CN107163113B - 水稻半卷叶控制基因srl9及其叶形改良的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水稻半卷叶控制基因SRL9编码的蛋白质，该蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。本发明还同时公开了编码上述蛋白质的基因，该基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。本发明还同时公开了上述基因的用途：用常规杂交技术构建基因替换的水稻，所述基因替换水稻的叶形得以改良，水稻叶片发生卷曲；所述基因替换水稻的结实率和产量得以提高。

Description

水稻半卷叶控制基因SRL9及其叶形改良的用途

技术领域

本发明属于植物基因工程领域。具体地说，本发明涉及一种利用半卷叶突变体图位克隆获得水稻半卷叶控制SRL9基因，以及利用转基因互补实验确认该基因的功能；同时还涉及利用该基因开展分子设计育种，塑造水稻理想株型，提高农作物的产量。

背景技术

水稻是单子叶模式植物，其叶片的外部形态结构由叶片、叶鞘、叶枕以及叶舌和叶耳组成。其中叶片包括表皮、叶肉和叶脉三个部分。叶片极性发育决定叶长、叶宽、叶片卷曲度等叶片形态建成的主要指标。水稻叶片为等面叶，叶片角质层、各级维管束数目和结构、叶肉细胞、近轴面泡状细胞及远轴面厚壁组织等都可能导致正常叶片的极性改变。近年来，科学家们在分子水平对叶片形态建成调控机制开展研究，分离与克隆了多个与叶片形态发育调控相关的基因。自2009年Zhang等借助水稻叶形突变体正向克隆第一个卷叶基因SLL1以来，科学家们已先后完成了20余个与叶片形态发育相关基因的克隆及调控机制的初步研究。

植物叶片的适度卷曲，尤其是最上面三片功能叶的适度卷曲，会使叶片直立上冲，增大整个群体的受光面积，不遮阴，使下部叶片也能够有光能吸收，从而提高光能产物的吸收，提高产量潜力。大部分卷叶基因与近轴面泡状细胞的发育调控相关，其数目和大小的改变导致叶片出现正卷或反卷；ACL1基因突变，其突变体的叶片近轴面泡状细胞的数目和大小增加，使表皮细胞扩张，导致植株的叶片向外卷曲；ROC5，编码一个HD-ZIP IV基因家族成员(第四类亮氨酸拉链同源框家族)，该基因的过表达植株的叶片上表皮泡状细胞的数目和大小都有所减少，造成内卷的表型；而共抑制植株的叶片泡状细胞数目和大小却都有所增加，导致叶片反卷，也说明ROC5基因具有保守性。RL14，编码一个2OG-Fe(II)氧化酶家族的蛋白，其主要在叶片维管束周边的叶肉细胞中积累表达，叶片近轴面的泡状细胞失水皱缩，且叶片中纤维素和木质素的含量也发生了显著的变化，表明可能是RL14通过影响叶片次生细胞壁的组分含量而影响叶片的水分运输，使叶片泡状细胞的形态发生异常，最终导致植株的叶片向近轴面卷曲。SRL1编码一个糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白，通过负向调节编码液泡H+-ATPase亚基和H+-焦磷酸酶基因的表达，进而抑制叶片中泡状细胞形成，调控叶片卷曲。OsZHD1，编码一个锌指同源结构域类同源盒转录因子，过表达植株的叶片近轴面泡状细胞数目增加，并且排列异常，导致叶片向远轴面卷曲，造成叶片反卷的表型出现。MYB103L，编码一个R2R3型MYB转录因子，过表达植株的叶片泡状细胞变小，导致叶片正卷，且体内的纤维素合成酶相关基因的表达量受到影响，且纤维素含量增加，而干涉植株的叶片纤维素含量和机械强度都有所降低。SLL2定位在第7染色体上，该基因的突变导致从6叶期开始出现内卷，伴随着光合作用的增强及株高和分蘖数目的减少，其组织细胞学分析表明，泡状细胞的缺收缩是导致叶片内卷的主要原因。REL1基因编码的蛋白，能够通过协调油菜素内酯信号调控叶片的形态，rel1突变体中泡状细胞数目和大小都增加，导致叶片反卷。REL2基因编码一个包含DUF630和DUF632结构域的功能未知蛋白，rel2近轴面表皮的泡状细胞数目增加，中部泡状细胞减小，导致叶片正卷。还有一部分基因，通过调控近-远轴面不同组织的发育，影响叶片卷曲度，包括SLL1、ADL1、OsAGO7、SRL2等。其中，SLL1编码一个属于KANADI家族SHAQKYF类MYB转录因子，该基因的突变导致叶片远轴面的厚壁组织细胞程序性死亡，不能形成厚壁细胞，导致叶片极端的向近轴面卷曲。ADL1编码一个类钙蛋白酶半胱氨酸蛋白酶，该基因突变导致远轴面的叶肉细胞和上皮细胞近轴化，分化成类泡状细胞，使叶片向远轴面卷曲，是维持叶片近远轴发育的重要基因。OsAGO7编码一个属于Argonaute(AGO)蛋白，控制叶片近-远轴面的发育，使叶片向上卷曲，增强了叶片的直立性。SRL2基因主要在叶片的维管束、叶鞘、根中表达，特别是在它们的厚壁细胞中表达，通过调控远轴面厚壁组织的分化，使远轴面近轴化，导致叶片正卷。此外，仍有一小部分基因，如CFL1(通过调控细胞质的发育而影响叶片卷曲。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种EMS诱变获得水稻半卷叶突变体中克隆的新半卷叶基因SRL9，属于KANADI家族MYB转录因子，其通过调控叶片近轴面泡状细胞和维管束发育，调节叶片卷曲程度。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种水稻半卷叶基因SRL9编码的蛋白质，该蛋白质具有SEQ ID No：2所示的氨基酸序列。

