CN111044513A - 现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法 - Google Patents

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CN111044513A CN202010000268.0A CN202010000268A CN111044513A CN 111044513 A CN111044513 A CN 111044513A CN 202010000268 A CN202010000268 A CN 202010000268A CN 111044513 A CN111044513 A CN 111044513A
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宋林生
刘超
于子超
王玲玲
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    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
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Abstract

本发明公开一种现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法，可在现场（养殖海区、近岸、食品加工车间及其他非实验室场合）通过碱液提取糖原、碘液显色、比色卡比对等简单操作，即可实现对扇贝闭壳肌食品糖原含量的测定。不需要将样品运输至实验室，也无需使用酶标仪、分光光度计等精密仪器，操作简单方便，可实现对闭壳肌糖原含量的快速检测，检测结果准确。

Description

现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法
技术领域
本发明涉及一种扇贝闭壳肌糖原含量的检测方法，尤其是一种操作简单、结果准确的现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法。
背景技术
扇贝是我国重要的海水养殖经济贝类之一，其中闭壳肌是人们餐桌上的重要美食，亦是扇贝食品加工的主要原材料。然而扇贝离水死亡后，闭壳肌中糖原会在糖原酵解酶系的作用下降解为果糖-6-磷酸，从而影响闭壳肌的鲜度，甚至引起腐臭变质。因此，糖原含量是确定扇贝闭壳肌新鲜程度的重要指标。
目前，糖原含量的检测方法主要包括比色法（蒽铜比色法、邻甲苯胺比色法、碘盐显色法等）、荧光测定法（荧光间接测定法、2-NBDG 荧光直接测定法等）以及免疫组化法等。然而，上述糖原含量检测方法的均需要将扇贝闭壳肌样品从现场（养殖海区、近岸、食品加工车间及其他非实验室场合）运回实验室进行测定，运输过程中的糖原损耗可导致糖原含量的检测值与现场实际值不相一致。现有检测方法在测定过程中需要分光光度计、酶标仪等多种精密仪器设备，操作过程比较繁琐。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简单、结果准确的现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法。
本发明的技术解决方案是：一种现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法，其特征在于按照如下步骤进行：
a. 取扇贝闭壳肌与质量百分比浓度30%的氢氧化钾溶液按照1g：3 mL混合后加热30min，获得闭壳肌裂解液；
b. 将闭壳肌裂解液与超纯水按照体积比1：19的混合，获得糖原检测液；
c. 将糖原检测液与糖原显色液按照体积比2.3：2.6混合均匀，静置20 min；所述糖原显色液是将糖原显色液A和糖原显色液B按照体积比1.3：100的混合液，所述糖原显色液A是0.026 g/mL碘和0.26 g/mL碘化钾的混合溶液，所述糖原显色液B是饱和氯化钙溶液；
d. 将糖原检测液的显色与比色卡进行比对，将比对获得的数值除以所取扇贝闭壳肌重量，即获得扇贝闭壳肌中糖原含量；所述比色卡是预先使用牡蛎糖原配制各浓度梯度糖原溶液，使用同批次试剂进行碘液显色反应，按照显色深度和糖原含量的对应关系制作而成，比色卡显色范围对应的糖原含量为10~40mg/mL，糖原含量梯度为2mg/mL。
本发明可在现场（养殖海区、近岸、食品加工车间及其他非实验室场合）通过碱液提取糖原、碘液显色、比色卡比对等简单操作，即可实现对扇贝闭壳肌食品糖原含量的测定。不需要将样品运输至实验室，也无需使用酶标仪、分光光度计等精密仪器，操作简单方便，可实现对闭壳肌糖原含量的快速检测，检测结果准确。
附图说明
图1是本发明实施例所用比色卡。
具体实施方式
取3枚死亡虾夷扇贝为样品，分别按照如下步骤进行：
a. 准确称取1g闭壳肌置于透明玻璃试管中，向试管中加入3 mL质量比浓度为30%的氢氧化钾溶液，将试管置于自热包上加热30min，流水冷却后，获得闭壳肌裂解液；
b. 取1 mL闭壳肌裂解液置于新的透明试管中，滴加19 mL超纯水，充分混合均匀，获得糖原检测液；
c. 将糖原检测液与糖原显色液按照2.3mL：2.6mL混合均匀，静置20 min；糖原显色液是将糖原显色液A和糖原显色液B按照1.3mL：100mL的混合液，糖原显色液A是0.026 g/mL碘和0.26 g/mL碘化钾的混合溶液，糖原显色液B是饱和氯化钙溶液；
d. 将糖原检测液的显色与比色卡进行比对，将比对获得的数值除以所取扇贝闭壳肌重量，即获得扇贝闭壳肌中糖原含量；
所述比色卡预先在实验室制备而成，具体制备方法是分别称取牡蛎糖原标准品6、12、18、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114、120 mg置于试管中，分别加入3ml 超纯水制备的糖原溶液浓度梯度为2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40mg/mL。每个浓度梯度糖原溶液各取1mL，分别加入19ml超纯水制备各浓度梯度糖原标准溶液。将1.3mL糖原显色液A和100mL糖原显色液B充分混合均匀，制备获得糖原显色液。吸取2.3mL各浓度梯度糖原标准溶液至试管中，并加入2.6 mL糖原显色液，静置20 min后，依据各糖原浓度梯度与显色结果的对应关系制作比色卡，如图1所示。
3个样品的显色范围分别为18-20 mg/mL，12-14mg/mL，28-30mg/mL。将比对获得的数值除以取样闭壳肌重量（1g），可得3个闭壳肌样品中糖原含量分别为18-20 mg/g，12-14mg/g，28-30mg/g。
同时使用南京建成生物技术有限公司糖原检测试剂盒对上述3枚死亡虾夷扇贝闭壳肌糖原含量进行测定，结果如下:
Figure DEST_PATH_IMAGE001
由此可见，本发明的检测方法可以获得扇贝闭壳肌糖原含量的准确范围。

Claims (1)

1.一种现场快速检测扇贝闭壳肌糖原含量的方法，其特征在于按照如下步骤进行：
a. 取扇贝闭壳肌与质量百分比浓度30%的氢氧化钾溶液按照1g：3 mL混合后加热30min，获得闭壳肌裂解液；
b. 将闭壳肌裂解液与超纯水按照体积比1：19的混合，获得糖原检测液；
c. 将糖原检测液与糖原显色液按照体积比2.3：2.6混合均匀，静置20 min；所述糖原显色液是将糖原显色液A和糖原显色液B按照体积比1.3：100的混合液，所述糖原显色液A是0.026 g/mL碘和0.26 g/mL碘化钾的混合溶液，所述糖原显色液B是饱和氯化钙溶液；
d. 将糖原检测液的显色与比色卡进行比对，将比对获得的数值除以所取扇贝闭壳肌重量，即获得扇贝闭壳肌中糖原含量；所述比色卡是预先使用牡蛎糖原配制各浓度梯度糖原溶液，使用同批次试剂进行碘液显色反应，按照显色深度和糖原含量的对应关系制作而成，比色卡显色范围对应的糖原含量为10~40mg/mL，糖原含量梯度为2mg/mL。
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