CN110981837A

CN110981837A - 紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体及其制备与应用

Info

Publication number: CN110981837A
Application number: CN201911218827.9A
Authority: CN
Inventors: 王永军; 于江; 何仲贵; 周双; 刘丹; 李金花; 刘洪卓
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2019-12-03
Filing date: 2019-12-03
Publication date: 2020-04-10
Also published as: WO2021110004A1

Abstract

本发明属于脂质体药物递送领域，涉及一种紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体及其制备方法与应用。本发明提供了紫杉醇的弱酸性衍生物，所述的弱酸性衍生物是以紫杉醇为原料，通过酯化反应与不同长度的饱和或不饱和碳链的酸酐或者二元酸相连，使药物呈现不同强度的弱酸性；所述紫杉醇弱酸性衍生物结构可以用以下通式表示：其中R₁如权利要求书和说明书所述。本发明制备了弱酸基团修饰的紫杉醇衍生物，通过pH梯度法将其主动包封于脂质体的内水相中，减少了聚氧乙烯蓖麻油，吐温80等表面活性剂的使用，避免了过敏反应的产生。所制备的脂质体包封率>95％，载药量高，稳定性好，在体内长循环，并且能够显著提高耐药剂量，从而达到增效、减毒的目的。PTX‑O‑CO‑R₁‑COOH。

Description

紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体及其制备与应用

技术领域

本发明属于脂质体药物递送领域，涉及紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体及其制备与应用。

背景技术

紫杉醇(Paclitaxel，PTX)为一线化疗药，是目前临床治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌，前列腺癌等多种肿瘤的最有效药物之一。但紫杉醇为脂溶性药物，不溶于水，因此紫杉醇的市售溶液剂泰素(Taxol)以聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇作为混合溶媒制成的。由于表面活性剂和有机溶剂的使用，使得在应用过程中产生严重的过敏反应及毒副作用，极大地限制了其临床应用。近年来，基于纳米技术的药物递送系统受到广大研究者的青睐，其中有很多被应用于紫杉醇的药物递送，并且有很多已经应用于临床实践中，包括紫杉醇脂质体 (力朴素)，紫杉醇白蛋白纳米粒，紫杉醇纳米胶束等。紫杉醇为脂溶性药物，紫杉醇脂质体(力朴素)就是利用其脂溶性通过被动载药方式将紫杉醇载入磷脂双分子层。但这种方式所得的制剂包封率较低，且药物包载于磷脂双分子层，不稳定，易于在体内发生药物突释现象，进而产生安全性问题，且疗效改善不明显，并且长期储存易于泄漏，进而限制了其在临床上的应用。因此，虽然纳米技术极大地提高了紫杉醇的成药性，但在实际临床应用中仍然存在很多问题。

主动载药脂质体作为一种药物递送载体受到研究者的广泛关注，其具有稳定性好，体内循环时间长，能够调控药物在体内的分布，更多的蓄积在肿瘤部位，减少对正常组织的损伤，从而达到增效减毒的目的。目前，世界上已有多种脂质体药物上市，如

Onivyde^TM，

等。主动载药法主要依靠pH梯度或者金属离子梯度进行载药，然而主动载药技术一般适用于弱酸弱碱性或能够与金属离子进行配位的水溶性药物，对于难溶性药物来说难以用这种方法获得高包封率的脂质体。溶剂辅助主动载药技术的发展为难溶性药物实现主动载药提供了可能。该方法是将难溶性药物溶解于与水混溶的有机溶剂中，有机溶剂能够增加药物溶解度并且提高膜的渗透性，进而实现了难溶性药物的主动包封。然而，对于紫杉醇这种既没有弱酸弱碱性又不具有与金属离子络合的药物来说，现有技术很难实现其主动包封。因此，我们需要寻找更合适的方法来提高紫杉醇的药物递送效率。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体及其制备方法，所述脂质体是将紫杉醇弱酸性衍生物主动包封于脂质体内水相中，提高制剂稳定性及载药量，增大耐药剂量，增强抗肿瘤效果，减少毒副作用。

