CN111053734A - 一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物 - Google Patents

一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN111053734A
CN111053734A CN202010047417.9A CN202010047417A CN111053734A CN 111053734 A CN111053734 A CN 111053734A CN 202010047417 A CN202010047417 A CN 202010047417A CN 111053734 A CN111053734 A CN 111053734A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical composition
sophorolipid
propionibacterium acnes
solubilizer
essence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010047417.9A
Other languages
English (en)
Inventor
宋欣
赵国芹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN202010047417.9A priority Critical patent/CN111053734A/zh
Publication of CN111053734A publication Critical patent/CN111053734A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A61K36/539—Scutellaria (skullcap)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，该药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5±1g，黄岑提取液或红霉素10±2g，戊二醇3±0.5g，EDTA二钠0.05±0.01g，甘油8±2g，透明质酸钠或黄原胶0.8±0.2g，尿素2±0.5g，香精0.3±0.1g，增溶剂0.3±0.1g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。实验证实本发明所述组合物的有效成分槐糖脂抑菌效果显著，对人体无任何毒副作用，可以在某些方面作为替代治疗后易复发感染及易产生耐药性的常规抗生素药物成为临床首选的抗痤疮丙酸杆菌的药物，具有极大的应用前景。

Description

一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物
技术领域
本发明涉及一种治疗痤疮的药物组合物，尤其涉及一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物；属于生物制药技术领域。
背景技术
痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)是痤疮的主要致病菌，它寄居于人体皮肤毛囊等处。在20世纪70年代中期人们发现局部外用抗生素对痤疮的治疗安全、有效、便利，随后以红霉素、克林霉素、甲硝唑为主的外用抗生素快速成为痤疮治疗的方式，尤其对于痤疮的炎性皮损，局部抗生素治疗至今仍然占有重要地位。但随着抗生素的大量使用，痤疮抗生素治疗疗效降低，抗生素治疗时间也延长。据研究发现，P.acnes生物膜的形成在耐药性的产生中可能扮演了重要的角色。细菌生物膜的存在使得细菌相互嵌入形成菌落，并在表面形成保护性的外骨架起到物理性屏障作用，故影响、阻止各种抗菌药物的治疗。
槐糖脂是一种重要的生物表面活性剂，对于它的研究始于二十世纪五、六十年代，主要是通过微生物发酵获得。关于槐糖脂抑菌作用的研究已经有所报道，但检索发现其抑制细菌的作用主要体现在好氧菌上，有关将微生物产生的槐糖脂生物表面活性剂用于制备抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物及其组合物的文献还未见报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物。
本发明所述抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5±1g，黄岑提取液10±2g，戊二醇3±0.5g，EDTA二钠0.05±0.01g，甘油8±2g，透明质酸钠或黄原胶0.8±0.2g，尿素2±0.5g，香精0.3±0.1g，增溶剂0.3±0.1g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
