CN114540375B - 调控玉米开花期和光周期适应性的基因、分子标记及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了调控玉米开花期和光周期适应性的基因、分子标记及其应用。本发明发现ZmELF3.1基因具有调控玉米开花期和光周期适应性以及调控玉米株高、叶片数、节数或穗柄长度等方面的应用。本发明还提供了通过影响ZmELF3.1基因在玉米组织中的表达丰度进而实现调控玉米开花期和光周期适应性的两个分子标记TE_11.8k或TE_6.5k，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。本发明还进一步提供了这两个分子标记的侧翼DNA序列以及特异性检测引物。本发明更进一步提供了应用ZmELF3.1基因或分子标记在调控玉米开花期和光周期适应性或培育广适性玉米新品种等方面的应用。

Description

调控玉米开花期和光周期适应性的基因、分子标记及其应用

技术领域

本发明涉及调控玉米开花期和光周期适应性的DNA序列，尤其涉及调控ZmELF3.1基因表达量的基因，分子标记及其检测引物，本发明进一步涉及它们在调控玉米开花期和光周期适应性中的应用，属于玉米开花期和光周期适应性调控的基因，分子标记及其应用领域。

背景技术

玉米是集粮食、饲料、工业原料于一身的重要农作物，是目前中国、也是全球种植范围最广、需求最大的谷类作物之一。适宜的开花期是决定玉米适应不同生态环境种植、继而保证其产量供应的关键因素之一。中国共有6大玉米种植区，其中北方春播玉米区和黄淮海平原夏播玉米区是两大玉米主产区。对于北方春播玉米区，适当早花能保证玉米有足够的时间进行灌浆并避开后期的霜冻，利于高产；对于黄淮海夏播玉米区，受“一年两熟”耕作制度的影响，适当早花是保证玉米产量和保障后茬作物正常轮作的关键。此外，研究表明，适当早花还有利于降低玉米空杆率和加速籽粒脱水，并且针对玉米开花期基因的改良还有助于玉米根系性状的改善。对美国和中国不同年代玉米自交系的研究还表明，开花期是玉米育种中重要的选择性状，并且早花是近现代中美玉米育种历程中共有的选择趋势。因此，发掘控制玉米花期的关键基因、更好地理解玉米花期的调节机制，对于培育、筛选和改良适合不同生态区种植的玉米新品种至关重要。

玉米大约于9000年前在墨西哥西南部由其野生祖先大刍草驯化而来。大刍草是典型的热带植物，其开花诱导对日照长度（光周期）极度敏感——短日条件(SD)促进其开花、长日条件(LD)抑制其开花(在北方长日条件下多数大刍草甚至不能正常开花)。而现在的玉米种植已经延伸贯穿整个世界——最南到南纬40°的智利，最北到北纬58°的加拿大(Huang et al., 2018)。而最主要的玉米种植区，如美国的黄金玉米带、中国的黄淮海夏玉米区及北方春玉米区，都集中在中纬度的温带。这与玉米驯化过程中光周期敏感性的降低，及育种过程中对开花期针对性的选择是分不开的。

鉴于花期对于玉米生产的重要性，前人已对玉米花期的遗传和分子调控机制开展了大量研究。玉米开花期是由多基因控制的复杂数量性状，并且有多条信号途径参与玉米的开花调控。然而，目前仅有少数的玉米开花期基因和数量性状位点 (QTL) 被克隆和功能验证。

发明内容

本发明的目的之一是提供ZmELF3.1基因在调控玉米开花期和光周期适应性中的应用；

本发明的目的之二是提供调控ZmELF3.1基因在玉米表达量的分子标记及其侧翼序列；

本发明的目的之三是提供通过调控ZmELF3.1基因表达量以实现调控玉米开花期和光周期适应性或培育早花和高纬度地区适应性的玉米新品种的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明的第一方面是提供了ZmELF3.1基因在调控玉米开花期和光周期适应性中的应用。

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述的ZmELF3.1基因在调控玉米开花期和光周期适应性中的应用包括：将ZmELF3.1基因在玉米进行过表达或超表达，促进玉米早开花；或者将玉米中的ZmELF3.1基因进行突变或敲除ZmELF3.1基因，使玉米开花延迟。

本发明的第二方面是提供了ZmELF3.1基因在调控玉米株高、叶片数、节数或穗柄长度等方面的应用；

作为本发明一种优选的具体实施方案，所述ZmELF3.1基因在调控玉米株高、叶片数、节数或穗柄长度中的应用包括：将玉米中的ZmELF3.1基因进行突变或敲除ZmELF3.1基因后导致玉米株高增加、玉米的总叶片数增加（尤其是增加玉米植株果穗之下的叶片数），玉米的总节数增加（尤其是增加玉米植株果穗之下的节数增多）或者使玉米的穗柄长度增长等；相反，还可将ZmELF3.1基因在玉米进行过表达或超表达，降低玉米株高、减少叶片数、减少节数或使玉米穗柄长度变短等。

至于如何提高ZmELF3.1基因在玉米中的表达量或者降低ZmELF3.1基因在玉米中的表达量，这均是本领域技术人员可以通过各种常规的技术手段来实现，譬如，通过构建ZmELF3.1基因的过表达载体，使ZmELF3.1基因在玉米中过表达或超表达；另外，本领域技术人员可以将ZmELF3.1基因的多核苷酸进行优化以增强在玉米中的表达效率。

本领域技术人员可通过基因编辑技术或基因敲除技术等将植物体内的ZmELF3.1基因进行功能缺陷突变将玉米中的ZmELF3.1基因进行突变或敲除ZmELF3.1基因。

在高纬度地区栽培玉米需要有较早的开花期，以满足开花后灌浆及成熟所需时间的要求，和避开后期的霜冻天气，是高纬度地区栽培玉米必需的性状；并且部分温带地区受“一年两熟”耕作制度的影响，适当早花是保证玉米产量和保障后茬作物正常轮作的关键；因此，同时有TE_11.8k和TE_6.5k存在于玉米ZmELF3.1启动子区的变异类型能促进玉米早开花，也在促进玉米的地域适应性方面具有广阔应用前景，并可能应用于广适玉米新品种的培育领域。

本发明中所述的调控玉米开花期和光周期适应性包括使玉米开花提早和更容易向高纬度地区适应。

本发明中所述的玉米光周期适应性是指玉米响应日照长度的变化而做出的开花期方面的变化响应，尤其是指玉米由低纬度热带短日照条件下转到高纬度温带长日照条件下，适应高纬度温带长日照条件正常开花的特性。

作为参考，本发明提还供了一种培育早花和高纬度地区适应性的玉米新品种的方法：通过提高ZmELF3.1基因在玉米中的表达量从而提早玉米开花期并增强高纬度地区适应性；因此，其它的通过改变ZmELF3.1基因在玉米中的表达量来达到提早玉米开花期和增强高纬度地区适应性的方法都应属于本发明的保护范围；包括但不限于利用其它的组成型或组织特异的启动子和ZmELF3.1构建的表达盒驱动ZmELF3.1基因在玉米中表达，或利用其它的自然变异来改变ZmELF3.1基因在玉米中表达，或通过对ZmELF3.1基因的启动子进行基因编辑以到达改变ZmELF3.1基因在玉米中表达的方法，或通过RNAi来降低ZmELF3.1基因在玉米中表达的方法。

本发明中所述ZmELF3.1基因，其B73参考基因组中的核苷酸序列为SEQ ID No.15所示，其编码区的核苷酸序列为SEQ ID No.16所示，其编码蛋白的氨基酸序列为SEQ IDNo.17所示。

本发明进一步对ZmELF3.1基因上游的序列进行分析，发现在以B73为代表的22个自交系中，ZmELF3.1基因上游区域存在一个6.5kb的NonLTR/L1逆转座子（TE_6.5k）及一个11.8kb的LTR/Gypsy逆转座子（TE_11.8k）插入，逆转座子TE_11.8k及TE_6.5k的插入可调控ZmELF3.1基因的表达量变化，进而调控玉米开花期和光周期适应性。

因此，本发明的第三方面是提供了调控玉米ZmELF3.1基因表达量的两个分子标记TE_11.8k和TE_6.5k；其中，所述分子标记TE_11.8k的多核苷酸为(a)、(b)、(c)或(d)所示：

(a) SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列，或(b)与SEQ ID No.1的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸；或(c)与SEQ ID No.1所示的多核苷酸至少有90%或以上同源性的多核苷酸；或(d) 在SEQ ID No.1所示的多核苷酸的基础上进行一个或多个碱基的缺失、取代或插入的多核苷酸突变体，且该多核苷酸突变体仍具有调控玉米开花期和光周期适应性的功能或活性。

所述分子标记TE_6.5k的多核苷酸为(Ⅰ)、(Ⅱ)、(Ⅲ)或(Ⅳ)所示：

(Ⅰ)SEQ ID No.2所示的多核苷酸序列，或(Ⅱ) 与SEQ ID No.2的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸；(Ⅲ)与SEQ ID No.2所示的多核苷酸至少有90%或以上同源性的多核苷酸；或(Ⅳ)在SEQ ID No.2所示的多核苷酸的基础上进行一个或多个碱基的缺失、取代或插入的多核苷酸突变体，且该多核苷酸突变体仍具有调控玉米开花期和光周期适应性的功能或活性。

本发明的第四方面是提供了分子标记TE_11.8k和TE_6.5k的侧翼DNA序列，其中，分子标记TE_11.8k的侧翼的左侧核苷酸序列选自SEQ ID No.3或SEQ ID No.5或SEQ IDNo.7所示的任何一种，分子标记TE_11.8k的侧翼的右侧核苷酸序列选自SEQ ID No.4、SEQID No.6或SEQ ID No.8所示的任何一种。

所述分子标记TE_6.5k的侧翼的左侧核苷酸序列选自SEQ ID No.9或SEQ IDNo.11或SEQ ID No.13所示的任何一种，分子标记TE_6.5k的侧翼的左侧核苷酸序列选自SEQ ID No.10、SEQ ID No.12或SEQ ID No.14中的任何一种。

所述的分子标记TE_11.8k或/和TE_6.5k通过影响ZmELF3.1基因的表达量进而调控玉米开花期和光周期适应性。

因此，本发明的第五方面是提供了分子标记TE_11.8k或/和TE_6.5k在调控玉米开花期和光周期适应性中的应用。

作为本发明的一种优选的具体实施方案，所述的分子标记TE_11.8k调控玉米开花期和光周期适应性中的应用包括：在玉米ZmELF3.1基因的上游插入分子标记TE_11.8k，使玉米ZmELF3.1基因的表达量升高，进而促进玉米早开花；或者在玉米ZmELF3.1基因的上游插入分子标记TE_6.5k,使玉米ZmELF3.1基因的表达量降低，进而使玉米开花延迟。

本发明的第六方面是提供了一种检测所述的分子标记TE_11.8k或TE_6.5k是否在玉米自然材料中存在的方法，包括通过检测TE_11.8k的插入情况来指示TE_6.5k的插入情况，或者通过检测TE_6.5k的插入情况来指示TE_11.8k的插入情况。

进一步的，含有所述SEQ ID No.1所述的部分或全部DNA序列或SEQ ID No.2所示的部分或全部的DNA序列的突变体的表达盒、含有该表达盒的重组植物表达载体、转基因细胞系和宿主菌均属于本发明的保护范围。

所述的重组植物表达载体是将所述表达盒与质粒或表达载体所构建得到的重组植物表达载体并且能够将所述表达盒转入植物宿主细胞、组织或器官中。

此外，根据分子标记TE_11.8k （SEQ ID No.1）或TE_6.5k（SEQ ID No.2）所设计的引物，或用于检测玉米中 TE_11.8k或TE_6.5k的变异情况的特异性检测引物也应属于本发明的保护范围。

因此，本发明的第七方面是提供针对分子标记TE_11.8k或/和TE_6.5k所设计的特异性检测引物及其应用，应用这些特异性检测引物可对玉米品种中的TE_11.8k或TE_6.5k的变异情况进行检测，从而用于玉米的分子辅助育种。

本发明的DNA序列或其突变体可以用于制备转基因植物。譬如，通过农杆菌介导、基因枪法等方法将含有所述DNA序列或其突变体的重组植物表达载体导入植物细胞、组织或器官中，再将该转化的植物细胞、组织或器官培育成植株，获得转基因植物。用于构建所述植物表达载体的出发载体可为任意一种用于农杆菌转化植物的双元载体或可用于植物微弹轰击的载体等。

为了实施本发明，制备和使用植物表达载体和宿主细胞的常规组合物和方法为本领域技术人员所熟知。

所述重组植物表达载体还可含有用于选择转化细胞的选择性标记基因。选择性标记基因用于选择经转化的细胞或组织。所述的标记基因包括：编码抗生素抗性的基因以及赋予除草化合物抗性的基因等。此外，所述的标记基因还包括表型标记，例如β-半乳糖苷酶和荧光蛋白等。

总之，可将本发明提供的DNA序列、该序列的突变体、分子标记TE_11.8k和TE_6.5k以及检测该分子标记变异情况的特异性检测引物等应用于改良玉米开花期和光周期适应性等方面。

作为参考，本发明提供了一种调控玉米的开花期和光周期适应性抗性的方法，包括：用SEQ ID No.1所示的DNA序列或SEQ ID No.2所示的DNA序列的突变体调控ZmELF3.1基因在玉米中进行表达。

本发明中所述的转化方案以及将所述多核苷酸或多肽引入植物的方案可视用于转化的植物（单子叶植物或双子叶植物）或植物细胞的类型而变化。将所述多核苷酸或多肽引入植物细胞的合适方法包括：显微注射、电穿孔、农杆菌介导的转化、直接基因转移以及高速弹道轰击等。在特定的实施方案中，可利用多种瞬时转化法将本发明的表达盒提供给植物。利用常规方法可使已转化的细胞再生稳定转化植株。

本发明可用于转化任何植物种类，包括但不限于：单子叶植物或双子叶植物，优选是玉米。

本发明所提供的调控玉米开花期和光周期适应性的DNA序列或其突变体能够调控ZmELF3.1基因在玉米中的表达，其对改良玉米开花期和光周期适应性具有重要意义，还可将其进一步应用于玉米新品种的选育。本发明还进一步提供了用作调控ZmELF3.1基因表达的分子标记TE_11.8k和TE_6.5k、检测所述分子标记变异情况的特异性检测引物，这些均能直接应用于定向改良玉米的开花期和光周期适应性，对于玉米新品种选育也具有重要的应用潜力。