本发明采用的技术方案如下：

本发明提供了紫杉醇的弱酸性衍生物，所述的弱酸性衍生物是以紫杉醇为原料，通过酯化反应与不同长度的饱和或不饱和碳链的酸酐或者二元酸相连，使药物呈现不同强度的弱酸性；

上述紫杉醇弱酸性衍生物结构可以用以下通式表示：

PTX-O-CO-R₁-COOH

其中，-O-CO-为连接酯键，R₁表示间隔基团，可以为C1-C8的饱和烷烃碳链，C2-C8的烯烃碳链或含有杂原子如O、S、N、Se、Si的C1-C8烷烃碳链；

进一步的，R₁优选C1-C6的烷烃或C2-C6的烯烃；

进一步的，R₁优选C1-C4的烷烃或C2-C4烯烃；

再进一步的，R₁优选C2-C3的烷烃或C4的烯烃；

药物弱酸性衍生物具有的pKa应满足大于等于3，小于等于12；

根据上述的紫杉醇弱酸性衍生物可以是但不限于以下结构：

本发明的紫杉醇弱酸性衍生物适合主动装载到脂质体内水相中。

进一步的，紫杉醇弱酸性衍生物在内水相环境中可以和阳离子通过静电相互作用或者金属阳离子形成难溶性沉淀而稳定在内水相环境中。

本发明提供一种紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体及其制备方法和应用：

紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体，包括以下组分：药物，磷脂，胆固醇，PEG化磷脂，醋酸钙和缓冲盐。其中胆固醇含量占所有磷脂组成的摩尔比为10-45％，优选为30-

45％，药物与脂质材料(磷脂+胆固醇)的质量比为1:20～1：5。

所述的磷脂为天然磷脂如蛋黄卵磷脂(EPC)、大豆磷脂、鞘磷脂、氢化大豆磷脂(HSPC)，或合成磷脂如二硬酯酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)中的一种或两种，优选为氢化大豆磷脂(HSPC)或二硬酯酰基磷脂酰胆碱(DSPC)中的一种或两种；

PEG化磷脂为DSPE-MPEG₁₀₀₀、DSPE-MPEG₂₀₀₀、DSPE-MPEG₅₀₀₀中的一种或几种，优选为DSPE-MPEG₂₀₀₀；

进一步地，优选二硬酯酰基磷脂酰胆碱(DSPC)，胆固醇，DSPE-MPEG₂₀₀₀组合。

本发明提供了紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体的制备方法，具体步骤如下：

(1)将磷脂、胆固醇、PEG化磷脂等溶解于适量有机溶剂中，减压旋转蒸发除去有机溶剂，得到均匀的薄膜。

(2)将梯度物质加入到步骤(1)中得到的薄膜中，水化，通过挤出设备降低粒度，得到粒径均一的空白脂质体。

(3)通过柱层析、超滤等方法，用缓冲盐除去脂质体外水相中的梯度物质，建立跨膜动力梯度，得到梯度空白脂质体。

(4)将药物溶液与梯度空白脂质体于相变温度之上进行搅拌孵育，即得到载药脂质体，除去其中剩余的有机溶剂，即得最终载药脂质体产品。

步骤(2)中所述的梯度物质为醋酸盐或磷酸盐溶液，优选为醋酸盐溶液，进一步优选为醋酸钙溶液，浓度为50-200mM。

步骤(4)中所述的药物溶液为药物的有机溶液，其中有机溶剂可以为乙醇，二甲基亚砜(DMSO)，甲醇，乙腈，丙酮，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，优选为二甲基亚砜 (DMSO)和乙醇，有机溶剂的用量可以为2％-50％(V/V)，优选为5％-20％。

本发明的主要优点：

(1)本发明的脂质体，以主动载药方式包载紫杉醇弱酸性衍生物，将药物包封于脂质体内水相，具有包封率高(>95％)，载药量高的特点。

(2)本发明的脂质体粒径均一，稳定性好，不易泄露，制备工艺简单，适宜工业放大生产。

(3)本发明的脂质体，体内药动实验证明能够明显延长药物在血浆中的半衰期和生物利用度。

(4)本发明的脂质体，体内药效学试验证明，其具有更好的抗肿瘤效果，且最大耐药剂量更高，毒副作用更小。

附图说明：

图1为本发明实施例1，2中PTX-SA，PTX-GA，PTX-DA核磁图和质谱图。

图2为本发明实施例3中紫杉醇-硫代羟基乙酸衍生物质谱图。

图3为本发明实施例7中细胞毒性图。

图4为本发明实施例8中脂质体的体内药动试验药时曲线图。

图5为本发明实施例9中脂质体的体内组织分布图。

图6为本发明实施例10中脂质体的体内药效学试验肿瘤体积变化及体重变化图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但并不因此将发明限制于所述的实施例范围之内。

