CN111067867A - 一种绿原酸长循环脂质体及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种绿原酸长循环脂质体及其制备方法与用途。本发明的绿原酸脂质体，以含有PEG化磷脂的脂质材料为膜材，包载绿原酸活性成分，制备平均粒径在50‑500nm的脂质体。本发明的绿原酸长循环脂质体，可延长绿原酸在血液中的驻留时间(MRT)，减慢药物清除速率(CLz)，提高血浆暴露量(药时曲线下AUC)，有利于绿原酸更好的发挥其生物学效应。

Description

一种绿原酸长循环脂质体及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种绿原酸长循环脂质体技术，属于医药制备的技术领域。
背景技术
绿原酸又名咖啡鞣酸(Chlorogenic acid，简称CHA)，是广泛存在于金银花、杜仲科植物杜仲的叶、葵花籽、茵陈和蓝盆花等植物中的一种有机酸，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、降糖、降脂、降血压和免疫调节等多种药理作用。绿原酸分子结构中含有最适合酚酶催化的反应底物邻二酚羟基，使得其化学性质极不稳定，受热及见光易氧化。
绿原酸结构中存在较多的酚羟基和一个羧基，在体内极易被灭活且被快速消除，体内驻留时间短、清除速率快，不利于其体内生物学效应发挥。
脂质体是由磷脂双分子层组成的囊泡，根据教科书记载，脂质体具有生物相容性好、无毒和无免疫原性等特点，有利于实现体内缓释效果，使其成为药物递送的优良载体。关于脂质体包载药物后对体内药代动力学特征的影响，不同的药物表现结果有所不同，既有延长循环时间的，也有加快药物清除的。这一方面取决于被包载药物的理化性质，另一方面还与磷脂-胆固醇比例(即脂材比)、药物与脂质材料的质量比有关，此外还与磷脂的衍生化修饰有关。有文献[1]以磷脂和胆固醇为膜材，对包载绿原酸的普通脂质体进行了研究，结果显示，与绿原酸溶液相比，这种普通脂质体提高了储存的化学稳定性，动物口服给药后的血药浓度有所升高，但无数据显示其体内驻留时间延长或血浆暴露量增加。
绿原酸具有良好的水溶性，同时还易溶于乙醇、甲醇和丙酮，表现出一定的亲脂性，但总体而言，其亲水性大于亲脂性，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。关于绿原酸的长循环脂质体，国内外均未见文献研究与报道。鉴于其特殊的理化性质，无法根据现有的对比文件及教科书知识，获得“绿原酸长循环脂质体”的相关教导。
发明内容
本发明基于大量的研究与探索，公开了一种绿原酸长循环脂质体，还公开了这种脂质体的制备方法和用途。
本发明公开的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，使用含有聚乙二醇(PEG)化磷脂(简称PEG化磷脂)的脂质材料为膜材，包载绿原酸活性成分，制备得到平均粒径为50-500nm的脂质体，优选 100-400nm。
本发明公开的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，膜材中除PEG 化磷脂外，还含有磷脂和胆固醇。任选地，膜材中还可加入离子型或非离子型的表面活性剂。
本发明公开的绿原酸长循环脂质体，绿原酸与膜材的质量比为 1:2-1:100，优选地，1:3-1:50,更优选为1:5-1:20。
本发明中，所述的PEG化磷脂，由“磷脂-PEG-活性基团”三部分组成，其中，磷脂选自二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆寇酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)和二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE) 