上述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，优选的实施方式是：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5g，黄岑提取液10g，戊二醇3g，EDTA二钠0.05g，甘油8g，透明质酸钠或黄原胶0.8g，尿素2g，香精0.3g，增溶剂0.3g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
本发明所述的另一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5±1g，红霉素10±2g，戊二醇3±0.5g，EDTA二钠0.05±0.01g，甘油8±2g，透明质酸钠或黄原胶0.8±0.2g，尿素2±0.5g，香精0.3±0.1g，增溶剂0.3±0.1g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
上述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，优选的实施方式是：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5g，红霉素10g，戊二醇3g，EDTA二钠0.05g，甘油8g，透明质酸钠或黄原胶0.8g，尿素2g，香精0.3g，增溶剂0.3g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
上述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物中：所述香精优选是玫瑰香精，所述增溶剂优选是peg-40增溶剂。
本发明所述的另一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物液体擦剂，其特征在于：所述液体洗剂的组分及含量是每1000ml二甲亚砜溶液中含槐糖脂45～50g，优选是每1000ml二甲亚砜溶液中含槐糖脂45g。
上述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物，其特征在于：所述槐糖脂优选以拟威克酵母变种(Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipid)CGMCC No.1576通过发酵方式制得。
实验证实：本发明所述槐糖脂能有效抑制痤疮丙酸杆菌的浓度为0.12g/L以上，所述槐糖脂能有效抑制痤疮丙酸杆菌生物膜的浓度为2.0g/L以上。
为了更好地理解本发明的实质，下面以槐糖脂的药理实验及结果来说明槐糖脂作为抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物的应用。
本发明所述槐糖脂的制备：
(1)菌种选择：拟威克酵母变种Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipidCGMCC No.1576；
(2)斜面培养：将菌种接种于基本无机盐培养基，其中添加质量体积比为1.5～2.0％的琼脂，25～35℃条件下，静止培养24～48小时；
(3)种子培养：将步骤(2)培养的菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于20～100mL含有质量体积比为4～14％的葡萄糖和1～8％的菜籽油的基本无机盐培养基中，25～35℃条件下，振荡培养24～48小时，制得种子液；
(4)扩大培养：以5～10％的体积比的接种量，将种子液接种于100～1000mL含有质量体积比为4～14％的葡萄糖和1～8％的菜籽油的基本无机盐培养基中，25～35℃条件下，振荡培养96～288小时；
(5)收集发酵产物：将步骤(4)所得的发酵液静置，使其自然沉降，收集沉积在摇瓶底部的浅黄色粘稠液体，之后以4000～7000转/分钟将所述粘稠物质离心，收集沉淀部分，即为槐糖脂粗提物；
(6)减压蒸馏：将步骤(5)所得槐糖脂粗提物，在温度50～70℃，压力0.2～0.8kg/cm2，真空度为0.02～0.08Mpa的条件下进行减压蒸馏，蒸发去除其中的水分；
(7)收集物干燥：将上述收集的减压蒸馏残渣，在50～100℃，真空度0.02～0.08Mpa条件下，真空干燥12～24小时，制得固体槐糖脂。
痤疮丙酸杆菌的菌体制备：将P.acnes ATCC6919菌种的冻干粉，用无菌水0.1～0.2mL溶解菌粉，吸取全部菌粉，接种于已经倒有厌氧培养基的厌氧培养皿里，均匀涂布，静置30min，倒置于厌氧袋中，放入厌氧发生剂，密封袋口，放于37℃厌氧培养箱中静置培养，直到看到菌落出现。然后用接种针挑取单个菌落接种于液体厌氧培养基中，轻轻摇晃，将单菌落散开，放入厌氧袋中，37℃静置培养72～120小时。吸取菌悬液，用培养基稀释,用血细胞计数板计数，将菌悬液调整为1×106-107CFU/mL，备用。
槐糖脂对痤疮丙酸杆菌的抑菌试验：将本发明方法制得的槐糖脂以二甲亚砜溶解制成母液，备用。