作为本发明的水稻叶形控制基因SRL9编码的蛋白质的改进：氨基酸序列还包括在SEQ ID No：2所示的氨基酸序列中添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸或其他物种中的同源序列而生成的氨基酸序列或衍生物。

本发明还提供了编码上述蛋白质的基因，该基因具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。

作为本发明的基因的改进：核苷酸序列还包括在SEQ ID No：1所示的核苷酸序列中添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物。

本发明还提供了含有上述基因的质粒。

本发明还提供了含有上述基因的植物表达载体。

本发明还提供了一种宿主细胞，该宿主细胞含有基因序列，该细胞为大肠杆菌细胞、农杆菌细胞或植物细胞。

本发明还提供了上述基因的用途---用于改良水稻叶形，用杂交技术(常规杂交技术)构建基因替换的水稻，所述基因替换水稻的叶形得以改良，水稻叶片发生卷曲。所述基因替换水稻的结实率和产量得以提高。

具体的说：本发明所提供的从水稻突变体中克隆的半卷叶新基因SRL9，具有SEQID No：1所示的核苷酸序列。也包括在取代一个核苷酸而产生的突变体等位基因，还含具有相同功能并能达到本发明目的的基因序列。

本发明中SEQ ID No：2所示的蛋白质，还包括其中进行一个或几个氨基酸的替换、插入或缺失氨基酸所获得的功能类似物。

本发明所提供了含有SEQ ID No：1所示序列的基因或含部分该基因片段的载体，如图4所示，该载体可以表达由上述核苷酸序列编码的多肽或同源类似物。

本发明利用EMS诱变获得的半卷叶突变体，通过图位克隆得到具突变位点的半卷叶控制基因SRL9，最终验证基因功能。此发明有助于阐明水稻叶形建成的分子机理，并通过分子设计育种改良叶形，为理想株型高产育种奠定理论和材料基础。

实现本发明的具体技术步骤如下：

一、水稻卷叶突变体SRL9的分离和遗传分析

本发明所采用的水稻半卷叶突变体(Semi-rolled leaf 9，Srl9)是将籼稻品种“蜀恢527”经1％(W/V)浓度的化学诱变剂(ethyl methane sulphonate，EMS)处理后，再通过大量筛选而得到的表型稳定的半卷叶突变体。该突变体Srl9叶片具半卷特性，其如图1所示。杂交之后产生F₁代自交产生的F₂代群体，F₂代群体共4319株，其中正常叶为3274株，卷叶为1045株，经卡平方测验，正常叶与半卷叶个体的分离比符合3:1，表明我们所得到的是一个符合单基因控制遗传规律的半卷叶隐性突变体。

二、图位克隆控制水稻叶形的SRL9基因

1、SRL9基因的初步定位

为了分离SRL9基因，本发明首先建立了一个大的多态性高的定位群体，由Srl9与粳稻品种日本晴(Nipponbare)杂交后自交而形成的F₂群体，再通过图位克隆的方法，并利用STS、SSR等分子标记对SRL9位点进行初步定位，将其初步定位在第9染色体的长臂上，并介于RM3769和RM5122两标记之间。

2、SRL9基因的精细定位

通过对BAC克隆AP005904的序列分析，发展了3个新的SSR标记和15个STS标记，如表1所示，将SRL9精确定位于STS(Sequence Tagged Site)标记SR9-5904-18(F:GTCATCAGTCACCGTGTTCA；R:CATGCGGAATCTGTAACTTG)和SSR分子标记SR9-5904-S3(F:CGTCAGCCTACACATCATCTC；R:CTTGAGATTGGTTTGCATCAT)之间，13.834Kb的范围之内。通过测序分析此区段的开放阅读框(ORF)推测候选基因，将SRL9基因精确定位于BAC克隆AP005904的103061-108515的位置(图3)。