本发明通过全基因组关联分析（GWAS）及基因编辑方法证明ZmELF3.1基因在调控玉米开花期方面具有重要作用，同时利用群体遗传学和生物化学的方法进一步证明ZmELF3.1基因启动子区的一个11.8kb的LTR/Gypsy逆转座子（TE_11.8k）具有促进ZmELF3.1基因表达的能力，而一个6.5kb的NonLTR/L1逆转座子（TE_6.5k）具有抑制ZmELF3.1基因表达的能力；两个逆转座子总是连锁在一起出现，而TE_11.8k促进ZmELF3.1基因表达升高的程度要大大高于TE_6.5k降低ZmELF3.1基因表达的程度，两者连锁在一起时的效果是使玉米ZmELF3.1基因表达升高，从而促进玉米早开花。群体遗传学分析还表明，这种两种TE连锁出现的基因型在玉米从“野生种—热带种质—温带种质”的演变过程中表现出等位基因频率逐渐升高的趋势；同时利用世界范围内收集到的1008份玉米农家种进行基因型分析表明，这种两种TE连锁出现的基因型在高纬度温带地区有明显富集的趋势，表明这两个逆转座子在玉米由热带（低纬度地区）向温带（高纬度地区）演化过程中发挥了重要作用。该变异的挖掘对玉米开花期和光周期适应性改良至关重要，并将在早花和地域适应性玉米新品种培育中具有广阔的应用前景。

本发明所涉及到的术语及定义

除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。虽然在本发明的实践或测试中可使用与本文所述者类似或等效的任何方法、装置和材料，但现在描述优选方法、装置和材料。

术语“多核苷酸”或“核苷酸”意指单股或双股形式的脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸及其聚合物。除非特定限制，否则所述术语涵盖含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，所述类似物具有类似于参考核酸的结合特性并以类似于天然产生的核苷酸的方式进行代谢。除非另外特定限制，否则所述术语也意指寡核苷酸类似物，其包括PNA（肽核酸）、在反义技术中所用的DNA类似物（硫代磷酸酯、磷酰胺酸酯等等）。除非另外指定，否则特定核酸序列也隐含地涵盖其保守修饰的变异体（包括（但不限于）简并密码子取代）和互补序列以及明确指定的序列。特定而言，可通过产生其中一个或一个以上所选（或所有）密码子的第3位经混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现简并密码子取代。

术语“同源性”指多核苷酸序列之间在百分比核苷酸位置同一性 (即序列相似性或同一性) 方面的相似性或百分同一性的水平。此处所用的术语同源性也指不同多核苷酸分子之间相似的功能特性的概念，例如具有相似功能的启动子可能具有同源的顺式元件。当多核苷酸分子在特定条件下特异性地杂交以形成双链体分子时，它们是同源的。在这些条件下 (称为严谨杂交条件 )一个多核苷酸分子可以用作鉴定共有同源性的另一个多核苷酸分子的探针或引物。

本发明中所述“严谨杂交条件”意指在所属领域中已知的低离子强度和高温的条件。通常，在严谨条件下，探针与其靶序列杂交的可检测程度比与其它序列杂交的可检测程度更高（例如超过本底至少2倍。严谨杂交条件是序列依赖性的，在不同的环境条件下将会不同，较长的序列在较高温度下特异性杂交。通过控制杂交的严谨性或洗涤条件可鉴定与探针100%互补的靶序列。对于核酸杂交的详尽指导可参考有关文献（Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Probes, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acidassays.1993)。更具体的，所述严谨条件通常被选择为低于特异序列在规定离子强度pH下的热熔点（T_m）约5-10℃。T_m为在平衡状态下50%与目标互补的探针杂交到目标序列时所处的温度（在指定离子强度、pH和核酸浓度下）（因为目标序列过量存在，所以在T_m下在平衡状态下50%的探针被占据）。严谨条件可为以下条件：其中在pH 7.0到8.3下盐浓度低于约1.0 M钠离子浓度，通常为约0.01到1.0 M钠离子浓度（或其它盐），并且温度对于短探针（包括（但不限于）10到50个核苷酸）而言为至少约30℃，而对于长探针（包括（但不限于）大于50个核苷酸）而言为至少约60℃。严谨条件也可通过加入诸如甲酰胺的去稳定剂来实现。对于选择性或特异性杂交而言，正信号可为至少两倍的背景杂交，视情况为10倍背景杂交。例示性严谨杂交条件可如下：50%甲酰胺，5×SSC和1% SDS，在42℃下培养；或5×SSC，1% SDS，在65℃下培养，在0.2×SSC中洗涤和在65℃下于0.1% SDS中洗涤。所述洗涤可进行5、15、30、60、120分钟或更长时间。

在本发明的上下文中，术语“突变体”是含有变化的DNA序列，在所述DNA序列中，优选在基本保持DNA序列的同时缺失、添加和/或替代原始序列的一个或多个核苷酸。例如，可以从DNA序列 5’或 3’末端缺失一个或多个碱基对以产生“截短的”DNA序列；也可以在DNA序列内部插入、缺失或替代一个或多个碱基对。可以通过例如标准DNA 诱变技术或通过化学合成变体DNA序列或其部分而产生变体DNA序列。突变体多核苷酸还包括合成来源的多核苷酸，例如采用定点诱变所得到的突变体，或者是通过重组的方法（例如DNA改组）所得到的突变体，或者是通过自然选择所得到的突变体。

本发明中所述的“多个”通常意味着2-8个，优选为2-4个；所述的“替换”是指分别用不同的氨基酸残基取代一个或多个氨基酸残基；所述的“缺失”是指氨基酸残基数量的减少，也即是分别缺少其中的一个或多个氨基酸残基；所述的“插入”是指氨基酸残基序列的改变，相对天然分子而言，所述改变导致添加一个或多个氨基酸残基。

术语“编码序列”：转录成RNA的核酸序列。

术语“启动子”指多核苷酸分子，所述多核苷酸分子在其天然状态位于可读框 (或蛋白质编码区)的翻译起始密码子上游或5’，并参与 RNA 聚合酶 II及其它蛋白质 ( 反式作用转录因子 )的识别和结合以启动转录。

术语“植物启动子”是在植物细胞中有功能的天然或非天然启动子。组成型植物启动子在植物发育始终的大部分或所有组织中发挥功能。可以将任何植物启动子用作 5’调节元件以用于调节与其可操作地连接的一种或多种特定基因的表达。当与可转录的多核苷酸分子可操作地连接时，启动子一般引起该可转录的多核苷酸分子的转录，其转录方式与该启动子通常连接的可转录的多核苷酸分子的转录方式类似。植物启动子可以包括通过操作已知启动子以产生人工、嵌合或杂合启动子而产生的启动子。这类启动子也可以通过例如向具有其自身部分或全部调节元件的活性启动子加入异源调节元件而组合了来自一个或多个启动子的顺式元件。

术语“顺式元件”指赋予基因表达全面控制的一方面的顺式作用转录 调节元件。顺式元件可以起到结合调节转录的转录因子，反式作用蛋白质因子的作用。一些顺式元件结合超过一种转录因子，而且转录因子可以与超过一种顺式元件以不同的亲和力相互作用。

术语“可操作地连接”指第一个多核苷酸分子 (例如启动子)与第二个可转录的多核苷酸分子(例如目的基因)连接，其中多核苷酸分子如此排列，从而第一个多核苷酸分子影响第二个多核苷酸分子的功能。优选地，两个多核苷酸分子是单个连续多核苷酸分子的部分，且更优选是临近的。例如，如果启动子在细胞内调节或介导目的基因的转录，则该启动子与目的基因可操作地连接。

术语“可转录的多核苷酸分子”指能够被转录为RNA分子的任何多核 苷酸分子。已知以使可转录的多核苷酸分子被转录为功能mRNA分子的方式将构建体引入细胞的方法，所述功能 mRNA分子得到翻译并从而表达为蛋白质产物。为了抑制特定的目的 RNA 分子的翻译，也可以构建能够表达反义RNA分子的构建体。

术语“重组植物表达载体”：一种或多种用于实现植物转化的DNA载体；本领域中这些载体常被称为二元载体。二元载体连同具有辅助质粒的载体是大多常用于土壤杆菌介导转化的。二元载体通常包括：T-DNA转移所需要的顺式作用序列、经工程化处理以便能够在植物细胞中表达的选择标记物，待转录的异源性DNA序列等。

术语“转化”：将异源性DNA序列引入到宿主细胞或有机体的方法。

术语“表达”：内源性基因或转基因在植物细胞中的转录和/或翻译。

术语“重组宿主细胞株”或“宿主细胞”意指包含本发明多核苷酸的细胞，而不管使用何种方法进行插入以产生重组宿主细胞，例如直接摄取、转导、f配对或所属领域中已知的其它方法。外源性多核苷酸可保持为例如质粒的非整合载体或者可整合入宿主基因组中。宿主细胞可为原核细胞或真核细胞，宿主细胞还可为单子叶或双子叶植物细胞。

附图说明

图1a为NAM群体中3号染色体218 Mb（B73_v2）附近开花期性状QTL的定位结果概况。Y为存在QTL，N为不存在QTL。图1b为用NAM群体对开花期性状进行GWAS分析所得的曼哈顿图；其中虚线指示的是ZmELF3.1所在的位置。

图2a为拟南芥AtELF3、玉米ZmELF3.1、ZmELF3.2、水稻OsELF3.1、OsELF3.2的蛋白序列比对；图2b为拟南芥AtELF3、玉米ZmELF3.1、ZmELF3.2、水稻OsELF3.1、OsELF3.2的蛋白序列相似性统计；图2c拟南芥AtELF3、玉米ZmELF3.1、ZmELF3.2、水稻OsELF3.1、OsELF3.2的蛋白系统进化树；图2d拟南芥AtELF3、玉米ZmELF3.1、ZmELF3.2蛋白的PrD及poly Q特征分析和对比。

图3a为ZmELF3.1和ZmELF3.2基因在短日条件下的节律表达情况；图3b为ZmELF3.1和ZmELF3.2基因在长日条件下的节律表达情况；图3c为ZmELF3.1和ZmELF3.2基因的组织表达特异性情况；图3d为ZmELF3.1和ZmELF3.2蛋白的亚细胞定位情况。

图4a为酵母双杂交实验表明ZmELF3.1/ZmELF3.2蛋白可以直接与ZmELF4.1/ZmELF4.2及 ZmLUX1/ ZmLUX2蛋白互作；图4b为双分子荧光互补实验表明ZmELF3.1/ZmELF3.2蛋白可以与ZmELF4.1/ZmELF4.2及 ZmLUX1/ZmLUX2蛋白互作；图4c为烟草瞬时表达实验表明ZmELF3.1/ZmELF3.2，ZmELF4.1/ZmELF4.2及 ZmLUX1/ZmLUX2之间存在蛋白互作；图4d为酵母三杂交实验表明ZmELF3.1/ZmELF3.2蛋白可以与ZmELF4.1/ZmELF4.2及ZmLUX1/ZmLUX2蛋白互作形成玉米中的EC复合体。

图5a为ZmELF4.1和ZmELF4.2基因在长日条件下的节律表达情况；图5b为ZmELF4.1和ZmELF4.2基因在短日条件下的节律表达情况；图5c为ZmLUX1、ZmLUX2、ZmLUX3和ZmLUX4基因在长日条件下的节律表达情况；图5d为ZmLUX1、ZmLUX2、ZmLUX3和ZmLUX4基因在短日条件下的节律表达情况；LD指长日条件先，SD指短日条件下。

图6为所得到的Zmelf3.1单突变体、Zmelf3.2单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体的DNA序列变异情况。

图7a为2018年在河北廊坊长日条件下Zmelf3.1单突变体、Zmelf3.2单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体的开花期表型及统计情况、图7b为2019年在海南三亚短日条件下Zmelf3.1单突变体、Zmelf3.2单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体的开花期表型及统计情况。

图8为2018年在河北廊坊长日条件下和2019年海南三亚短日条件下Zmelf3.1单突变体、Zmelf3.2单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体的叶片数表型的统计情况。

图9为Zmelf3.1单突变体、Zmelf3.2单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体的株高、节数及穗柄长度的表型差异情况；图中的线段代表20cm的比例尺。

图10为过表达ZmELF3.1之后玉米开花期显著提早；左图为野生型和过表达转基因材料中ZmELF3.1基因的表达量分析；右图为2021年河北廊坊长日条件下野生型和ZmELF3.1过表达转基因材料的开花期表型。

图11为Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体及野生型中ZCN8、ZCN7及ZCN12基因在长日（LD，左侧）和短日（SD，右侧）条件下的节律表达模式图。

图12为两个逆转座子TE_11.8k及TE_6.5k在45份具有完整基因组的自交系中的分布情况模式图。

图13a为B73和Ki3自交系中TE_11.8k及TE_6.5k插入情况的模式图；图13b为25个NAM亲本（9个有逆转座子插入，16个无逆转座子插入）中有无逆转座子插入材料间的开花期性状对比情况；图13c为有无逆转座子插入材料间的ZmELF3.1基因表达情况对比；图13d为2015年廊坊长日条件下415份自交系群体中有无逆转座子插入材料间的雄花开花期性状对比情况。415份自交系同时包含热带和温带材料；图13e为2016年海南三亚短日条件下415份自交系群体中有无逆转座子插入材料间的雄花开花期性状对比情况；图13f为3个有逆转座子插入的代表性自交及3个无逆转座子插入的代表性自交系中ZmELF3.1基因的节律表达对比情况；图13g为构建烟草表达载体所用启动子的模式图；图13h为烟草表达实验表明TE_11.8k逆转座子（LTR/Gypsy）可以激活下游报告基因的表达；图13i为烟草表达实验表明TE_6.5k逆转座子（NonLTR/L1）可以抑制下游报告基因的表达；图13j为荧光强度定量分析表明TE_11.8k促进下游基因表达升高的程度要远远高于TE_6.5k降低基因表达的程度，可以断定两者连锁在一起时的效果是使下游基因表达升高。

图14a为18份热带自交系与27份温带自交系间逆转座子TE_11.8k及TE_6.5k附近的核苷酸多态性对比情况；图14b为18份热带自交系与27份温带自交系间逆转座子TE_11.8k及TE_6.5k附近的Tajima’s D对比情况。

图15a为72份大刍草、196份热带自交系、219份温带自交系、327份现代育种自交系中逆转座子插入基因型的频率分布情况；图15b为广泛代表世界范围玉米变异信息的1008份玉米农家种中逆转座子插入基因型的地域分布情况；图15c和图15d为1008份玉米农家种中逆转座子插入情况与种质纬度分布之间的关系分析。含有逆转座子插入的种质在高纬度地区高频率处在，表明TE_11.8k及TE_6.5k逆转座子的插入对玉米种质向高纬度的温带地区扩张有重要贡献。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