将槐糖脂母液加入到厌氧培养基试管中，使其终浓度为0.12、0.24、0.48、0.72g/L。以只加菌液和只加DMSO溶液分别作为阳性和阴性对照，同时为排除Lac SLs本身的颜色影响，以只加不同浓度的样液不加菌液作为第三种对照。37℃培养。
槐糖脂对痤疮丙酸杆菌的生物膜抑制试验：
(1)取保藏的P.acnes菌株，平板划线，在厌氧袋里培养36小时(平板为无抗厌氧培养基平板)。取出平板，挑取单菌落，用移液枪枪尖挑取菌落后，直接把枪尖放入装有5mLTSB培养基的试管进行接种，在厌氧袋里培养30h。(2)将TSB培养基转移到96孔板里，(3)加入含不同浓度槐糖脂的培养基，每组至少5个平行转入96孔板中，每孔150μl 30℃静置培养10-12h。(4)将孔内液体吸出，后用dd H2O冲洗三次，每孔200μl。(5)0.1％结晶紫染色，37℃静置10min,每孔200μl。将结晶紫吸出，用ddH2O冲洗三次，每孔200μl，最后一次将液体吸完不能有剩余。各孔加入30％乙酸(200μl)溶解菌体，反复轻轻吹吸至完全溶解，减少误差。(6)在560nm处测定光吸收值。
上述液体厌氧培养基(用于厌氧菌培养)的配方是：胰蛋白胨10g/L，牛肉膏10.0g/L，葡萄糖5.0g/L，氯化钠5.0g/L，酵母膏3.0g/L，乙酸钠3.0g/L，可溶性淀粉1.0g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，pH 6.6-7.0。
上述固体厌氧培养基(用于厌氧菌菌体制备)的配方是：胰蛋白胨10g/L，牛肉膏10.0g/L，葡萄糖5.0g/L，氯化钠5.0g/L，酵母膏3.0g/L，乙酸钠3.0g/L，可溶性淀粉1.0g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，琼脂20g/L，pH 6.6-7.0。
上述TSB培养基(用于细菌增菌)的配方是：胰蛋白胨17.0g/L，大豆蛋白胨3.0g/L，氯化钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，pH值7.3±0.2。
抑菌试验结果显示：当添加的槐糖脂的浓度在0.12g/L以上时，在较长的培养时间(120h)内，痤疮丙酸杆菌的生长被完全抑制(见图1)。
对于痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制结果显示：在添加了一定剂量的槐糖脂(>2.0g/L)之后，其生物膜即可以被完全抑制(见图2)。
基于上述药理效果，本发明所述槐糖脂与药学上可接受的辅料或赋形剂能制成任何一种药剂学上所说的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物剂型。同时，以槐糖脂为有效成分加入抑细菌药物组分和药学上可接受的辅料或赋形剂也能制成任何一种药剂学上所说的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物剂型。
上述的剂型优选软膏剂或液体擦剂。其中软膏剂、液体擦剂的药物制剂可以按照本行业已知的方法制备，在制备过程中使用可药用辅料或赋形剂，例如离子络合剂(如EDTA二钠)、增稠剂(例如透明质酸钠、黄原胶等)、防腐剂(戊二醇)、吸湿剂(例如甘油)、保湿剂(例如尿素)以及增溶剂(peg-40氢化蓖麻油)等。
具体的，本发明公开了含内酯型槐糖脂，黄岑提取液或红霉素，戊二醇，EDTA二钠，甘油，透明质酸钠或黄原胶，尿素，香精，增溶剂，余量为纯化水的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物。
本发明所述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物中，槐糖脂是利用拟威克酵母变种发酵生产获得，具有工艺方法简便、成本低、纯度高的特点，因此用于制备药物价格低廉，且用量少；同时实验证实本发明所述组合物的有效成分槐糖脂抑菌效果显著，对人体无任何毒副作用，可以在某些方面作为替代治疗后易复发感染及易产生耐药性的常规抗生素药物成为临床首选的抗痤疮丙酸杆菌的药物，具有极大的应用前景。
附图说明
图1不同浓度的槐糖脂对痤疮丙酸杆菌生长的抑制结果统计图
统计结果显示：槐糖脂浓度在0.12g/L以上时，能够完全抑制红色毛癣菌的生长。
图2对痤疮丙酸杆菌生物膜的抑制结果统计图
统计结果显示：槐糖脂浓度达到2.0g/L以上时，能够完全破坏痤疮丙酸杆菌的生物膜。
具体实施方式
下面结合具体附图和实施例对本发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较佳实施方式而已，应该说明的是，下述说明仅仅是为了解释本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。
下述实施例中，所使用的材料、试剂、P.acnes菌株等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。拟威克酵母变种Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipid CGMCCNo.1576菌株是申请人先前申请专利时保藏的菌株，其已多次在公开的文献(包括专利CN200710114796.3槐糖脂在制备抗皮肤癣菌药物中的应用)中记载。黄岑提取液购自湖州佳美生物化学制品有限公司或汕头市勋诺化工科技有限公司。