实施例1：酯键相连的紫杉醇-丁二酸(PTX-SA)和紫杉醇-戊二酸(PTX-GA)的合成

将紫杉醇，DMAP，丁二酸酐或戊二酸酐置于茄形瓶中，加入无水二氯甲烷溶解，室温反应5小时，TLC监测反应(二氯甲烷:甲醇＝10:1，0.1％冰醋酸)，反应完毕后，得到白色油状粘稠液体，将其溶于二氯甲烷中，用0.5M HCl洗两次，水洗一次，蒸干，通过柱层析法以二氯甲烷:甲醇100：1的洗脱溶剂(含千分之一冰醋酸)洗脱进行分离纯化，即得白色固体。

采用质谱和核磁共振氢谱(¹H-NMR)来确定衍生物的结构，选用溶剂为CDCl₃，结果如图1A和图1B，波谱解析结果如下：

PTX-SA:1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.07(m,2H,Ar-H),7.68(d,J＝7.8Hz,2H, Ar-H),7.54(t,J＝7.4Hz,1H,Ar-H),7.44(td,J＝7.4,3.3Hz,3H,Ar-H),7.32(m,7H,Ar-H),7.01 (dd,J＝18.7,8.9Hz,1H,-NH-),6.22(s,1H,10-H),6.17(m,1H,13-H),5.92(dd,J＝9.2,3.1Hz, 1H,3'-H),5.61(d,J＝7.0Hz,1H,2-H),5.46(d,J＝3.2Hz,1H,2'-H),4.89(m,1H,5-H),4.36(dd, J＝11.1,6.7Hz,1H,7-H),4.23(d,J＝8.5Hz,1H,20α-H),4.14(d,J＝8.4Hz,1H,20β-H),3.72(d, J＝7.0Hz,1H,3-H),2.61–2.52(m,4H,-OCCH2CH2-CO-),2.52(m,1H,6α-H),2.37(s,3H,4- COCH3),2.31(m,2H,14-H),2.14(s,3H,10-COCH3),1.84(m,3H,18-CH3),1.84(m,1H,6β-H), 1.61(s,3H,19-CH3),1.15(s,3H,17-CH3),1.06(s,3H,16-CH3).

PTX-GA:1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.14(m,2H,Ar-H),7.73(d,J＝7.8Hz,2H, Ar-H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H,Ar-H),7.52(td,J＝7.4,3.3Hz,3H,Ar-H),7.38(m,7H,Ar-H),7.20 (dd,J＝18.7,8.9Hz,1H,-NH-),6.30(s,1H,10-H),6.26(m,1H,13-H),6.01(dd,J＝9.2,3.1Hz, 1H,3'-H),5.69(d,J＝7.0Hz,1H,2-H),5.49(d,J＝3.2Hz,1H,2'-H),4.97(m,1H,5-H),4.44(dd, J＝11.1,6.7Hz,1H,7-H),4.29(d,J＝8.5Hz,1H,20α-H),4.20(d,J＝8.4Hz,1H,20β-H),3.82(d, J＝7.0Hz,1H,3-H),2.56(m,1H,6α-H),2.47(s,3H,4-COCH3),2.42(dt,J＝7.4,3.6Hz,2H,-

OCCH2CH2CH2-CO-),2.38(m,2H,14-H),2.31(t,J＝7.1Hz,2H,-OCCH2CH2CH2-CO-),2.22 (s,3H,10-COCH3),1.94(m,3H,18-CH3),1.86(m,1H,6β-H),1.86(dd,2H,-OCCH2CH2CH2- CO-),1.66(s,3H,19-CH3),1.21(s,3H,17-CH3),1.13(s,3H,16-CH3).