以下实施例中所用的自交系可从“中国作物种质信息网”得到相关信息和申请获取对应的种子。

试验例1 ZmELF3.1基因在调控玉米开花期和光周期适应性功能试验

、GWAS分析系表明ZmELF3.1基因是调控玉米开花期和光周期的重要候选基因

为了挖掘调控玉米开花期和地域适应性的关键调控因子，本试验对经典的NestedAssociation Mapping （NAM）群体的QTL定位结果进行了梳理。NAM群体由25个家系的重组自交系（RILs）组成，每个家系约有200个株系，共有约5000RILs，具有极强的QTL挖掘能力。通过对11个环境的开花期性状进行QTL分析，在3号染色体上216.5-221.5 Mb（B73_v2，以218.4 Mb为中心）附近检测到一个显著的花期性状QTL位点（图1a），将其命名为qFT3_218。QTL效应分析表明，qFT3_218在13个家系中被检测到对雄花开花期（DTA）具有调控作用，在14个家系中被检测到对雌花开花期（DTS）具有调控作用。通过将长日条件下和短日条件下开花期均值的差异程度定义为光周期敏感性性状。还发现qFT3_218在10个家系中被检测到对雄花的光周期敏感性具有调控作用，在12个家系中被检测到对雌花的光周期敏感性具有调控作用。有意思的是，qFT3_218更多在温带自交系B73和热带自交系所组成的RILs群体中被检测（图1a），这表明qFT3_218可能是潜在的调控玉米由热带向温带适应性的关键遗传位点。

为了确定qFT3_218的候选基因，本试验充分利用全基因组关联分析（GWAS）遗传分辨率更高的优势，利用5000株系组成的NAM群体的基因型、11个环境的开花期表型、及群体结构数据，结合混合线性模型进行GWAS分析。其中在3号染色体218.8 Mb（B73_v2）附近检测到一个显著的花期性状关联信号S3_218895116（图1b）。该位点与DTA关联的p-value为1.48e-7，与DTS关联的p-value为7.84e-7。候选基因分析表明，S3_218895116上下游50kb范围内只有一个注释基因GRMZM2G045275，并且S3_218895116距离GRMZM2G045275基因只有2.5kb（S3_218895116位于GRMZM2G045275下游）；同源基因分析表明，GRMZM2G045275编码一个与拟南芥中ELF3高度同源的蛋白；因此，将GRMZM2G045275命名为ZmELF3.1，并确定其为qFT3_218的候选基因。

、ZmELF3.1和ZmELF3.2基因表现出昼夜节律的表达模式，且表达受到日照长度的调控

通过BLAST分析，本发明人在玉米基因组中找到了另一个与拟南芥ELF3同源的基因AC233870.1_FG003，将其命名为ZmELF3.2。此前报道显示，ELF3蛋白末端存在PrD功能域，并且在PrD功能域中有多个谷氨酰胺（poly Q）连续出现的氨基酸序列特征，而这种特征在其行使生物学功能方面具有重要作用。然而，对玉米、水稻、拟南芥中的同源蛋白分析表明，禾本科植物玉米、水稻中没有PrD功能域和poly Q的存在（图2），预示着其与拟南芥中ELF3可能存在着功能上的不一样。

将玉米B73自交系分别于光照培养箱中进行长日和短日光照条件下种植，以观察ZmELF3.1和ZmELF3.2基因的节律表达情况。其中，长日条件为16小时光照+8小时黑暗，短日条件为8小时光照+16小时黑暗。通过48小时内间隔4小时连续取样及qRT-PCR分析表明，ZmELF3.1和ZmELF3.2基因都表现出昼夜节律的表达模式，且不同日照长度条件下表达模式不尽相同（图3a和图3b）。其中，ZmELF3.1的表达量远远高于ZmELF3.2基因，表明ZmELF3.1可能在玉米中发挥着更重要的生物学功能。

另外，对不同的玉米组织进行取样并qRT-PCR分析表明，ZmELF3.1和ZmELF3.2基因在不同组织中都有表达，表现为组成型表达的模式（图3c）。不过在所有取样的组织中，ZmELF3.1的表达量都远远高于ZmELF3.2，这再次印证ZmELF3.1可能在玉米中发挥着更重要的生物学功能。进一步亚细胞定位分析表明ZmELF3.1蛋白主要定位在细胞核中（图3d），与其发挥功能的定位模式相符。

、ZmELF3s可以和ZmELF4s及ZmLUXs形成EC复合体

在拟南芥中，ELF3可以和ELF4及LUX形成evening complex（EC复合体，缩写为EC），进而通过其中的转录因子LUX来调控下游基因的表达。EC复合体是植物生物钟的重要组成部分，在调控植物光周期开花及节律生长方面发挥着重要作用。通过BLAST分析，本发明人在玉米基因组中找到了2个ZmELF3基因（ZmELF3.1和ZmELF3.2）、2个ZmELF4基因（ZmELF4.1和ZmELF4.2）及4个ZmLUX基因（ZmLUX1、ZmLUX2、ZmLUX3和ZmLUX4）。酵母双杂交（Y2H）及双分子互补荧光（BiFC）实验分析表明，ZmELF3.1/ZmELF3.2可以和ZmELF4.1/ZmELF4.2及ZmLUX1/ZmLUX2蛋白互作，但ZmELF4.1/ZmELF4.2和ZmLUX1/ZmLUX2之间检测不到直接的蛋白互作信号（图4）。进一步的酵母三杂交实验表明，ZmELF3.1/ZmELF3.2可以作为桥梁介导ZmELF4.1/ ZmELF4.2与ZmLUX1/ZmLUX2之间的蛋白互作形成EC复合体。

qRT-PCR分析表明，2个ZmELF3基因（ZmELF3.1和ZmELF3.2）、2个ZmELF4基因（ZmELF4.1和ZmELF4.2）及4个ZmLUX基因（ZmLUX1、ZmLUX2、ZmLUX3和ZmLUX4）都表现出在长短日照条件下节律表达的模式（图5），表明他们的表达都受到生物钟的调控。其中，ZmELF3.1、ZmELF4.1和ZmLUX1的表达量显著高于其同源基因，表明相对于其同源基因ZmELF3.1、ZmELF4.1和ZmLUX1可能在玉米中起着更重要的生物学功能。

、转基因分析表明ZmELF3.1基因在调控玉米开花相关性状方面发挥重要作用

为了确定ZmELF3s的基因功能，本试验构建了ZmELF3s的基因编辑载体，对玉米中的ZmELF3s进行了基因敲除并得到了Zmelf3.1单突变体、Zmelf3.2单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体（图6）。每种材料各得到3个独立株系。将这些遗传材料种植在河北廊坊（长日条件）和海南乐东（短日条件）环境下，表型观察表明，Zmelf3.1单突变体在长日和短日条件下都比野生型材料显著晚开花8-12天，Zmelf3.2单突变体与野生型相比没有明显的开花期差异（图7）。进一步还发现Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体在长日和短日条件下都比Zmelf3.1单突变体开花更晚（图7），表明ZmELF3.1基因和ZmELF3.2基因之间存在着部分功能冗余，并且ZmELF3.1基因在调控开花期性状方面发挥着主导作用。

此外，本试验还发现，Zmelf3.1单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体的叶片数（图8）、株高、节数及穗柄长度（图9）都显著长于野生型，而Zmelf3.2单突变体的叶片数、株高、节数及穗柄长度等性状与野生型差异不明显，这表明Zmelf3.1还参与到了玉米株高、叶片数、节数及穗柄长度的发育调控。

进一步的通过创制ZmELF3.1基因过表达转基因株系分析表明，与突变体表型相反，ZmELF3.1基因高表达后比野生型材料显著的提早开花（图10）。

、EC复合体调控玉米重要的光周期适应性基因的表达

报道显示，玉米中的ZCN8、ZCN7及ZCN12是重要的成花素基因，是玉米开花过程中关键的信号整合者和开花促进因子。通过对野生型和Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体材料48小时连续节律取样，及qRT-PCR分析表明，ZCN8、ZCN7及ZCN12在玉米Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体材料中的表达量显著降低，并且节律表达的模式也几乎消失（图11）。因为ZCN8、ZCN7及ZCN12是重要的成花促进因子，这可能是玉米Zmelf3.1单突变体及Zmelf3.1 Zmelf3.2双突变体晚花的重要原因。

试验例2 调控ZmELF3.1基因表达的ZmELF3.1基因上游的逆转座子的鉴定以及遗传效应

、ZmELF3.1基因上游两个逆转座子的发掘

利用平均>55×的PacBio SMRT reads数据、>94×的二代Illumina 150bp双末端测序数据、及>139×的BioNano单分子数据，对世界范围内广泛使用的12 个玉米骨干自交系亲本进行全基因组组装。这12个自交系为：PH207、A632、OH43、Zheng58、Ye478、Dan340、Huangzaosi、Chang7-2、Jing92、Jing724、Xu178、S37。加上已发表的B73 、Mo17、W22、四个欧洲玉米基因组及26个NAM群体亲本的基因组，目前共计有45个可用的玉米自交系完整基因组。这45个高质量基因组几乎涵盖了玉米育种上所有杂种优势群的核心代表自交系。将45个完整基因组中的ZmELF3.1基因序列调取出来分析发现，其CDS区域非常保守（图12），仅有少数几个非同义突变发生。通常情况下，基因上游区域在基因的表达调控过程中发挥着重要作用。进一步对ZmELF3.1基因上游的序列进行分析，发现在以B73为代表的22个自交系中，ZmELF3.1基因上游区域存在一个6.5kb的NonLTR/L1逆转座子（TE_6.5k）及一个11.8kb的LTR/Gypsy逆转座子（TE_11.8k）插入（图12）；其中6.5kb的NonLTR/L1类逆转座子位于ZmELF3.1基因上游约7kb的地方（以B73_v4基因组为参考），11.8kb的LTR/Gypsy逆转座子位于ZmELF3.1基因上游约31kb的地方（以B73_v4基因组为参考），并且在22个基因组中，这两个转座子完全连锁，即有TE_11.8k插入时必然有TE_6.5k的插入（图12）。另外23个自交系中没有这两个逆转座子的插入。

其中，TE_11.8k（11.8kb的LTR/Gypsy逆转座子）的序列信息为SEQ ID No.1。TE_6.5k（6.5kb的NonLTR/L1逆转座子）的序列信息为SEQ ID No.2。

其中，有逆转座子的插入的自交系中TE_11.8k及TE_6.5k侧翼的序列非常保守，有逆转座子插入的自交系可以以B73为代表（图13a），其侧翼序列特征为：

TE_11.8k的左侧DNA序列信息（以B73为代表）为SEQ ID No.3，右侧DNA序列信息为SEQ ID No.4。

TE_6.5k的左侧DNA序列信息（以B73为代表）为SEQ ID No.9，右侧DNA序列信息为SEQ ID No.10。

无转座子插入的自交系中TE_11.8k及TE_6.5k侧翼的序列有较多变异，其中核心侧翼序列可以以CML247和Ki3为代表（图13a），其侧翼序列特征为：

CML247中TE_11.8k位置（实际无逆转座子插入）的左侧DNA序列信息为SEQ IDNo.5，右侧DNA序列信息为SEQ ID No.6。

Ki3中TE_11.8k位置（实际无逆转座子插入）的左侧DNA序列信息为SEQ ID No.7，右侧DNA序列信息为SEQ ID No.8。

CML247中TE_6.5k位置（实际无逆转座子插入）的左侧DNA序列信息为SEQ IDNo.11，右侧DNA序列信息为SEQ ID No.12。

Ki3中TE_6.5k位置（实际无逆转座子插入）的左侧DNA序列信息为SEQ ID No.13，右侧DNA序列信息为SEQ ID No.14。

、逆转座子TE_11.8k及TE_6.5k的插入可调控ZmELF3.1基因的表达量变化，并造成玉米早花

结构变异是造成植物农艺性状改变的重要原因。本试验对26个NAM群体的亲本进行基因型分析发现，其中9个自交系含有TE_11.8k及TE_6.5k的插入，其余17个无插入。进而表型分析发现，含有逆转座子插入的自交系平均比无逆转座子插入自交系早开花9-10天（图13b）。qRT-PCR分析表明，含有逆转座子插入的自交系中ZmELF3.1基因的表达量比无逆转座子插入自交系普遍高出许多（图13c）。

为了进一步分析这两个逆转座子插入的遗传效应，我们对415份由热带和温带自交系组成的自然群体进行了表型和基因型的分析。结果表明，其中143份自交系没有逆转座子的插入，272份自交系有逆转座子插入；并且所有272份自交系中两个逆转座子TE_11.8k及TE_6.5k紧密连锁在一起出现。结合表型分析表明，含有逆转座子插入的自交系不论在长日还是短日条件下都比无逆转座子插入自交系显著早开花（图13d和图13e）。从其中随机挑选了3个含有逆转座子插入自交系（B73、W138和GY237）及3个无逆转座子插入自交系（CIMBL1、CIMBL26和CIMBL32），用qRT-PCR方法进行节律表达分析表明，含有逆转座子插入的3个自交系中ZmELF3.1基因的表达量在各个昼夜节点处都比无逆转座子插入自交系普遍偏高（图13f）。

3、逆转座子TE_11.8k和TE_6.5k连锁在一起最终促进ZmELF3.1基因的高表达及玉米早花

为了研究TE_11.8k和TE_6.5k对ZmELF3.1基因的调控作用，我们分别将TE_11.8k和TE_6.5k序列克隆下来，并连接到含有荧光素酶（LUC）报告基因的载体上。两个载体只存在TE_11.8k和TE_6.5k序列的差异（图13g）。烟草瞬时表达实验表明，TE_11.8k可以激活下游基因的表达，而TE_6.5k则抑制下游基因的表达（图13h-13j）；但TE_11.8k促进下游基因表达升高的程度要远远大于TE_6.5k降低下游基因表达的程度（图13h-13j）。因此，结合TE_11.8k和TE_6.5k总是连锁在一起在自然界中出现的现象，可以断定，两者在调控开花方面的综合特征为，TE_11.8k促进ZmELF3.1基因表达升高的程度要大大高于TE_6.5k降低ZmELF3.1基因表达的程度，两者连锁在一起的效果是使玉米ZmELF3.1基因表达升高，从而促进玉米早开花。

