaga taacaagggg gacaggccac tgcatgttgc aacgcggaag 720

ggaaaaacca ttatagttca gacgctaata tccattgaag agattgatat caatgcaatc 780

aatggagctg gagagaccgc ttttgccatt gcagagaaac tgggtaatga agagcttgta 840

aacatcctga gggaggctgg tggagtaacc gcagaagagc aagtaaatcc tccgaaatca 900

atcaagcgtt ttaagcaaac acatgatgtc caatcgcaga tcaagcaaaa gcgtcggaca 960

aatatgcatt tccacacgat caggaagagt agtcaaaagc tccacactga ggctccagtc 1020

tgcgctttgg cagacgccat gttcagactt cctgcaaagc tcgatgagct actgattagc 1080

cacgtccaca tgcttcctag gggtgcggag gatgagatac ctctcatcaa gcaagatctg 1140

gaagagataa tggccattct gcaggagcac gaccacccag ggagagcgga agaccgtgct 1200

atgacgagca agtgcctgac caaggaggtg cgcgagctgt catacgacat ggaggatagt 1260

gtcgaccagt atgtgcacgc cgtcgacacc aagagaagga ttgttcctcg ccgtaaaaag 1320

tacaagatca cctgtcgtag gggcaagacc actgcgcggc tcccggagaa gcttaagtgg 1380

cgtatatgga tggccaacaa gatcagggag ttcagtgtgc gctcgcaaga ggcgctgcag 1440

cggtacagcc tatttaacca ccctggtgct catgacatca gcacgtctgc tacttctacg 1500

agacatgatg tgtgttttgg ctcttggtat cccacaccgt gtggggagct tgtcggtata 1560

gatggacatt tgaatactct tgaagcgtgg ttgggtaagg atggggagca gcagctcaag 1620

gtggtatctg ttgttggatc tggaggggtt ggtaagacca cactttccaa agagctgtac 1680

cgtagaatca gagggcaatt cgagtgccag gcatttgtga ggacgtcccg gaagcccgac 1740

atcaggaggc ttctcatcag cttgctctca caagtccggc cacaccaaac ccctcacact 1800

tggaaattgc atagtctaat tgccgatatc aggacacatc tccacgataa gaggtacttg 1860

atcgtcattg atgatgtatg ggctacacaa acatgggata tcattaatcg tgctttgccg 1920

gctggtaatc tttgcagtag aattctaata acaacagaag tcgaagatgt agctctgaaa 1980

tgttgtggtt atgactctag gcatgttctt atggtgaaac cacttggtta cgatgattca 2040

agcaaattat ttttcagcac agcttttgga ctacaatatg aatgtcctcc agaactctgt 2100

gacgctgcac acaacattgt gaggaaatgt gctggttcac cactagcaat ggttactgtg 2160

gctagtcttt tagtaagcca gattggcaaa ccagagaaat gggattatgt aaatgaaatc 2220

ttaggtcacg gtttgagcac atatcctagc tcggaaggaa tgaaacaagt actaaacctt 2280

agttacaaca atcttcctca ttatttgaag gcatgtgtga tgtatctcag tatatatgaa 2340

gaggactaca taattcagaa agatgatttg gtaaagcaat ggatagctga aggtcttatc 2400

ctagcaacag aagagaaaga caaagaggaa atatcaagga gatattttga tgagcttatc 2460

agtagcagaa tgatcctacc tgtgtataca aatgacaacg atgatgtttt gtcctgcaca 2520

ctgcatcaca tggtacttga ttttatcaaa cacaagtcct tagaagagaa ttttgtcatc 2580

ccaatagatc atagtcagac aactgcacca ctcgcagaca aggttcgtcg actgtctctc 2640

cactttggta attcagaagc aacgccacca acaaatatga gactatcaca agttcggact 2700

ctcgcatttt tcggggtcat tgagtgtttg ccttccgtta tagagtttcg gcttcttcaa 2760

