CN110964768A - 一种抗氧化多肽及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗氧化多肽及制备方法，其分别通过采用动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白进行生产加工而得到的多肽，所述油料种子蛋白为花生种子蛋白、芝麻种子蛋白、油菜籽种子蛋白、向日葵种子蛋白、棉籽种子蛋白、红花种子蛋白或椰子种子蛋白中的一种或多种的组合，本发明涉及生物工程技术领域。该抗氧化多肽及制备方法，可实现将多种蛋白进行集中发酵酶解处理，节约生产成本，制备工艺简单，很好的达到了通过将采用微生物发酵和酶水解工艺同时进行，来降低成本的目的，实现了通过微生物产生的端肽酶对肽末端进行修饰，使制得的肽苦味消失，并且散发天然芳香味。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体为一种抗氧化多肽及制备方法。
背景技术
自1956年英国科学家Harman提出自由基理论以来，随着研究的深入，人们对自由基过量而导致的机体衰老以及对多种疾病的诱导作用有了更深的认识，而高活性的抗氧化剂的摄入是清除体内过量自由基的一个有效方法，目前生产量最大的是化学抗氧化剂，但因明显的毒副作用，导致其使用受到限制，随着人们对食品安全和抗氧化剂安全要求的提高，人们开始把目光转向天然抗氧化剂，与化学抗氧化剂相比，天然抗氧化剂的安全性要远高于前者，因而越来越受到人们的重视，在对天然抗氧化剂的研究中，抗氧化肤是目前的热门方向之一，食物蛋白质经蛋白酶温和水解后产生的肽，不仅比蛋白质本身更容易被人体消化吸收，还可促进人体对其他营养素如钙和铁的吸收，更重要的是，有些肽类还具有抗氧化、免变调节、降血压、降血脂、折菌等生理活性这些具有生理调节活性的肽，称为物活性肤，抗氧化性是近年来国内外科学工作者对多肽生物活性研究中的一个新的研究课题，来源于食物蛋白的抗氧化肽，不但具有良好的抗氧化活性，且安全性极高，因而在保健食品以及生物医药领域的应用前景十分广阔。
目前的抗氧化多肽在制备过程中，大多是直接进行单一的蛋白酶解制备，然后再将制备的多种多肽进行混合使用，然而，这样的制备方法较为复杂，不能实现将多种蛋白进行集中发酵酶解处理，节约生产成本，无法达到通过将采用微生物发酵和酶水解工艺同时进行，来降低成本的目的，不能实现通过微生物产生的端肽酶对肽末端进行修饰，使制得的肽苦味消失，并且散发天然芳香味，从而给生产人员的多肽制备带来极大的不便。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种抗氧化多肽及制备方法，解决了现有的制备方法较为复杂，不能实现将多种蛋白进行集中发酵酶解处理，节约生产成本，无法达到通过将采用微生物发酵和酶水解工艺同时进行，来降低成本的目的，不能实现通过微生物产生的端肽酶对肽末端进行修饰，使制得的肽苦味消失，并且散发天然芳香味的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种抗氧化多肽，其分别通过采用动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白进行生产加工而得到的多肽。
优选的，其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白5-10份、玉米蛋白5-10份、卵清蛋白5-10份、小麦醇溶蛋白5-10份、酪蛋白10-20份、油料种子蛋白10-20份和大豆蛋白10-20份。
优选的，其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白7份、玉米蛋白7份、卵清蛋白7份、小麦醇溶蛋白7份、酪蛋白15份、油料种子蛋白15份
和大豆蛋白15份。
优选的，其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白5份、玉米蛋白5份、卵清蛋白5份、小麦醇溶蛋白5份、酪蛋白20份、油料种子蛋白20份
和大豆蛋白20份。
优选的，其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白10份、玉米蛋白10份、卵清蛋白10份、小麦醇溶蛋白10份、酪蛋白10份、油料种子蛋白10份和大豆蛋白10份。
优选的，所述油料种子蛋白为花生种子蛋白、芝麻种子蛋白、油菜籽种子蛋白、向日葵种子蛋白、棉籽种子蛋白、红花种子蛋白或椰子种子蛋白中的一种或多种的组合。
优选的，所述动物血清白蛋白为猪血清白蛋白、羊血清白蛋白或牛血清白蛋白中的一种或多种的组合。
本发明还公开了一种抗氧化多肽的制备方法，具体包括以下步骤：
S1、发酵酶解处理：首先将选取的动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白分别倒入发酵罐中，然后加入30-40mL的温水，之后接种发酵菌种，启动加热设备，将发酵罐温度控制在26-33℃，并且调节PH在5-7范围内，然后向发酵罐中加入12-20mL的水解蛋白酶通过搅拌设备以转速为200-300r/min搅拌20-30min，混合完成后，将发酵罐密封发酵12-16h；