实施例1：槐糖脂的制备
(1)菌种选择：拟威克酵母变种(Wickerhamiella domercqiaevar.sophorolipid)CGMCC No.1576；
(2)斜面培养：将菌种接种于基本无机盐培养基，其中添加质量体积比为1.6％的琼脂，25℃条件下，静止培养24小时；
(3)种子培养：将步骤(2)培养的菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于20mL含有质量体积比为4％的葡萄糖和1％的菜籽油的培养基中，25℃条件下，振荡培养24小时，制得种子液；
(4)扩大培养：以5％的体积比的接种量，将种子液接种于100mL含有质量体积比为1％的菜籽油的培养基中，25℃条件下，振荡培养96小时；
(5)收集发酵产物：将步骤(4)所得的发酵液静置，使其自然沉降，收集沉积在摇瓶底部的浅黄色粘稠液体，之后以5000转/分钟将上述粘稠物质离心，收集固态部分，即为槐糖脂粗提物。
(6)减压蒸馏：将步骤(5)所得槐糖脂粗提物，在温度60℃，压力0.4kg/cm2，真空度为0.04Mpa的条件下进行减压蒸馏，蒸发去除其中的水分；
(7)收集物干燥：将上述收集的减压蒸馏残渣，在70℃，真空度0.04Mpa条件下，真空干燥16小时；制得固体槐糖脂。
实施例2：槐糖脂的制备
(1)菌种选择：拟威克酵母变种(Wickerhamiella domercqiaevar.sophorolipid)CGMCC No.1576；
(2)斜面培养：将菌种接种于基本无机盐培养基，其中添加质量体积比为1.6％的琼脂，30℃条件下，静止培养30小时；
(3)种子培养：将步骤(2)培养的菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于50mL含有质量体积比为8％的葡萄糖和3％的菜籽油的培养基中，30℃条件下，振荡培养30小时，制得种子液；
(4)扩大培养：以7％的体积比的接种量，将种子液接种于500mL含有质量体积比为3％的菜籽油的培养基中，30℃条件下，振荡培养120小时；
(5)收集发酵产物：将步骤(4)所得的发酵液静置，使其自然沉降，收集沉积在摇瓶底部的浅黄色粘稠液体，之后以6000转/分钟将上述粘稠物质离心，收集固态部分，为槐糖脂粗提物。
(6)减压蒸馏：将步骤(5)所得槐糖脂粗提物，在温度65℃，压力0.8kg/cm2，真空度为0.08Mpa的条件下进行减压蒸馏，蒸发去除其中的水分；
(7)收集物干燥：将上述收集的减压蒸馏残渣，在100℃，真空度0.08Mpa条件下，真空干燥24小时；制得固体槐糖脂。
实施例3：槐糖脂作为抗痤疮丙酸杆菌药物的应用
痤疮丙酸杆菌的菌体制备：将斜面保存的痤疮丙酸杆菌取一接种环转接到液体厌氧培养基中，在厌氧培养袋中37℃下培养36小时，制得痤疮丙酸杆菌菌悬液，稀释使菌悬液浓度为1×106-107CFU/mL。
将实施例1制得的槐糖脂以二甲亚砜(DMSO)溶解制成母液，备用。
取槐糖脂母液分别按梯度稀释到不同的浓度，然后分别加到制备好的痤疮丙酸杆菌菌悬液中(1×106-107CFU/mL)
以未添加槐糖脂的培养基和仅添加了二甲亚砜的平板作为对照。
上述液体厌氧培养基(用于厌氧菌培养)的配方是：胰蛋白胨10g/L，牛肉膏10.0g/L，葡萄糖5.0g/L，氯化钠5.0g/L，酵母膏3.0g/L，乙酸钠3.0g/L，可溶性淀粉1.0g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，pH 6.6-7.0
抑菌试验结果显示：
未添加槐糖脂和仅添加了二甲亚砜的的平板在120h内，菌体生长不受抑制，当添加槐糖脂的浓度达到0.12g/L以上时，痤疮丙酸杆菌的生长被完全抑制(见图1)。
实施例4：槐糖脂作为抗痤疮丙酸杆菌生物膜药物的应用
痤疮丙酸杆菌生物膜的制备：(1)取保藏的P.acnes菌株，平板划线，在厌氧袋里培养36小时(平板为无抗厌氧培养基平板)。取出平板，挑取单菌落，用移液枪枪尖挑取菌落后，直接把枪尖放入装有5mL液体TSB培养基的试管进行接种，在厌氧袋里培养30h。(2)将培养有痤疮丙酸杆菌的TSB培养基转移到96孔板里，制得生物膜。
将实施例1制得的槐糖脂以二甲亚砜溶解制成母液，备用。
将槐糖脂母液用液体厌氧培养基稀释，并使其终浓度为0.1～2.0g/L，加入到制备的痤疮丙酸杆菌生物膜样品孔中，每孔150μl，每组至少5个平行。在厌氧袋里30℃静置培养24-36h。然后将孔内液体吸出，后用dd H2O冲洗三次，每孔200μl。0.1％结晶紫染色，37℃静置10min,每孔200μl。将结晶紫吸出，用ddH2O冲洗三次，每孔200μl，最后一次将液体吸完不能有剩余。各孔加入30％乙酸(200μl)溶解菌体，反复轻轻吹吸至完全溶解，减少误差。最后在560nm处测定光吸收值。以不加槐糖脂的孔作为对照。