试验例3 逆转座子TE_11.8k和TE_6.5k的起源，在玉米种植地域扩张过程中受到选择以及在玉米地域扩张过程中发挥作用的试验

为了探究逆转座子TE_11.8k和TE_6.5k的起源，本试验对72份大刍草（玉米的野生种）进行了两个逆转座子处的基因型鉴定，发现只有2份大刍草中含有TE_11.8k和TE_6.5k的插入，并且两者连锁在一起，表明逆转座子TE_11.8k和TE_6.5k插入是存在于野生祖先种中的既有变异（standing variation），并且两者在野生种中就连锁在一起出现。

为了探究逆转座子TE_11.8k和TE_6.5k在玉米地域扩张过程中的受选择情况，本试验将45个（已有完整基因组序列）自交系中的TE_11.8k和TE_6.5k、及ZmELF3.1编码区的序列调取出来进行了选择分析（图14）。通过将其中的18个热带及27个温带自交系进行序列多态性（以π为参数）分析表明，温带自交系在TE_11.8k和TE_6.5k所在位置附近保留了极低的序列多态性（显著低于热带自交系）。Tajima's D分析表明，温带自交系在TE_11.8k和TE_6.5k的Tajima's D值都小于0，分别为-1.6和-2.4，而热带自交系在TE_11.8k和TE_6.5k的Tajima's D值都大于0，分别为1.2和2.0。而在ZmELF3.1编码区没有检测到选择的信号，表明TE_11.8k和TE_6.5k在玉米地域扩张过程中受到了较强的人工选择。

为了探究TE_11.8k和TE_6.5k是否在玉米地域扩张过程中发挥了重要作用，本试验额外的鉴定了327份现代育种自交系中逆转座子的基因型情况。结合72份大刍草、415份热带和温带自交系的基因型数据，分析发现，2.8%的大刍草、7.7%的热带自交系、58.4%的温带自交系、74.6%的现代育种自交系中含有这两个逆转座子（图15a）；有两个逆转座子插入的基因型频率在玉米由“大刍草—热带自交系—温带自交系—现代育种自交系”的演变过程中发生了逐步的提升（图15a）。尤其值得注意的是，在“热带自交系—温带自交系”的适应过程中，有两个逆转座子插入的基因型频率发生了超过7倍的跨越式提升，表明其在玉米由热带向温带适应过程中发挥了关键作用。

进一步的，本试验对广泛代表世界范围玉米变异信息的1008份玉米农家种进行了基因型鉴定。分析发现，有两个逆转座子插入的基因型在高纬度的温带地区高频分布，而在热带地区分布较少（图15b-15d），进一步证明TE_11.8k和TE_6.5k的插入在玉米由热带向温带适应过程中发挥了关键作用。