S2、过滤处理：将步骤S1发酵完成后的物料转移至过滤设备中，通过超滤膜进行过滤处理，将发酵杂质过滤下来，并将滤出的发酵液进行集中收集；
S3、灭菌处理：将步骤S2得到的发酵液先通过蒸汽灭菌设备进行110-130℃的高温灭菌处理10-15min；
S4、纯化和鉴定处理：然后将灭菌后的发酵液通过SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱分别进行纯化处理，从而得到混合抗氧化多肽，最后利用蛋白质固相序列分析仪鉴定各多肽的氨基酸序列，鉴别成功后，即可完成混合抗氧化多肽的制备。
(三)有益效果
本发明提供了一种抗氧化多肽及制备方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该抗氧化多肽及制备方法，通过在其分别通过采用动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白进行生产加工而得到的多肽，其制备方法，具体包括以下步骤：S1、发酵酶解处理：首先将选取的动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白分别倒入发酵罐中，然后加入30-40mL的温水，之后接种发酵菌种，启动加热设备，将发酵罐温度控制在26-33℃，并且调节PH在5-7范围内，然后向发酵罐中加入12-20mL的水解蛋白酶通过搅拌设备以转速为200-300r/min搅拌20-30min，混合完成后，将发酵罐密封发酵12-16h，S2、过滤处理：将步骤S1发酵完成后的物料转移至过滤设备中，通过超滤膜进行过滤处理，将发酵杂质过滤下来，并将滤出的发酵液进行集中收集，S3、灭菌处理：将步骤S2得到的发酵液先通过蒸汽灭菌设备进行110-130℃的高温灭菌处理10-15min，S4、纯化和鉴定处理：然后将灭菌后的发酵液通过SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱分别进行纯化处理，从而得到混合抗氧化多肽，最后利用蛋白质固相序列分析仪鉴定各多肽的氨基酸序列，鉴别成功后，即可完成混合抗氧化多肽的制备，可实现将多种蛋白进行集中发酵酶解处理，节约生产成本，制备工艺简单，很好的达到了通过将采用微生物发酵和酶水解工艺同时进行，来降低成本的目的，实现了通过微生物产生的端肽酶对肽末端进行修饰，使制得的肽苦味消失，并且散发天然芳香味，制备条件温和，且易于控制，从而大大方便了生产人员的多肽制备。
附图说明
图1为本发明制备方法的流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明实施例提供三种技术方案：一种抗氧化多肽的制备方法，具体包括以下实施例：
实施例1
S1、发酵酶解处理：首先将选取的7份动物血清白蛋白、7份玉米蛋白、7份卵清蛋白、7份小麦醇溶蛋白、15份酪蛋白、15份油料种子蛋白和15份大豆蛋白分别倒入发酵罐中，然后加入35mL的温水，之后接种发酵菌种，启动加热设备，将发酵罐温度控制在30℃，并且调节PH在6范围内，然后向发酵罐中加入16mL的水解蛋白酶通过搅拌设备以转速为250r/min搅拌25min，混合完成后，将发酵罐密封发酵14h，油料种子蛋白为花生种子蛋白、芝麻种子蛋白、油菜籽种子蛋白、向日葵种子蛋白、棉籽种子蛋白、红花种子蛋白和椰子种子蛋白的组合物，动物血清白蛋白为猪血清白蛋白、羊血清白蛋白和牛血清白蛋白的组合物；
S2、过滤处理：将步骤S1发酵完成后的物料转移至过滤设备中，通过超滤膜进行过滤处理，将发酵杂质过滤下来，并将滤出的发酵液进行集中收集；
S3、灭菌处理：将步骤S2得到的发酵液先通过蒸汽灭菌设备进行120℃的高温灭菌处理13min；
S4、纯化和鉴定处理：然后将灭菌后的发酵液通过SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱分别进行纯化处理，从而得到混合抗氧化多肽，最后利用蛋白质固相序列分析仪鉴定各多肽的氨基酸序列，鉴别成功后，即可完成混合抗氧化多肽的制备。
实施例2
S1、发酵酶解处理：首先将选取的5份动物血清白蛋白、5份玉米蛋白、5份卵清蛋白、5份小麦醇溶蛋白、20份酪蛋白、20份油料种子蛋白和20份大豆蛋白分别倒入发酵罐中，然后加入30mL的温水，之后接种发酵菌种，启动加热设备，将发酵罐温度控制在26℃，并且调节PH在5范围内，然后向发酵罐中加入12mL的水解蛋白酶通过搅拌设备以转速为200r/min搅拌20min，混合完成后，将发酵罐密封发酵12h，油料种子蛋白为花生种子蛋白，动物血清白蛋白为猪血清白蛋白；
S2、过滤处理：将步骤S1发酵完成后的物料转移至过滤设备中，通过超滤膜进行过滤处理，将发酵杂质过滤下来，并将滤出的发酵液进行集中收集；
S3、灭菌处理：将步骤S2得到的发酵液先通过蒸汽灭菌设备进行110℃的高温灭菌处理10min；
S4、纯化和鉴定处理：然后将灭菌后的发酵液通过SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱分别进行纯化处理，从而得到混合抗氧化多肽，最后利用蛋白质固相序列分析仪鉴定各多肽的氨基酸序列，鉴别成功后，即可完成混合抗氧化多肽的制备。
