CN110960594A - 一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物，所述中药组合物，包括以下重量份的组分：太子参15～25份、白术5～15份、茯苓15～25份、炙甘草3～10份、防风5～15份、白芍10～20份、蒸陈皮3～10份、黄连片3～10份、木香5～15份；本发明所述的中药组合物通过证实，对物理性疼痛、化学性疼痛均具有明显的镇痛效果，并且通过抑制肠道动力发挥止泻作用，可明显改善肠道高敏状态，减少粪便含水率，增加黏膜屏障功能，并改善肠道菌群；可为腹泻型肠易激患者提供一种安全有效、无药物依赖性、温和易服的中药配方，对提高IBS‑D的临床治愈率，缓解临床症状，规范化管理疾病，具有重要的医用价值。

Description

一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物

技术领域

本发明属于中医药领域，涉及一种中药组合物，具体涉及一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物。

背景技术

肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种常见的功能性肠道疾病，以反复发作的腹部疼痛、粪便性状或排便习惯改变为特征，而肠道并无器质性改变的一组临床症候群。罗马IV标准根据粪便性状的不同，将肠易激综合征主要分为3个亚型：肠易激综合征腹泻型(irritabel bowel syndrome with predominant diarrhea，IBS-D)、便秘型(irritabel bowel syndrome with predominant constipation，IBS-C)、混合型(irritabel bowel syndrome with mixed bowel habits，IBS-M)；其中腹泻型肠易激综合征患者所占比例最多，约占患病总人数的61.5％。

据统计，IBS在全球流行率约为10％至15％，为消化系统常见病、多发病。在初级保健和胃肠病学诊疗中经常遇到IBS，在美国所有转诊给胃肠病科医生的病例中，IBS占25％至50％，在因病请假天数上仅次于感冒。据统计，女性与男性的患病比例为2:1，有一半IBS患者会寻求治疗。最近的研究发现，亚洲的IBS的患病率在6.8-33.3％之间，其中腹泻型肠易激综合征患者所占比例最多，约占患病总人数的61.5％。本病发病率高、反复难愈，严重而频繁的腹泻、腹痛症状严重影响了患者的生活质量及工作效率，寻求药物治疗的费用更是给患者个人及社会带来了沉重的经济负担。此病虽不威胁患者的生命，但却严重影响患者的生存质量，造成劳动力下降，并且由于患者的反复就诊而耗费大量有限的医疗资源。

目前，IBS的病因和发病机制尚不十分明确，认为可能是遗传因素、内脏高敏感、肠道动力异常、脑肠轴异常、肠道分泌及吸收功能异常、免疫异常、精神心理因素等多因素共同作用导致发病。传统上，IBS的发病机制集中在肠道运动、内脏感觉异常、脑-肠相互作用和心理社会因素上。尽管在大多数IBS患者中可以证明存在这些异常中的一种或多种，但没有一种机制可以解释所有这些异常的症状。最近，在一些IBS患者中已经证实有肠道免疫系统激活、肠黏膜通透性和肠道微生物组的改变。由于致病因素复杂，且临床缺乏良好的生物学诊断标志物，存在多种、重叠、非特异性症状，因此给诊治带来了一定困难。

而当前临床使用的西药包括止泻药、5-羟色胺药物、解痉药、抗抑郁药、微生态调节剂等，其疗效亦欠理想，且长期使用毒副作用明显，患者常常不能耐受，导致病情反复，部分患者甚至无法维持临床缓解状态；已公布的一种治疗肠易激综合征药物组合物包括丁香、肉桂组合物、选择性胃肠道拮抗剂等药物。这一类属于中西医合成药物，由中药提取物和西药合成，二者结合有利有弊，且由于药物含有西药成分，长期服用，仍有较大的副作用且缺乏中医分证论治，适用人群不明确。

另一方面，治疗肠易激综合征的中药配方多以柴胡疏肝散、痛泻要方、参苓白术散等为基础方加减，虽有一定的临床疗效，但少有中药配方结合地域特点增减药物，且大多数已公布的中药配方的疗效仅通过临床研究或动物实验验证，大多数只从单一机制进行疗效评定，极少从临床-实验-临床进行反复验证，从而导致已公布的中药处方具有适应范围模糊不清、疗效机制欠清晰等不足。且已公布的中药配方极少报道中药对肠易激综合征患者的肠道微生物结构的影响。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种用于治疗腹泻型肠易激综合征的疗效好、副作用少的中药组合物。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物，名为：肠安菌泰(CAJT)，包括以下重量份的组分：太子参15～25份、白术5～15份、茯苓15～25份、炙甘草3～10份、防风5～15份、白芍10～20份、蒸陈皮3～10份、黄连片3～10份和木香5～15份。