序列表

<110> 中国农业科学院生物技术研究所

华南农业大学

<120> 调控玉米开花期和光周期适应性的基因、分子标记及其应用

<130> BJ-2002-220201A-L

<160> 17

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 11800

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 1

cattcattgt tggaacttgc tctctgctgc aagtgggcca acgggggtga acaatggcga 60

caacagggtt acgtgcacgg gggcaatagc tctgttgatc tcgcctctca cgggcactgt 120

gcgggggtat ttataggtgt ctgagtgccc agcgtcttgt cttaaggacg catgtgccct 180

cagacgccta gtttatcccc ggaatattcc cataaagcag ggttacaagc tgtaattaca 240

agtatgcctt tacaagtcag gcccgtaata cagaggcggc cacgcggggc ccgttacaat 300

gggccagatc acacgtgggc cttggggctg aatgaggccg cgccgtgtga ggacgtcgcc 360

gcaggtcttc gtcaaagtgt cgagtcctgc gaagggtgtc cctgcccgct ttgcctccgt 420

cggaccagcg gctgcagcga aggcctggag cgaagggtgg cgtctttgcc ttcgccccaa 480

catttgccct ccgagggacc agttcgacaa agtcacctgg tgccgaagac gtcgctagat 540

ggcggagacg ctgccctcgc tcgaagtggt tccgcggggg tttttgatgt gaccgttgat 600

ggacggcgta ctgttggatt gcgggtttcc cgaagcgtcg cggcctgtcg ggttgtgggt 660

ttcccgagga gccgcgccct gcctataaaa ggggggcggg ggcggcgctg tttgaattct 720

gctttccgcg ctccgtaaaa ccctagccgc ccgccgcctt gctgctcctt ttcctccgct 780

gctccctttg ttcgccgtcg ttctggctcg agtgaagcaa accgcccgcc gccgccgacg 840

gtacgtagcc atgccatcct cttcttcttc cgccaccgcc acgccgccgg ccgccgcctc 900

gtctgaggag acgttgagtg acgcgatggt ggaagagttg cgcgtcggcg actctgttga 960

attcggtgtg tcacggatga cgtcaggccg tattgaagat atgcagcggt tgggctactt 1020

tggcgacgga gtcgctcggg ccccggggac ggaggaagtc cccgagccgg agggcgagtt 1080

ggttgttttc gaggcgttct tcgccgccgg actccgcctg cctgcgcacc ggtttgtcag 1140

cgaagtcctg cgcagattca gtgttcaaat acatcagctt acgccgaacg ccatagtggc 1200

gctggcgaag tatgtctggg cgacgacttc gtacggcggg cagccgtcgg ttgaagtttt 1260

cgcgaagaat tattgcttgc attggcagaa aagggtggtt gagggcggag ttgcgcagtt 1320

cgggtcgtgc actttcacgc cgaagaccgg caagaccacg atgccagtag tggagttggt 1380

cccgtgcgcc cgcaacaagt ggggcagttg gaatgagttt tggttttatg tttctgaggc 1440

aactgtcgaa ggccatcaag ggctccccgt gtccgtaatg tgctctcact attactctgc 1500

gtatccgcct ttcgaagtgg cagaagagga tacagacgaa gaggccctac ggtacgccgc 1560

cggtcagagc agcgggcgtg atttggttga agagtttgcg gcgtacgggg tctggccctt 1620

ggcgcacggc tgggcgctgg gcgaagtatg ccctcgccag atgccctttc acggaggaag 1680

ggaggtgcga agtcctgcct tcgcactgag tttgcggaac cgtgacccgg ccgccttcgt 1740

gcgtgatgca gaagacttgg cggtgcgact cgtggggcgc tacgtgccga agacggaagg 1800

ccagcgcagt ttcgatatcc gtgggtcaaa cgatcgcttg aacagggtct ttgaattaaa 1860

tcaactgccg tacgacggct accctggtca ggacgaagca gaccgccgcg ggaagaaacc 1920

ggcggtggag gccggaggcg accctgcgct ggcggccgcc gcctcttcga aaaagagaaa 1980

attaggtact gcgatgggag ggcttggggt gtctgatagt ttcgctagag agttaatgag 2040

gacgtgtgcg gccccggggg agaggatgtc ttcgcccgag ctccgggagt cttcggctcg 2100

gatgctgagg gttaccgggg gttgctggcc taaaaacatt cctatcccct gggatgaaga 2160

ggactgtttt acatctcgta tggctcgtcg gtggaaagtt tttccttatg ggcgaaatat 2220

cggtcatgtt gtgtgggcag tgatggacaa ggatcgccaa gcggcggcgc ggaaacgcca 2280

ggcgaccgtg agggttcatg aagcccggcc gaaaaggcag cggggagcat cgaaggctga 2340

ggcctccggc ggaggcaagc cgccattgcc ggcgaaggcg ggtgcctccg cgcctggcaa 2400

ggcgccggag gcgacggtgg gcgccggagg ccccaagctg tcgaaggtgg tgccgtccgc 2460

cagcggagtg gcggaggctg cgaaggcggc ccgatcgcta ccgccgcccg gcaaacgcgt 2520

tgccgacttc ggcactgaga ttgatgtgga ggattatctt gggggtgagt ctatatgtat 2580

acactttttt ttttttttaa tctgttgatg cgttgcaggg ttggacgagg gcccgctcgc 2640

tctagttgtg cctggcgcgg cggtcgcgac ggctgcgcca gcgccgaagg cgggggtaga 2700

gacccttggc gctggaggcg aggtgactgc cctcgcgttg gtcagagacg aggcggacgc 2760

ggcgacccgc cggctgaaag gagcaatgga ggcgctgagt caggtctgcc gagctttttt 2820

tttttttttt tttttttttt ttttaacacg ggccttatgt gtgttctgca ggtggctgac 2880

ttcaccagcc gtactgcgtc gggggccctt acggcgacgt tgtctgccga ggtcgagaga 2940

cttcggacgc aacacgcgga cgctgtccgt gagaagtcgg cctccgacag caagtgccgc 3000

aagctggcgg agaaggtggc cgcccttgag aaggagaagg cagacctccg gcgccagctg 3060

atggaggaga gaagggaggc caacgaagcc atcgccaagg agcagtctgc gcaggcggag 3120

gccaggctgg cgcgggcgga gggcaatgtc gccaaggagc tcgccgggga gctgcagcgg 3180

cggcttgctg ccttcgagag ccgcgcggag ggggccgagg ccgcggcgcg agcggaggcc 3240

gaacggacgc gcacgcagct catgacttca tatcgcgagc tgggtgtgcg gacgagcgac 3300

ttcgaggtgc cggagcgaga ggccggactt cgctgtctgg agtgggtgca ggaggaactg 3360

caggagctcc ccactgtctt ggcggggttg atgtcgttca cctccctggt cacctgcgag 3420

gcagcgatga acgcgctctc tcgcgaaggc tgccggcact ttgaggccct cgaccaggtg 3480

gatgaagatt ttgggcgaga tatctttgag gtcgaagacc ccgtggtgaa ggagtccggc 3540

ggggccctct ttgaccggat gtggggttca tacggtcgag aggtggtccg ggcgcgggcc 3600

gaggctgcaa gggctcaggt aacgttgtcg tttactcggt gcttgctgga tgcggtttgt 3660

gcgtgtgttt gctgaatttt ttgtacgttt tgtcttaggc ggagcgcggc gagcgggtgg 3720

acgattttgg ggcgctgaac agcgcgccgc ctgagccgga gaccacccct gcggaggccg 3780

ccactggagt cgccccggtg accgcggaag atgcaccagg cgcccttgta cctgctgcgg 3840

ccggcgaagg cctactccca agggtggccg aaggcgcgtc tgatgccccc gcagctgctg 3900

tgccgggcgc tgaagatccg gcggagacaa cggcggaggc ggcggcggag gctcccgcag 3960

cggcagggcc ttcgcaggtg gcgtaggtgg tgtttagggt tgagggattt ttggatgatg 4020

tactgaattt tggttgctgc gcaggttcaa gattttgggc ctgcgcacgc aaccgctact 4080

actggttttt tggcggcttc gaccgcggaa ggtggaaatg aatgtggtgg gtctgtttct 4140

gagttttttg attttactga ctctgggagc tcggctgaat ggaccgagga gtcgtcggag 4200

gaggacttgg actattttgc ggccctggac gaggctgcgg cggaggctgc gctacatgct 4260

gcggacgcgc caggcgtgcc cggtcctagc accgggcacc gacgacgaag ggcggttgcg 4320

aagcgtagga ttagtgcgga ggaaggggct cgtcttcgcg ttagtagggt tggtcggcag 4380

gagctgctgt ctttgccggc cgtctcgggt gtgggggaag gggagctgcg aagccttttt 4440

gctggtgagg agcttaggat aatgttattt aattatagag agatggggat tattcctaag 4500

gttgagccga tgtagggcgt ggtgccctcg cttgtgtatg tgcaagggtt tgtaaaatgg 4560

agtggtgtgc cctcgcgtgc ttgtgcctgc gagggcgctg tgtactttga ctggtgtgat 4620

tgattgtgct gtgccagtgt gattataatt ggtcttgctg tcgcttctgc ttttgccata 4680

ctgggtcggc tgcgcccttg ggcggttttt gcggtaggct ccggctgcgc cttttaggcg 4740

acttctgcgc gaaaagcctt cgcgatagac tttgattttt gcgcacttgt ggagctaagt 4800

ccggctgcac ccttgggcga cttctgcgcg gttagtcttc gcgatagact tcgattcttg 4860

cgcacttgtt gtgctaagtc cggctgcacc cttaggcgac ttctgcgcgg atagtcttcg 4920

cgatagactt tgatttttgc gcacttgttg tgctaagtcc ggctgcaccc ttaggcgact 4980

tctgcgcgga tagtcttcgc gatagacttt gatttttgcg cacttgttgt gctaagtccg 5040

gctgcaccct taggcgactt ctgcgcggat agtcttcgcg atagactttg atttttgcgc 5100

acttgttgtg ctaagtccgg ctgcaccctt aggcgacttc tgcgcggata gtcttcgcga 5160

tagactttga tttttgcgca cttgttgtgc taagtccggc tgcaccctta ggcgacttct 5220

gcgcggatag tcttcgcgat agactttgat ttttgcgcac ttgttgtgct aagtccggct 5280

gcacccttag gcgacttctg cgcggatagt cttcgcgata gactttgatt tttgcgcact 5340

tgttgtgcta agtccggctg cacccttagg cgacttctgc gcggattggt cgcacgcgag 5400

ggtggctagc gcttagcctc gcggtgactt cgaattggtc gaatgccgaa gaccgttgtc 5460

gcggtctttt ttcgacacat gcttttgcgg gggatttttc tcacatatat tacatggctc 5520

cgcctcgtta aaaacctcac cccccgggag gaaaagagtg cgggccggta caagattgtt 5580

tgcggtgaat tacaagggcg aactcagccc taggaattaa acaaaaaatt tacgaaggtt 5640

gtcaatgttc caggagtgct ccaggtcctc gccatctggc gttgcgagcc tgtaagcgct 5700

gggggaagct tttgtcttga ctatgaaggg gccctcccac ttgggctcca gcttgccctt 5760

ggactccgtc cgagctgttc ggatgagtac gaggtccccc gcgctgaact cctttgggat 5820

gactgcgcgg tcgcgccatg ctttggtctg ggcttggtat ttgtttaagg cctgcagggc 5880

gaagacccgg tctccgtcaa tgagatcttt ggaggttggc tcatccacgt caggggtggc 5940

tgacggagct gtgcgcggag acccgtgttt tatttcttgc ggtgtcattg cctctgatcc 6000

gtatagaagg cggaaaggag tgaacccggt cgccctgcac tcggttgtgt tcagcgccca 6060

gactgcctcc ggtagcaagt cggtccatct gccctttttc tcgtcgagga gcatcttctt 6120

gatggctgtg aagattttcc cattggcacg ctccacgact ccgttggact gcggatgata 6180

gactgaagcg aaggcaagct tggtgccaat ggaaaaacag aaatccttga aatcttgatt 6240

gtcaaactgc ttgccgttgt caactgttag ctcggacggt actccgaagc ggcaaacaat 6300

gttctgccaa aagaattttt gggcagtctt tgatgtgatt gtggacacag ccctcgcttc 6360

aatccacttg gtgaagtatt cgacggctac gaaggcgaac ttgaggttcc cctgagcggt 6420

gggcaagggc ccgacgatgt ccaggcccca gcgctgaaga ggccatgtat gggcgaccag 6480

ctttgtgtat tgcgaggggt tgcctgaccg aggagagaac ttctggcagg cttcgcagga 6540

ccttgcgact cgatttgcgg cgcagatcat tgcaggccag taaaaccctt gtcggatcac 6600

cttagcagcc agggcccttg gccccgcgtg cgagccgcaa gttccactgt ggacctcgcg 6660

caagatttgg atgccttcgg tttcggtgac gcatttaagc attggctgac tgaccccctt 6720

cttgtataat tggccctcga ttagcgcgaa gtcccggctc cgatgctcga ggcgcttcgc 6780

ctcactgacg tcggttgggt gatagtatcc ctgtagaaac agggttattg gggcccgcca 6840

gtcctcggtc atgattaggt ggactatacg gtggccctcg ctatcatttg ttatttggag 6900

cccttcgggg ctccggacgg ctggcgtgcc gatggtgtga aagaatacgt cggagggcag 6960

gggctcgccc ctggcggcgg ccttggctaa tgcatcggcc tcctcattct tggccctgtc 7020

cacatgctgt agggtgaatc ccttgaactg cctctcgaga cttcggatag ccgcgaggta 7080

ttgcatgagc gcggggtctt ttgctgcata gtctttttcg acctgaccgg cgactatctt 7140

ggagtctgtt ttgatgatac aggtggtgac tccgagggcc cttagcttgc ggaggccgag 7200

gatgactgct tcatactctg ctatgttgtt tgtacatttg tcggattcca gagcgaagct 7260

gaggcgtgct gcatatctgt gtttgactcc ggctggtgag gtgatgactg cagcgacgcc 7320

tgcccccgca tgacaccatg caccgtcgca atggatagtc cagacctttt ttgtggatgg 7380

gtccggctgt gttactggcc cagtccagtc gacgacgaag tctgccagga cttgcgattt 7440

gatggctgtc ctgggctcga agctgatatg gtagccggag agctcggctg cccacttggc 7500

gattctcact gatgcctccg ggttcctgaa tagttcgccg agtcccctgt ccgaggtgac 7560

tcggaccttg aatgcttcaa aataatggcg cagcttgcgc gaggacataa caactgcgta 7620

agcaatcttc tccagctctg tcatgttgca tttggatggt gtcaggactt cggagacata 7680

ataaacaggg cactgtctga ctgcgccttc gactgtctgc tcctgcacta gtgccgcgct 7740

gaccgcgtgc ggcgaagccg cgacatagag caataagggg agcgaggagt ctgggcttgt 7800

gaggatggcc agctccgcca ggtactgttt taatgaggcg aaggccgctg cttgctccgg 7860

tccccaagcg aagtccttcg cgccgcggag ggttttgagg aaggggagac ttcgctcggc 7920

ggacctggag atgaatctat tgagggcggc catcctgcct gtcaggcgct ggacgtccct 7980

ggcggactgc ggaggcgaca tgtcgacgat ggcctggatc ttggttgggt tggcctcgat 8040

gcctcggcgg gacaccaggt agcccaatat cttgccctgg cggacaccga aaacgcactt 8100

ttccgggttt aggcggagtc gtgcatctcg catgctcgcg aatgtttccg ccaggtcggc 8160

gaggtggtcc tccttatttt tgctggcgac gacgatgtcg tccacatatg tgaatacgtt 8220

tctgccgacc tgcccttcga gcaccgtttt ggtgagtctg gagaaggtgg acccggcatt 8280

cttgagaccc tccggcattc tgacaaagca ataagtgccg aagggtgtta taaagctggt 8340

gctggccttg tcttcctcct tcatgtatat ctggtgatag ccggagaagc agtcgaggag 8400

ggacatgacc tcgcatccgg ccgcgctatc gactattttg tcgatccgtg gcaacgggaa 8460

attgtccttt gggcaggact tattgagact ggtgaagtct atgcacatgc gccattttcc 8520

gcttttcttc tgcaccatca caacattgga gagccacgtg gggtaagcca ccggctcgat 8580

gaatttagcc tccaggaggc gatgcacctc cgccttggcg gcttctgtct tttcatctga 8640

catcttgcga agcttctgct ttttgggtcg caccgaaggg tcaatctcca ggctgtgttc 8700

gattatggct cggctgactc cgaccagatc gagggcagac caggcgaaga catctttatt 8760

cttggccagg cagcagagaa gtttctcttc ttcaagtgac gtgaggtctt cgctgatagt 8820

tacagtctgt ttgggcgtgg cctgatcgag ggggacagtc ttggtcccgt cttggcactg 8880

caactgtgcc ttgtcgtgct gcttgtcggt tgggctagcc ggcgcaggga cttcgcgctg 8940

ggtcgtgaga cagtgtacat ttctctgacc gggcacgaag tcccgctcta tgttgcgcgc 9000

cgtctgctgg ttgccgtaga ttgtgatggc gcccagcggg cctggtatct tcatacatag 9060

gtacaacccg tggatggcgg cttcgaattt gttgatggag cctcggccca tgatggcgtt 9120

gtatggatat accatgtcga caatgtcgaa ggttatttgc tcacttcggg cattgggtgc 9180

tacaccgaag gagaggggca actctatctt gccaactgga aaggtgccct tgccgccgaa 9240

accatacaac gggttgtccg aaggcttcag caagctgtgg cttatgccca tgcggtcgaa 9300

ggcgtggagg aagatgatgt ccgcctgact gccgttgtcg acgaggactt tgtgtaagtc 9360

ccaacctgcc acgctgcagt tgatgaccat tgcgtcgatg tgggggggcg ctgcgtaggt 9420