实施例3
S1、发酵酶解处理：首先将选取的10份动物血清白蛋白、10份玉米蛋白、10份卵清蛋白、10份小麦醇溶蛋白、10份酪蛋白、10份油料种子蛋白和10份大豆蛋白分别倒入发酵罐中，然后加入40mL的温水，之后接种发酵菌种，启动加热设备，将发酵罐温度控制在33℃，并且调节PH在7范围内，然后向发酵罐中加入20mL的水解蛋白酶通过搅拌设备以转速为300r/min搅拌30min，混合完成后，将发酵罐密封发酵16h，油料种子蛋白为椰子种子蛋白，动物血清白蛋白为牛血清白蛋白；
S2、过滤处理：将步骤S1发酵完成后的物料转移至过滤设备中，通过超滤膜进行过滤处理，将发酵杂质过滤下来，并将滤出的发酵液进行集中收集；
S3、灭菌处理：将步骤S2得到的发酵液先通过蒸汽灭菌设备进行130℃的高温灭菌处理15min；
S4、纯化和鉴定处理：然后将灭菌后的发酵液通过SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱分别进行纯化处理，从而得到混合抗氧化多肽，最后利用蛋白质固相序列分析仪鉴定各多肽的氨基酸序列，鉴别成功后，即可完成混合抗氧化多肽的制备。
综上所述
本发明可实现将多种蛋白进行集中发酵酶解处理，节约生产成本，制备工艺简单，很好的达到了通过将采用微生物发酵和酶水解工艺同时进行，来降低成本的目的，实现了通过微生物产生的端肽酶对肽末端进行修饰，使制得的肽苦味消失，并且散发天然芳香味，制备条件温和，且易于控制，从而大大方便了生产人员的多肽制备。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种抗氧化多肽，其特征在于：其分别通过采用动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白进行生产加工而得到的多肽。
2.根据权利要求1所述的一种抗氧化多肽，其特征在于：其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白5-10份、玉米蛋白5-10份、卵清蛋白5-10份、小麦醇溶蛋白5-10份、酪蛋白10-20份、油料种子蛋白10-20份和大豆蛋白10-20份。
3.根据权利要求1所述的一种抗氧化多肽，其特征在于：其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白7份、玉米蛋白7份、卵清蛋白7份、小麦醇溶蛋白7份、酪蛋白15份、油料种子蛋白15份和大豆蛋白15份。
4.根据权利要求1所述的一种抗氧化多肽，其特征在于：其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白5份、玉米蛋白5份、卵清蛋白5份、小麦醇溶蛋白5份、酪蛋白20份、油料种子蛋白20份和大豆蛋白20份。
5.根据权利要求1所述的一种抗氧化多肽，其特征在于：其制备原料按重量比份包括：动物血清白蛋白10份、玉米蛋白10份、卵清蛋白10份、小麦醇溶蛋白10份、酪蛋白10份、油料种子蛋白10份和大豆蛋白10份。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种抗氧化多肽，其特征在于：所述油料种子蛋白为花生种子蛋白、芝麻种子蛋白、油菜籽种子蛋白、向日葵种子蛋白、棉籽种子蛋白、红花种子蛋白或椰子种子蛋白中的一种或多种的组合。
7.根据权利要求1-5任意一项所述的一种抗氧化多肽，其特征在于：所述动物血清白蛋白为猪血清白蛋白、羊血清白蛋白或牛血清白蛋白中的一种或多种的组合。
8.一种抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、发酵酶解处理：首先将选取的动物血清白蛋白、玉米蛋白、卵清蛋白、小麦醇溶蛋白、酪蛋白、油料种子蛋白和大豆蛋白分别倒入发酵罐中，然后加入30-40mL的温水，之后接种发酵菌种，启动加热设备，将发酵罐温度控制在26-33℃，并且调节PH在5-7范围内，然后向发酵罐中加入12-20mL的水解蛋白酶通过搅拌设备以转速为200-300r/min搅拌20-30min，混合完成后，将发酵罐密封发酵12-16h；
S2、过滤处理：将步骤S1发酵完成后的物料转移至过滤设备中，通过超滤膜进行过滤处理，将发酵杂质过滤下来，并将滤出的发酵液进行集中收集；
S3、灭菌处理：将步骤S2得到的发酵液先通过蒸汽灭菌设备进行110-130℃的高温灭菌处理10-15min；
S4、纯化和鉴定处理：然后将灭菌后的发酵液通过SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱分别进行纯化处理，从而得到混合抗氧化多肽，最后利用蛋白质固相序列分析仪鉴定各多肽的氨基酸序列，鉴别成功后，即可完成混合抗氧化多肽的制备。
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| CN116284301A (zh) * | 2023-03-27 | 2023-06-23 | 斯坦德医药研发(江苏)有限公司 | 一种抗氧化多肽及其应用 |
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