太子参、白术、茯苓补气健脾且能利水渗湿，白芍柔肝缓急以舒肝，防风疏肝解郁，白芍配防风则白芍养肝体而防风助肝用，共奏舒肝解郁之功效，陈皮理气燥湿且能化痰，木香理气止痛且能疏肝，木香合陈皮则理气之功卓著，共奏消胀满、止痛之效，黄连味苦，清热燥湿以止泻。

本发明中药组合物兼顾肠易激综合征的多种致病因素的特点，拟方选药旨在通过多靶点、多途径协同增强临床疗效。针对肠道动力异常、肠道免疫系统、肠道菌群紊乱的发病机制，优选太子参、白术、茯苓、黄连、炙甘草，其中太子参、白术、茯苓、炙甘草已被证实具有促进营养物质吸收、调节物质能量代谢、调节胃肠运动、调节胃肠激素、促进黏膜损伤修复、改善肠道黏膜免疫、促进黏膜损伤修复、调节肠道微生态菌群等功能，黄连具有抗腹泻、抗炎、解热等作用；针对内脏高敏、脑肠互动紊乱的发病机制，选用防风、陈皮、白芍、木香，其中陈皮已被证实具有双向调节胃肠平滑肌运动、利胆、促进消化等作用，防风具有镇痛、抗炎等作用，木香具有解痉、镇痛镇静、抗炎等作用。上述药物合用能整体调节肠易激综合征患者的身体机能，较目前已有的中药配方具有作用靶点更多、适用范围更广的优势。

作为本发明的优选实施方式，所述中药组合物包括以下重量份的组分：太子参20份、白术10份、茯苓20份、炙甘草6份、防风10份、白芍15份、蒸陈皮5份、黄连片5份和木香10份。

本发明还要求保护所述的中药组合物在制备治疗腹泻型肠易激综合征的药物中的应用。

本发明还要求保护包括所述的中药组合物的药物；所述药物具有镇痛、止泻或治疗腹泻型肠易激综合征的作用。

作为本发明的优选实施方式，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

作为本发明的优选实施方式，所述药物的剂型包括颗粒剂。

进一步地，本发明还提供了所述颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)原药料的前处理：按处方比例，称取处方中的药材，清洗后粉碎，得到饮片；

(2)原药料的提取与浓缩：将所述步骤(1)制得的饮片加水煎煮2次，将水提液经滤网过滤后减压浓缩，制得相对密度为1.07～1.09g/ml的药膏，再将药膏过筛得颗粒药膏；

(3)喷雾干燥：取步骤(2)所述的颗粒药膏加热煮沸，喷雾干燥，然后收集喷干粉；

(4)粉碎与混合：取步骤(3)所述的喷干粉，用高速粉碎机粉碎过振荡筛，置于固定料斗混合机中混合，制得中药配方颗粒提取物；

(5)制粒与分装：取步骤(4)所述的中药配方颗粒提取物，用干式造粒机干压制粒，即得所述颗粒剂。

作为本发明的优选实施方式，所述步骤(1)的饮片厚度为0.3-1.5cm。

作为本发明的优选实施方式，所述步骤(2)的具体过程为：第一次煎煮加水量为总投料重量的8倍，加热沸腾后提取2小时，药液过滤；第二次煎煮加水量为总投料重量的7倍，加热沸腾后提取1小时；然后将两次水提液合并，经40目滤网过滤至储罐中；取所述储罐中的滤液再进行过滤，然后将所得滤液进行减压浓缩，制得相对密度为1.07～1.09g/mL的药膏，再将药膏过筛得颗粒药膏。

本发明所述的中药组合物可通过液相色谱-质谱检测其有效成分。

作为本发明的优选实施方式，所述液相色谱-质谱联用法中的中的液相色谱检测的具体方法为：色谱柱为Phenomenex Luna C18(250*4.6mm,5μm)；0-60min，以乙腈和0.1％甲酸水溶液为流动相；柱温25℃；流速：1mL/min；检测波长：254nm。