cgacgtctcg cgcgtcgaag gttagcggta tgtgggacca cttcgtctgc acgactgggc 9480

cagtgacggc gacatggttg atgctgcggt agtggtcccg cttctgccgc ttggtgtcga 9540

agtcggtgct tgacccccct gttatcatgt gaatgactcc gcgataaggt tgatcggcga 9600

agtcttcttg ctttggggga tggggaatgt tttggtgttg ctggtgtggt ggtgggggtg 9660

gaggaggtac gatttgtact tcctgatgat gttggtaagc gtggtgcggt ggatgcggag 9720

cgggggcgtg gacgtatggt ggagtgggtg gctggtagtt atgcgcgaca attctgggat 9780

tgtcggccgg ctgcgccctc gccattctat ctctggtggc cttcgtctcg gggcagtctt 9840

tggtctggtg ggcgcagtct tcgccgtgga aaaggcaata gaaccggcgc ggcggctgct 9900

gcgcccgccc tcgacccctg ccgcgcgttc catttccgcg gccttggggg ggatattcct 9960

ggcggcgagg ggggtcagca gcaggctgtt ggttgacgat gttgtggact tgctgctgac 10020

tgcggctgtc tcgactggag tctggctgcg aagtccttgt ccacgtgcgg ctggactgcg 10080

gagtctgact gttgggtttc cgttgcgact cgaccttgcg ctggtggagc tcttcggatt 10140

tggcatattt ttcgaagagc tgatatagct cctgcaagct cttgggtgga tccctgatac 10200

aatggctgta gaggacgccg gcccgaaggc cattgatggc gtagtggata gcgatctgat 10260

cgtcgacaga gggcagctgt gacttgagtg ttaagaactt gcggtaatac tcccgcagag 10320

tctccttttc cagctgtttg caaagcgaga gcttggccaa agcgtcggtg tctggacggt 10380

acccttggaa gttgaggagg aacttgtccc tgagacttcg ccacgaatca atggacagcg 10440

ggggcaatct ggtgaaccag gtgagtgctg ggccctctag ggcgatgatg aaagactttg 10500

ccattgtggc ctcgtcccct ccggctgatg caacggcgac ttggtaactc atgatgtatt 10560

gcgccggatc ggtgctgccg ttgtacttgg ggtatgcccc cgctcgaaag ttggctggcc 10620

aaggcgtcac ttgcaggtgt ggcgccaggg gacttcgctc gtcgaggtag ttgatccctt 10680

ggaatggcgc gccgtgctgg ggggcgtagt catgctgggg gaaacgcggg ttctccggct 10740

gcgcccggtg ctgcaggggt tggccgtgct gtcggccgag gtagccttcg cgcatgtcct 10800

ccggctgagc gcgttgttgg aggggtggtt cttgctgcaa accgaggtgg ccttcgcgct 10860

gcatcagcgc gatctcgcgc tcgaggtctt gggctttctg ctcctcgtcg cgtatcattt 10920

gccgcacttt ggctaatgcg gaaacacgtt ggcgcttggc ctccagtatc tctttctgcc 10980

tctggagatt gcggttcctg aggcgcaggg cgcgcagctg cagctgttct tctgttgaga 11040

cgccgagggc ctcaccatcc tcggtgaggt cggcgccttc cagtggggcg aagcctgggg 11100

gcggctgcga ctgtccttcg gttccgcagg tgcggaaggt gtcgtcttcg ccggtgtggg 11160

gaacattgtc ctcaatgggc tcttggtggg tggattgggt gagggcgagg gccttgccct 11220

ttcttgcggc cagcagtgct gccttcgcag cctcgtcagc cttggggtta gctctcttgg 11280

gtgccatcgc gggtggtttt gtcgtagcac gaacggtggg cgccaaatgt tggaacttgc 11340

tctctgctgc aagtgggcca acgggggtga acaatggcga caacagggtt acgtgcacgg 11400

gggcaatagc tctgttgatc tcgcctctca cgggcactgt gcgggggtat ttataggtgt 11460

ctgagtgccc agcgtcttgt cttaaggacg catgtgccct cagacgccta gtttatcccc 11520

ggaatattcc cataaagcag ggttacaagc tgtaattaca agtatgcctt tacaagtcag 11580

gcccgtaata cagaggcggc cacgcggggc ccgttacaat gggccagatc acacgtgggc 11640

cttggggctg aatgaggccg cgccgtgtga ggacgtcgcc gcaggtcttc gtcaaagtgt 11700

cgagtcctgc gaagggtgtc cctgcccgct ttgcctccgt cggaccagcg gctgcagcga 11760

aggcctggag cgaagggtgg cgtctttgcc ttcgccccaa 11800

<210> 2

<211> 6496

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 2

ataaaatatt atcacttgac gcagattgca tcctcatcgg ggttcgcgcg agggagatga 60

gacgcaaagg aaaaaagaaa aaatggcgcc cggtcccctg ggccgcttct tcttcctctg 120

gcgttctcct ttctccgtcg cacggcttgc agcggtgcgg gactcggtct cctgttgttg 180

ggccgtcttc ctcgtgccgt tccctggccc agggatacag taccccgacg ccgtcagcgg 240

agcggcccct aaaggcgcgt tttccttgga tcgggtggag tccaggggtg tcgctggtct 300

cttcgcgtct gcttcccctc tcgggtgagt cgcctcgtct gttgtcttct ccgcccgcaa 360

aaccctctcc ctcgctaggg tttcctctgg attttgttgg tgcgcattct tttcctcact 420

gtgccgcctt cctctcgcac ctctggtctc tcccgtcttc ggtgaggtct agttttggtg 480

ggggttggtg cgtttcgtct tttcgtcctc cggtggttga ggaggagtgg ccgcgtctgg 540

gttctggtgt tcttcgttgc cctgcgaaaa tcgctgctat ggatccgaaa ggagagaacc 600

cccagaactc ccaatgggat cgttggggtc cgtcggagaa gccgcaaggt tctcatcctt 660

ggaacagacc aagaaacctt agctggaagc ttaagcctaa tatcggcaaa tctgagcagc 720

agaaaggtgt cctgtctcct catcctggtg agggaaatca aacaggtaac ccttctgtct 780

ctcctgttcc tttgaagaaa gatctcgatc ttgttcgccc tgcgttctgt caaaaatgtg 840

gtgttaaagg acatcatgcc agaaattgtt ttaacgcttt gtggtgtgat atttgccgca 900

aggagacaca tgtcacttcg cgttgtgttc ttcctaagca aaacaaaccc accatgccca 960

ttgttggttt ggctgctgat ggtttagggt tttatctgtc tcacttcgct aaacctttga 1020

tcaaaaagcc aaaaagggtt ttcatcggtc tggttaaagt ggttgaggga cttgtctctg 1080

ctgaagatct tgagagatat ttcgggtttc acttcccttg gaacaaaagg tggaaagcta 1140

ccaaatgcca ttcaggattt ctgatgcagt ttccctccca agaacgtctt gatgaaatga 1200

taagcttccc ggagctgaaa atgaagatgt ctggggccaa gatcgctgtt gtgccttgga 1260

gttctagggc caaacctaaa tctagactcc atactgtgtg ggttattgct gaaaatgtcc 1320

ctgaggaatt gcagaattac caatctatct gtgaaattgg ttcaatgata ggcgctgtgg 1380

aggaggttga ccttatgtct ctggattctg atgatatagt gagatttaaa atccacatta 1440

aaagtgtggc tatgatccct cctgtggtgg aagtggctgt caagcctttt ctttatgata 1500

tcttctttag aattgagtct atttgtgatg aaggatggaa tgatgattct gtgaatttgg 1560

gtaagagagc ctcggttcaa attcatggat ctaatgatcc gctttttgat aaatctggga 1620

aaaaacccaa gaatctggat gatgatgtcc ctgaagagga gcctaatcct attctcaaaa 1680

ttggggagtc ttcttctcaa ggcaaagagt ttgccaaact gtctgaccct aatcttgtgc 1740

cttctaaaga tgtgtctgat gatgaacaga aactcgataa cctttctgat gagaaggtgg 1800

attttgatcc aaatgaagat gatctgctta gctcgcaaga attggaagaa ttcgctaagg 1860

atatggagga agatccaact gattttcagt caaaaattgg tgctatgatc tcgattcccc 1920

ccaatgatga gatggttatt gaagggaaga acaaaaagcc tctggacttg cctaccaaca 1980

cggctgaagg cgtcaggaaa agctctaggt tggagaagaa tgatgaggtg aaggtggttg 2040

ataaaacgat atacagagca gaagccaagg atgctttcct caataaaggt atgagttcta 2100

attccttttc tttgcttgat tctaattatg atgatttgat agatttagct tgtaaacttg 2160

gagtttcttt gggcccctct gactccgatg tgattgataa tttggagttg atcaaagatc 2220

tggaacgttc cagaaaaatt ttggccttcc aagcttgcaa aaatagtatg accccaaatg 2280

tggaggtccc ttcccttgtt gatcacataa acatggatag tagtgtccat gatgattctg 2340

acctgaatat tgatcaggac ttacttgatg tgatggtttt acgaaaaggt aggaaaatta 2400

agcatcggaa aaaaacgatt aaaaaaaggc ttcccctaaa agtagaggtc catctacgaa 2460

aaaggggagt ctatctgttc ttacctccct cctgatccgt tttaaatcat gagaggcctt 2520

atttggaatt gtcagggttt gggtcgtgat tctaagtttg atttcctgag ggaaatcatt 2580

aaggaagaaa aaattgattt cattggttta caagaaacta aaaaagatca ttttaatgat 2640

tctcttctgt cctcgcttgc gggtagcaag ctttttgcct ggttctcctc tcctcccaat 2700

gggagatcgg gaggtctttt agtgggtttt aattctgagg tgtttgatgt tagagaattt 2760

gatgcgggtg aattcttaac tcgctccctt gtcctccaca gagaaaaaaa atttatctgg 2820

aatttcgtta acgtttatgg ggctgcccaa aatgagcaca aatctcgctt tctcagtgaa 2880

ttgtctgctg tttgctcgag aagccaggtc cccatgctta ttggtggtga tttcaatatt 2940

ctcaggaaag ctgaggaaaa aataaacctg gtaccctcag caaatggagt tttctgttca 3000

atagcattat agatcatcat ggtctagttg aatttgatct gaaaaataga ctatacacgt 3060

ggtctaacaa tcgtaatgat cctacttttg aaaaacttga tagatttttg gccagtcctg 3120

actgggatct tgcttataat aatattagtg ttatcgggtt aaatagatcc ttttcggatc 3180

atgttcccct ttgccttcac actgattccc tgcccatggt gcgtaaggat tttcgttatg 3240

agctgtgttg gaagattagg cctgattttc acaaattagt ggaaaatgtt tggactcttc 3300

cggttggtgt gtccaacagt cttgatgttt ggaaaataaa attgaaacgt ttgcgtcaga 3360

agcttaaagg ttggaacagt aatgtggtag gtcactacaa aaagttgaag aaaaacttga 3420

ttgaaaaaat tgatattctg gataaggcca gtgagtcgtc tggcctttcg gaggctgaca 3480

gatatatgaa attagatttg gagtctaatc tcaggaagat tgtggatgag gaaaacatta 3540

gccttagaca aaaagctagg gataaattct tattagaggg tgatgagaat tccaagtatt 3600

ttcatttgat ggctagacac aaaaaaagga agttgaaaat cttgactctt tctcacggtg 3660

atattgtggc tcatgatgac catggcatta atcaactggc gacttccttt tacaaaaatc 3720

tctttggtcc ttcccgtgat tcgaatattt ctctgaataa cctggacatg aaacagctgg 3780

gggagggtga tagaattctg ctcaccaacc ccttttcttt ggaagagatc aaggatgtgg 3840

tgtttgcttt gaaacacaat agtgctccgg gccccgatgg cttcccttct gaattttttc 3900

aggaaatttg ggatgtgatc aaaagtgatc tgttcaatct ctttaaagat tttcatgatg 3960

gctctctcaa cattgaaaga cttaattttg gtattgtcac tcttattcct aaggtccctg 4020

atgcgactga tattaaagct tttcgcccaa tttgcttgct taatgtttgc tacaaaatca 4080

ttaccaaagt tcttactaac agattggctc gttgcattac ttctgtgatt agtgaccttc 4140

aatatgggtt tataaaagga agatatatta tggatggtgt tctttctttg catgagatta 4200

ttcatgaagt taaacggaag aaacagaatg gggttatttt caaagtcgat tttgaaaaag 4260

cctatgacaa ggttaattgg aattttcttc ataaaatgat gataaaaaaa gggtttggag 4320

atttatggag tgattgggtt ttgaagactg tgaaaggtgg caaagttgct atccgaacta 4380

atgatgtggt tgggccctac tttaaaactc ataaaggtgt tcgccaaggt gatcctttct 4440

cccctctcct ttttaatgtg gctgctgatg gtcttgcttg tctgatccaa aaagccaagg 4500

atgaaggtgt tatcaaaggc cttattcctc atattgtcac tggtggctgc tgttgtcttc 4560

aatatgcaga tgacaccatt tttctgtttc aggatgattt ggaaaatgct agaaatttga 4620

agtttattct ttgcatcttt gaacagattt ctggcttaaa aattaatttt cataaaagtg 4680

aaattatttg cctgggaaat gcctgcaata gagaacatct atatgctgat atcttcactt 4740

gtcctcccag tggtcttcct atgaaatact taggggttcc tattgataac aaaaaattgt 4800

gcaaatcttt gtgggatccc attgttggaa aggttgagaa taaattgggc tcctggcaag 4860

gtcggttcct tagtttgggt ggccggttag tcttgcttaa cagcagtctc accaacgttc 4920

ccttgtatat gctttctcta tataaatgcc ccaaagctgt gttaaaaaaa atagttatct 4980

tcaggaaaag attattatgg cagggagggc atgatcagaa aaaatttcat ttggctgctt 5040

ggaacttagt ctgctcccct aaaaatatgg gcggtcttgg tgttttggat ttgcaaaaaa 5100

tgaatgaagc tttgttggct aaatggattt ggagactaga aaatactagt ggtttgtggc 5160

aatccattat aaaaagcaaa tacattatga ataaacctat tatttcggtg aaggatagac 5220

cttcagattc tcatttctgg aaaggtattc tctcggttcg agacaaatat tataaatact 5280

gtaaaataaa gattggtgat ggtaagagtt ccagtttttg gaaaaatatt tggtgtggca 5340

atatgacgct ggctgacaaa taccctaatt tgtttgaggt ggcttatgac aaagatatca 5400

ctgttcataa ggttgtctcc tctaattttc agttgctgac tttcagaaga agacttattg 5460

gtactttagg tgaggcctat agtgacctta tggatcagtg tagccaggcc tcgctttctg 5520

gaaatgctga ttcttcaaat tggttgttgg gttgcaaagg ttattcggta aaatcttttt 5580

acaaaatgtt aaataattcc agaattgtgg ttcctgtgaa ttttatgtgg aaaaccagac 5640

ttccgcaaaa aaataaagtg ttcttatggt tggtcagaaa taataagatt ttgaccaaag 5700

acaatttggt aaaaaggcac tggcatggga atacggcctg taacttttgt ggattattag 5760

aatccataga tcacctattt tttcattgtc ctgtggccag attcatttgg agaatcatcc 5820

aaattgcttt caaattgtct tctaccccaa aaaactcagc tgacctcttt ggtccctgga 5880

ttgacagttt tcataatcct gaaaagaagc tgattctttt tggatgtggt gctgttattt 5940

gggctatttg gcgtactcgt aatgattgct gcttcaatgc taggctgatt gatgatccat 6000

ctaatgtgat tttctcctgc tgttattgga ttgatgcttg gtctattcga cagacaaaga 6060

agggaaaaag actggtggaa caaggaagcc gcagaattcg aaagataaca agtgatatct 6120

acagcaaggc ccatggttgg aagccggttg acaggcgtct ccagtgacat tttgctgctg 6180

ctcatgcatc ttttgcttct ggatgtatac agcgtgtctg cttttggtag ataaaaacta 6240

gcgttcttgt cattcctggt gatgtgatgt tcccggctgc ttttggggca tatcctttgt 6300

agatattcag tgttatctgt tagactgtcg gtcttttgtt ggttgaccgt attccttctg 6360

ctgggtttaa tgctttgtgt agctgatatt gtggtaggct tatcggcttg tgtctgttgg 6420

tttgtcgtga ttcctgtaag aactatgttt ggtttctatt tcttaatgaa atagggggta 6480

tcccattgtc aaaaaa 6496

<210> 3

<211> 992

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 3

catctagagg cttggtaaag atatcggcta gctggttctc ggtgctaaca tgaaacactt 60

cgatatctcc cttttgctgg tggtctctca aaaagtgatg ccggatgtct atgtgctttg 120

tgcggctgtg ctcaacagga ttttccgcca tgcggatagc actctcatta tcacatagga 180

gtgggacttt gctcaaattg tagccaaagt ccctgagggt ttgcctcatc caaagtagtt 240

gtgcgcaaca ctttcctgcg gcaacatact cggcctcagc gatggatagg gcaacggagg 300

tttgtttctt agaattccat gacaccaggg accttcctaa gaattggcac gtccccgatg 360

tactcttcct atcgacctta catccagcat agtcggaatc tgaatatcca atcaagtcaa 420

aggtagaccc ctttggatac cagagcccga agcaaggcgt agcaactaaa tatctaagga 480

ttcgcttcac tgccactaag tgacactcct taggatcgga ttgaaatcta gcacacatgc 540

