CN111073835B

CN111073835B - 一株能有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌及其应用

Info

Publication number: CN111073835B
Application number: CN201911389053.6A
Authority: CN
Inventors: 倪云霞; 何碧珀; 刘新涛; 赵辉; 刘红彦; 赵新贝; 千慧敏
Original assignee: Institute of Plant Protection of Henan Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Plant Protection of Henan Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2019-12-28
Filing date: 2019-12-28
Publication date: 2022-07-12
Anticipated expiration: 2039-12-28
Also published as: CN111073835A

Abstract

本发明涉及一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌株及其应用，属于生物修复技术领域。该门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019302。本发明还提供了该菌株的筛选方法以及应用该菌株得到的菌悬液。本发明的门多萨假单胞菌SFAD3在添加100mg/L的阿特拉津的基础盐培养基中培养15d，降解率达到50.06％，表明该菌株能有效降解阿特拉津；在含阿特拉津的土壤中处理30d，降解率达到72.6％，表明SFAD3对被阿特拉津污染的土壤有较好修复作用；同时采用本发明筛选的门多萨假单胞菌发酵液对芝麻苗生长具有一定促生作用。

Description

一株能有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌及其应用

技术领域

本发明涉及一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌株，属于生物修复技术领域。

背景技术

阿特拉津(atrazine)通用名莠去津，化学名称为2-氯-4-乙胺基-6-异丙胺基 -1,3,5-三嗪，属于三嗪类除草剂，广泛用于玉米、高粱、大豆等旱田作物防除一年生禾本科杂草马唐、稗草、狗尾草、莎草及十字花科和豆科杂草，对多年生杂草也有一定抑制作用。阿特拉津属于低毒除草剂，因其在土壤中持留性和半衰期较长，容易对水稻、小麦、大豆等后茬敏感作物产生药害；污染地下水和地表水，威胁到人类和动物健康以及生态环境。

微生物降解是一种公认的环境友好型去除污染物的方法。假单胞属ADP菌株(Pseudomonas sp.ADP)和节杆菌属TC1(Arthrobacter sp.TC1)是研究降解阿特拉津的模式菌株，其降解原理已研究的比较透彻。目前报道门多萨假单胞菌能够降解的农药有甲胺磷、氟磺胺草醚、单甲脒，还没有关于降解阿特拉津的报道。

发明内容

本发明提供了一株门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)菌株，可有效降解阿特拉津，为三嗪类除草剂的环境修复提供理论依据和微生物资源。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌，该门多萨假单胞菌为门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国武汉，保藏编号为CCTCC NO：M2019302，保藏日期：2019年04月28日。

一种门多萨假单胞菌的筛选方法，在河南省农业科学院原阳实验基地的玉米田采集土壤，将土壤样品充分混匀，取10g土样加入到含阿特拉津10mg/L的基础盐培养基100mL中，30℃、180r/min震荡培养；每7d以10％的转接量将培养物转到阿拉特津浓度递增的基础盐培养基中，基础盐培养基中阿拉特津的浓度分别为10mg/L、20mg/L、30mg/L、50mg/L、100mg/L；取阿特拉津浓度为 100mg/L时的富集培养物依次倍比稀释到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5，各浓度取100μL分别涂布到含阿特拉津为100mg/L的固体基础盐培养基平板上，将平板放置于30℃恒温箱培养，培养3～5d后，挑取有水解圈的菌落，划线分离纯化，筛选出能有效降解阿特拉津的菌株，经鉴定，获得的降解菌为门多萨假单胞菌 SFAD3。

所述的基础盐培养基的成分为：0.45g KH₂PO₄，1.79g K₂HPO₄，0.4g NaCl， 0.2gMgSO₄·7H₂O，蒸馏水定容至1000mL，pH 7.0。

一种门多萨假单胞菌降解阿特拉津配制的菌悬液，挑取门多萨假单胞菌 SFAD3单菌落接种于LB液体培养基，30℃、200r/min震荡培养16～20h；取过夜培养的菌液，4000r/min离心10min，弃上清，沉淀用基础盐培养基洗涤3次；然后将沉淀用基础盐培养基配制成1×10⁹cfu/mL的菌悬液。