进一步地，流动相中，乙腈的浓度梯度如下：0～10min，10％乙腈；10～20min，30％乙腈；20～30min，50％乙腈；30～40min，70％乙腈；40～50min，90％乙腈。

作为本发明的优选实施方式，所述液相色谱-质谱联用法中的质谱条件为：扫描模式为正离子模式；离子源温度：550℃；离子源电压：5500V；MS扫描范围：50-1500Da；MS/MS扫描范围：50-1500Da；MS诱导碰撞电压：10V；MS/MS诱导碰撞电压：35V。

使用AB SCIEX X500R QTOF Mass Spectrometer；离子源：ESI(TurboionSpray)。

本发明所述的中药组合物其主要功效为健脾疏肝、清利湿热，能逆转肝之疏泄、脾失健运，使肝气调达，脾胃运化功能正常；通过长期的临床观察及动物实验证实了本发明中药组合物对物理性疼痛、化学性疼痛均具有明显的镇痛效果，并且通过抑制肠道动力发挥止泻作用，可明显改善肠道高敏状态，减少粪便含水率，增加黏膜屏障功能，并改善肠道菌群；本发明为腹泻型肠易激患者提供了一种科学有效、无药物依赖性、温和易服、无明显副作用的中药配方；本发明中药组合具有临床疗效佳，安全性高的优势，对于治疗和缓解患者的症状，规范化管理疾病，避免产生长期服用西药的副作用，具有重要的医用价值。

附图说明

图1为AWR评分示意图。

图2为治疗前后大鼠的体重。

图3为治疗前后大鼠粪便含水率结果。

图4为治疗前后大鼠避水应激测试结果。

图5为母婴分离第28天大鼠结肠扩张时AWR评分为3分时的平均注水量。

图6为治疗前后大鼠结肠扩张时AWR评分为3分时的平均注水量。

图7为各组药物对热板疼痛模型小鼠痛阈值的影响结果。

图8为各组药物对对醋酸扭体模型小鼠痛阈值的影响结果。

图9为各组药物对蓖麻油腹泻小鼠的稀便率影响结果。

图10为各组药物对蓖麻油腹泻小鼠的腹泻指数影响结果。

图11为qPCR实验各目的基因的引物序列。

图12为各组大鼠结肠肥大细胞的含量表达结果。

图13为各组大鼠结肠SCF蛋白的表达结果。

图14为各组大鼠结肠SCF mRNA的表达结果。

图15为各组大鼠结肠5-HTR1A蛋白的表达结果。

图16为各组大鼠结肠5-HTR1A mRNA的表达结果。

图17为各组大鼠结肠SP蛋白蛋白的表达结果。

图18为各组大鼠结肠SP mRNA的表达结果。

图19为各组大鼠结肠C-KIT蛋白的表达结果。

图20为各组大鼠结肠C-KIT mRNA的表达结果。

图21为各组大鼠结肠PKC蛋白的表达结果。

图22为各组大鼠结肠PKC mRNA的表达结果。

图23为各组大鼠结肠TRPV1蛋白的表达结果。

图24为各组大鼠结肠TRPV1 mRNA的表达结果。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物的实施例，由以下重量的组分组成：太子参20g、白术10g、茯苓20g、炙甘草6g、防风10g、白芍15g、蒸陈皮5g、黄连片5g、木香10g。

实施例2

本发明一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物的实施例，由以下重量的组分组成：太子参15g、白术5g、茯苓15g、炙甘草3g、防风5g、白芍10g、蒸陈皮3g、黄连片3g、木香5g。

实施例3

本发明一种治疗腹泻型肠易激综合征的中药组合物的实施例，由以下重量的组分组成：太子参25g、白术15g、茯苓25g、炙甘草10g、防风15g、白芍20g、蒸陈皮10g、黄连片10g、木香15g。