atacgctaag cataatgtct ggtctactag cacataaata aagtaaagac cctatcatta 600

accggtatgc tttttgatca acggacttac ctcctttgtt gaggtcggtg tgtccgtcgg 660

ttcccatcgg agtctttgcg ggcttggcgt ccttcatccc aaaccgcttc agcagatctt 720

gcgtgtactt cgtttgagag atgaaggtgc cgtccttgag ttgcttcact tggaacccaa 780

ggaagtagtt caactcgccc atcatcgacg tctcgaattt ctgcgtcatc accctgctaa 840

actcttcaca agacttttta ttagttgaac caaatattat gtcatcgaca taaatttggc 900

acacaaataa atcaccatca catgtcttag tgaaaagagt tggatcggct ttcccaacct 960

taaaagcatt tgcaattaag aaatctctaa gg 992

<210> 4

<211> 686

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 4

cattcatacc atgctcttgg ggcttgctta agtccataga gcgccttaga gagcttacac 60

acgtggtcag ggtaccgttc atcctcgaag ccagggggtt gctccacgta cacctcctcc 120

ttgattggcc cgttgaggaa ggcactcttc acatccattt ggaataacct gaaagaatgg 180

tgagaggcat atgctaacaa gatacgaatg gactctagcc tagccacagg agcaaaagtc 240

tcctcaaagt ccaaacctgc gacttgggca taaccttttg ccacaagtcg agccttgttc 300

cttgtcacca ctccgtgctc gtcttgtttg ttgcggaaca cccgcttggt tcccacaaca 360

ttctgcttgg gacgaggcac caacgtccaa acttcattcc tcttgaagtt gttgagctcc 420

tcttgcatgg ccaacaccca gtccggatct agcaaggcct cttctaccct gaaaggctca 480

atagaagaga caaaggagta atgttcacaa aaattaacta atcgagaccg agtagttact 540

cccttgctaa tatctcccag aatttggtcg acgggatgat ccctttgaat catcgctcga 600

acttgggttg gaggtgccgg ttgcgtttct tcccccatca catgatcatc ttgtgctccc 660

ccttgatcac acatctcctg ttgatg 686

<210> 5

<211> 992

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 5

catctagagg cttggtaaag atatcggcta gctggttctc ggtgctaaca tgaaacactt 60

cgatatctcc cttttgctgg tggtctctca aaaagtgatg ccggatgtct atgtgctttg 120

tgcggctgtg ctcaacagga ttttccgcca tgcggatagc actctcatta tcacatagga 180

gtgggacttt gctcaaattg tagccaaagt ccctgagggt ttgcctcatc caaagtagtt 240

gcgcgcaaca ctttcctgcg gcaacatact cggcctcagt gatggatagg gcaacggagg 300

tttgtttctt agaattccat gacaccaggg accttcctaa gaattggcac gtccccgatg 360

tactcttcct atcgacctta catccagcat agtcggaatc tgaatattca atcaagtcaa 420

aggtagaccc ctttggatac cagagcccga agcaaggcgt agcaactaaa tatctaagga 480

tttgcttcac tgccactaag tgacactcct taggatcgga ttgaaatcta gcacacatgc 540

atacgctaag cataatgtcc ggtctactag cacataaata aagtaaagac cctatcatta 600

accggtatgc tttttgatca acggacttac ctcctttgtt gaggtcggtg tgtccgtcgg 660

ttcccatcgg agtctttgcg ggcttggcgt ccttcatccc aaaccgcttc agcagatctt 720

gcgtgtactt cgtttgagag atgaaggtgc cgtccttgag ttgcttcact tggaacccaa 780

ggaagtagtt caactcgccc atcatcgacg tctcgaattt ctgcgtcatc accctgctaa 840

actcttcaca agacttttta ttagttgaac caaatattat gtcatcgaca taaatttggc 900

acacaaataa atcaccatca catgtcttag tgaaaagagt tggatcggtt ttcccaacct 960

taaaagcatt tgcaattaag aaatctctaa gg 992

<210> 6

<211> 686

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 6

cattcatacc atgctcttgg ggcttgctta agtccataga gcgccttaga gagcttacac 60

acgtggtcag ggtaccgttc atcctcgaag ccagggggtt gctccacgta cacctcctcc 120

ttgattggcc cgttgaggaa ggcactcttc acatccattt ggaataacct gaaagaatgg 180

tgagcggcat atgctaacaa gatacgaatg gactctagcc tagccacagg agcaaaagtc 240

tcctcaaagt ccaaacctgc gacttgggca taaccttttg ccacaagtcg agccttgttc 300

cttgtcacca ctccgtgctc gtcttgtttg ttgcggaaca cccgcttggt tcccacaaca 360

ttctgcttgg gacgaggcac cagcgtccaa acttcattcc tcttgaagtt gttgagctcc 420

tcttgcatgg ccaacaccca gtccggatct agcaaggcct cttctaccct gaaaggctca 480

atagaagaga caaaggagta atgttcacaa aaattaacta atcgagaccg agtagttact 540

cccttgctaa tatctcccag aatttggtcg acgggatgat ccctttgaat catcgctcga 600

acttgggttg gaggtgccgg ttgcgtttct tcccccatca catgatcatc ttgtgctccc 660

ccttgatcac acatctcctg ttgatg 686

<210> 7

<211> 991

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 7

catcaagtgg cttggtaaag atatcggcta attgatcttt agtgttaata tatgaaatct 60

cgatatctcc cttttgttgg tgatccctta aaaagtgata ccgaatggct ttgtgtttgt 120

gcggctatgc tcaacgggat tatccgccat gcggattgca ctctcattat cacatagaag 180

aggaactttg gttaatttgt aaccgtagtc cctaagggtt tgcctcatcc aaagtagttg 240

cgcgcaacaa tggcctgcgg caatgtactc ggcttcggcg gtagaaagag ctacggaatt 300

ttgcttcttt gaagcccaag acaccaagga tcttcccaag aactggcaag tccccgatgt 360

gctctttcta ttaattttac accccgccca atcggcatcc gaataaccaa ttaaatcaaa 420

tgtggatccc ctaggatacc aaagcccaaa cttagaagta taaactaaat atctcaagat 480

tcgttttacg accgtaaggt gagcttcctt agggtcggct tggaatcttg cacacatgca 540

tacggaaagc ataatatccg gtcgagatgc acataaatag agtaaagaac ctaccatcga 600

ccggtatacc ttttgatcca cggacttacc ttccgtgtcg aggtcgagat gcccattggt 660

tcccatgggt gtcttgatgg gtttggcatc cttcatccca aacttgctta ggatatcttg 720

agtatacttt gtttgactaa tgaaggtgcc ctcttggagt tgctttactt gaaatcctaa 780

gaaatacttc aactccccca tcattgacat ctcgaatttt tgtgtcatga tcctactaaa 840

ttcttcacat gtagattcgt tagtagaccc aaatataata tcatcaacat aaatttggca 900

tacaaacaaa tcattgtcaa aagttttagt gaataaagta ggatcggcct ttccaacttt 960

gaagccatta gtgataagga aatctctaag g 991

<210> 8

<211> 686

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 8

cattcatacc atgctcttgg ggcttgcttg agcccataaa gcaccttaga gagtttgtac 60

acgtggttag ggtactcact atcttcaaag ccgggaggtt gctcaacata gacctcgtcc 120

ttgattggtc catttaggaa ggcactcttc acgtccattt gataaagctt gaagccatgg 180

taagtagcat aggctaataa tatacgaatt gactcaagcc tagctacggg tgcataggtt 240

tcaccgaaat ccaaaccttc gacttgggag tatcctttgg ccacaagtcg tgctttgttc 300

cttgtcacca caccatgctc gtcttgcttg ttgcggaaaa cccaattggt tcctacaaca 360

ttttggttag gacatggaac taaatgccat acctcatttc tagtgaagtt gttgagctcc 420

tcttacattg ccaccaccca atccgagtct tgtagtgctt cctctacctt gtgtggctca 480

atagaggaaa caaaagagta atgcccacaa aaatgtgcaa cacgagatct agtggttacc 540

cccttatgaa tgtcgcctag gatggtgtcg acggggtgat ctcgttggat tgcttggtgg 600

actcttgggt gtggcggcct ttgttcttca tcctccttgt cttgatcatt tgtatctccc 660

ccttgatcat tgccgtcatc ttgagg 686

<210> 9

<211> 234

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 9

gcctaagcac cgctggtagc ctagagtagg gacgataata gggaattttt tttattgagg 60

acctattcag gacctattta tatccgtttc tgctataaaa aaatcatcac gaagatctcc 120

acgagcattt gtgggaatat ttttcgtatt ctcgttttcc acatagataa attctggata 180

gagatcccgt atccgcttaa attataatta ggacatacat cttttgttat taat 234

<210> 10

<211> 466

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 10

ataaaatatt atcacttata catattgtca gatgtaaaaa tttattatgt accttaaaat 60

gaacactttt gtacaatgag ggatctcttg acaaaataat tatttatttt tattattaac 120

tattacatga aaaatcgaca cgtgcaaagt taacgggtct acgcggggaa tagtgataca 180

aaatgctttt gcatctctat ccccgtggcc atttacccat cggagaacaa tttccctgtt 240

tacatctctg tggggaagaa atttctccat cctcgtgctc taagggttat tttaggaaat 300

gcatttttcc aattaattcc tatttttaag aaaaaaataa actatttttt cttagaaaaa 360

taaaaacacc taaggaaaaa tgaggtttgc aatctaactc taacgaatga attattcatg 420

tgaaatcggg gatcagatgc cattgtcatc actgggaggg agccaa 466

<210> 11

<211> 233

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 11

gcctaagcac cgctggtagc ctagagtagg gacgataata gggaatcttt ttattgagga 60

cctattcagg acctatttat atccgtttct gctataaaaa aatcatcacg aagatctcca 120

cgagcatttg tgggaatatt tttcgtattc tcattttcca catagataaa ttctggatag 180

agatcccgta tccgcttaaa ttataattag gacatacatc ttttgttatt aat 233

<210> 12

<211> 466

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 12

ataaaatatt atcacttata catattgtca gatgtaaaaa tttattatgt accttaaaat 60

gaacactttt gtacaatgag ggatctcttg acaaaataat tatttatttt tattattaac 120

tattacatga aaaatcgaca cgtgcaaagt taacgggtct acgcggggaa tagtgataca 180

aaatgcttct gcatctctat ccccgtggcc atttacccat cggagaacaa tttccctgtt 240

tacatctctg tggggaagaa atttctccat cctcgtgctc taagggttat tttaggaaat 300

gcatttttcc aattgattcc tatttttaag aaaaaaataa actatttttt cttagaaaaa 360

taaaaacacc ttaggaaaaa tgaggtttgc aatctaactc taacgaatga attattcatg 420

tgaaatcggg gatcagatgc cattgtcatc actgggaggg agccaa 466

<210> 13

<211> 233

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 13

gcctaagcac cgctggtagc ctagagtagg cacgataata gggaattttc tattgaggac 60

ctattcagga cctatttata tccgtttctg ctataaaaaa atcatcacga agatctccac 120

gagcatttgt gggaatattt ttcgtattct cgtttttcca catagataaa ttctggatag 180

aggtcccgta tccgtttaaa ctataattag gacatccatc ttttgttatt aat 233

<210> 14

<211> 468

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 14

ataaaatatt atcacttatg catattgtca gatgtaaaaa tttattatgt gtaccttaaa 60

atgaacacat ttgtacaatg agggatctct tgataagata attatttatt tttatcatta 120

actattacac gaaaaatcga cacgtgcaaa gttaacgagt ctacgcgggg aatagtgata 180

cgaaatgctt ctacgtccct gttcccgtgg tcgtttaccc atcggagaac aatttccctg 240

tttacatctc tgtggggaag aaatttctct atcctcatgc tctaaaggtt attttaggaa 300

ctgcattttt ccaattgatt cctattttta agaaaaaaat gaactatttt ttcttagaaa 360

aataaaaaca ccttaggaaa aatgaggttt gcaatctaac tctaacggat gaattattca 420

tgtgaaatcg gggatcatat gccattgtca tcactgggag ggagccaa 468

<210> 15

<211> 5858

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 15

cgctcccaat cccatgcgcc cctctgctct cacggtttga tttccctttc agttgggccg 60

ccatggccgc ggtagcagct gtgcgcctgc accccggcct cccccatcgc cggccctgac 120

actgggtaaa cgtggtggct gaagctgctg ctgaggattc gggatcttct tgctgccgcc 180

acgagctgcc tgcgtgatat tgacacggcg cgctcccctg gctcctgggc atgacgaggg 240

gaggcggtgg acaaggaggc aaggaggagc cggggaaggt gatgggtccg ctgttcccgc 300

ggctccacgt cagcgacgca ggcaagggcg gcggcccgcg ggctccgcca aggaacaaga 360

tggcgctcta cgagcagttc accgtgccgt ccaaccgctt cagctccccc gcggcctccg 420

cccgcgccgc gggggccagc ctcgtgccct ccacggcggc tgcccaggtg agcagctcga 480

tgtttgcttc tgcttttttt tttcctggtg ttatccaagc tgctaatatt aagctttccc 540

tttgttgcta cttggcaaaa tggcaaattc ttttttttct caaaaattga aaattaattc 600

ctggcatgca gcctaacaac ctttctgtga gcgcatttgc ctgcctttgt tgctacttgg 660

caaaatggca attttttttc tcaaaaattg aaaattaatt cctggcatgc agcctaacaa 720

cctttctgtg agcgcatttg cctgcctgca aacccacaac gtatatgttg tcatagcgca 780

cgagcatcgg agcatgtgat ctttatgtcc acaattaatt cctttagggt gccatctgcg 840

accaagcttt tggattgaga gcgctcactc gtgcgtaggt tccacagctc agcgttctag 900

ctattttgct aattgtgttg cgtgtgacaa aacttggtag gaagtttcta gtacataagt 960

agaaactaga aaggagcaca agctaagagg agatgatcaa gaatcggttc gaagaagcta 1020

gaggcccagt gcatgacaat tgacacattt atttgcaggt tcatttgtta tgatcttcag 1080

cgtgtatgtt gtaaagacga gcaactatcc aatgctctgc gagtttgtag gataggaaaa 1140

ctattctaga atacaaacgt gtgaggatca cccacaggaa atcaattact ctgcaaaatg 1200

gaggtaggta taccgtatgc aaaagcagaa taaatggccg gggcctgggg cacaaacaaa 1260

aggaaactgt ggttgcttga tgtcttaaca cttgtcagta tccctgctct cccccttctg 1320

ggggccaagc accgagcaat gtgttcatta ggtactctaa tatttggttc cccattccag 1380

gatcaaattc ttggtttgag gaattaagaa ttgatatgtg cgcccctgtc accatgttat 1440

ttgccgctct gttaatcctc attgcaattt gggcaagttg tgtgtagctg catacttgcg 1500

cttaccttta aggtggtgtg attttaggag ttagactact ggtactggga ccatgagagg 1560

taacataaca aatgaaaata acagtgacgc agaccacttc agataaacaa gtgattcaat 1620

tgggtgttta gggaaagaaa ccaaatctga caggtatctg tactgaaatt tcctagtttt 1680

gctggtggta tccaagtttg taatatgctt tgcacgactt cctcagtgat cttctgtctg 1740

tggctgaaat gttgaccctc cctcttatag ttgtgttaca gtttaggctc caaattttgc 1800

tgcttggaaa gtactcctta tatgaagctt aagtaccttt ttgtaagcac acatgctcta 1860

ttttaaaaac cacagtgatc tgtgtgtcca gtgtccacaa gggaatacca tctccctagg 1920

ggtttgtttt aagttatgtt cttatggcta tcctaattta attagtggaa tttgcagcga 1980

agctcttgga ctgaggccct cacttaggtt ctgtttcagg ccgcctttgg aatgcaggaa 2040

tttcatagga atcatacaag aatttcacag gaatcagttc attttcacag aaaaaacaca 2100

ggaaacagga aaaaatcccg cattccaaag tggggctcaa ccatcttgct attataacca 2160

tttgtgatgt tgtttgggac taaacataat gtgtgtgtgt gtgggggggg gggggggttg 2220

cctgctgaga gtttactttg tagtacatat ggaaaggttc ataagcaaaa ataaaaggaa 2280