所述的菌悬液震荡培养时，在培养基为基础盐培养基，温度为37℃，pH为 7，菌悬液的接种量为2％的条件下，降解阿特拉津的效果最好。

一种所述的门多萨假单胞菌在有效降解阿特拉津方面的应用。

一种所述的门多萨假单胞菌在含有阿特拉津残留的土壤修复方面的应用。

一种所述的门多萨假单胞菌发酵液对芝麻苗生长方面的应用。

本发明有益效果：

1.本发明提供一株有效降解阿特拉津的菌株SFAD3，结合形态、生理生化特征和分子鉴定结果，确定SFAD3属于假单胞属(Pseudomonas)，为门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)。

2.本发明的门多萨假单胞菌SFAD3在添加100mg/L的阿特拉津的基础盐培养基中培养15d，降解率达到50.06％，表明门多萨假单胞菌SFAD3能有效降解阿特拉津。

3.环境条件对本发明的门多萨假单胞菌SFAD3的降解效率有显著影响，菌株SFAD3在温度为37℃、pH为7、阿特拉津初始浓度为6.25mg/L、接种量为 2％的条件下能够更好地降解阿特拉津。

4.本发明的门多萨假单胞菌SFAD3在含50mg/Kg阿特拉津的土壤中处理 30d，降解率达到72.6％，表明SFAD3对被阿特拉津污染的土壤有较好的修复作用。

5.采用本发明筛选的门多萨假单胞菌SFAD3的发酵液测定对芝麻苗生长的影响，结果表明1×10⁹cfu/mL的SFAD3发酵液对芝麻苗生长具有一定促生作用，与对照相比，其根长增长14.17％，鲜质量增加20.33％，干质量增加11.76％，促生效果明显。

附图说明

图1基于16S rDNA同源分析的菌株SFAD3系统发育树；

图2环境条件对菌株SFAD3生长及降解阿特拉津的影响；

图3菌株SFAD3对土壤中阿特拉津的降解。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实验材料：

基础盐培养基：0.45g KH₂PO₄，1.79g K₂HPO₄，0.4g NaCl，0.2g MgSO₄·7H₂O，蒸馏水定容至1000mL，pH 7.0，加入适量阿特拉津作为唯一碳氮源。

LB培养基：10g胰蛋白胨，5g酵母粉，10g NaCl，蒸馏水1000mL，pH 7.0。

阿特拉津甲醇溶液：称取1g阿特拉津原药，加入90mL甲醇溶解，定容至 100mL，阿特拉津母液终浓度为10000mg/L。

菌株来源：门多萨假单胞菌SFAD3分离自河南省农业科学院实验基地(原阳)玉米田的土壤样品。

实施例一：阿特拉津降解菌的筛选

筛选方法：在河南省农业科学院原阳实验基地的玉米田采集土壤，取土壤样 10g，加入到含阿特拉津10mg/L的基础盐培养基(100mL)中，充分混匀后， 30℃、180r/min震荡培养；每7d以10％的转接量将培养物转到阿拉特津浓度递增的基础盐培养基中，基础盐培养基中阿拉特津的浓度分别为10mg/L、20mg/L、 30mg/L、50mg/L、100mg/L；取阿特拉津浓度为100mg/L时的富集培养物倍比稀释到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5五个浓度，各浓度取100μL分别涂布到含阿特拉津为100mg/L的固体基础盐培养平板上，将平板放置于30℃恒温箱培养，培养3～5d后，挑取有水解圈的菌落，划线分离纯化，筛选出能有效降解阿特拉津的菌株SFAD3。

本实施方式从经过富集驯化的土样中获得3株能够降解阿特拉津的菌株，其中编号为SFAD3的菌株5d后能在添加100mg/L的阿特拉津的基础盐平板上形成明显的水解圈，表明SFAD3具有较好的降解能力。

实施例二：菌株SFAD3降解能力测定

挑取SFAD3单菌落接种于LB液体培养基，30℃，200r/min震荡培养16～20 h；取过夜培养的菌液，4000r/min离心10min，弃上清，用基础盐培养基洗涤3 次；将沉淀用基础盐培养基配制成1×10⁹cfu/mL的菌悬液。将菌悬液以2％的接入量添加到含100mg/L阿特拉津的基础盐培养基中，30℃、180r/min震荡培养，设置不接菌为对照，各3个重复。分别在培养3d、6d、9d、12d、15d时取样，用二氯甲烷萃取3次，二氯甲烷体积依次为样品体积的50％、20％、20％，将萃取液蒸发干燥，用甲醇(高效液相色谱级)溶解，定容至5mL，过0.22μm滤膜，用高效液相色谱检测其残留。高效液相色谱(HPLC)条件：色谱柱：Inertsil ODS-3C18(4.6×125mm，5μm)，柱温：35℃；流动相甲醇：水＝70：30(v/v)；检测波长：225nm；流速：1mL/min；进样量：10μL。根据HPLC测定结果，计算阿特拉津降解率，计算公式如下：

降解率(％)＝(阿特拉津初始浓度-阿特拉津终浓度)/阿特拉津初始浓度×100％本实施方式菌株SFAD3对阿特拉津的降解如表1所示，菌株SFAD3在添加 100mg/L的阿特拉津的基础盐培养基中培养15d，降解率能达到50.06％，说明菌株SFAD3能有效降解阿特拉津。

表1基础盐培养基中SFAD3对阿特拉津的降解

表中降解率为：均值±标准误，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。

实施例三：菌株SFAD3的形态学观察和生理生化鉴定

观察生长于LB平板上的SFAD3菌落形态，通过革兰氏染色观察菌体特征；参照《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)测定菌株生理生化相关指标。

菌株SFAD3形态学观察表明：SFAD3在LB培养基上菌落粘稠，有光泽，不透明，表面平滑，边缘不规则，菌落淡黄色，没有色素产生；革兰氏染色呈阴性，无芽孢，菌体短杆状；SFAD3的生理生化测定结果如表2所示，甲基红反应、明胶水解试验、淀粉水解试验、几丁质水解试验、纤维素水解试验和酪氨酸水解试验均为阴性，过氧化氢酶试验和精氨酸双水解试验试验为阳性；SFAD3可利用的碳源有：甘油、麦芽糖、乳糖、蔗糖、葡萄糖、木糖和甘露醇，不能利用的碳源有果糖和山梨醇。

表2菌株SFAD3的生理生化特征

实施例四：菌株SFAD3的分子鉴定

SFAD3基因组DNA采用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法提取：在LB 培养基平板上划线SFAD3，37℃过夜培养；挑取单菌落于100mL LB液体培养基中，30℃，200r/min震荡培养16～20h；取过夜培养的菌液，5000r/min离心 10min，弃上清；用10mL TE重悬菌体，加入500μL 10％SDS，50μL蛋白酶 K，20μl RNAase，振荡混匀，37℃水浴1h消化掉大部分蛋白质和RNA；加入 1.5mL 65℃预热的5M NaCl，混匀后再加入1.5mL 65℃预热的CTAB/NaCl溶液，混匀，65℃水浴20min；加入等体积酚/氯仿/异戊醇轻轻混匀，12000r/min 离心10min，将上清转到无菌离心管；加入等体积的氯仿/异戊醇抽提，将上清移至干净的离心管中；加入2倍体积的无水乙醇，颠倒混匀，-20℃静置30min， 12000r/min离心10min，得到DNA沉淀；用75％乙醇洗涤两次，37℃干燥，溶于200μL TE/RNase溶液，65℃温育1h，-20℃保存备用。

PCR反应扩增模板为SFAD3基因组DNA，引物为细菌通用引物27F：5′ -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′(SEQ ID NO.1)和1492R：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′(SEQ ID NO.2)。

PCR反应扩增体系为25μL，其中Mix 12.5μL、上游引物(10μmol/L)和下游引物(10μmol/L)各1μL、模板DNA1μL、双蒸水补足至25μL。PCR扩增条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，54℃退火1min，72℃延伸90s，循环35次；72℃再延伸10min。

PCR产物经1％琼脂糖凝胶检测后送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将测序获得的序列进行BLAST比对，检索出相似性高且具有代表性的菌株，用BioEdit 7.0软件对其进行多重比对，再用MEGA 4.0软件进行聚类分析，构建系统发育树，对菌株进行进一步鉴定。

本实施方式获得降解菌SFAD3的16S rDNA序列，长度为1439bp，测序结果与GenBank中的16S rDNA序列进行同源性比对，结果显示，SFAD3的16S rDNA与假单胞属(Pseudomonas)的多种细菌的16S rDNA序列都具有99％的相似性。利用MEGA 4.0软件进行聚类分析，如图1所示，SFAD3与门多萨假单胞菌(登录号CP_013124.1、CP_02364.1、CP_000680.1)聚为一簇，自举验证支持率达到98％。结合形态观察与生理生化特征，确定门多萨假单胞菌SFAD3 属于假单胞属(Pseudomonas)，为门多萨假单胞菌(Pseudomonasmendocina)。 SFAD3 16S rDNA序列：

GTTACCCTTTGTAGACTTCACCCCAGTCATGAATCACTCCGTGGTAACCGTC CCCCCGAAGGTTAGACTAGCTACTTCTGGAGCAACCCACTCCCATGGTGTG ACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTGACATTCTGATT CACGATTACTAGCGATTCTGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATC CGGACTACGATCGGTTTTATGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCAACC CTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTGGCCGTAAGGGCCATG ATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTT AGAGTGCCCACCATAACGTGCTGGTAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTT ACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAG CACCTGTGTCTGAGCTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCA GCATGTCAAGGCCAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACAT GCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCG GCCGTACTCCCCAGGCGGTCAACTTAATGCGTTAGCTGCGCCACTAAGTACTCAAGGTACCCAACGGCTAGTTGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGG TATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATCAGT CCAGGTGGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCAC CGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTACCGTACTCTAGCTCGCCAGTTTT GGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGCTTTCACATCCAACTTAACGAAC CACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTTCG TATTACCGCGGCTGCTGGCACGAAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTCGGTAAC GTCAAAACAGCAAGGTATTAACTTACTGCCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGC TTTACAATCCGAAGACCTTCTTCACACACGCGGCATGGCTGGATCAGGCTT TCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCG TGTCTCAGTTCCAGTGTGACTGATCATCCTCTCAGACCAGTTACGGATCGTC GCCTTGGTGAGCCATTACCTCACCAACTAGCTAATCCGACCTAGGCTCATCT GATAGCGCAAGGCCCGAAGGTCCCCTGCTTTCTCCCGTAGGACGTATGCGGTATTAGCGCCCGTTTCCGGACGTTATCCCCCACTACCAGGCAGATTCCTAGG CATTACTCACCCGTCCGCCGCTAAATCAGAGAGCAAGCTCTCTTCATCCGC (SEQ ID NO.3)。

实施例五：环境条件对门多萨假单胞菌SFAD3生长及降解阿特拉津的影响菌悬液的制备参考实施例二。通过改变温度、pH值、阿特拉津初始浓度和接种量，测定不同环境对菌株SFAD3降解阿特拉津的影响。测定培养温度(20℃、 25℃、30℃、37℃、40℃)的影响时，培养基中阿特拉津的初始浓度为100mg/L， pH为7，接种量2％；

测定pH值(5、6、7、8、9)的影响时，培养基中阿特拉津初始浓度为100 mg/L，接种量为2％，培养温度为30℃；

测定基础盐中阿特拉津初始浓度(6.25、12.5、25、50、100mg/L)时，pH 为7，接种量为2％，培养温度为30℃；

测定接种量(0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％)时，培养基中阿特拉津的初始浓度为100mg/L，pH为7，培养温度为30℃。所有处理重复3次，以不接菌为对照，培养7d后，(1)通过高效液相色谱法测定SFAD3降解率；(2)通过平板稀释涂布法，测定培养液中生物量。

环境条件对门多萨假单胞菌SFAD3生长及降解阿特拉津的影响见图2。

图2-a显示培养温度对菌株SFAD3的生长及降解率的影响。SFAD3对阿特拉津的降解能力随培养温度的升高呈先上升后下降的趋势。当温度升高到37℃时，菌株的生物量和降解率均达最大值，分别为9.34(log cfu/mL)和55.57％，表明SFAD3在37℃时降解能力最强；

图2-b显示pH值对菌株SFAD3的生长及降解率的影响。SFAD3在培养基 pH为6-8时的生物量较多，且降解率在47.88-52.02％之间。当pH为7时菌株生物量和降解率最大，分别为9.3(log cfu/mL)和52.1％，表明该菌株适合中性环境生长；

图2-c显示阿特拉津初始浓度对SFAD3的生长及降解率的影响。随着阿特拉津浓度的降低，SFAD3的生长及代谢受到的毒性抑制逐渐降低，降解能力增加，其降解率逐渐上升。当阿特拉津初始浓度低于50mg/L时，其降解率均在 65％以上，其中6.25mg/L时，菌株的生长量和降解率均最大，分别为9.59(log cfu/mL)和72.2％；

图2-d显示接种量对菌株SFAD3的生长及降解率的影响。随着培养基中初始接种量的增加，菌株的降解能力呈先上升后降低的趋势。初始接种量为2％条件下，菌株生物量最大，降解率为50.04％，说明2％为最佳接种量，这可能是因为培养前期，菌株可以从培养基中获得较多的营养；但是到培养后期，培养基中的营养成分被菌株消耗，菌株生长受到抑制，因此降解酶减少，降解阿特拉津的能力下降。

实施例六：门多萨假单胞菌SFAD3对含有阿特拉津残留的土壤的修复作用

称取10g不含阿特拉津的无菌土到9cm直径的无菌培养皿中，均匀加入500 μL稀释10倍的阿特拉津甲醇溶液，使土壤中阿特拉津的终浓度为50mg/Kg，待甲醇挥发后，加入2mLSFAD3菌悬液，菌悬液制备参照实施例二。设置不接菌的土壤样品为阴性对照，每个处理3个重复。放置在37℃恒温培养箱，定期喷洒少量无菌水，以保持土壤湿润。分别在第5、10、15、20、25、30d取样，测定阿特拉津降解情况。在待测的10g土壤样品加入30mL二氯甲烷，剧烈震荡30min后，12000r/min离心10min，取上清到蒸发皿中蒸发干燥，甲醇调整体积，定容到10mL，过0.22μm滤膜，参照实施例二检测土壤中残留的阿特拉津。

本实施方式门多萨假单胞菌SFAD3对阿特拉津残留土壤的修复效果见图3。不同取样时间下，接菌处理以及未接菌处理土壤样品中阿特拉津残留量如图3所示。随着培养时间的延长，2种处理中阿特拉津的浓度变化差异逐渐增大，经过30d的模拟修复试验，在接菌处理实验中，土壤中阿特拉津的浓度由50mg/Kg 降低到13.7mg/Kg，降解率达72.6％，表明菌株SFAD3对土壤中阿特拉津有较好的降解能力。在未接菌处理的对照实验中，土壤中阿特拉津的浓度由50mg/Kg 降低到46.3mg/Kg，降解率仅为7.4％。表明门多萨假单胞菌SFAD3对阿特拉津残留土壤有较好的修复效果。

实施例七：门多萨假单胞菌SFAD3发酵液对芝麻苗生长的影响

SFAD3发酵液制备：在LB培养基平板上划线SFAD3，37℃静置培养16～20 h；挑取单菌落于200mL LB液体培养基中，37℃，200r/min震荡培养培养48h，用血球计数板计数后，调整菌体浓度至1×10⁹cfu/mL。

以芝麻做指示植物，采用盆栽方式，挑选饱满的芝麻种子在28℃恒温培养箱催芽24h后播种在无菌土壤中。待芝麻苗生长到两叶一心时进行定苗，每盆留4棵长势一致的芝麻苗。设置2个处理：处理1为空白对照，用无菌水灌根，每棵苗5mL；处理2用1×10⁹cfu/mL的SFAD3发酵液灌根，每株5mL，发酵培养基为LB培养基。每个处理16棵芝麻苗，重复3次。将处理好的芝麻苗放置于光照温室中(28～32℃)，定期浇水，培养21d后调查芝麻苗的生长情况，记录株高、根长、鲜质量以及干质量，用Excel、DPSSOFT统计学软件对获得的数据进行分析。

本实施方式门多萨假单胞菌SFAD3对芝麻苗生长的影响见表3。培养21d 后，SFAD3发酵液灌根处理实验组芝麻苗的根长、鲜质量和干质量分别为13.13 cm、2.19g和0.19g，与对照相比，根长增长14.17％，鲜质量增加20.33％，干质量增加11.76％，差异显著(表3)；2种处理的株高差异不显著。综上所述，菌株SFAD3对芝麻生长具有一定的促生作用。

表3菌株SFAD3发酵液对芝麻苗生长的影响

序列表

<110> 河南省农业科学院植物保护研究所

<120> 一株能有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌及其应用

<130> 生物防治和修复技术领域

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 1

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 2

ggttaccttg ttacgactt 19

<210> 3

<211> 1439

<212> DNA

<213> 人工序列()

<400> 3

gttacccttt gtagacttca ccccagtcat gaatcactcc gtggtaaccg tccccccgaa 60

ggttagacta gctacttctg gagcaaccca ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa 120

ggcccgggaa cgtattcacc gtgacattct gattcacgat tactagcgat tctgacttca 180

cgcagtcgag ttgcagactg cgatccggac tacgatcggt tttatgggat tagctccacc 240

tcgcggcttg gcaacccttt gtaccgacca ttgtagcacg tgtgtagccc tggccgtaag 300

ggccatgatg acttgacgtc atccccacct tcctccggtt tgtcaccggc agtctcctta 360

gagtgcccac cataacgtgc tggtaactaa ggacaagggt tgcgctcgtt acgggactta 420

acccaacatc tcacgacacg agctgacgac agccatgcag cacctgtgtc tgagctcccg 480

aaggcaccaa tccatctctg gaaagttctc agcatgtcaa ggccaggtaa ggttcttcgc 540

gttgcttcga attaaaccac atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca attcatttga 600

gttttaacct tgcggccgta ctccccaggc ggtcaactta atgcgttagc tgcgccacta 660

agtactcaag gtacccaacg gctagttgac atcgtttacg gcgtggacta ccagggtatc 720

taatcctgtt tgctccccac gctttcgcac ctcagtgtca gtatcagtcc aggtggtcgc 780

cttcgccact ggtgttcctt cctatatcta cgcatttcac cgctacacag gaaattccac 840

caccctctac cgtactctag ctcgccagtt ttggatgcag ttcccaggtt gagcccgggg 900

ctttcacatc caacttaacg aaccacctac gcgcgcttta cgcccagtaa ttccgattaa 960

cgcttgcacc cttcgtatta ccgcggctgc tggcacgaag ttagccggtg cttattctgt 1020

cggtaacgtc aaaacagcaa ggtattaact tactgccctt cctcccaact taaagtgctt 1080

tacaatccga agaccttctt cacacacgcg gcatggctgg atcaggcttt cgcccattgt 1140

ccaatattcc ccactgctgc ctcccgtagg agtctggacc gtgtctcagt tccagtgtga 1200

ctgatcatcc tctcagacca gttacggatc gtcgccttgg tgagccatta cctcaccaac 1260

tagctaatcc gacctaggct catctgatag cgcaaggccc gaaggtcccc tgctttctcc 1320

cgtaggacgt atgcggtatt agcgcccgtt tccggacgtt atcccccact accaggcaga 1380

ttcctaggca ttactcaccc gtccgccgct aaatcagaga gcaagctctc ttcatccgc 1439

Claims

1.一株有效降解阿特拉津的门多萨假单胞菌（Pseudomonas mendocina），其特征在于：所述的门多萨假单胞菌为门多萨假单胞菌SFAD3，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2019302，保藏日期：2019年04月28日。

2.一种采用权利要求1的门多萨假单胞菌降解阿特拉津配制的菌悬液，其特征在于：

挑取门多萨假单胞菌SFAD3单菌落接种于LB液体培养基，30℃、200 r/min震荡培养16~20 h；取过夜培养的菌液，4000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀用基础盐培养基洗涤3次；然后将沉淀用基础盐培养基配制成1×10⁹ cfu/mL的菌悬液。

3.根据权利要求2所述的菌悬液，其特征在于：震荡培养时，所用培养基为基础盐培养基，温度为37℃，pH为7。

4.根据权利要求3所述的菌悬液，所述的基础盐培养基成分为：0.45 g KH₂PO₄，1.79 gK₂HPO₄，0.4 g NaCl，0.2 g MgSO₄·7H₂O，蒸馏水定容至1000 mL，pH 7.0。

5.一种如权利要求1所述的门多萨假单胞菌在有效降解阿特拉津方面的应用。

6.一种如权利要求1所述的门多萨假单胞菌在含有阿特拉津残留的土壤修复方面的应用。

7.一种如权利要求1所述的门多萨假单胞菌在促进芝麻苗生长中的应用。