一、本发明中药组合物治疗IBS-D的药效学研究

1.实验材料和方法：

(1)实验材料：

将SD大鼠分为6组：正常组(control)、模型组(model)、CAJT低剂量组、CAJT中剂量组、CAJT高剂量组、阿洛司琼(Alosetron)组；其中，除正常组外，其他各组以母婴分离复合醋酸灌肠方法建立大鼠IBS-D模型，通过结肠扩张腹壁回缩反射评分、避水应激、粪便含水率等指标评价模型，确定造模后的SD大鼠具有IBS-D肠道高敏。

CAJT(下同)颗粒剂：按本发明实施例1中药组合物配方，制成每袋8.1克的颗粒剂，用蒸馏水溶解成不同剂量的溶液，并以37℃水浴锅温热。

将实施例1的中药组合物制备成颗粒剂的方法包括以下步骤：

(1)原药料的前处理：按处方比例，称取处方中的药材，清洗后粉碎，制得饮片，备用；

(2)原药料的提取与浓缩：①水提：按处方量的比例，取处方中的9味饮片投入提取罐中，加水煎煮2次，第一次煎煮加水为总投料重量的8倍，加热沸腾后提取2小时，药液过滤；第二次煎煮加水为总投料重量的7倍，加热沸腾后提取1小时，然后将水提液经40目滤网过滤至储罐中；②减压浓缩：取储罐中滤液，过350目滤网进行过滤，将过滤后的滤液进行减压浓缩，将浓缩温度控制在80℃以下，真空度为-0.03Mpa，浓缩至相度密度为1.07g/mL的药膏进行出料，将药膏过250目筛，制得颗粒药膏；

(3)喷雾干燥：取上述中药配方颗粒药膏放置配料罐中，加热煮沸15分钟，喷雾干燥控制的进风温度为175℃，出风温度为85℃，喷雾干燥结束后，收集喷干粉放置洁净塑料袋中，放入中间站暂存，3天内进入下一工序；

(4)粉碎与混合：取中药配方颗粒喷干粉，用高速粉碎机粉碎过80目振荡筛，放置固定料斗混合机中混合20分钟，制得中药配方颗粒提取物；

(5)制粒与分装：①配料、制粒：取中药配方颗粒提取物，用干式造粒机制粒(冲孔板孔径1.70mm)，设备油压20±4bar干压制粒，颗粒用16目和30目筛整粒，粗粒和细粉重新制粒，最后制得粒度在16目～30目范围、色泽均匀的中药配方颗粒，检验合格，入库；②分装：用包装袋分装为8.1g/袋，检查装量差异和密封性，符合要求后即可正式分装，分装期间应每15分钟检查装量差异和密封性。

阿洛司琼：取1g阿洛司琼，加入超纯水定容至100mL，超声混匀后配制成浓度为10mg/mL的药物。

(2)实验方法：

予药物(CAJT颗粒剂或阿洛司琼)灌胃给药2周。CAJT低剂量组、CAJT中剂量组、CAJT高剂量组分别给予0.85g/Kg/day、1.7g/Kg/day、3.4g/Kg/day的CAJT颗粒剂，阿洛司琼组给予剂量为200μg/Kg/day的阿洛司琼。

(3)评价方法：

实验前后称取各组大鼠的体重，动态观察大鼠体重增长情况。药物干预结束后开始行为学观察，观察大鼠在毛发、色泽、活动度、叫声、饮水量、大便等情况，收集各组大鼠粪便，测定粪便含水率。并进行结肠扩张进行腹部回缩反射评分，以及测试避水应激1h内大鼠排便颗粒数。

大便含水率测定(Feces moisture content,FMC)：造模完成后第一天，每组随机抽取大鼠6只，单独置于大鼠代谢笼中，收集1h内大鼠排出的粪便，并称取大便湿重，于微波中火烘2分钟后，称干重，粪便含水量按照《中国药典》水分测定烘干法测定：大便含水率＝大便湿重-大便干重/大便湿重×100％。

避水应激测试(water avoid stress,WAS)：将单只大鼠放置于一箱(45cm×25cm×25cm)底部中央的大小为8cm×8cm×10cm的平台上，箱内倒入常温的水使水面距平台顶部在1cm以内，正常组放于同样的平台上但箱内不装水，观察1h记录大鼠排便粒数。