中的一种，优选地为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)和二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)，更优选为二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)；PEG分子量选自1000－10000Da,优选地为2000－8000Da，更优选为2000－5000Da；活性基团选自－羟基(OH)、-马来酰亚胺基团(MAL)、-N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、-氨基(NH2)、-羧基(COOH)、-巯基(SH)、-醛基(CHO)、-叶酸(Folate)、－甘露糖(Man)、-(天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸，NGR)短肽-(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，RGD)短肽、－单克隆抗体和－多肽，优选地为－羟基(OH)、-叶酸(Folate)、－甘露糖(man)、－半乳糖凝集素(Gal)、-(天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸，NGR)短肽-(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，RGD)短肽、－单克隆抗体和－多肽，更优选地为－羟基(OH)、－甘露糖(Man)和－半乳糖凝集素(Gal)。
本发明中，所述的磷脂，选自天然磷脂、合成磷脂中的一种或它们的混合物；优选地，为天然磷脂，选自大豆磷脂、蛋黄磷脂中的一种或它们的混合物。
本发明中，以脂质体膜材的总重量为100计，PEG化磷脂所占重量百分比为5％～50％,优选地为10％～30％；磷脂所占重量百分比为 30％～85％，优选地为50％～70％；胆固醇所占重量百分比为5％～ 25％，优选地为10％～20％。
本发明的绿原酸长循环脂质体，任选地，可采用薄膜分散法、二次乳化法、乙醇注入法或逆向蒸发法制备。
本发明中，所述的薄膜分散法，按如下步骤操作：
1)脂材溶液配制：称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇，分别加入有机溶剂溶解制成浓度在5-40mg/ml的溶液，有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氢呋喃、丙酮、无水乙醇中的一种或它们的混合物；
2)药物溶液：称取绿原酸，加有机溶剂制成1-5mg/ml浓度的溶液，有机溶剂，选自无水乙醇、甲醇和丙酮中的一种或它们的混合物。
3)脂质薄膜：按规定的质量比例，量取各种脂材溶液和药物溶液，置圆底烧瓶中，混合，在35℃－60℃条件下减压旋蒸除去有机溶剂，成膜；
4)水化：取预热至35℃－60℃的PBS缓冲液，加入至上述的脂质薄膜中，水化30-60min，必要时水化液经超声探头或高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液。
本发明中，所述的二次乳化法，按如下步骤操作：
1)脂材溶液配制：称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇，加入有机溶剂溶解制成浓度在5-40mg/ml的溶液，有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氢呋喃、丙酮、无水乙醇中的一种或它们的混合物；
2)药物溶液：称取绿原酸，加水或PBS缓冲液溶解制成1-5mg/ml 浓度的溶液；
3)乳化和挥除溶剂：在高速搅拌下，将药物溶液缓慢滴加到脂质材料溶液中，高速搅拌1h后，将等体积的PBS缓冲液缓慢滴加到上述液体中，高速搅拌1h后，再将所得到的乳液于通风橱中搅拌挥发除去有机溶剂，即得绿原酸脂质体的混悬液。
本发明中，所述的乙醇注入法，按如下步骤操作：
称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇，分别加入无水乙醇溶解制成 5-40mg/ml的溶液，绿原酸药物溶于无水乙醇形成1-5mg/ml的浓度，按规定的质量比量取各种溶液，置圆底烧瓶中搅拌混合后缓慢均匀注入到PBS缓冲液中，PBS缓冲液温度控制在35-55℃，保温并磁力搅拌1h使其充分水化，于35-55℃旋转蒸发除去除溶剂，随后冰浴超声或经过高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液。
本发明中，所述的逆向蒸发法，按如下步骤操作：
称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇分别加入氯仿溶解制成5-40mg/ml 浓度的溶液，绿原酸药物溶于丙酮形成1-5mg/ml的浓度，按规定的质量比量取各种溶液，置圆底烧瓶中搅拌混合，35-55℃旋转蒸发除去有机溶剂，形成均匀薄膜；再加入氯仿-丙酮混合溶剂和PBS缓冲液，搅拌均匀后超声形成稳定的W/O相，35-55℃旋转蒸发至胶凝状，再加入一定体积的PBS缓冲液，35℃水化1h，得到绿原酸脂质体。
本发明的脂质体制备方法，还可在绿原酸脂质体悬液中加入冻干支撑剂，通过冷冻干燥工艺制成冻干粉；其中冻干支撑剂为甘露醇、海藻糖、萄萄糖、蔗糖、乳糖、壳聚糖中的一种或它们的混合物。
本发明采用激光散射粒度仪测定绿原酸长循环脂质体的粒径：移液枪精密量取绿原酸长循环脂质体悬液或者冻干脂质体的复溶液 0.5ml加入到5mL纯净水中轻微振荡混匀后，采用激光散射粒度仪测定其粒径。
本发明采用LC-MS/MS生物样品分析方法，考察了ICR小鼠尾静脉注射绿原酸长循环脂质体后不同时间的血浆药物浓度。结果表明，与绿原酸的原料药相比，无论是普通脂质体还是本发明的长循环脂质体，都可延长药物在体内的驻留时间(MRT)和血浆暴露量(AUC)，但本发明的长循环脂质体，清除速率较普通脂质体更慢，具有更为显著的体内长循环效果。
附图说明
图1绿原酸长循环脂质体的药-时曲线图
具体实施方式
为了便于理解，以下将通过具体的实施例、试验例及附图，对本发明的绿原酸脂质体进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。
实施例1:薄膜分散法制备不同脂材比的脂质体
固定绿原酸与膜材的质量比为1:10，按下表方法制备不同脂材比的脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
表1不同脂材比的绿原酸长循环脂质处方组成及其粒径结果
Figure BDA0001833054560000061
制备方法：
(1)脂材溶液配制：称取大豆磷脂、胆固醇和 DSPE-PEG2000-OH，分别加入无水乙醇溶解制成浓度20mg/ml、10 mg/ml和34mg/mL的溶液。
(2)药物溶液配制：精密称取绿原酸原料药，加入无水乙醇溶解制成浓度为1.2mg/ml的溶液。
(3)脂质铺膜：按规定的质量比例，按照表1的比例量取各种脂材溶液，并加入药物溶液，使绿原酸与膜材的质量比为1:10，置圆底烧瓶中，混合，在35℃条件下减压旋蒸除去有机溶剂，成膜。
(4)水化：取12ml预热至35℃的PBS缓冲液，加入至上述的脂质薄膜中，水化60min，水化液经超声探头或高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液，药物浓度约为1.0mg/ml。
实施例2:薄膜分散法制备不同药脂比的脂质体
固定脂材比为大豆磷脂：胆固醇：DSPE-PEG2000-OH＝ 70:20:10，制备不同绿原酸与膜材的质量比的脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
表2不同绿原酸与膜材的质量比的绿原酸长循环脂质体处方组成及粒径结果
Figure BDA0001833054560000071
制备方法：
(1)脂材溶液配制：称取大豆磷脂、胆固醇和DSPE-PEG2000-OH，分别加入无水乙醇溶解制成浓度20mg/ml、10mg/ml和34mg/mL的溶液。
(2)药物溶液配制：精密称取绿原酸原料药，加入无水乙醇溶解制成浓度为1.2mg/ml的溶液。
(3)脂质铺膜：按规定的质量比例，量取各种脂材溶液使磷脂重量百分比为70％、胆固醇重量百分比为20％、DSPE-PEG2000-OH重量比为10％，绿原酸与膜材的质量比按表2进行量取，置圆底烧瓶中，混合，在35℃条件下减压旋蒸除去有机溶剂，成膜。
(4)水化：取12ml预热至35℃的PBS缓冲液，加入至上述的脂质薄膜中，水化60min，水化液经超声探头或高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液，药物浓度为1.0mg/ml。
实施例3:改变大豆磷脂材料为蛋黄卵磷脂，薄膜分散法制备不同脂材比的脂质体
以薄膜分散法制备，固定绿原酸与膜材的质量比为1：10，改变大豆磷脂材料为蛋黄卵磷脂，按下表方法制备不同脂材比的脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
(1)脂材溶液配制：称取蛋黄卵磷脂、胆固醇和 DSPE-PEG2000-OH，分别加入无水乙醇溶解制成浓度20mg/ml、10 mg/ml和34mg/mL的溶液。
(2)药物溶液配制：精密称取绿原酸原料药，加入无水乙醇溶解制成浓度为1.2mg/ml的溶液。
(3)脂质铺膜：按规定的质量比例，按照表3的比例量取各种脂材溶液，并加入药物溶液，使绿原酸与膜材的质量比为1:10，置圆底烧瓶中，混合，在35℃条件下减压旋蒸除去有机溶剂，成膜。
(4)水化：取12ml预热至35℃的PBS缓冲液，加入至上述的脂质薄膜中，水化60min，水化液经超声探头或高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液，药物浓度为1.0mg/ml。按照发明内容中脂质体粒径测定方法，对所制备的绿原酸长循环脂质体的粒径进行测定，结果如表3所示。
表3不同磷脂比例绿原酸长循环脂质体处方组成及粒径结果
Figure BDA0001833054560000081
实施例4:薄膜分散法制备不同PEG化磷脂的脂质体
以薄膜分散法制备，固定脂材比为大豆磷脂：胆固醇：PEG化磷脂＝70:20:10，绿原酸与膜材的质量比＝1：10，制备不同PEG化磷脂的脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
(1)脂材溶液配制：称取大豆磷脂、胆固醇和PEG化磷脂，分别加入无水乙醇溶解制成浓度20mg/ml、10mg/ml和34mg/mL的溶液。
(2)药物溶液配制：精密称取绿原酸原料药，加入无水乙醇溶解制成浓度为1.2mg/ml的溶液。
(3)脂质铺膜：按规定的质量比例，量取各种脂材溶液使磷脂重量百分比为70％、胆固醇重量百分比为20％、各种PEG化磷脂(表4) 重量比为10％，按照绿原酸与膜材的质量比为1:10进行量取，置圆底烧瓶中，混合，在35℃条件下减压旋蒸除去有机溶剂，成膜。
(4)水化：取12ml预热至35℃的PBS缓冲液，加入至上述的脂质薄膜中，水化60min，水化液经超声探头或高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液，药物浓度为1.0mg/ml。按照发明内容中脂质体粒径测定方法对所制备的绿原酸长循环脂质体的粒径进行测定，结果如表4所示。
表4不同PEG化磷脂的绿原酸长循环脂质体处方组成及粒径结果
Figure BDA0001833054560000091
Figure BDA0001833054560000101
实施例5:二次乳化法制备脂质体
按照实施例1中样品1-3的脂质体处方组成，固定脂材比为大豆磷脂：胆固醇：DSPE-PEG2000-OH＝70:20:10，绿原酸与膜材的质量比为1:10，二次乳化法制备脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
(1)脂材溶液配制：取大豆磷脂、胆固醇和DSPE-PEG2000-OH，分别加入氯仿溶解制成浓度为20mg/ml、10mg/ml和34mg/mL的溶液。
(2)药物溶液：精密称取一定质量的绿原酸原料药溶于PBS溶液中，制得1.2mg/ml的浓度。
(3)乳化和挥除溶剂：最取3种溶液，使磷脂重量百分比为70％、胆固醇重量百分比为20％、DSPE-PEG2000-OH重量比为10％，混合均匀；按照绿原酸与膜材的质量比1:10，量取适量绿原酸水溶液，在高速搅拌下缓慢滴加到溶解磷脂材料的氯仿溶液中，高速搅拌1h后，将等体积的PBS缓冲液缓慢滴加到上述液体中，高速搅拌1h后，再将所得到的乳液于通风橱中搅拌挥发除去有机溶剂，即得绿原酸脂质体的混悬液。按照发明内容中脂质体粒径测定方法，所得脂质体的粒径为120nm。
实施例6:乙醇注入法制备脂质体
按照实施例1中样品1-3的脂质体处方组成，固定脂材比为大豆磷脂：胆固醇：DSPE-PEG2000-OH＝70:20:10，绿原酸与膜材的质量比为1:10，乙醇注入法制备脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