上述液体厌氧培养基(用于厌氧菌培养)的配方是：胰蛋白胨10g/L，牛肉膏10.0g/L，葡萄糖5.0g/L，氯化钠5.0g/L，酵母膏3.0g/L，乙酸钠3.0g/L，可溶性淀粉1.0g/L，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，pH 6.6-7.0。
上述TSB培养基(用于细菌增菌)的配方是：胰蛋白胨17.0g/L，大豆蛋白胨3.0g/L，氯化钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.5g/L，葡萄糖2.5g/L，pH值7.3±0.2。
抑菌试验结果显示：
显示槐糖脂浓度达到2.0g/L以上时，能够完全破坏痤疮丙酸杆菌的生物膜(见图2)。
实施例5：以槐糖脂为有效成分的组合物作为抗痤疮丙酸杆菌药物软膏剂的制备
首先在配料容器中加入100ml纯化水及EDTA二钠0.05克。将甘油8g和透明质酸钠或黄原胶0.8g，搅拌分散均匀至无颗粒，加入到配料容器中，搅拌至完全溶解，约30-60min。冷却降温，温度降至45℃时，在搅拌条件下依次加入尿素2g，内酯型槐糖脂5g、黄芩提取液10克及戊二醇3g，每种物料加入间隔时间5分钟，最后充分搅拌均匀。无菌灌装入塑料软管，每管装入量为10g，即得槐糖脂为有效成分的组合物的软膏剂，其中含槐糖脂的量为0.5克(5％)。
实施例6：以槐糖脂为有效成分的组合物作为抗痤疮丙酸杆菌药物软膏剂的制备
首先在配料容器中加入100ml纯化水及EDTA二钠0.05克。将甘油8g和透明质酸钠/黄原胶0.8g，搅拌分散均匀至无颗粒，加入到配料容器中，搅拌至完全溶解，约30-60min。冷却降温，温度降至45℃时，在搅拌条件下依次加入尿素2g，内酯型槐糖脂5g、红霉素10克及戊二醇3g，每种物料加入间隔时间5分钟，最后充分搅拌均匀。无菌灌装入塑料软管，每管装入量为10g，即得槐糖脂为有效成分的组合物的软膏剂，其中含槐糖脂的量为0.5克(5％)。
实施例7：槐糖脂作为治疗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物软膏剂的制备
首先在配料容器中加入100ml纯化水及EDTA二钠0.05克。将甘油8g和透明质酸钠/黄原胶0.8g，搅拌分散均匀至无颗粒，加入到配料容器中，搅拌至完全溶解，约30-60min。冷却降温，温度降至45℃时，在搅拌条件下依次加入尿素2g，内酯型槐糖脂5g及戊二醇3g，每种物料加入间隔时间5分钟，最后充分搅拌均匀。无菌灌装入塑料软管，每管装入量为10g，即得槐糖脂软膏剂，其中含槐糖脂的量为0.5克(5％)。
实施例8：槐糖脂作为治疗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物液体擦剂的制备
取实施例1制取的槐糖脂45g，加入二甲亚砜至1000ml，使槐糖脂溶解，然后装入100mL塑料瓶中，即得产品。

Claims (8)

1.一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5±1g，黄岑提取液10±2g，戊二醇3±0.5g，EDTA二钠0.05±0.01g，甘油8±2g，透明质酸钠或黄原胶0.8±0.2g，尿素2±0.5g，香精0.3±0.1g，增溶剂0.3±0.1g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
2.根据权利要求1所述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5g，黄岑提取液10g，戊二醇3g，EDTA二钠0.05g，甘油8g，透明质酸钠或黄原胶0.8g，尿素2g，香精0.3g，增溶剂0.3g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
3.一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5±1g，红霉素10±2g，戊二醇3±0.5g，EDTA二钠0.05±0.01g，甘油8±2g，透明质酸钠或黄原胶0.8±0.2g，尿素2±0.5g，香精0.3±0.1g，增溶剂0.3±0.1g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
4.根据权利要求3所述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物的组分及含量以每100ml体积计，含内酯型槐糖脂5g，红霉素10g，戊二醇3g，EDTA二钠0.05g，甘油8g，透明质酸钠或黄原胶0.8g，尿素2g，香精0.3g，增溶剂0.3g，余量的纯化水；所述药物组合物的剂型是软膏剂。
5.根据权利要求1-4之一所述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物，其特征在于：所述香精是玫瑰香精，所述增溶剂是peg-40增溶剂。