结肠扩张(colorectal distention,CRD)和腹部收缩反射(AbdominalWithdrawal Reflex,AWR)测试：大鼠实验前一晚开始禁食不禁水，双盲法检测(操作结肠扩张及腹部收缩反射评分的人员均对实验组的设计无从知晓)。将一个由医用手套指状物制成小球囊并连接到套着导管的小鼠灌胃针，凡士林涂抹润滑肛门后将此自制导管通过肛门插入结肠，在体外导管距肛门1cm处用胶带将管子固定在大鼠尾巴根部，以免发生位移。将大鼠置于小透明盒中使其适应，在结肠扩张前30min继续让大鼠适应自制球囊导管。结肠扩张时将预热(37℃)的水注入球囊中，记录引起大鼠AWR得分为3分时的注水量。结肠扩张操作重复3次，每次操作间隔10min，以3次结肠扩张测量到的注水量的平均值为大鼠结肠扩张引起腹部收缩反射的疼痛阈值。

AWR评分如下(参考图1)：0分，大鼠对结肠扩张没有行为反应；1分，大鼠对结肠扩张身体没行动反应，有偶尔的头部运动；2分，腹部肌肉收缩而腹部并未抬起；3分，腹部肌肉收缩并且腹部抬起离开地面；4分，腹部肌肉收缩并身体呈弓形拱起，骨盆结构抬起。

2.实验结果：

正常组大鼠活跃，鼠毛白皙干净有光泽，无舔趾、腹部肌肉收缩和弓背抬腹现象。模型组大鼠非常活跃、频繁上蹿下跳，打架，鼠毛发黄干燥粗糙，缺乏光泽，偶可见大鼠舔趾、腹部肌肉收缩，粪便质软偏稀，垫料臭味稍明显，鼠笼清洁度较差。阿洛司琼组大鼠粪便干硬，大鼠无舔趾腹部肌肉收缩和弓背向上抬起现象，垫料干燥无明显臭味，鼠笼清洁。CAJT中剂量、CAJT高剂量组大鼠状态稍活跃，喜追逐，鼠毛整洁有光泽，未观察到大鼠舔趾腹部肌肉收缩和弓背向上抬起现象，而CAJT低剂量组偶可观察到，并且大鼠活跃状态与模型组相比，改变不明显。

治疗前后大鼠的体重如图2，大鼠粪便含水率结果如图3，治疗前后大鼠避水应激1h内排出的粪便数测试结果如图4，母婴分离第28天大鼠结肠扩张时AWR评分为3分时的平均注水量结果如图5，治疗前后大鼠结肠扩张时AWR评分为3分时的平均注水量图6(#，与正常组比较，P＜0.05。与模型组比较：*，P＜0.05；***，P＜0.001)。

由实验结果显示，IBS-D模型大鼠(除正常组外各组)治疗前与治疗后的粪便含水率均明显高于正常组大鼠的粪便含水率(P＜0.05)；IBS-D模型大鼠在第56天、70天避水应激期间1h内大鼠排出粪便数明显多于正常组大鼠(P＜0.05)；IBS-D模型大鼠在第28天、56天、70天时结肠扩张时AWR评分为3分时的平均注水量也显著少于正常组大鼠的平均注水量(P＜0.05)；说明大鼠出现了持续性的内脏高敏性，母婴分离复合醋酸灌肠模型虽然没有造成大鼠腹泻症状，但是大鼠粪便含水量显著增多，此模型较好拟合了IBS-D临床实际，从中医角度解释则是母婴分离复合醋酸灌肠造成了大鼠肝郁脾虚证型，母婴分离与醋酸灌肠本身就是对身心产生程度很深的刺激，大鼠呈现出焦虑躁动的肝郁表现，肝失疏泄导致横逆犯脾，肠道传导失司，而从产生痛(肠道高敏感性)与泻(本研究为大鼠粪便含水率增高)的症状。以母婴分离为基础复合其他刺激因素的模型可致大鼠体重明显低于正常大鼠。本研究也显示母婴分离复合醋酸灌肠的IBS-D模型大鼠体重明显小于正常组大鼠的体重(P＜0.05)。IBS-D模型大鼠体重低于正常组其原因可能是大鼠处于焦虑状态，导致新陈代谢加快，而进食量又减少。从中医理论角度诠释则是由于脾失健运，肝失疏泄，胃纳差从而导致体重增长慢。