atgattaaca ataagtggga aaggctaaaa tttatttgca ggttcatttg ttatgacctt 2340

tatatgtatc ctggctgtaa tgatatgctt ggggggggga ggtccagagg acaaccatgt 2400

aacaataacc agcaagaaat cagttacttt gcaaatacgg tgatagaaag gtagctactt 2460

gagaagaaat ccaggggctg cccgcactca tgattctctg tccttattct ctcaccattt 2520

tgcggggtaa agcagtgagc aaagaaagaa ttgagatttt gacccttagg tactcaaatg 2580

tctcacctct aatccagttt taaatgaaag ttgttggatg ctttggaagt actatctacc 2640

agtttgcatg gagggatcct aactggatgg gccttggcaa acgaagatag gaacttagtg 2700

ttccattaac gaattgttca ataaatgtta caaagtactg acagagtttc ttcatccagg 2760

tttatggtta tgacaggacg ctgttccagc ccttcgacgt gccttcaaat gagcctcctc 2820

gttcatctga aaagttcaaa ggaaacacta tcaacgggca gtctaatagt acaagaagag 2880

aacctttgag gatgtcctca cagaccaaga acaaggacgt ctgtgcttca aaatcaattg 2940

ccaagtgcac ctcacagcat agagtgggca acaccatcat gtcttctgga aagaaagtgg 3000

tcagtgatga tgaatttatg gttccttcca tctgttatcc tagattttat cgacagtcta 3060

ctcaagatca tgcagataaa tcaaaacccc aatctactac aaacccacac aaaagtcctg 3120

caatgtccaa atcatctgta gagtgctata gtactgtgaa caagcacttg gacaaaatca 3180

atgaagctga taggaggtta atgaactctc caaaggttaa ggagaaagaa gcagtgcaag 3240

gatcaaaagc tgtggaagtt aaagaaaaga gttcatcatt tcaggcatca gaaaagttca 3300

aagacaaata tgctaagcta tgtcaaatga ggaataaggc aagtaatata aatcattgtg 3360

acaacaacgg ttgccaacct gcaagcgtga atggaaattt cacagaagca aagaacccta 3420

cagcagctag aaatacatct tcctgtaaac catgtactga tgtagatagc tctaacagga 3480

agtctaattt actggaaaga agcccacggg aagttggtgc taagagaaaa agaggacatc 3540

acaatggaga gcaaaatgat gatttatctg actcctcagt ggaatgcata cctggggggg 3600

agatctctcc agatgaaatt gttgctgcta ttggtccaaa gcatttctgg aaagcaagaa 3660

gagctattca gaagtaagta tatggtgctt gagtagctgt tttgtagttt tgtaccaagt 3720

atttgtagca ttctttagac aatactattc atatgtttca ctctgcttat ttcctttttc 3780

ttttagtttt cagttaattg tcatatggaa gacaaaagta tgaagatgat aagtctgttg 3840

tttggttttc agtacctaac tattctgttg tactattaaa tataaactgt ggataataat 3900

gaatgccttc aattttgatt cttttaagta gaaaacatgg tagtttcatc caaaagaata 3960

gtatgttgct tgtaagactg atattgtgaa tatttctttc ttgctttctg gattgctgca 4020

taatgccttt ttttatgttt tacactctgt cctgttaaaa tctacagtca gcagagggtt 4080

tttgctgtcc aagtgttcga gctgcataag ctgataaaag taagtctcca ggaaatcgat 4140

acatctttct tcctttttcc gttcataagt aggttatctt atgtgataca attttgtgca 4200

caatgctatt ataaccccgt ttgtaattga cttccaaaca ggtgcagaaa ttaatcgcgg 4260

catctccaca tctgcttatt gaaggtgatc ctgtccttgg caatgcatta acaggaaaaa 4320

ggaacaaact tcctaaagga aattcgaaag ttcagaccct gtcaatcaca aacaaagatg 4380

atatccagcc aaccctagag caaccagagt tatcaaaaca agacacagaa ggaaacttat 4440

tggcccattc tcatgatgat ggacttggtg acaaccatca taatcaagct gcaacaaatg 4500

aaacctttac aagcaaccct ccagctatgc atgttgctcc tgacaacaaa cagaataact 4560

ggtgcatgaa tccaccgcag aatcaatggc ttgtcccagt tatgtcgcct tctgaaggtc 4620

ttgtctataa gccttttgcc ggcccttgtc ccccagttgg aaatctgctg acaccatttt 4680

acgccaactg tgctccgtca aggctgcctt ctacaccata tggcgttcct attcctcacc 4740

agccacagca catggtccct cctggtgccc ctgccatgca tatgaactac ttcccgcctt 4800

tcagtatgcc agtgatgaat ccaggaacac cagcatctgc agtggagcaa gggagccatg 4860

ctgctgcgcc acagcctcat gggcacatgg accagcagtc gctgatctca tgtaacatgt 4920

cacacccgag tggcgtttgg aggtttcttg catcaaggga cagcgagcca caggccagca 4980

gcgccaccag ccctttcgac aggctccaag tccaaggtga tggaagtgct ccgttgtcat 5040

tctttcccac ggcttcagct ccgaatgtcc agcctccgcc ctcatctgga ggccgggacc 5100

gggaccagca gaaccatgta atcagggttg ttccgcgtaa cgcacagact gcttcagtcc 5160

cgaaagccca acctcagccg tcatccggag gccgggacca aaagaaccat gtaatcaggg 5220

ttgttccgca taacgcgcag actgcttcgg agtcagcagc gtggatcttc cggtcaatac 5280

aaatggagag gaaccaaaat gattcgtagc tggttaccat atactttcgt gtcatccgat 5340

ggcagcttag tgcagcattg cagtttacag ggctacccga gctgcagatt atggtggctc 5400

ctgtattctg accactgatt gcgctttacc cgatcgtcat agatattgga tgatatgatc 5460

ttgtgttcta tgcagagttg taagccaaag ttgtgcccct gaagactgaa gtgacagccc 5520

tgaagttggg agtccttcct gattgtgcta tgactggaat tggtatatat ataggttact 5580

tgaacggttt cactgtgttg agctcaccac acggccgcgc ttctgtaaca tacaatacaa 5640

tagactatga gtggtacagt aggaagcagc agtcagaaaa tgactgctgg taccatgcta 5700

cggggtcgct atagattgat gtgtaccggt actctggttc tggtagtata tgctgctgta 5760

taattcagtg tttaattatc tatatattgt acattagctg tcaagcctgt aaggcattgt 5820

attgtgggca atgaatttgg ttgcaaatgt tcgtgtac 5858

<210> 16

<211> 2271

<212> DNA

<213> Zea mays L

<400> 16

atgacgaggg gaggcggtgg acaaggaggc aaggaggagc cggggaaggt gatgggtccg 60

ctgttcccgc ggctccacgt cagcgacgca ggcaagggcg gcggcccgcg ggctccgcca 120

aggaacaaga tggcgctcta cgagcagttc accgtgccgt ccaaccgctt cagctccccc 180

gcggcctccg cccgcgccgc gggggccagc ctcgtgccct ccacggcggc tgcccaggtt 240

tatggttatg acaggacgct gttccagccc ttcgacgtgc cttcaaatga gcctcctcgt 300

tcatctgaaa agttcaaagg aaacactatc aacgggcagt ctaatagtac aagaagagaa 360

cctttgagga tgtcctcaca gaccaagaac aaggacgtct gtgcttcaaa atcaattgcc 420

aagtgcacct cacagcatag agtgggcaac accatcatgt cttctggaaa gaaagtggtc 480

agtgatgatg aatttatggt tccttccatc tgttatccta gattttatcg acagtctact 540

caagatcatg cagataaatc aaaaccccaa tctactacaa acccacacaa aagtcctgca 600

atgtccaaat catctgtaga gtgctatagt actgtgaaca agcacttgga caaaatcaat 660

gaagctgata ggaggttaat gaactctcca aaggttaagg agaaagaagc agtgcaagga 720

tcaaaagctg tggaagttaa agaaaagagt tcatcatttc aggcatcaga aaagttcaaa 780

gacaaatatg ctaagctatg tcaaatgagg aataaggcaa gtaatataaa tcattgtgac 840

aacaacggtt gccaacctgc aagcgtgaat ggaaatttca cagaagcaaa gaaccctaca 900

gcagctagaa atacatcttc ctgtaaacca tgtactgatg tagatagctc taacaggaag 960

tctaatttac tggaaagaag cccacgggaa gttggtgcta agagaaaaag aggacatcac 1020

aatggagagc aaaatgatga tttatctgac tcctcagtgg aatgcatacc tgggggggag 1080

atctctccag atgaaattgt tgctgctatt ggtccaaagc atttctggaa agcaagaaga 1140

gctattcaga atcagcagag ggtttttgct gtccaagtgt tcgagctgca taagctgata 1200

aaagtgcaga aattaatcgc ggcatctcca catctgctta ttgaaggtga tcctgtcctt 1260

ggcaatgcat taacaggaaa aaggaacaaa cttcctaaag gaaattcgaa agttcagacc 1320

ctgtcaatca caaacaaaga tgatatccag ccaaccctag agcaaccaga gttatcaaaa 1380

caagacacag aaggaaactt attggcccat tctcatgatg atggacttgg tgacaaccat 1440

cataatcaag ctgcaacaaa tgaaaccttt acaagcaacc ctccagctat gcatgttgct 1500

cctgacaaca aacagaataa ctggtgcatg aatccaccgc agaatcaatg gcttgtccca 1560

gttatgtcgc cttctgaagg tcttgtctat aagccttttg ccggcccttg tcccccagtt 1620

ggaaatctgc tgacaccatt ttacgccaac tgtgctccgt caaggctgcc ttctacacca 1680

tatggcgttc ctattcctca ccagccacag cacatggtcc ctcctggtgc ccctgccatg 1740

catatgaact acttcccgcc tttcagtatg ccagtgatga atccaggaac accagcatct 1800

gcagtggagc aagggagcca tgctgctgcg ccacagcctc atgggcacat ggaccagcag 1860

tcgctgatct catgtaacat gtcacacccg agtggcgttt ggaggtttct tgcatcaagg 1920

gacagcgagc cacaggccag cagcgccacc agccctttcg acaggctcca agtccaaggt 1980

gatggaagtg ctccgttgtc attctttccc acggcttcag ctccgaatgt ccagcctccg 2040

ccctcatctg gaggccggga ccgggaccag cagaaccatg taatcagggt tgttccgcgt 2100

aacgcacaga ctgcttcagt cccgaaagcc caacctcagc cgtcatccgg aggccgggac 2160

caaaagaacc atgtaatcag ggttgttccg cataacgcgc agactgcttc ggagtcagca 2220

gcgtggatct tccggtcaat acaaatggag aggaaccaaa atgattcgta g 2271

<210> 17

<211> 756

<212> PRT

<213> Zea mays L

<400> 17

Met Thr Arg Gly Gly Gly Gly Gln Gly Gly Lys Glu Glu Pro Gly Lys

1 5 10 15

Val Met Gly Pro Leu Phe Pro Arg Leu His Val Ser Asp Ala Gly Lys

20 25 30

Gly Gly Gly Pro Arg Ala Pro Pro Arg Asn Lys Met Ala Leu Tyr Glu

35 40 45

Gln Phe Thr Val Pro Ser Asn Arg Phe Ser Ser Pro Ala Ala Ser Ala

50 55 60

Arg Ala Ala Gly Ala Ser Leu Val Pro Ser Thr Ala Ala Ala Gln Val

65 70 75 80

Tyr Gly Tyr Asp Arg Thr Leu Phe Gln Pro Phe Asp Val Pro Ser Asn

85 90 95

Glu Pro Pro Arg Ser Ser Glu Lys Phe Lys Gly Asn Thr Ile Asn Gly

100 105 110

Gln Ser Asn Ser Thr Arg Arg Glu Pro Leu Arg Met Ser Ser Gln Thr

115 120 125

Lys Asn Lys Asp Val Cys Ala Ser Lys Ser Ile Ala Lys Cys Thr Ser

130 135 140

Gln His Arg Val Gly Asn Thr Ile Met Ser Ser Gly Lys Lys Val Val

145 150 155 160

Ser Asp Asp Glu Phe Met Val Pro Ser Ile Cys Tyr Pro Arg Phe Tyr

165 170 175

Arg Gln Ser Thr Gln Asp His Ala Asp Lys Ser Lys Pro Gln Ser Thr

180 185 190

Thr Asn Pro His Lys Ser Pro Ala Met Ser Lys Ser Ser Val Glu Cys

195 200 205

Tyr Ser Thr Val Asn Lys His Leu Asp Lys Ile Asn Glu Ala Asp Arg

210 215 220

Arg Leu Met Asn Ser Pro Lys Val Lys Glu Lys Glu Ala Val Gln Gly

225 230 235 240

Ser Lys Ala Val Glu Val Lys Glu Lys Ser Ser Ser Phe Gln Ala Ser

245 250 255

Glu Lys Phe Lys Asp Lys Tyr Ala Lys Leu Cys Gln Met Arg Asn Lys

260 265 270

Ala Ser Asn Ile Asn His Cys Asp Asn Asn Gly Cys Gln Pro Ala Ser

275 280 285

Val Asn Gly Asn Phe Thr Glu Ala Lys Asn Pro Thr Ala Ala Arg Asn

290 295 300

Thr Ser Ser Cys Lys Pro Cys Thr Asp Val Asp Ser Ser Asn Arg Lys

305 310 315 320

Ser Asn Leu Leu Glu Arg Ser Pro Arg Glu Val Gly Ala Lys Arg Lys

325 330 335

Arg Gly His His Asn Gly Glu Gln Asn Asp Asp Leu Ser Asp Ser Ser

340 345 350

Val Glu Cys Ile Pro Gly Gly Glu Ile Ser Pro Asp Glu Ile Val Ala

355 360 365

Ala Ile Gly Pro Lys His Phe Trp Lys Ala Arg Arg Ala Ile Gln Asn

370 375 380

Gln Gln Arg Val Phe Ala Val Gln Val Phe Glu Leu His Lys Leu Ile

385 390 395 400

Lys Val Gln Lys Leu Ile Ala Ala Ser Pro His Leu Leu Ile Glu Gly

405 410 415

Asp Pro Val Leu Gly Asn Ala Leu Thr Gly Lys Arg Asn Lys Leu Pro

420 425 430

Lys Gly Asn Ser Lys Val Gln Thr Leu Ser Ile Thr Asn Lys Asp Asp

435 440 445

Ile Gln Pro Thr Leu Glu Gln Pro Glu Leu Ser Lys Gln Asp Thr Glu

450 455 460

Gly Asn Leu Leu Ala His Ser His Asp Asp Gly Leu Gly Asp Asn His

465 470 475 480

His Asn Gln Ala Ala Thr Asn Glu Thr Phe Thr Ser Asn Pro Pro Ala

485 490 495

Met His Val Ala Pro Asp Asn Lys Gln Asn Asn Trp Cys Met Asn Pro

500 505 510

Pro Gln Asn Gln Trp Leu Val Pro Val Met Ser Pro Ser Glu Gly Leu

515 520 525

Val Tyr Lys Pro Phe Ala Gly Pro Cys Pro Pro Val Gly Asn Leu Leu

530 535 540

Thr Pro Phe Tyr Ala Asn Cys Ala Pro Ser Arg Leu Pro Ser Thr Pro

545 550 555 560

Tyr Gly Val Pro Ile Pro His Gln Pro Gln His Met Val Pro Pro Gly

565 570 575

Ala Pro Ala Met His Met Asn Tyr Phe Pro Pro Phe Ser Met Pro Val

580 585 590

Met Asn Pro Gly Thr Pro Ala Ser Ala Val Glu Gln Gly Ser His Ala

595 600 605

Ala Ala Pro Gln Pro His Gly His Met Asp Gln Gln Ser Leu Ile Ser

610 615 620

Cys Asn Met Ser His Pro Ser Gly Val Trp Arg Phe Leu Ala Ser Arg

625 630 635 640

Asp Ser Glu Pro Gln Ala Ser Ser Ala Thr Ser Pro Phe Asp Arg Leu

645 650 655

Gln Val Gln Gly Asp Gly Ser Ala Pro Leu Ser Phe Phe Pro Thr Ala

660 665 670

Ser Ala Pro Asn Val Gln Pro Pro Pro Ser Ser Gly Gly Arg Asp Arg

675 680 685

Asp Gln Gln Asn His Val Ile Arg Val Val Pro Arg Asn Ala Gln Thr

690 695 700

Ala Ser Val Pro Lys Ala Gln Pro Gln Pro Ser Ser Gly Gly Arg Asp

705 710 715 720

Gln Lys Asn His Val Ile Arg Val Val Pro His Asn Ala Gln Thr Ala

725 730 735

Ser Glu Ser Ala Ala Trp Ile Phe Arg Ser Ile Gln Met Glu Arg Asn

740 745 750

Gln Asn Asp Ser

755

Claims (7)

1.调控玉米ZmELF3.1基因表达量的分子标记TE_11.8k，其特征在于，所述分子标记TE_11.8k的多核苷酸为SEQ ID No.1所示。

2.权利要求1所述的分子标记TE_11.8k在调控ZmELF3.1基因表达量中的应用；所述应用包括：在玉米ZmELF3.1基因的上游插入分子标记TE_11.8k，使玉米ZmELF3.1基因的表达量升高。

3.权利要求1所述的分子标记TE_11.8k在调控玉米开花期、光周期或纬度适应性中的应用；所述的应用包括：在玉米ZmELF3.1基因的上游插入分子标记TE_11.8k，使玉米ZmELF3.1基因的表达量升高，进而促进玉米早开花，增强玉米对长日照条件或高纬度地区的适应性。

4.一种调控玉米的开花期、光周期或纬度适应性的方法，其特征在于，包括：将权利要求1所述的分子标记TE_11.8k插入到ZmELF3.1基因的上游，影响ZmELF3.1基因在玉米中的表达量，进而影响玉米的开花期、光周期或纬度适应性。

5.一种检测权利要求1所述的分子标记TE_11.8k是否在玉米自然材料中存在的方法，其特征在于，包括通过检测TE_6.5k的插入情况来指示TE_11.8k的插入情况；所述TE_6.5k的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。

6.含有权利要求1所述的分子标记TE_11.8k的重组表达载体。

7.权利要求6所述的重组表达载体在调控玉米开花期及不同维度适应性育种中的应用。

Images