6.一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物液体洗剂，其特征在于：所述液体洗剂的组分及含量是每1000ml二甲亚砜溶液中含槐糖脂45～50g。
7.根据权利要求6所述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物液体洗剂，其特征在于：所述液体洗剂的组分及含量是每1000ml二甲亚砜溶液中含槐糖脂45g。
8.根据权利要求1、2、3、4、6或7所述的抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物，其特征在于：所述槐糖脂以拟威克酵母变种(Wickerhamiella domercqiae var.sophorolipid)CGMCC No.1576通过发酵方式制得。
CN202010047417.9A 2020-01-16 2020-01-16 一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物 Pending CN111053734A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010047417.9A CN111053734A (zh) 2020-01-16 2020-01-16 一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010047417.9A CN111053734A (zh) 2020-01-16 2020-01-16 一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111053734A true CN111053734A (zh) 2020-04-24

Family

ID=70306758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010047417.9A Pending CN111053734A (zh) 2020-01-16 2020-01-16 一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111053734A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116904332A (zh) * 2022-06-21 2023-10-20 山东福瑞达生物股份有限公司 一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2720941A1 (fr) * 1994-06-13 1995-12-15 Inst Francais Du Petrole Utilisation des sophorolipides et compositions cosmétiques et dermatologiques.
FR2735979A1 (fr) * 1995-06-28 1997-01-03 Inst Francais Du Petrole Utilisation comme substances therapeutiquement actives ou produits cosmetiques des sophorolipides, en particulier pour le traitement de la peau
CN101019875A (zh) * 2007-01-29 2007-08-22 山东大学 槐糖脂在制备抗生素药物中的应用
WO2007130738A1 (en) * 2006-03-09 2007-11-15 Polytechnic University Anti-herpes virus properties of various forms of sophorolipids
WO2010050413A1 (ja) * 2008-10-28 2010-05-06 株式会社カネカ ソホロースリピドの製造方法
WO2012167815A1 (en) * 2011-06-06 2012-12-13 Ecover Co-Ordination Center N.V. Sophorolactone compositions and uses thereof
CN104178537A (zh) * 2014-08-27 2014-12-03 齐鲁工业大学 一种槐糖脂农用抗菌素及其在治理作物真菌病害中的应用
CN105567580A (zh) * 2015-12-31 2016-05-11 沈阳化工大学 一株产槐糖脂酵母菌及其制备方法与应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2720941A1 (fr) * 1994-06-13 1995-12-15 Inst Francais Du Petrole Utilisation des sophorolipides et compositions cosmétiques et dermatologiques.