gtcctaatcc tacatctttt tggcgatgat gaaagtgtca gttttgatct cactggaata 2820

tctgagcttt ttcggttgag atatttgcat gtcacatgta atgccacctt agaagtacca 2880

caaactcaga tgcgaggttt acaatatttg gagacactga aaatagatgc aagagtaagt 2940

gcagttccgt cggacattgt tcatttgccg agcttgttgc acctcagtct tcctgttggg 3000

acaaatctac caaatggtat tgaccatatg acatcgcttt gcacacttga atattttgat 3060

ataaatgtta actcaatgga gaatgtgcac agccttggtg agctgaccaa tcttcaggat 3120

cttcggctca catgttctac agttccttct tcttacttaa agagtaaaat cgatagtatg 3180

ggctctattc ttgcgaacct cagcaacctc aggtctgtaa ctctgaagtc ttcaggtatt 3240

ctggagagtg aaccttacag catgatcatt tcctgtgatg gcttgagcag cgtttcctct 3300

cctccagctc ttcttcaaag atttgagtgg ttgccacgca tttgtacctt ctccagcatc 3360

cctaagtgga ttagccatct caacaagctc tgcattttaa agattgggct tagggaatta 3420

gtgagcaatg atgtcgctgc tctgagagga ttgcctgcac taactgtttt gtcgttatat 3480

gtccgagcaa agcccgcaga aaaaattgtc tttagtaggg caggattctt ggttctcaag 3540

tgcttcaagt tcaggtgcag tgtaccttgg ctggaatttg aggtggatgc aatgcctaat 3600

ctcttgaaac tcaagctaag tttcgatgcc catggagtag atcaacatgg tactatacct 3660

gtcggcatag tgcacttaac aggccttaag gaaatctcta caaaaatttg gggtgctggt 3720

tacaatgaaa gaagggctgc aaaatcagcg ctgattgccg ctattaagat gcattcggga 3780

tgtcccaccg ccagcataca gtgtttagat gggatgttca gtggtaagga tgataataat 3840

agcgggatac aagaggaaga acacatggct ctgcaaaagc agcaatacaa tatcatggag 3900

gaagacttga tggaacagca taaagtccgt caaaaaggca cgtgggaaga tgctcacaga 3960

aggttttctg cattttcaga ttggaaagct gttgcggaca agcaacctaa cagtagagtg 4020

caccatccgt gccgggttgg gaagacgacc ggactgtcaa catcaaggaa gtggacagca 4080

tggctgaaga cagagacaca gaaatacaag agcatggata aagactccaa taaacagcat 4140

ggaggtcttc caaaggacca catggatgtt gcagacaaac aagctgccag tagcaacaat 4200

cgtaggattc ccaggcggac caggaagatg agtagtcgga ggatgcaggt gagggtagga 4260

tccttgcagg acttgggttt cctcgacgat ggcttcagct ggaggaagta cggccagaag 4320

gataccatgg gctccacgta cccaagagct tatttccggt gcacgcacag gcacgttaag 4380

ggctgcctag cgaccaagca ggtgcagcgc acgtctaacg acccgctgct ctttgacgtg 4440

gtgcataacg gggagcacac gtgcttggac tctgtcggat cccctgcgac gtccgggagc 4500

caggttacct acgaggggat aaatgcaacc gcggcaacgt cttgtggcca ggtcaccttg 4560

gaggaggtga gcagaggtac gcccggagtt ggattcatgt ccccggcggt gttcagtagc 4620

caggttatgt ccgaggtggt aagcggaagc gggagtacgg cgggattttc tggtgatgag 4680

gttggcatgc cagacccgga ccgcgatggc tacgaatttg accgagtttg a 4731

<210> 3

<211> 1576

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Met Glu Gln Gln Gln Ser Phe Glu Glu Arg Thr Ser Lys Asp Ser Pro