实施例2：酯键相连的紫杉醇-反式-二丁烯-1，4-二甲酸(PTX-DA)的合成

将紫杉醇，DMAP，反式-二丁烯-1，4二甲酸置于茄形瓶中，加入无水二氯甲烷溶解，冰水浴条件下搅拌40min，加入EDCI，继续搅拌1h，然后转移至室温反应2小时，薄层色谱监测反应(二氯甲烷:甲醇＝10:1，0.1％冰醋酸)，反应完毕后，用0.5M HCl 洗两次，水洗一次，蒸干得白色固体。通过柱层析法以依次以二氯甲烷:甲醇100：1、 50：1的洗脱溶剂(含千分之一冰醋酸)洗脱进行分离纯化，得白色固体。

采用质谱和核磁共振氢谱(¹H-NMR)来确定衍生物的结构，选用溶剂为CDCl₃，结果如图1C，波谱解析结果如下：

PTX-DA:1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.06(m,2H,Ar-H),7.66(d,J＝7.8Hz,2H, Ar-H),7.53(t,J＝7.4Hz,1H,Ar-H),7.44(td,J＝7.4,3.3Hz,3H,Ar-H),7.33(m,7H,Ar-H),6.95 (dd,J＝18.7,8.9Hz,1H,-NH-),6.22(s,1H,10-H),6.17(m,1H,13-H),5.91(dd,J＝9.2,3.1Hz, 1H,3'-H),5.61(d,J＝7.0Hz,1H,2-H),5.56-5.51(s,2H,-CH＝CH-),5.44(d,J＝3.2Hz,1H,2'- H),4.89(m,1H,5-H),4.36(dd,J＝11.1,6.7Hz,1H,7-H),4.23(d,J＝8.5Hz,1H,20α-H),4.13(d, J＝8.4Hz,1H,20β-H),3.74(d,J＝7.0Hz,1H,3-H),3.10-2.94(4H,-OCCH2CH＝CHCH2-CO-), 2.48(m,1H,6α-H),2.37(s,3H,4-COCH3),2.26(m,2H,14-H),2.15(s,3H,10-COCH3),1.84(m, 3H,18-CH3),1.81(m,1H,6β-H),1.61(s,3H,19-CH3),1.15(s,3H,17-CH3),1.06(s,3H,16- CH3).

实施例3：酯键相连的紫杉醇-硫代羟基乙酸衍生物的合成

将紫杉醇，DMAP，硫代羟基乙酸酐置于茄形瓶中，加入无水二氯甲烷溶解，室温反应 5小时，TLC监测反应(二氯甲烷:甲醇＝10:1，0.1％冰醋酸)，反应完毕后，得到白色油状粘稠液体，将其溶于二氯甲烷中，用0.5M HCl洗两次，水洗一次，蒸干，通过柱层析法以二氯甲烷:甲醇100：1的洗脱溶剂(含千分之一冰醋酸)洗脱进行分离纯化，即得白色固体。

采用质谱来确定衍生物的结构，结果如图2。

实施例4：化合物稳定性比较

将合成的纯度>99％的PTX-SA，PTX-GA，PTX-DA置于4℃冰箱保存，分别在放置 10天，20天，30天后通过高效液相色谱分别进行纯度测定，比较稳定性。

结果如表1所示，PTX-SA和PTX-GA具有良好的化学稳定性，而PTX-DA不稳定，30 天内药物降解约20％。

表1 PTX-SA，PTX-GA，PTX-DA的放置10天，20天，30天纯度百分比

化合物	0天	10天	20天	30天
					PTX-SA	99.4％	99.2％	99.3％	99.1％
PTX-GA	99.2％	99.0％	98.9％	98.7％
					PTX-DA	99.3％	94.5％	87.6％	79.8％

实施例5：紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体的制备

将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000按照质量比68.1:22.2:1.2置于500mL茄形瓶中，加入氯仿使固体溶解，40℃下减压旋转蒸发成膜，加入120mM醋酸钙水溶液，于 65℃旋转水化30min，在氮气流保护下分别通过孔径为400nm、200nm和100nm的聚碳酸酯膜各十次，获得粒径均一的空白脂质体。琼脂糖凝胶SephadexG-50用120mM硫酸钠水溶液预平衡，通过柱层析除去空白脂质体外水相的醋酸钙，以形成跨膜离子梯度；将 PTX-SA、PTX-GA用DMSO溶解，配制成5mg/ml的母液，按照药脂比质量比1:10的比例，向空白脂质体中滴加药物的DMSO溶液，于65℃下搅拌孵育30min，结束后冰浴终止载药。

结果表明，PTX-SA载药后脂质体粒径约为122.6nm，测得包封率约为97.2％；而PTX-GA载药脂质体测得包封率仅为67.6％；因此不同碳链的酸修饰紫杉醇对脂质体包封率有影响。