称取大豆磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-OH和绿原酸原料药，分别加入无水乙醇溶解制成浓度20mg/ml、10mg/ml、34mg/mL和 1.2mg/ml的溶液。按规定的质量比例，量取各种脂材溶液和药物溶液，使磷脂重量百分比为70％、胆固醇重量百分比为20％、 DSPE-PEG2000-OH重量比为10％，绿原酸与膜材的质量比为1:10，置圆底烧瓶中搅拌混合后缓慢均匀注入到PBS缓冲液中，PBS缓冲液温度控制在55℃，保温并磁力搅拌1h使其充分水化，于55℃旋转蒸发除去除溶剂，随后冰浴超声或经过高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液。按照发明内容中脂质体粒径测定方法，所得脂质体的粒径为125nm。
实施例7:逆向蒸发法制备脂质体
按照实施例1中样品1-3的脂质体处方组成，固定脂材比为大豆磷脂：胆固醇：DSPE-PEG2000-OH＝70:20:10，绿原酸与膜材的质量比为1:10，逆向蒸发法制备脂质体，并采用激光粒度仪测定平均粒径。
取大豆磷脂、胆固醇和DSPE-PEG2000-OH，分别加入氯仿溶解制成浓度为20mg/ml、10mg/ml和34mg/mL的溶液。最取3种溶液，使磷脂重量百分比为70％、胆固醇重量百分比为20％、 DSPE-PEG2000-OH重量比为10％，混合均匀；另配制绿原酸丙酮，浓度为1.2mg/ml，按照绿原酸与膜材的质量比为1:10，量取适量绿原酸溶液，与磷脂溶液混合后，35℃旋转蒸发除去有机溶剂，形成均匀薄膜；再加入氯仿-丙酮混合溶剂和PBS缓冲液，搅拌均匀后超声形成稳定的W/O相，35℃旋转蒸发至胶凝状，再加入一定体积的PBS缓冲液，35℃水化1h，得到绿原酸脂质体。按照发明内容中脂质体粒径测定方法，所得脂质体的粒径为120nm。
实施例8:
取实施例1中的样品1-3和实施例5-实施例7制备的脂质体悬液，按照下表5加入冻干支撑剂、按冻干程序“预冻(-25℃,0.5h)—— (-25℃,1.5h)——(-35℃,2h)；主干燥(-35℃,0.3h)——(-30℃,2.8h) ——(-20℃,13h)——(-10℃,2h)；再干燥(0℃,3h)——(25℃,3h) ——(25℃,5h)”进行冷冻干燥，得绿原酸长循环脂质体的冻干粉，并按照发明内容中脂质体粒径测定方法，采用激光粒度仪进行粒径测定。
表5冻干剂的种类和用量
Figure BDA0001833054560000121
制备例1:参比脂质体的制备与粒径测定
普通脂质体：根据现有文献公开发表的绿原酸普通脂质体的制备方法，在保持胆固醇20％的比例不变，将PEG化磷脂由大豆磷脂代替，磷脂重量百分比由70％调整为80％，采用薄膜分散-超声法制备普通脂质体悬液，激光粒度仪测定粒径为130nm；
试验例1:不同脂质体的血浆-药时特征考察
以6羟黄酮(6-HF)为内标，采用液质联用(LC-MS/MS)方法血浆样品测定。
1.质谱检测条件
离子源：ESI；
离子极性：正离子、负离子；
离子检测方式：多反应监测(MRM)；
裂碎电压：145V；
碰撞能量：CHA为10eV，6-HF为37eV；
检测对象：CHA([M+H]-，m/z 353.1→191.1)，6-HF([M+H]+， m/z 239.1→109.1)；
雾化压力：15psi；
毛细管电压：4000V；
干燥气温度：350℃；
干燥气流速：8L/min。
2.内标溶液制备
采用10μg/mL的6羟黄酮(6-HF)作为内标：精密称量6-HF 5mg 至100mL容量瓶中，含有Vc(0.2％w/v)的甲醇定容，精密移取该溶液 2.00mL至10mL容量瓶，0.2％Vc-甲醇定容，配制成10μg/mL的内标供试品溶液备用。
3.动物给药方案及供试样品测定
采用ICR小鼠，体重18-20g，共12只，分成4组，每组3只。