1 5 10 15

Glu Lys Met Gly Asp Ser Ala Leu His Leu Ala Ala Arg Ala Gly Asn

20 25 30

Val Ala Leu Val Gln Lys Ile Phe Ala Asp Cys Asp Pro Glu Leu Val

35 40 45

Ala Glu Leu Thr Asp His Gln Asn Gln Asp Gly Glu Thr Ala Leu Tyr

50 55 60

Val Ser Ala Glu Met Gly His Val Glu Val Val Cys Glu Ile Leu Lys

65 70 75 80

Val Cys Asp Leu His Ser Ala Phe Leu Lys Ala His Asn Ser Phe Asp

85 90 95

Ala Phe His Ile Ala Ala Lys Gln Gly His Leu Val Val Leu Gln Glu

100 105 110

Leu Leu Lys Ala Phe Pro Ala Leu Ala Met Thr Thr Asn Ser Val Asn

115 120 125

Ala Thr Ala Leu Tyr Thr Ala Thr Leu His Cys His Ile Gly Ile Val

130 135 140

Asn Leu Leu Leu Asp Thr Asp Pro Arg Leu Ala Arg Ile Ala Arg Asn

145 150 155 160

Asn Gly Lys Thr Ala Leu His Ile Ala Ala Arg Leu Gly Asn Val Glu

165 170 175

Val Val Val Leu Leu Leu Asn Lys Asp Pro Ala Thr Val Phe Arg Ile

180 185 190

Asp Arg Lys Gly Gln Thr Ala Val His Met Ala Ser Lys Gly His Asn

195 200 205

Ala Glu Ile Leu Leu Glu Leu Leu Lys Pro Asp Val Ser Val Ile His

210 215 220

Leu Glu Asp Asn Lys Gly Asp Arg Pro Leu His Val Ala Thr Arg Lys

225 230 235 240

Gly Lys Thr Ile Ile Val Gln Thr Leu Ile Ser Ile Glu Glu Ile Asp

245 250 255

Ile Asn Ala Ile Asn Gly Ala Gly Glu Thr Ala Phe Ala Ile Ala Glu

260 265 270

Lys Leu Gly Asn Glu Glu Leu Val Asn Ile Leu Arg Glu Ala Gly Gly

275 280 285

Val Thr Ala Glu Glu Gln Val Asn Pro Pro Lys Ser Ile Lys Arg Phe

290 295 300

Lys Gln Thr His Asp Val Gln Ser Gln Ile Lys Gln Lys Arg Arg Thr

305 310 315 320

Asn Met His Phe His Thr Ile Arg Lys Ser Ser Gln Lys Leu His Thr

325 330 335

Glu Ala Pro Val Cys Ala Leu Ala Asp Ala Met Phe Arg Leu Pro Ala

340 345 350

Lys Leu Asp Glu Leu Leu Ile Ser His Val His Met Leu Pro Arg Gly

355 360 365

Ala Glu Asp Glu Ile Pro Leu Ile Lys Gln Asp Leu Glu Glu Ile Met

370 375 380

Ala Ile Leu Gln Glu His Asp His Pro Gly Arg Ala Glu Asp Arg Ala

385 390 395 400

Met Thr Ser Lys Cys Leu Thr Lys Glu Val Arg Glu Leu Ser Tyr Asp

405 410 415

Met Glu Asp Ser Val Asp Gln Tyr Val His Ala Val Asp Thr Lys Arg

420 425 430

Arg Ile Val Pro Arg Arg Lys Lys Tyr Lys Ile Thr Cys Arg Arg Gly

435 440 445

Lys Thr Thr Ala Arg Leu Pro Glu Lys Leu Lys Trp Arg Ile Trp Met

450 455 460

Ala Asn Lys Ile Arg Glu Phe Ser Val Arg Ser Gln Glu Ala Leu Gln

465 470 475 480

Arg Tyr Ser Leu Phe Asn His Pro Gly Ala His Asp Ile Ser Thr Ser

485 490 495

Ala Thr Ser Thr Arg His Asp Val Cys Phe Gly Ser Trp Tyr Pro Thr

500 505 510

Pro Cys Gly Glu Leu Val Gly Ile Asp Gly His Leu Asn Thr Leu Glu

515 520 525

Ala Trp Leu Gly Lys Asp Gly Glu Gln Gln Leu Lys Val Val Ser Val

530 535 540

Val Gly Ser Gly Gly Val Gly Lys Thr Thr Leu Ser Lys Glu Leu Tyr

545 550 555 560

Arg Arg Ile Arg Gly Gln Phe Glu Cys Gln Ala Phe Val Arg Thr Ser

565 570 575

Arg Lys Pro Asp Ile Arg Arg Leu Leu Ile Ser Leu Leu Ser Gln Val

580 585 590

Arg Pro His Gln Thr Pro His Thr Trp Lys Leu His Ser Leu Ile Ala

595 600 605

Asp Ile Arg Thr His Leu His Asp Lys Arg Tyr Leu Ile Val Ile Asp

610 615 620

Asp Val Trp Ala Thr Gln Thr Trp Asp Ile Ile Asn Arg Ala Leu Pro

625 630 635 640

Ala Gly Asn Leu Cys Ser Arg Ile Leu Ile Thr Thr Glu Val Glu Asp

645 650 655

Val Ala Leu Lys Cys Cys Gly Tyr Asp Ser Arg His Val Leu Met Val

660 665 670

Lys Pro Leu Gly Tyr Asp Asp Ser Ser Lys Leu Phe Phe Ser Thr Ala

675 680 685

Phe Gly Leu Gln Tyr Glu Cys Pro Pro Glu Leu Cys Asp Ala Ala His

690 695 700

Asn Ile Val Arg Lys Cys Ala Gly Ser Pro Leu Ala Met Val Thr Val

705 710 715 720

Ala Ser Leu Leu Val Ser Gln Ile Gly Lys Pro Glu Lys Trp Asp Tyr

725 730 735

Val Asn Glu Ile Leu Gly His Gly Leu Ser Thr Tyr Pro Ser Ser Glu

740 745 750

Gly Met Lys Gln Val Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Asn Leu Pro His Tyr