实施例6：内水相浓度对弱酸性衍生物包封率的影响

将DSPC、胆固醇、DSPE-PEG2000按照质量比68.1:22.2:1.2置于500mL茄形瓶中，加入氯仿使固体溶解，40℃下减压旋转蒸发成膜，加入50mM、120mM和200mM醋酸钙水溶液，于65℃旋转水化30min，在氮气流保护下分别通过孔径为400nm、200nm和 100nm的聚碳酸酯膜各十次，获得粒径均一的空白脂质体。琼脂糖凝胶SephadexG-50用 120mM硫酸钠水溶液预平衡，通过柱层析除去空白脂质体外水相的醋酸钙，以形成跨膜离子梯度；将PTX-SA用DMSO溶解，配制成5mg/ml的母液，按照药脂比1:10的比例，向空白脂质体中滴加药物的DMSO溶液，于65℃下搅拌孵育30min，结束后冰浴终止载药。

结果表明：随着内水相浓度增加，PTX-SA脂质体包封率逐渐增加，当内水相醋酸钙浓度达到120mM时，包封率不再增加，因此选取120mM作为紫杉醇弱酸性衍生物的最优内水相浓度。

实施例7：体外细胞毒试验

采用MTT法(噻唑蓝)考察药物及制剂对乳腺癌细胞(4T1)，前列腺癌细胞(RM- 1)的细胞毒性。

具体操作步骤如下：用胰酶将状态良好的细胞消化下来，用新鲜培养基将细胞悬液稀释至浓度为1×10⁴cells/mL，然后向96孔板加入100μL的细胞悬液(1000cells/孔)，于培养箱中过夜贴壁，弃去旧培养基，向各孔中加入200μL不同浓度的含有紫杉醇(PTX)，紫杉醇-丁二酸(PTX-SA)，紫杉醇-丁二酸脂质体(PTX-SA LPs)的培养液，对照组加入不含药的新鲜培养液，培养24小时或48小时后，每孔加入20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液继续培养4小时。取出后弃去孔内溶液并用滤纸吸干，每孔加入200μLDMSO溶解生成的蓝紫色结晶，于振荡器上振摇10min使之完全溶解，用酶标仪测570nm波长下的吸光度值，并利用公式计算细胞抑制率，通过GraphPadPrism5.0计算各组IC50值。结果如图2，表1，表2所示。

表2紫杉醇，紫杉醇弱酸性衍生物及其脂质体对4T1细胞的半数致死浓度

表3紫杉醇，紫杉醇弱酸性衍生物及其脂质体对RM-1细胞的半数致死浓度

实施例8：体内药动试验

给药方案与血样采集共6只大鼠随机分为两组，每组三只，于实验开始前12h禁食禁水并称量每只大鼠的体重。尾静脉注射分别给予每组大鼠紫杉醇溶液剂(泰素)、紫杉醇-丁二酸脂质体，每只大鼠注射的紫杉醇等效剂量为4mg/kg。分别于给药后0.083h，0.25h，0.5h，1h，2h，4h，8h，12h，24h和48h时采集血样至涂有肝素的EP管中，13000rpm 离心10min，取上清储存于-20℃中，使用UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中紫杉醇和紫杉醇- 丁二酸的浓度，使用DAS2.0软件计算药动参数。实验结果如图3，表3所示。根据实验结果可知，所制备的主动载药脂质体能够显著延长药物的半衰期，提高生物利用度。

表4紫杉醇及紫杉醇-丁二酸药动学参数

实施例9：体内组织分布试验

将对数生长期的4T1细胞用胰酶进行消化接种于BALB/C小鼠右侧皮下，建立小鼠乳腺癌肿瘤模型。当肿瘤体积达到200-300mm³左右时，将荷瘤小鼠随机分成两组，每组九只：(1)紫杉醇溶液剂(8mg/kg)；(2)紫杉醇-丁二酸脂质体(等效紫杉醇剂量)，尾静脉注射给药后6小时，12小时和48小时后分别处死三只小鼠，取出心、肝、脾、肺、肾和肿瘤组织，用生理盐水冲洗干净，用滤纸将水分吸干，储存于-80℃冰箱，使用UPLC- MS/MS测定荷瘤小鼠各器官和肿瘤组织中药物的含量。结果如图4所示。根据结果可以看出，与溶液剂相比，脂质体组药物在肿瘤部位蓄积更多，并且随着给药时间的延长，药物在肿瘤部位的蓄积相对更多。