3、SRL9基因的鉴定和功能分析

利用pCAMBIA1300质粒构建SRL9互补载体。以蜀恢527的基因组DNA为模版，用序列为5'-CGAGATCTTAGATTATTTTTATTCGTATATAAG-3'和5'-GGCCTGCAGGGATTAAAGAAAGAAGC-3'的引物进行PCR扩增，获得的7989bp片段PCR扩增产物用BglII和SdaI进行完全双酶切，得到全长为7980bp的基因组DNA片段，包含SRL9基因的启动区的1810bp，5455bp的编码区，715bp的SRL9基因的下游序列，将该片段后连到pCAMBIA1300载体多克隆位点BamHI和PstI之间获得pCAMBIA1300-SRL9互补载体(BglII与BamHI，SdaI与PstI分别为同尾酶)(图4)。

通过转基因技术，进行功能互补的转基因研究，结果表明本发明获得了使突变体恢复正常叶片形态的转基因水稻(图5)，证明了本发明正确克隆了SRL9基因，明确SRL9基因的DNA序列(SEQ ID No：1)和cDNA序列(SEQ ID No：3)，氨基酸序列分析表明SRL9基因编码KANADI基因家族MYB转录因子(SEQ ID No：2)。

综上所述，本发明从水稻半卷叶突变体(Semi-rolled leaf 9，Srl9)中克隆并鉴定了控制水稻叶片卷曲程度的基因，将其命名为SRL9，并通过互补实验进行基因功能验证。在水稻中，平展叶片的SRL9基因单碱基替换后编码的氨基酸产生变化，基因功能导致叶片近轴面泡状细胞发育异常，造成半卷曲的表型。图位克隆的结果表明，该基因编码的Myb转录因子，通过调控近轴面泡状细胞和远轴面叶肉细胞发育，控制水稻叶片卷曲度。SRL9基因单碱基突变后，叶片中泡状细胞数目增多，导致叶片呈半正卷状态，改变了平展野生型平展叶片的受光姿态，叶片在相同光照情况下，可以增加受光面积，提高光合作用效率，增加粮食产量。叶形作为作物重要的农艺性状，是理想株型的重要组成部分，在品种改良和分子设计辅助育种中占有重要的地位。而适度卷曲的叶片是水稻理想株型的重要内容之一，改良植物叶片的卷曲程度，从而提高光合作用效率，加速干物质的积累，提高作物产量，具有广阔的应用前景。该发明可以为水稻株型改良和分子设计育种提供新的基因资源和理论指导。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是水稻苗期半卷叶突变体Srl9和野生型的表型图；

图2是半卷叶基因SRL9在水稻第9染色体长臂上的初定位图；

图3是半卷叶基因SRL9在水稻第9染色体上的精细定位图；

图4是互补载体pCAMBIA1300-SRL9质粒图谱；

图5是功能互补实验T2代转基因互补植株表型图；

图6是利用半卷叶基因SRL9改良日本晴叶形技术路线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：水稻半卷叶调控基因SRL9的克隆

1、水稻材料

水稻(Oryza sativa L.)突变体Srl9(Semi-rolled leaf 9,Srl9)，其原始野生型材料为籼稻品种“蜀恢527”。水稻(Oryza sativa L.)突变体Srl9是将籼稻品种“蜀恢527”经1％(V/V)浓度的化学诱变剂(ethyl methane sulphonate，EMS)处理后，再通过大量筛选而得到的表型稳定的突变体Srl9。该突变体除了叶片呈半卷曲外，其它表型均与野生型相似，如图1所示。

从图1中，我们可以看出，在水稻的苗期，突变体的叶片呈现半卷曲的状态。

2、分析和定位群体

纯合的半卷叶突变体Srl9与粳稻常规品种日本晴(Nipponbare)进行杂交，F₁代自交，得到F₂群体，F₂代群体共4319株，其中正常叶为3274株，卷叶为1045株。选择该1045株半卷叶突变体Srl9表型植株作为定位群体。在分蘖期每株取1克左右的嫩叶，用来提取总DNA。

3、SSR和STS标记定位SRL9基因

采用改良的CTAB法提取水稻叶片用于基因定位的基因组DNA。取3-5cm水稻叶片，剪碎放入2.0ml eppendorf离心管中，加入1粒钢珠，700ul提取液，置于TissueLyser IIsystem组织研磨器，研磨2-3min，65℃恒温水浴40-60min，再用氯仿萃取，吸取上清液，加入等量冰冻的异丙醇，离心，用70％酒精洗涤，晾干即可加入150μl超纯水作为DNA样品。每一个PCR反应用2-3μl DNA样品。

SRL9基因的初步定位：在SRL9与日本晴(Nipponbare)组合的F₂群体中随机选取1045卷叶株中的186株，组成的小群体进行SSR分析，根据公布的粳稻和籼稻创建的分子遗传图谱，选取近似均匀分布于各条染色体上的SSR引物，利用MJResearch的PTC-200型梯度热循环仪进行PCR扩增，PCR扩增反应总体积为20μl，其中包括50mmol/L KCl，10mmol/LTris-Cl(pH9.0)，1.5mmol/L MgCl₂，200μmol/L dNTP，50-100ng的基因组DNA，1个单位的Taq聚合酶和0.1μmol/L引物，其余为蒸馏水。扩增程序为94℃预变性4min，进入循环扩增：94℃变性30s，各引物及其退火温度见表1，退火时间30s，72℃延伸40s，循环40次；72℃延伸10min。经5％琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙啶(EB)染色，检测PCR产物的多态性。最终将SRL9初步定位在第9号染色体长臂RM3769和RM5122两分子标记之间。

SRL9基因的精细定位：在Srl9与日本晴(Niponbare)组合的F2群体中共选取1045株(包括初定位的186株)隐性个体，在初定位的基础上继续设计STS标记，通过对籼稻品种9311和粳稻品种日本晴进行序列比对分析，发展了18个新的具有多态分子标记(表1)，其中SSR(Simple Sequence Repeats)分子标记3对，具体为SR9-5904-S1、SR9-5904-S3和SR9-5904-S6；STS(Sequence Tagged Site)分子标记15对，具体为SR9-5321、SR9-5556、SR9-6562、SR9-6453、SR9-5904-2、SR9-5904-5、SR9-5904-8、SR9-5904-10、SR9-5904-11、SR9-5904-12、SR9-5904-13、SR9-5904-18、SR9-5904-24、SR9-5577和SR9-5421。

利用MJResearch的PTC-200型梯度热循环仪进行PCR扩增，PCR扩增反应总体积为20μl，其中包括50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(pH9.0)，1.5mmol/L MgCl2，200μmol/LdNTP，50-100ng的基因组DNA，1个单位的Taq聚合酶和0.1μmol/L引物，其余为蒸馏水。扩增程序为94℃预变性5min，进入循环扩增：94℃变性45s，各引物及其退火温度见表1，退火时间40s，72℃延伸50s，循环35-39次；72℃延伸10min，冷却降温至16℃后备用。经4％-5％琼脂糖凝胶电泳分离和Gelred染色，检测PCR产物的多态性。

最终将SRL9精确定位于AP005904的BAC上，位于STS(Sequence Tagged Site)标记SR9-5904-18和SSR分子标记SR9-5904-S3之间共13.834kb的范围之内。基因定位的分子标记序列如表1所示。

表1、用于基因定位的分子标记序列

4、SRL9基因预测、cDNA全长基因的获得与功能的预测：

根据精细定位的结果，在13.834kb范围内根据Rice Automated AnnotationSystem(http://RiceGAAS.dna.affrc.go.jp)的预测，发现在此区间内只含有1个候选基因，我们设计了这个候选基因的测序引物(见表2)，采用PCR方法分别从Srtl9和野生型籼稻品种蜀恢527基因组中扩增出候选基因片段，委托上海英骏生物技术有限公司进行测序(PCR扩增反应体系和扩增程序参照上文)。分析发现蜀恢527的SRL9基因的DNA片段中，从起始密码子ATG开始的第8个碱基产生了有C到T的替换，导致编码的氨基酸密码子由CCG(Pro，脯氨酸)到CTG(Leu，亮氨酸)的改变。根据BAC克隆AP005904序列的基因注释信息(NCBI)，预测该基因编码KANADI基因家族MYB转录因子，通过调控叶片近轴面泡状细胞和维管束发育，调节叶片的卷曲程度。经过PCR扩增得到了SRL9基因的cDNA全长序列(SEQ ID No：3)。SRL9基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。

该水稻半卷叶基因SRL9编码的蛋白质具有SEQ ID No：2所示的氨基酸序列。SEQID No：2中的“*”表示终止密码子(TAG)。

表2、用于候选基因测序的引物及其PCR退火温度

实施例2：植物转化

利用MJResearch的PTC-200型梯度热循环仪进行PCR扩增。以蜀恢527基因组DNA为模版，用序列为5'-CGAGATCTTAGATTATTTTTATTCGTATATAAG-3'和5'-GGCCTGCAGGGATTAAAGAAAGAAGC-3'的引物PCR进行扩增。PCR扩增反应体系：总体积为40μl，其中包括50mmol/L KCl，10mmol/L Tris-Cl(pH9.0)，1.5mmol/L MgCl2，200μmol/L dNTP，50-100ng的基因组DNA，5个单位的Taq聚合酶和0.1μmol/L引物，其余为蒸馏水。扩增程序：94℃预变性4min，进入循环扩增；94℃变性50s，退火温度60℃，退火时间40s，72℃延伸4min，循环35次；72℃延伸15min，降温冷却至16℃后备用。PCR扩增获得的7989bp长度的产物，用BglII和SdaI进行完全双酶切，得到全长为7980bp的基因组DNA片段，包含SRL9基因的启动区的1810bp，5455bp的编码区，715bp的SRL9基因的下游序列，将该片段后连到pCAMBIA1300载体多克隆位点BamHI和PstI之间获得pCAMBIA1300-SRL9互补载体(BglII与BamHI，SdaI与PstI分别为同尾酶)。

这个质粒通过电击的方法转入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)株系EHA105中转化水稻。我们利用突变体Srl9成熟胚诱导的愈伤组织，经过诱导培养基培养2周后，挑选生长旺盛的愈伤用作转化的受体。用含有双元质粒载体(pCAMBIA1300-SRL9)的EHA105菌株侵染水稻愈伤，在黑暗、25℃条件下共培养3天后，在含有50mg/L Hygromycin的筛选培养基上光照培养14天左右(光照强度为13200LX，温度为32℃)。将预分化的愈伤转至分化培养基上在光照条件下(光照强度为13200LX，温度为32℃)培养一个月左右得到抗性转基因植株。对植株进行鉴定和连续的观察，发现植株叶片恢复了正常的形态，与同一生长阶段的突变体比较，叶片不再卷曲。如图5所示。

实施例3：改良水稻叶形的方法

利用半卷叶突变基因SRL9改良日本晴平展叶片卷曲度，改良方法如图6所示。具体步骤为：以半卷叶突变体Srl9为半卷叶调控基因的供体亲本，以平展叶的粳稻日本晴为半卷叶基因SRL9的受体亲本，杂交后，用日本晴作为轮回亲本连续回交4代再自交2代的基础上，用SR9-5904-18和SR9-5904-S3两个分子标记(两标记之间只含有一个SRL9基因)，筛选含有供体突变体Srl9中的突变基因SRL1片段株系；结合株型，筛选接近日本晴的半卷叶植株，继续与日本晴回交1代并自交，在其后代中用分子标记SR9-5904-18和SR9-5904-S3筛选含有半卷叶突变基因SRL9片段且表现为纯合的日本晴近等基因系，用于农艺性状和产量相关性状调查。通过对筛选到的5个叶形改良后的半卷叶日本晴近等基因系(Near Iso-genicLines，NIL)植株与日本晴株高和生育期的考察发现，两者之间没有显著差异(表3)；从产量性状比对结果看，虽然半卷叶日本晴近等基因系的平均千粒重相对日本晴有一定程度增加，但两者之间差异不显著；但从结实率和每亩产量考察结果来看，除了SRL9-NPB-NIL 1和SRL9-NPB-NIL 5两个株系以外，其余所有叶形改良后的半卷叶日本晴近等基因系株系(SRL9-NPB-NIL 2～4)的平均结实率要显著高于原受体亲本株系日本晴；而所有半卷叶日本晴的近等基因系(SRL9-NPB-NIL 1～5)的每亩产量相对日本晴都显著增加(表4)。说明导入半卷叶调控基因SRL9的叶形改良日本晴能显著增加水稻产量，SRL9基因在水稻叶形改良和产量育种的实践中具有重要的实际应用意义。

表3受体亲本日本晴及叶形改良的日本晴半卷叶近等基因系(NIL)株高和生育期评价

株系名称	全生育期(天)	株高(cm)
			日本晴(NPB)	104.6±0.58	89.4±4.61
SRL9-NPB-NIL 1	105.3±0.58	88.6±3.65
			SRL9-NPB-NIL 2	103.6±1.53	89.8±4.49
SRL9-NPB-NIL 3	104.6±0.87	88.7±3.36
			SRL9-NPB-NIL 4	105.3±0.48	87.9±5.08
SRL9-NPB-NIL 5	104.6±1.56	88.4±3.65

