CN110964783B - 一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法 - Google Patents

一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本申请属于临床医学检测领域，公开了一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法。本发明所述质控品由基质液和线粒体天门冬氨酸氨基转移酶组成；所述基质液由基质、10‑80mmol/L缓冲剂、5‑100mg/L 5‑磷酸吡哆醛、20‑200g/L糖类、0.001‑0.5％叠氮化钠、20‑200mg/L硫酸新霉素组成。本发明质控品选取人血清作为基质，临床样本符合程度高，通用性强，可最大程度降低了基质效应。在基质中添加稳定剂及叠氮化钠和硫酸新霉素，加入不同量的mAST获得不同浓度水平质控品产品，产品均一性、稳定性好，不受运输、温度等因素影响，适用范围广，2‑8℃下保存有效期为24个月。

Description

一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法
技术领域
本发明属于临床医学检测领域，具体涉及一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法。
背景技术
线粒体天冬氨酸氨基转移酶(mAST)是细胞内功能酶天门冬氨酸氨基转移酶的一种同工酶,存在于线粒体中,并广泛存在于动物或人的肝、心、骨骼肌和肾等组织中,以心、肝含量最高。当这些脏器损伤时，mAST大量释放入血，致其血清水平升高。一般情况下,血清中mAST活力占总AST活力的大约10％。当肝实质细胞损伤时，细胞线粒体内mAST进入血中，引起血清mAST活力升高，因此测定血清mAST可间接了解肝细胞超微结构损伤及线粒体损伤的严重程度。由于mAST在血清中的半衰期短，其清除比AST的另一种同工酶，存在于细胞浆中的胞质天冬氨酸氨基转移酶(cAST)，快5倍以上，当细胞不再坏死，血清中mAST将迅速降低甚至恢复正常水平，所以mAST可以作为肝脏、心脏损伤、坏死及预后判断的敏感指标。
目前mAST的检测试剂市面上产品很多，各厂家产品质量参差不齐，如何提高检测结果的有效性，成为临床应用的迫切要求。而室内质控的目的就在于检测和控制本实验室常规工作的精密度及检测其准确度的改变，以提高本实验室常规工作中标本检测的一致性，从而保证检验报告的准确发出，因此室内质控品的品质是实验室质量管理的基础和关键环节。
线粒体天冬氨酸氨基转移酶质控品目前存在问题有：①为试剂厂商配套其检测试剂的质控品，是否适合其他厂家检测试剂缺少验证②mAST质控品有效期为一年，有效期短给临床检验带来很大困难③水平数少，所能涵盖的检测范围比较有限。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于针对现有线粒体天冬氨酸氨基转移酶质控品存在的问题，提供一种稳定且检测范围广的mAST质控品。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术上方案:
一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品，由基质液和线粒体天门冬氨酸氨基转移酶组成；
所述基质液由如下成分组成：基质、10-80mmol/L缓冲剂、5-100mg/L 5-磷酸吡哆醛、20-200g/L糖类、0.001-0.5％叠氮化钠、20-200mg/L硫酸新霉素。
本发明中，所述基质液中所述基质为正常人血清和/或混合人血清。所述正常人血清、混合人血清均为商品化产品，有稳定的采购渠道，无需离心筛选，可实现大批量生产。
本发明中线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品中加入了缓冲剂，可将基质液pH调整至正常人血清水平，同时使基质液pH保持稳定，减少其他添加物对pH的影响。在本发明中，所述缓冲剂为HEPES缓冲液。
在本发明中，所述糖类为海藻糖、蔗糖、半乳糖、果糖中的一种或几种。
在一些实施方案中，所述质控品中所述基质液由如下成分组成：正常人血清、50mmol/LHEPES缓冲液、50g/L海藻糖、0.2％NaN3、80mg/L硫酸新霉素。
在本发明中，所述高水平质控品中所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量为60-90U/L；所述中水平质控品中所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量为30-50U/L；所述低水平质控品中所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量为10-30U/L。
本发明还提供了所述质控品的制备方法，在基质中添加10-80mmol/L缓冲剂、5-100mg/L 5-磷酸吡哆醛、20-200g/L糖类、0.001-0.5％叠氮化钠、20-200mg/L硫酸新霉素混合均匀，将pH调至7.0-8.0，制得质控品基质液，测定质控品基质液中线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的本底值，添加线粒体天门冬氨酸氨基转移酶至设定值。
在本发明中，所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的设定值具体为：高水平质控品中所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量为60-90U/L；所述中水平质控品中所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量为30-50U/L；所述低水平质控品中所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量为10-30U/L。
在本发明中，所述制备方法将质控品溶液分装、干燥的步骤。
在一些实施方案中，将制得的质控品溶液分装，低温真空干燥得到线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品质控品。
本发明所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品质控品可放置于2～8℃长期保存。
本发明所述质控品在使用前加入分装时同体积的去离子水复溶，然后在相应项目检测仪器进行检测，确定质控品靶值及质控范围，同时对质控品进行性能评价。