以绿原酸水溶液为参比1，绿原酸普通脂质体为参比2，实施例1 中的样品1-3为试验组1，实施例4中的样品4-3为试验组2，按照 40mg/kg剂量尾静脉注射，于给药后不同时间点(0,2min、5min、15min、 30min、60min、120min、240min、360min)眼眶取血，置于加入肝素钠的离心管中，静置15min，4000rpm离心10min，取上层血浆于离心管中，加入内标液10μL，甲醇150μL，10％三氯乙酸40μL，震荡涡旋5min，以14000rpm离心l0min后取上清液20μL进样，按 LC-MS/MS法测定条件(色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱 (150mm×3.0mm，5μm)；流速：0.5mL/min；进样体积：20μL；柱温：25℃；流动相：甲醇5％，水(0.2％甲酸)95％)进样分析，记录色谱图及峰面积，根据随行标准曲线计算药物的血药浓度，绘制药时曲线(附图1)，采用DAS3.2.8软件，非房室模型拟合药动学参数(表 6)。
表6绿原酸长循环脂质体的体内药动学参数
Figure BDA0001833054560000141
上表结果表明，与绿原酸溶液组相比，普通脂质体参比组使MRT 延长至2.1倍，药时曲线下面积AUC延长至1.8倍，而本发明实施例1 中样品1-3的MRT和AUC分别延长至5.9倍和7.6倍，本发明实施例4 中样品4-3的MRT和AUC分别延长至4.2倍和2.4倍。
以上结果提示，与绿原酸的原料药相比，无论是普通脂质体还是本发明的长循环脂质体，都可延长药物在体内的驻留时间(MRT)和血浆暴露量(AUC)，但本发明的长循环脂质体，又明显优于文献报道的普通脂质体，清除速率更慢，具有更为显著的长循环效果。
参考文献
1.冯颖淑.辛香料活性成分绿原酸和辣椒碱的纳米脂质给药系统研究[D].江苏无锡：江南大学，2016，博士学位论文。

Claims (16)

1.一种绿原酸长循环脂质体，其特征在于，脂质体膜材中含有PEG化磷脂、磷脂和胆固醇，包载的活性成分为绿原酸，脂质体平均粒径在50-500nm。
2.根据权利要求1所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，绿原酸与膜材的质量比为1:2-1:100，优选1:3-1:50，更优选1:5-1:20。
3.根据权利要求1－2任一项所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，膜材中的PEG化磷脂由“磷脂-PEG-活性基团”三部分组成，其中的磷脂选自二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、二肉豆寇酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰乙醇胺中的一种；PEG分子量选自1000－10000Da；活性基团选自－羟基、-马来酰亚胺基团、-N-羟基琥珀酰亚胺、-氨基、-羧基、-巯基、-醛基、-叶酸、－甘露糖、－半乳糖凝集素、-(天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸)短肽、-(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)短肽、－单克隆抗体或－多肽。
4.根据权利要求3所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，PEG化磷脂中的磷脂选自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺；PEG分子量选自2000－8000Da；活性基团选自－羟基、-叶酸、－甘露糖、－半乳糖凝集素、-(天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸)短肽或-(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)短肽。
5.根据权利要求4所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，PEG化磷脂中的磷脂选自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，PEG分子量选自2000－5000Da,活性基团选自－羟基、－甘露糖或－半乳糖凝集素。
6.根据权利要求1－2任一项所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，膜材中的磷脂选自天然磷脂、合成磷脂中的一种或它们的混合物，优选天然磷脂，其中天然磷脂选自天然大豆磷脂或天然蛋黄磷脂及其它们的混合物。