表4受体亲本日本晴及叶形改良的日本晴半卷叶近等基因系(NIL)产量性状调查

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

<110> 中国水稻研究所

<120> 水稻半卷叶控制基因SRL9及其叶形改良的用途

<160> 3

<210> 1

<211> 5455

<212> gDNA

<213> 水稻（Oryza sativa）

<400> 1

atggcgctga tgatgctgca gccgctcgac gccggcggcg gcgcgtcggc gccgccgccg 60

ccgatccgcg ggatacctat ctacaacggc cccggcgggt tcccgttcct gcagccgtcg 120

cccaccgccg gcgacgtcgg ccaccaccac caccaccacc ccaagatggg attctacagc 180

tcgtaccacc acccatccac gtggccctcc acgtcgccgt ccccgctcgc ggcgccgccg 240

ggcgccgcgt cgtcgccgct cgaccccacg gcggcgttcc tctcctcccc ccaccaccgg 300

atgctgtccg ccgcctcggg gaggctcaac ggcatgctct ccgtctccga caccctccgc 360

agctacggcg tccccggcgc cgccgccccc ggcgtcatcg gcggcgcgca ccaccaccac 420

caccacctcc acggcggcca gccgttcgtc ggcgccctcg cgtcccgctt catgcccaag 480

ctccccgcca agcgcagcat gcgcgcgccg cgcatgcgct ggacgagcac cctccacgcc 540

cgcttcgtcc acgccgtcga gctcctcggc ggccacgaga gtacgccccc gccatcatcg 600

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atccaatctt gttcttggca ggggcgacgc ccaagtcggt gctggagctc atggacgtca 720

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tgaaattaat caatcagaat gtcatgagat gatgatgatg atgataataa tactaggata 1920

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gaaccaaagg caacaccaac aaactttggc atgcattgat gatgtatcta aatatgagtt 2040