目前IBS-D并没有普遍公认疗效确切的西药，本研究课题选择阿洛司琼为阳性西药对照组。阿洛司琼是5-HTR3拮抗剂，抑制非选择性阳离子通道的活化，进而调节肠神经系统，抑制胃肠道神经元上的5-HT受体的活化，减少肠道分泌、蠕动和传入疼痛信号。而此动物模型以内脏高敏为病理生理学基础，而阿洛司琼是5-HTR3拮抗剂，不仅能抑制非选择性阳离子通道的活化而且能显著降低内脏高敏，本发明中药组合物具有健脾疏肝功效，能逆转肝之疏泄、脾失健运，使肝气调达，脾胃运化功能正常。肝疏泄功能得当则在情志上不急不躁，不怒不抑郁淡漠。

本发明中药组合物的药效学结果显示，CAJT低剂量、CAJT中剂量、CAJT高剂量、阿洛司琼均能明显减少大鼠结肠扩张时AWR评分为3分时的平均注水量、避水应激1h内大鼠排出粪便数、粪便含水率，尤其以CAJT中剂量、CAJT高剂量效果显著，与阿洛司琼效果基本一致。从中医角度解释，本发明中药组合物降低大鼠肠道高敏的作用主要是白芍、甘草能酸甘化阴，养阴柔肝，缓急止痛以及木香具有行气止痛功效；本发明中药组合物中并没有涩肠止泻的中药，所以其减少大鼠粪便含水率的作用则更多的是本发明中药组合物整个复方针对IBS-D根本病机发挥治疗效果，疏肝行气，健脾止泻。

二、本发明所述中药组合物的镇痛止泻作用的研究

1.实验材料和方法：

(1)实验材料：

C57小鼠雌雌性各半(18-22g)由广东省动物实验中心提供，许可证号：SCXK(粤)2013-0002。小鼠饲养于广州中医药大学国际中医药转化医学研究所SPF级实验动物房，饲养条件为II级，环境安静无嘈杂，昼夜周期12h/12h，室温22-25℃，相对湿度55％，自由进食、饮水，适应性饲养7天。

阿司匹林(大连美仑有限公司，100g/瓶)：取0.2g加20mL超纯水配制成0.1mg/mL的溶液。洛哌丁胺(大连美仑有限公司，1g/瓶)：取4mg加20mL超纯水配制成2mg/mL的溶液。蓖麻油：TCI，25mL/瓶。

(2)实验方法：

将C57小鼠分为正常组、模型组、CAJT低剂量组、CAJT中剂量组、CAJT高剂量组、阿司匹林组(热板镇痛、醋酸扭体模型的阳性对照药)、洛哌丁胺组(腹泻模型的阳性对照药)。C57小鼠适应性喂养1周后，开始药物干预7天。

其中，模型组只建模处理，不给药；CAJT低剂量组、CAJT中剂量组、CAJT高剂量组分别给予1.229g/kg/day、2.457g/kg/day、4.914g/kg/day的CAJT颗粒剂；阿司匹林组给予0.1g/kg/day剂量的阿司匹林；洛哌丁胺组给予剂量为2mg/kg/day的洛哌丁胺；

(3)评价方法：

分别通过热板镇痛法(物理性疼痛模型)和醋酸扭体疼痛(化学性疼痛模型)实验观察本发明中药组合物镇痛作用；采用蓖麻油致小鼠腹泻模型研究本发明中药组合物的止泻功能。

痛阈提高的百分率＝(给药后的痛阈-基础痛阈)/基础痛阈×100％；

稀便率＝稀便数/总便数。

稀便级：稀便的级别用4级分别代表稀便的程度。以稀便污染定性滤纸形成污迹面积的大小计算级别，污渍形状较为规则圆形时测其直径，不规则形状的污渍则测其最长和最近似圆形的直径，求两数的均数即为其稀便级。标准如下：

表1稀便的级别的评价标准

级数	1	2	3	4
					污迹直径(cm)	<1	1～1.9	2～3	>3

通过稀便率和稀便级两个指标计算小鼠腹泻指数，公式：

腹泻指数＝稀便率×稀便级；

2.实验结果：

各组药物对热板疼痛模型小鼠痛阈值的影响结果如图7，各组药物对对醋酸扭体模型小鼠痛阈值的影响结果如图8，各组药物对蓖麻油腹泻小鼠的稀便率影响结果如图9，各组药物对蓖麻油腹泻小鼠的腹泻指数影响结果如图10(#，与正常组比较，P＜0.001。与模型组比较：*，P＜0.05；**，P＜0.01；***，P＜0.001)。