由上述技术方案可知，本发明提供了一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法。本发明所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品由基质液和线粒体天门冬氨酸氨基转移酶组成；所述基质液由如下成分组成：基质、10-80mmol/L缓冲剂、5-100mg/L 5-磷酸吡哆醛、20-200g/L糖类、0.001-0.5％叠氮化钠、20-200mg/L硫酸新霉素。本发明质控品选取人血清作为基质，渠道来源稳定可实现大批量生产，并且临床样本符合程度高，通用性强，可最大程度降低了基质效应。同时在基质中添加稳定剂及叠氮化钠和硫酸新霉素两种防腐剂，加入不同量的线粒体天门冬氨酸氨基转移酶获得不同浓度水平质控品产品。进一步本发明所述质控品采用低温真空干燥技术获得冻干态质控品，以延长质控品的稳定性。本发明所述质控品的产品均一性、稳定性好，不受运输、温度等因素影响，适用范围广，2-8℃下保存有效期为24个月。本发明所述质控品制备方法简单，制备成本低，便于临床的推广和使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示长期稳定性结果图；
图2示北京九强/北京安图的质控品基质效应分析图；
图3示北京九强/宁波美康的质控品基质效应分析图。
具体实施方式
本发明公开了一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品及其制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及产品已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如无特殊说明，本发明实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
实施例1：本发明所述mAST质控品
所述基质液由如下成分组成：正常人血清、50mmol/LHEPES缓冲液、50g/L海藻糖、0.2％NaN3、80mg/L硫酸新霉素、30mg/L 5-磷酸吡哆醛；；
所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量：高水平质控品为60U/L；中水平质控品为30U/L；低水平质控品为10U/L。
实施例2：本发明所述mAST质控品
所述基质液由如下成分组成：正常人血清、50mmol/LHEPES缓冲液、80g/L蔗糖、0.2％NaN3、80mg/L硫酸新霉素、25mg/L 5-磷酸吡哆醛；
所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量：高水平质控品为70U/L；中水平质控品为40U/L；低水平质控品为20U/L。
实施例3：本发明所述mAST质控品
所述基质液由如下成分组成：混合人血清、30mmol/LHEPES缓冲液、40g/L果糖、0.2％NaN3、40mg/L硫酸新霉素、30mg/L 5-磷酸吡哆醛；
所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量：高水平质控品为80U/L；中水平质控品为50U/L；低水平质控品为15U/L。
试验例、本发明质控品性能验证
一、质控品稳定性验证数据：
1、质控品开瓶稳定性
将实施例2质控品加入纯化水复溶后，4℃放置7天或14天后进行监测，数据见表1。
表1开瓶稳定性结果
水平 对照 4℃7天 4℃14天 7天降幅 14天降幅
Q1 23 24 24 -4.3％ -4.3％
Q2 43 43 42 0.0％ 2.3％
Q3 73 71 72 2.7％ -1.4％
结果显示，本发明所述质控品加入纯化水复溶后放置4℃14天，使用线粒体天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒进行检测，其结果与新复溶质控品无明显差异，显示质控品开瓶稳定性好。
2、质控品长期稳定性
将实施例2质控品放置4℃，于0个月、3个月、6个月、12个月、18个月、24个月进行监测，数据见表2及图1。
表2长期稳定性结果
水平 0个月 1个月 3个月 6个月 12个月 18个月 24个月
Q1 23 22 22 21 22 21 21
Q2 43 42 43 38 41 40 40
Q3 73 73 72 67 71 70 71
结果显示，本发明所述质控品放置4℃24个月，检测结果与0个月结果无明显差异，显示质控品4℃24个月稳定性好。
3、检测结果验证
使用北京安图生物工程有限公司、宁波美康生物科技股份有限公司及北京九强生物技术有限公司的线粒体天门冬氨基转移酶检测试剂盒分别对实施例2质控品及临床样本进行检测，以测试本发明所述质控品在不同厂家的试剂的检测结果。检测数据见表3。
表3不同厂家的试剂的检测结果
将20份临床样本在北京九强、北京安图及宁波美康试剂检测结果一致性情况与质控品在这三个平台检测结果进行比对分析。根据上述结果绘图(图2和3)，结果显示以北京九强为参照，制备的线粒体天门冬氨基转移酶质控品在北京安图、宁波美康的检测系统上与临床样本表现一致，表明制备的线粒体天门冬氨基转移酶质控品基质效应小。
按照上述方法对实施例1和实施例3所述质控品进行检测，结果与实施例2所述质控品相似。

Claims (3)

1.一种线粒体天门冬氨酸氨基转移酶质控品，由基质液和线粒体天门冬氨酸氨基转移酶组成；
所述基质液由如下成分组成：正常人血清、50mmol/LHEPES缓冲液、80g/L蔗糖、0.2%NaN3、80mg/L硫酸新霉素、25mg/L 5-磷酸吡哆醛；
所述线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的含量：高水平质控品为70U/L；中水平质控品为40U/L；低水平质控品为20U/L。
2.权利要求1所述质控品的制备方法，在正常人血清中添加50mmol/LHEPES缓冲液、25mg/L 5-磷酸吡哆醛、80g/L蔗糖、0.2% NaN3、80mg/L硫酸新霉素混合均匀，将pH调至7.0-8.0，制得质控品基质液，测定质控品基质液中线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的本底值，添加线粒体天门冬氨酸氨基转移酶至设定值。
3.根据权利要求2所述的制备方法，还包括将质控品溶液分装、干燥的步骤。
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