agtgacatgc aaaattaacc tgccaagtac aacctctatt tattaattcc caaaaaaatc 2100

tcatggagga gaagggagag agagagatag tagtaatgtg tggtgatgca tggctaaaaa 2160

agcttagcaa aagaatgttt tgggggcaca cacacacaca cctggagagg gagttgccta 2220

tgtttaggtg gccaatgttg ttatgtcaca caaaagacca aaaagtcaca caccccatgg 2280

cttggcctcc tcctcccccc ttgacctgtg cagttagcta ggcttcttct cttctctccc 2340

tctgtgtttg gtttttgtgg agctaaaaac attttaaaaa tcttgcaaac attgtgtgta 2400

aaaataggtt cttgggctct gcccattgtc ctctagcttc tctcaaatct ctctctctct 2460

ctctctctct ctctctctct ttctcaaacc tagggagggg agggttactc aggcagggct 2520

ccattatcat ttcttatcaa tgcatggctc tgattccagg gggatggggc tttgacctga 2580

catgccctat tgcctaggaa tatgtaacca aggacttgct gcattcttgg ttctttctcc 2640

ctctctcacc agtctcttca atgccctttt cttccacctc ttgggcaatt attagcatgg 2700

atggagctca ccttttcact ctaccctcta gctgtgatta aatcattgac taatcctaat 2760

tcataaatat aagggattca actatgtaac tagatgtact agatcctagt attactagtg 2820

tgttttgatt ctgttaggag gagtgattag cgtttgtcgt aagtactagt attaaactat 2880

aggggattag tgtagatcat ttttttaaaa attagtgagt gtgcttgggc agattttact 2940

ccagccattg gcgtgaaaac tttgatcttt gggcagcttg gaagcaagta cagttcaacc 3000

tgtccttggc tgcattcgct gctttttctt tctcaggact cactgcaact ttcttgccat 3060

ccccaacacc tccctttcgg tcgtgtttga tcagttgcat tgctggtttc ttcgccgctt 3120

taatttctcc atctttcttc tgttccttat tggctaagta aaaaatcatt ctcagcaatc 3180

aagttttgaa attcaaatta gcttcaggtt ttatctatct aataattctc tgactagttc 3240

tctttctttc aagacctgtt cttgttcaga actcttatgc agttgagagt tcagttgttc 3300

atggaagtaa tggcaatgcc tggtctagtc tttgagcagt atcctcctta tgctcttgat 3360

tttccttcac tttagccgtt tcagtcaaac tttggggaca aattaaagtc agctggtcaa 3420

gtgcatacat accacgtcat attttttaga tgaatccatt gtagtattaa atactagtga 3480

caaaaaaata taactaaatg gcattaaatt gcaaccttct tccccaaaat aattgggcac 3540

aactaccttg cttgcatatg ctttatagta ctcctactta ttacttcctt gaatccatga 3600

ggattccagg aatttggtca ggtcaaatgt ccaggaggaa ttaggctatc tttttttatc 3660

ttcttctttt tcttctaggt agtaggatcg ttgtgcacat ataaacaaaa caaaatagaa 3720

atttaagagg aaaccctccc aaaaaaaata cgactatcaa ttatgagtga ttttacagtt 3780

cttgaggagg tacaatgata cattttctat tttaaaattc agtaactttg atactatgag 3840

gtacagaaat ttgcacaaaa aaaatttggt acctctcaag tacttaaaat atcttatcaa 3900

ttatatttca gcaatgttgt cgttgctcga gttgtgcaaa aacatttctg atgaacaagt 3960

ggagatgtat gcatatttag agagggaaac acatgcattt tttaatatac attctcatga 4020

caaattttgg tgttctcgtc tcattttagt ctagcttaga ttaatggcat ccatatattg 4080

gtgaactgaa acagattgta tatgtccagt cttgaacaaa cttcattata caatgcataa 4140

tcagaaaaga tacagacata tattggcaga tcacataaag tggtgtatct atgattgggt 4200

ggtattttgg acatacaaag tctactggtc cctcatttgt taacagcata catttgttcc 4260

tatcaagaca aaagcacttt acaacagttt ggtagtaagt tggtgttatg tgcgtgtcta 4320

tttagataga gtggtagtaa aggaaggaca ctttttcttg atataccaaa atcacacata 4380

aaaaagaagt gtcattttca tgatcaacat gtggggtatg aacaaaaatg ttctcccccc 4440

tccaaccaac attgaagtca tcacacataa aaagcaaaaa catttaacaa taatacatgc 4500

agacacatgt gcatgcatgt gtggatcacg caaggacata ctaattcaat taggtattca 4560

caattaatta gtgcaggaaa tgacatgtaa ttacaattat atatgcacaa cgatccttgt 4620

gtatttgtgt gacccattgt agtagcattt gattcctttc ttgtgccttt ctctacattg 4680

aattcgatct ttgccaacag cggcttgctg atgagctcct gtgccattgc actgctgagc 4740

tgcaccaaac agggacatct tttaagagct tgttgcctgg aaatgatcca tgtaaccaac 4800

tgttcaggaa gagcacactg tttgctgctc actttagcta aagcaaaact gtgtgcatta 4860

tgcaatgcat atgcatcctt ccatctaccc ctgtgtcctt tgccccccaa actgtgtaac 4920

tacagtttac catgcacata catacaatgc acatctaccc aattgtagca ttgttgcaag 4980

gcctacttca gaattcagtt agtccccaat tgatccaact gcacacatat acatttacat 5040

atacatatac acaaacatac cagcttggag aaaaggttgt aacaactttg ctaaatgtga 5100

gatgtgtaat gtgtgttctt cctcttttca gggacccatg gctgtcgtcc aattcttgca 5160

acatggacgc ccatcgctcc gtaggattgt cttctcctat tgaggtatat atccttacat 5220

tgttcaaagc ttctttcgat tcctagctaa ctgcatatcc atgcagaaat tcattagctc 5280