实施例10：体内药效试验

将对数生长期的4T1细胞用胰酶消化，离心，用无菌PBS将细胞重悬，混匀后吸取200 μL细胞悬液接种于BALB/c小鼠右侧皮下，建立小鼠乳腺癌肿瘤模型。密切观察小鼠状态及肿瘤生长情况，当肿瘤体积为100mm³左右时将荷瘤小鼠按照肿瘤体积大小平均分为4组，每组5只，分别尾静脉注射给予PBS(空白对照)，紫杉醇溶液剂(8mg/kg)，紫杉醇-丁二酸脂质体(等效紫杉醇8mg/kg)，紫杉醇-丁二酸脂质体(等效紫杉醇30 mg/kg)。间隔两天给药一次，共计给药四次，每天测量小鼠肿瘤体积及体重变化，小鼠肿瘤体积＝(肿瘤长径×肿瘤短径²)/2。

小鼠肿瘤体积，体重变化曲线如图5所示。实验结果表明，与紫杉醇溶液剂相比，紫杉醇-丁二酸脂质体具有更好的抗肿瘤效果，在不产生毒副作用的情况下能够显著提高耐药剂量，并且高剂量组抗肿瘤效果更明显。

Claims

1.紫杉醇弱酸性衍生物，其特征在于，所述的弱酸性衍生物结构通式如下所示：

PTX-O-CO-R₂-COOH

其中，-O-CO-为连接酯键，-R₂-为间隔基团。

2.根据权利要求1所述的紫杉醇弱酸性衍生物，其特征在于，R₂为C1-C8的饱和烷烃碳链，C2-C8的烯烃碳链或含有O、S、N、Se、Si杂原子的C1-C8烷烃碳链。

3.根据权利要求1所述的紫杉醇弱酸性衍生物，其特征在于，修饰位点C-2’位羟基可以替换为C-7位羟基。

4.根据权利要求1-3任何一项所述的紫杉醇弱酸性衍生物，其特征在于，所述的紫杉醇弱酸性衍生物优选为如下结构：

进一步优选为紫杉醇琥珀酸衍生物：

。

5.包含权利要求1-4任何一项所述的紫杉醇弱酸性衍生物脂质体，其特征在于，包括以下组分：药物，磷脂，胆固醇，PEG化磷脂，醋酸盐溶液和缓冲盐。其中胆固醇含量占所有磷脂组成的摩尔比为10-45％，优选为30-45％，药物与脂质材料(磷脂+胆固醇)的质量比为1:20～1：5。

6.根据权利要求5所述的主动载药脂质体，其特征在于，所述的磷脂为天然磷脂如卵磷脂、大豆磷脂、鞘磷脂、氢化大豆磷脂，或合成磷脂如二硬酯酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油中的一种或两种，优选为氢化大豆磷脂或二硬酯酰基磷脂酰胆碱中的一种或两种。

7.根据权利要求5所述的主动载药脂质体，其特征在于，PEG化磷脂为DSPE-MPEG₁₀₀₀、DSPE-MPEG₂₀₀₀、DSPE-MPEG₅₀₀₀中的一种或几种，优选为DSPE-MPEG₂₀₀₀。

8.根据权利要求5所述的主动载药脂质体的制备方法，其特征在于，

(4)将药物溶液与梯度空白脂质体于相变温度之上进行搅拌孵育，即得到载药脂质体，除去其中剩余的有机溶剂，即得最终脂质体产品。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的梯度物质为醋酸盐或磷酸盐溶液，优选为醋酸盐溶液，进一步优选为醋酸钙溶液，浓度为50-200mM。

10.根据权利要求8所述的制备方法，步骤(4)中所述的药物溶液为药物的有机溶液，其中有机溶剂可以为乙醇，二甲基亚砜(DMSO)，甲醇，乙腈，丙酮，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，优选为二甲基亚砜(DMSO)和乙醇，有机溶剂的用量可以为2％-50％(V/V)，优选为5％-20％。

11.权利要求1-4中任何一项所述的紫杉醇弱酸性衍生物或权利要求6-7中任何一项所述的紫杉醇弱酸性衍生物主动载药脂质体在药物传递系统和制备抗肿瘤药物中的应用。