755 760 765

Leu Lys Ala Cys Val Met Tyr Leu Ser Ile Tyr Glu Glu Asp Tyr Ile

770 775 780

Ile Gln Lys Asp Asp Leu Val Lys Gln Trp Ile Ala Glu Gly Leu Ile

785 790 795 800

Leu Ala Thr Glu Glu Lys Asp Lys Glu Glu Ile Ser Arg Arg Tyr Phe

805 810 815

Asp Glu Leu Ile Ser Ser Arg Met Ile Leu Pro Val Tyr Thr Asn Asp

820 825 830

Asn Asp Asp Val Leu Ser Cys Thr Leu His His Met Val Leu Asp Phe

835 840 845

Ile Lys His Lys Ser Leu Glu Glu Asn Phe Val Ile Pro Ile Asp His

850 855 860

Ser Gln Thr Thr Ala Pro Leu Ala Asp Lys Val Arg Arg Leu Ser Leu

865 870 875 880

His Phe Gly Asn Ser Glu Ala Thr Pro Pro Thr Asn Met Arg Leu Ser

885 890 895

Gln Val Arg Thr Leu Ala Phe Phe Gly Val Ile Glu Cys Leu Pro Ser

900 905 910

Val Ile Glu Phe Arg Leu Leu Gln Val Leu Ile Leu His Leu Phe Gly

915 920 925

Asp Asp Glu Ser Val Ser Phe Asp Leu Thr Gly Ile Ser Glu Leu Phe

930 935 940

Arg Leu Arg Tyr Leu His Val Thr Cys Asn Ala Thr Leu Glu Val Pro

945 950 955 960

Gln Thr Gln Met Arg Gly Leu Gln Tyr Leu Glu Thr Leu Lys Ile Asp

965 970 975

Ala Arg Val Ser Ala Val Pro Ser Asp Ile Val His Leu Pro Ser Leu

980 985 990

Leu His Leu Ser Leu Pro Val Gly Thr Asn Leu Pro Asn Gly Ile Asp

995 1000 1005

His Met Thr Ser Leu Cys Thr Leu Glu Tyr Phe Asp Ile Asn Val

1010 1015 1020

Asn Ser Met Glu Asn Val His Ser Leu Gly Glu Leu Thr Asn Leu

1025 1030 1035

Gln Asp Leu Arg Leu Thr Cys Ser Thr Val Pro Ser Ser Tyr Leu

1040 1045 1050

Lys Ser Lys Ile Asp Ser Met Gly Ser Ile Leu Ala Asn Leu Ser

1055 1060 1065

Asn Leu Arg Ser Val Thr Leu Lys Ser Ser Gly Ile Leu Glu Ser

1070 1075 1080

Glu Pro Tyr Ser Met Ile Ile Ser Cys Asp Gly Leu Ser Ser Val

1085 1090 1095

Ser Ser Pro Pro Ala Leu Leu Gln Arg Phe Glu Trp Leu Pro Arg

1100 1105 1110

Ile Cys Thr Phe Ser Ser Ile Pro Lys Trp Ile Ser His Leu Asn

1115 1120 1125

Lys Leu Cys Ile Leu Lys Ile Gly Leu Arg Glu Leu Val Ser Asn

1130 1135 1140

Asp Val Ala Ala Leu Arg Gly Leu Pro Ala Leu Thr Val Leu Ser

1145 1150 1155

Leu Tyr Val Arg Ala Lys Pro Ala Glu Lys Ile Val Phe Ser Arg

1160 1165 1170

Ala Gly Phe Leu Val Leu Lys Cys Phe Lys Phe Arg Cys Ser Val

1175 1180 1185

Pro Trp Leu Glu Phe Glu Val Asp Ala Met Pro Asn Leu Leu Lys

1190 1195 1200

Leu Lys Leu Ser Phe Asp Ala His Gly Val Asp Gln His Gly Thr

1205 1210 1215

Ile Pro Val Gly Ile Val His Leu Thr Gly Leu Lys Glu Ile Ser

1220 1225 1230

Thr Lys Ile Trp Gly Ala Gly Tyr Asn Glu Arg Arg Ala Ala Lys

1235 1240 1245

Ser Ala Leu Ile Ala Ala Ile Lys Met His Ser Gly Cys Pro Thr

1250 1255 1260

Ala Ser Ile Gln Cys Leu Asp Gly Met Phe Ser Gly Lys Asp Asp

1265 1270 1275

Asn Asn Ser Gly Ile Gln Glu Glu Glu His Met Ala Leu Gln Lys

1280 1285 1290

Gln Gln Tyr Asn Ile Met Glu Glu Asp Leu Met Glu Gln His Lys

1295 1300 1305

Val Arg Gln Lys Gly Thr Trp Glu Asp Ala His Arg Arg Phe Ser

1310 1315 1320

Ala Phe Ser Asp Trp Lys Ala Val Ala Asp Lys Gln Pro Asn Ser

1325 1330 1335

Arg Val His His Pro Cys Arg Val Gly Lys Thr Thr Gly Leu Ser

1340 1345 1350

Thr Ser Arg Lys Trp Thr Ala Trp Leu Lys Thr Glu Thr Gln Lys

1355 1360 1365

Tyr Lys Ser Met Asp Lys Asp Ser Asn Lys Gln His Gly Gly Leu

1370 1375 1380

Pro Lys Asp His Met Asp Val Ala Asp Lys Gln Ala Ala Ser Ser

1385 1390 1395

Asn Asn Arg Arg Ile Pro Arg Arg Thr Arg Lys Met Ser Ser Arg

1400 1405 1410

Arg Met Gln Val Arg Val Gly Ser Leu Gln Asp Leu Gly Phe Leu

1415 1420 1425

Asp Asp Gly Phe Ser Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Asp Thr Met

1430 1435 1440

Gly Ser Thr Tyr Pro Arg Ala Tyr Phe Arg Cys Thr His Arg His

1445 1450 1455

Val Lys Gly Cys Leu Ala Thr Lys Gln Val Gln Arg Thr Ser Asn

1460 1465 1470

Asp Pro Leu Leu Phe Asp Val Val His Asn Gly Glu His Thr Cys

1475 1480 1485

Leu Asp Ser Val Gly Ser Pro Ala Thr Ser Gly Ser Gln Val Thr

1490 1495 1500

Tyr Glu Gly Ile Asn Ala Thr Ala Ala Thr Ser Cys Gly Gln Val

1505 1510 1515

Thr Leu Glu Glu Val Ser Arg Gly Thr Pro Gly Val Gly Phe Met

1520 1525 1530

Ser Pro Ala Val Phe Ser Ser Gln Val Met Ser Glu Val Val Ser

1535 1540 1545

Gly Ser Gly Ser Thr Ala Gly Phe Ser Gly Asp Glu Val Gly Met

1550 1555 1560

Pro Asp Pro Asp Arg Asp Gly Tyr Glu Phe Asp Arg Val

1565 1570 1575

<210> 4

<211> 247

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

gcacactgca tcacatggta cttgatttta tcaaacacaa gtccttagaa gagaattttg 60

tcatcccaat agatcatagt cagacaactg caccactcgc agacaaggtt cgtcgactgt 120

ctctccactt tggtaattca gaagcaacgc caccaacaaa tatgagacta tcacaagttc 180

ggactctcgc atttttcggg gtcattgagt gtttgccttc cgttatagag tttcggcttc 240

ttcaagt 247

<210> 5

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ccggggatcc tctagagtga tgtttgatag cacacaaggt a 41

<210> 6

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ccaagcttgc atgcctgcag atgccatcct ctctactcgg tcttt 45

<210> 7

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

atggagcagc agcagagctt cgagg 25

<210> 8

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

ttacgtgcta acattatcaa gtgga 25

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

aaggaggtgc gcgagctgtc 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tgacaagtgc tcgatgccaa 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

gcagagcctg gttcaaaaag 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

cgcctctagc gagagctatg 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

gaaaccagca aagaaagaaa 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

cgtagcagtc atgcaattta 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gttgctgcaa acaacaataa 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

atgtagatcg caacccatag 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

ctagaacctt ttcagaaccg 20

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

gaaaaagaaa aatgttcacg a 21

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

aaaacaaata atggtgaccg 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

agccagaaat atgctgatgt 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

atgtttgtaa ccgactctgg 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ttttcactag caaaagggtc 20

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

caaccaccca gtattgttct 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

agctgcagac ttttaacgac 20

<210> 25

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

gtttgtagca gacaacaaca ac 22

<210> 26

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

accaaagagt tagctatgga ca 22

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

ggatctcaga catgtacgct 20

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

cattactagg taccggcttg 20

<210> 29

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

aactgctcaa gagctgtagg 20

<210> 30

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

aggaacctgc ttacaaatca 20

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

tctttgttca caaatcacga 20

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

aatatgacca agcctgagtg 20

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

gtaggagtac cacgcaacat 20

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

gtaatttgtt tatccaccgc 20

<210> 35

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

atgtgtatgt gtgaatggtt gt 22

<210> 36

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gttttaggat tttaggggtt tt 22

<210> 37

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

tgctgtgttg ctgagataag 20

<210> 38

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

tatgttacac ccaccggtat 20

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

gctgctcctg ctctagtaaa 20

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

aagtaataag cgcaccaaac 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

aggagagcgg caaggactac 20

<210> 42

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

gagaatcaca ggaaggcacg 20

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

aatccatcga tagcaagaga 20

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

tcattcatcc aaaacatcaa 20

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

ggtcaatcaa cgaccagtat 20

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

acacaagaag aaaacggaaa 20

<210> 47

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gttctgcatt acctggaaag 20

<210> 48

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

ccaattatgg ttggtgttct 20

<210> 49

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

tcgatggtca aacctaaaat 20

<210> 50

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

acacttttgc aggttgaaat 20

<210> 51

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

cacctgttga gaggaagaag 20

<210> 52

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

agaatgccaa actgattcat 20

<210> 53

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 53

agaaccatcc gaataggccg agac 24

<210> 54

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 54

agaggtggat tgggcatgga aac 23

<210> 55

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 55

cggtggtggt gaagatttga a 21

<210> 56

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 56

gacgaacctt gtctgcgagt g 21

<210> 57

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 57

ggcaaagcaa tggatagccg aagg 24

<210> 58

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

tgcaacaagc tgggcaaatg aac 23

<210> 59

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

cgaggacacc aaccagatag c 21

<210> 60

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 60

ccaggcagaa agacaggaaa a 21

<210> 61

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 61

ttggatgggc atttttccgc 20

<210> 62

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 62

tccaagatac aagtgtccgg c 21

<210> 63

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 63

gtcccttgcc aacctgtcag gatag 25

<210> 64

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 64

ctgcatgcca ttcttcagaa gctaa 25

<210> 65

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 65

tttgttacaa cccaggggg 19

<210> 66

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 66

ttgtgtggcg aaagaaacag 20

<210> 67

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

gcatagcatc gcatatgcat 20

<210> 68

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

gccacgcttg gacaagatat 20

<210> 69

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 69

agagtgcacc atccgtgccg ggttg 25

<210> 70

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 70

actcccgctt ccgcttacca cctcg 25

<210> 71

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 71

tgggaagatg ctcacagaag gta 23

<210> 72

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 72

ctcaaactcg gtcaaattcg tag 23

<210> 73

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 73

tttttttttt ttttagctag cgcacactgc atcacatggt a 41

<210> 74

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 74

gattcttctt ccgttgctag cacttgaaga agccgaaact c 41

<210> 75

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 75

tgctcttgta tttctgtgtc tctgt 25

<210> 76

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 76

cgtcaaaaag gcacgtggga agatg 25

<210> 77

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

gctactgaag cccgatgtct c 21

<210> 78

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

tctccagctc cattgattgc 20

Claims (5)

1.小麦条锈病抗性基因YrU1，其特征在于：其包括自身启动子和5′-UTR、3′-UTR在内的基因全长的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利按要求1所述的小麦条锈病抗性基因YrU1，其特征在于：其编码区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.由权利要求2所述的小麦条锈病抗性基因YrU1编码的蛋白，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.3 所示。

4.含有如权利要求1所述小麦条锈病抗性基因YrU1的载体。

5.如权利要求1所述小麦条锈病抗性基因YrU1在小麦抗性育种中的应用。

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