gcattcattc tgaacatgat gtctgaaact ctgaattttt tttcgtttgt gcgtgtttca 5340

gaacttggaa ccgtgcagat cgagcagctc gcaggtgtcc aaccatgagc tgagtagccc 5400

tagtctcgag ttcactctag ggaggcctga ctggcacggt gcagatcatg attag 5455

<210> 2

<211> 377

<212> PRT

<213> 水稻（Oryza sativa）

<400> 2

Met Ala Leu Met Met Leu Gln Pro Leu Asp Ala Gly Gly Gly Ala Ser Ala Pro Pro Pro

1 5 10 15 20

Pro Ile Arg Gly Ile Pro Ile Tyr Asn Gly Pro Gly Gly Phe Pro Phe Leu Gln Pro Ser

25 30 35 40

Pro Thr Ala Gly Asp Val Gly His His His His His His Pro Lys Met Gly Phe Tyr Ser

45 50 55 60

Ser Tyr His His Pro Ser Thr Trp Pro Ser Thr Ser Pro Ser Pro Leu Ala Ala Pro Pro

65 70 75 80

Gly Ala Ala Ser Ser Pro Leu Asp Pro Thr Ala Ala Phe Leu Ser Ser Pro His His Arg

85 90 95 100

Met Leu Ser Ala Ala Ser Gly Arg Leu Asn Gly Met Leu Ser Val Ser Asp Thr Leu Arg

105 110 115 120

Ser Tyr Gly Val Pro Gly Ala Ala Ala Pro Gly Val Ile Gly Gly Ala His His His His

125 130 135 140

His His Leu His Gly Gly Gln Pro Phe Val Gly Ala Leu Ala Ser Arg Phe Met Pro Lys

145 150 155 160

Leu Pro Ala Lys Arg Ser Met Arg Ala Pro Arg Met Arg Trp Thr Ser Thr Leu His Ala

165 170 175 180

Arg Phe Val His Ala Val Glu Leu Leu Gly Gly His Glu Arg Ala Thr Pro Lys Ser Val

185 190 195 200

Leu Glu Leu Met Asp Val Lys Asp Leu Thr Leu Ala His Val Lys Ser His Leu Gln Met

205 210 215 220

Tyr Arg Thr Val Lys Ser Thr Asp Lys Pro Ala Ala Ser Ser Gly Pro Ala Asp Gly Gly

225 230 235 240

Ser Gly Asp Glu Glu Phe Ala Gly Gly Gly Gln Ala Ala Ser Gly Gly Gly Asp Ser Met

245 250 255 260

Cys Leu Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Ala Ala Phe Ala Glu His Gly Arg

265 270 275 280

Ser Ala Ser Glu Gly Ala Ala Ser Ser Val Gly Gly Gly Gly Gly Gly Asp Met Asp Gln

285 290 295 300

Ser Ser Ala Gly Asn Thr Ser Thr Thr Arg Trp Ser Asn Ser Ser Arg Asp Pro Trp Leu

305 310 315 320

Ser Ser Asn Ser Cys Asn Met Asp Ala His Arg Ser Val Gly Leu Ser Ser Pro Ile Glu

325 330 335 340

Asn Leu Glu Pro Cys Arg Ser Ser Ser Ser Gln Val Ser Asn His Glu Leu Ser Ser Pro

345 350 355 360

Ser Leu Glu Phe Thr Leu Gly Arg Pro Asp Trp His Gly Ala Asp His Asp *

365 370 375

<210> 3

<211> 1134

<212> CDNA

<213> 水稻（Oryza sativa）

<400> 3

atggcgctga tgatgctgca gccgctcgac gccggcggcg gcgcgtcggc gccgccgccg 60

ccgatccgcg ggatacctat ctacaacggc cccggcgggt tcccgttcct gcagccgtcg 120

cccaccgccg gcgacgtcgg ccaccaccac caccaccacc ccaagatggg attctacagc 180

tcgtaccacc acccatccac gtggccctcc acgtcgccgt ccccgctcgc ggcgccgccg 240

ggcgccgcgt cgtcgccgct cgaccccacg gcggcgttcc tctcctcccc ccaccaccgg 300

atgctgtccg ccgcctcggg gaggctcaac ggcatgctct ccgtctccga caccctccgc 360

agctacggcg tccccggcgc cgccgccccc ggcgtcatcg gcggcgcgca ccaccaccac 420

caccacctcc acggcggcca gccgttcgtc ggcgccctcg cgtcccgctt catgcccaag 480

ctccccgcca agcgcagcat gcgcgcgccg cgcatgcgct ggacgagcac cctccacgcc 540

cgcttcgtcc acgccgtcga gctcctcggc ggccacgaga gggcgacgcc caagtcggtg 600

ctggagctca tggacgtcaa ggatctgacg ctagcgcatg tcaagagcca cctccagatg 660

tatcgcaccg tgaagagcac tgacaagcct gcagcctctt cagggccggc ggacggcggc 720

tccggcgacg aggagttcgc cggcggcggg caggcggcgt cgggcggcgg cgacagcatg 780

tgcctgaggg gtggcggcgg cggcggggtg gccgcggcgg cgttcgcgga gcacggccgg 840

tcggcgtcgg agggcgccgc cagctcggtc ggcggcggcg gcggcggcga catggaccag 900

tcgtcggccg gcaacaccag caccaccagg tggagcaact cctcaaggga cccatggctg 960

tcgtccaatt cttgcaacat ggacgcccat cgctccgtag gattgtcttc tcctattgag 1020

aacttggaac cgtgcagatc gagcagctcg caggtgtcca accatgagct gagtagccct 1080

agtctcgagt tcactctagg gaggcctgac tggcacggtg cagatcatga ttag 1134

Claims (7)

1. 水稻半卷叶控制基因SRL9编码的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。

2.编码如权利要求1所述蛋白质的基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列如SEQ IDNo：1所示。

3.含有权利要求2所述基因的质粒。

4.含有权利要求2所述基因的植物表达载体。

5.宿主细胞，其特征在于：该宿主细胞含有权利要求2所述的基因序列；该细胞为大肠杆菌细胞或农杆菌细胞。

6.如权利要求2所述基因的用途，其特征在于：用杂交技术构建基因替换的水稻，所述基因替换水稻的叶形得以改良，水稻叶片发生卷曲。

7.根据权利要求6所述的基因的用途，其特征在于：所述基因替换水稻的结实率和产量得以提高。

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