7.根据权利要求1所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，在脂质体膜材中，PEG化磷脂所占重量百分比为5％～50％,磷脂所占重量百分比为30％～85％，胆固醇所占重量百分比为5％～25％。
8.根据权利要求7所述的绿原酸长循环脂质体，其特征在于，脂质体膜材中，PEG化磷脂所占重量百分比为10％～30％,磷脂所占重量百分比为50％～70％，胆固醇所占重量百分比为10％～20％。
9.权利要求1-8任一项所述的绿原酸长循环脂质体的制备方法，其特征在于，制备方法选自薄膜分散法、二次乳化法、乙醇注入法或逆向蒸发法。
10.根据权利要求9所述的绿原酸长循环脂质体的制备方法，其特征在于，制备方法选自薄膜分散法，操作方法如下：
1)脂材溶液配制：称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇，分别加入有机溶剂溶解制成5-40mg/ml的脂材溶液，备用；
其中的有机溶剂，选自二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氢呋喃、丙酮、无水乙醇中的一种或它们的混合物；
2)药物溶液：称取绿原酸，溶解制成1-5mg/ml浓度的溶液，备用；
其中的有机溶剂，选自无水乙醇、甲醇和丙酮中的一种或它们的混合物；
3)脂质薄膜：按规定的质量比，量取各种脂材溶液和药物溶液，置圆底烧瓶中，混合，35℃－60℃条件下减压旋蒸除去有机溶剂，成膜；
4)水化：取预热至35℃－60℃的PBS缓冲液，加入至脂质薄膜中，水化30-60min，必要时水化液经超声探头或高压均质机处理，获得符合粒径要求的绿原酸脂质体悬液。
11.根据权利要求9所述的绿原酸长循环脂质体的制备方法，其特征在于，制备方法选自二次乳化法，操作方法如下：
1)脂材溶液配制：称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇，加入有机溶剂溶解制成浓度在5-40mg/ml的溶液，有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿、乙醚、四氢呋喃、丙酮、无水乙醇中的一种或它们的混合物；
2)药物溶液：称取绿原酸，加水或PBS缓冲液溶解制成1-5mg/ml的溶液；
3)乳化和挥除溶剂：在高速搅拌下，将药物溶液缓慢滴加到脂质材料溶液中，高速搅拌1h后，将等体积的PBS缓冲液缓慢滴加到上述液体中，高速搅拌1h后，再将所得到的乳液于通风橱中搅拌挥发除去有机溶剂，即得绿原酸脂质体的混悬液。
12.根据权利要求9所述的绿原酸长循环脂质体的制备方法，其特征在于，制备方法选自乙醇注入法，操作方法如下：称取磷脂、PEG化磷脂和胆固醇，分别加入无水乙醇溶解制成5-40mg/ml的溶液，绿原酸药物溶于无水乙醇形成1-5mg/ml的浓度，按规定的质量比量取各种溶液，置圆底烧瓶中搅拌混合后缓慢均匀注入到PBS缓冲液中，PBS缓冲液温度控制在35-55℃，保温并磁力搅拌1h使其充分水化，于35-55℃旋转蒸发除去除溶剂，随后冰浴超声或经过高压均质机处理，获得粒径符合要求的绿原酸脂质体悬液。
13.根据权利要求9所述的绿原酸长循环脂质体的制备方法，其特征在于，制备方法选自逆向蒸发法，操作方法如下：称取磷脂、PEG化磷脂、胆固醇分别加入氯仿溶解制成5-40mg/ml浓度的溶液，绿原酸药物溶于丙酮形成1-5mg/ml的浓度，按规定的质量比量取各种溶液，置圆底烧瓶中搅拌混合，35-55℃旋转蒸发除去有机溶剂，形成均匀薄膜；再加入氯仿-丙酮混合溶剂和PBS缓冲液，搅拌均匀后超声形成稳定的W/O相，35-55℃旋转蒸发至胶凝状，再加入一定体积的PBS缓冲液，35℃水化1h，得到绿原酸脂质体悬液。
14.根据权利要求9-13所述的制备方法，其特征在于，制得的“绿原酸脂质体悬液”，还可加入冻干支撑剂，通过冷冻干燥工艺制成冻干粉针。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，冻干支撑剂为甘露醇、海藻糖、萄萄糖、蔗糖、乳糖、壳聚糖中的一种或它们的混合物。
16.权利要求1－8任一项所述的绿原酸长循环脂质体在制备治疗免疫系统疾病或肿瘤免疫疾病药物中的应用。
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