FR2735979A1 (fr) * 1995-06-28 1997-01-03 Inst Francais Du Petrole Utilisation comme substances therapeutiquement actives ou produits cosmetiques des sophorolipides, en particulier pour le traitement de la peau
WO2007130738A1 (en) * 2006-03-09 2007-11-15 Polytechnic University Anti-herpes virus properties of various forms of sophorolipids
CN101019875A (zh) * 2007-01-29 2007-08-22 山东大学 槐糖脂在制备抗生素药物中的应用
WO2010050413A1 (ja) * 2008-10-28 2010-05-06 株式会社カネカ ソホロースリピドの製造方法
WO2012167815A1 (en) * 2011-06-06 2012-12-13 Ecover Co-Ordination Center N.V. Sophorolactone compositions and uses thereof
CN104178537A (zh) * 2014-08-27 2014-12-03 齐鲁工业大学 一种槐糖脂农用抗菌素及其在治理作物真菌病害中的应用
CN105567580A (zh) * 2015-12-31 2016-05-11 沈阳化工大学 一株产槐糖脂酵母菌及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM等: "Characteristics of Sophorolipid as an Antimicrobial Agent", 《J. MICROBIOL. BIOTECHNOL.》 *
KIM等: "Characteristics of Sophorolipid as an Antimicrobial Agent", 《J. MICROBIOL. BIOTECHNOL.》, vol. 12, no. 2, 31 December 2002 (2002-12-31), pages 3 - 4 *
刘冉等: "槐糖脂生物活性的研究进展", 《食品工业》, no. 12, 20 December 2016 (2016-12-20), pages 224 - 228 *
刘青芝等: "槐糖脂的微生物合成及其应用研究进展", 《食品与药品》, no. 11, 10 November 2009 (2009-11-10), pages 51 - 55 *
张建中: "《中外皮肤病诊疗指南：专家解读》", 30 April 2014, pages: 126 *
高学敏等: "《中医美容学》", 30 September 1999, pages: 187 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116904332A (zh) * 2022-06-21 2023-10-20 山东福瑞达生物股份有限公司 一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用
CN116904332B (zh) * 2022-06-21 2024-03-26 山东福瑞达生物股份有限公司 一株具有良好抗氧化效果的痤疮丙酸杆菌及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FR2486400A1 (fr) Medicaments a base de levures ou de leurs extraits insolubles
CN111202739A (zh) 槐糖脂在制备抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物中的应用
CN102260308B (zh) 左旋异戊酰螺旋霉素iii、其制剂、制备方法及应用
CN101531968B (zh) 红曲协同发酵提高蛹虫草子实体和虫草菌素产量的方法
CN111053734A (zh) 一种抗痤疮丙酸杆菌及其生物膜的药物组合物
CN111419829B (zh) 和厚朴酚在抑制猪链球菌或其生物被膜中的用途
Levine et al. Therapeutic properties of oral ambruticin (W7783) in experimental pulmonary coccidioidomycosis of mice
CN102311471B (zh) 左旋异戊酰螺旋霉素ii、其制剂、制备方法及应用
CN101019875A (zh) 槐糖脂在制备抗生素药物中的应用
CN102048729B (zh) 一种治疗阴道炎的制剂
CN111494364B (zh) 异戊烯基取代的苯酚类化合物抗金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的应用
CN112438975B (zh) 糖尿病治疗药物在抑菌中的应用
CN101538247B (zh) 一种生物碱类化合物的制备方法
CN102070588A (zh) α-吡喃酮类化合物及其制备方法和用途
CN113648303A (zh) 咖啡醇或其衍生物在制备抗白色念珠菌药物或抗白色念珠菌日用品中的应用
CN114149483A (zh) 一种抗菌肽组合物及其应用
CN101199539B (zh) 槐糖脂在制备抗皮肤癣菌药物中的应用
ES2211191T3 (es) Producto de transformacion microbiana.
CN102604843A (zh) 一种真菌发酵产物的制备方法及在水稻病害防治中的应用
CN115124543B (zh) 具有抗病毒活性的三环吡啶酮类化合物及其应用
CN114958695B (zh) 一株链霉菌、活菌制剂及其生产方法和用途
CN109481435B (zh) 妇科用复方组合物
CN112159766B (zh) 一株褐扇小孔菌新菌株及其发酵方法和在抑菌方面的应用
CN108276363B (zh) 帚状曲霉次生代谢物及其在制备抗真菌药物中的应用
CN117257819A (zh) 鞣酸在制备抗克柔念珠菌药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination