CN110973072B - 一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生命科学、医学及兽医学技术领域，具体为一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法。第一步：生理盐水进行高压灭菌，高压灭菌后的生理盐水加入双抗，配置具有双抗在生理盐水中的浓度为100μg/ml；第二步：收集成虫，收集50条左右。本发明提供一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，本发明不仅可以收集大量华支睾吸虫虫卵，而且也可制备一些ES抗原。
Description
技术领域
本发明涉及生命科学、医学及兽医学技术领域，具体为一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法。
背景技术
在寄生虫病诊断领域，如华支睾吸虫病，其临床诊断的金标准是从宿主体内或宿主排泄物中提取并发现寄生虫虫卵，目前从宿主粪便中收集虫卵是最主要的检测方法，在现有技术中，粪便中虫卵检测方法包括直接涂片法、漂浮法、沉淀法、尼龙筛淘洗法及改良加藤法(又称Kato-Katz法)等，这些方法的缺点在于从粪便中收集的虫卵数量少，而且杂质多，不利于显微镜观察及对虫卵的后期试验，比如后期试验中的虫卵中DNA提取、虫种的鉴定及虫卵分子生物学检测方法的建立等研究。
发明内容
为了克服上述的不足，本发明提供一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，本发明不仅可以收集大量华支睾吸虫虫卵，而且也可制备一些ES抗原。
本发明采取的技术方案如下：
一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，包括如下步骤：
第一步：生理盐水进行高压灭菌，高压灭菌后的生理盐水加入双抗，配置在生理盐水中的双抗浓度为100μg/ml；
第二步：收集成虫，收集50条左右；
第三步：用第一步配置的生理盐水清洗成虫，清洗无杂质后，先用含有双抗的培养基RPMI-1640清洗五次，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；然后把清洗后的成虫放入含有双抗的RPMI-1640培养基进行培养，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；注意此步骤应在细胞间进行；此步骤的成虫是在培养皿中清洗和培养；
第四步：将第三步的成虫从培养皿中取出放到培养瓶中，培养瓶中装有含有双抗的RPMI-1640培养基，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；规定1ml培养基中放入5-8条成虫，然后把培养瓶置于37度的5％二氧化碳恒温培养箱中培养18h；
第五步：吸取第四步中二氧化碳恒温培养箱中培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；
第六步：18小时后，把5％二氧化碳恒温培养箱中培养瓶取出，吸取培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；
第七步：重复第六步，直到发现虫体崩裂，则停止操作；
第八步：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，然后弃掉上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。
第八步还可以为：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，保存上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。
本发明的有益效果是：为大量收集华支睾吸虫虫卵节省时间，提高成虫及虫卵的利用效率。本发明不仅可以收集大量华支睾吸虫虫卵，而且也可制备一些ES抗原。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，包括如下步骤：
第一步：生理盐水进行高压灭菌，高压灭菌后的生理盐水加入双抗，配置具有双抗在生理盐水中的浓度为100μg/ml；双抗为青霉素和链霉素的混合液，青霉素和链霉素的比例为1：1；
第二步：收集成虫，收集50条左右；
第三步：用第一步配置的生理盐水清洗成虫，清洗无杂质后，先用含有双抗的培养基RPMI-1640清洗五次，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；然后把清洗后的成虫放入含有双抗的RPMI-1640培养基进行培养，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；注意此步骤应在细胞间进行；此步骤的成虫是在培养皿中清洗和培养；
第四步：将第三步的成虫从培养皿中取出放到培养瓶中，培养瓶中装有含有双抗的RPMI-1640培养基，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；规定1ml培养基中放入5-8条成虫，然后把培养瓶置于37度的5％二氧化碳恒温培养箱中培养18h；
第五步：吸取第四步中二氧化碳恒温培养箱中培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；
第六步：18小时后，把5％二氧化碳恒温培养箱中培养瓶取出，吸取培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；
第七步：重复第六步，直到发现虫体崩裂，则停止操作；
第八步：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，然后弃掉上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。
第八步还可以为：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，保存上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (2)
1.一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，其特征在于：包括如下步骤：
第一步：生理盐水进行高压灭菌，高压灭菌后的生理盐水加入双抗，配置在生理盐水中的双抗浓度为100μg/ml；
第二步：收集成虫，收集50条左右；
第三步：用第一步配置的生理盐水清洗成虫，清洗无杂质后，先用含有双抗的培养基RPMI-1640清洗五次，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；然后把清洗后的成虫放入含有双抗的RPMI-1640培养基进行培养，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；注意此步骤应在细胞间进行；此步骤的成虫是在培养皿中清洗和培养；
第四步：将第三步的成虫从培养皿中取出放到培养瓶中，培养瓶中装有含有双抗的RPMI-1640培养基，培养基RPMI-1640含有双抗的浓度为100μg/ml；规定1ml培养基中放入5-8条成虫，然后把培养瓶置于37度的5％二氧化碳恒温培养箱中培养18h；
第五步：吸取第四步中二氧化碳恒温培养箱中培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；
第六步：18小时后，把5％二氧化碳恒温培养箱中培养瓶取出，吸取培养瓶的全部清液保存，然后向培养瓶中加入培养基，培养瓶再次置于5％二氧化碳恒温培养箱中进行培养18h，加入的培养基与吸取的培养基体积一致；
第七步：重复第六步，直到发现虫体崩裂，则停止操作；
第八步：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，然后弃掉上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。
2.根据权利要求1所述的一种华支睾吸虫大量纯净虫卵收集的方法，其特征在于：第八步还可以为：对收集的全部清液进行离心，转速5000RPM，时间30min，保存上层清液，用滤器过滤一下，透析之后就可以用收集ES抗原了，余下的沉淀即为大量的虫卵。
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