小鼠热板法和醋酸扭体法镇痛实验结果显示，CAJT中剂量、CAJT高剂量及阿司匹林对物理性和化学性致痛因素造成的疼痛均有明显的镇痛作用。热板镇痛实验结果表明，通过灌胃给予CAJT中、CAJT高剂量颗粒剂后，能显著提高小鼠对物理性疼痛刺激(热刺激)的痛阈值，并且与模型组相比较具有明显的差异性(P＜0.05)；化学性疼痛模型醋酸扭体疼痛实验中，CAJT中、CAJT高剂量可以明显减少小鼠的扭体次数，具有较高的扭体抑制率(P＜0.05)。两个镇痛模型的结果都显示浓度为CAJT中剂量、CAJT高剂量对物理性疼痛与化学性疼痛均具有良好的镇痛效果，而CAJT低剂量组大鼠的疼痛阈值虽然有所下降，但与模型组相比，差异没有统计学意义。这可能是由于低剂量的CAJT相当于临床用量的一半剂量，因血药浓度不够从而限制了其镇痛的效果。CAJT中、CAJT高剂量的镇痛作用在现代研究中也能找到依据。据文献报道，腹腔注射白芍苷对毒蜂痛觉过敏模型，自发的持续性痛觉高敏及原发性热过敏均有显著抑制作用，其机制可能是通过阻断阿片受体实现的。白芍苷能够通过抑制ERK信号通路调节腺苷A1受体改善母婴分离大鼠的肠道高敏，它的镇痛作用也可能是中枢神经系统中K-阿片受体和α2-肾上腺素能受体介导的。黄连的有效成分小檗碱可显著缓解内脏疼痛。陈皮中的橙皮苷可抑制DRG神经元P2X3受体介导的伤害性传递，从而减轻大鼠的机械和热痛觉过敏。从中医理论解释就是CAJT中的白芍与甘草酸甘化阴，柔肝养阴、缓急止痛；木香、陈皮、黄连合而燥湿行气止痛。

蓖麻油腹泻模型探索本发明中药组合物的止泻作用的研究中，我们选取稀便率和腹泻指数作为指标。灌胃给予蓖麻油30min后，除正常组外，各组小鼠逐渐出现排便次数增多，排出稀便。除此之外，模型组小鼠的精神明显变差，状态比较淡漠，活动频率减少，肛门粪便污迹明显。与模型组比较，CAJT中剂量组、高剂量组稀便率与腹泻指数均明显降低(P＜0.01)；但与模型组相比，CAJT低剂量组的小鼠稀便率虽降低，但差异无统计学意义(P＞0.05)，而CAJT低剂量组、CAJT中剂量组、高剂量组的腹泻指数较模型组明显降低(P＜0.01)。由此可见，CAJT三个剂量均能显著降低蓖麻油所致小鼠腹泻模型的腹泻指数，均具有一定的止泻作用。同时我们发现虽然CAJT中剂量、高剂量明显降低蓖麻油所致小鼠腹泻模型的稀便率，但是CAJT低剂量未能明显降低蓖麻油所致小鼠腹泻模型的稀便率。稀便率等于稀便数与粪便总数的比值，腹泻指数等于稀便率与平均稀便级别的乘积。当粪便总数样本量固定且较小时，稀便率的波动范围很大。所以，究其原因可能是腹泻指数更能综合全面地反映稀便量与稀便程度的异常。研究显示小檗碱能够加强人Caco-2细胞紧密蛋白的连接作用降低肠上皮的通透性从而发挥止泻作用。白术、防风药能通过降低白介素6，白介素8等炎症因子的表达水平，提高紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1的含量从而修复肠道黏膜屏障，改善肠道黏膜通透性。从中医理论解释，CAJT中虽然没有涩肠或渗湿止泻的中药，但是其能针对IBS-D的肝郁脾虚的病机发挥疏肝止痛，健脾止泻的功效，恢复肝疏泄、脾运化、肠道传导的正常功能，从而治疗泄泻。

综上，CAJT的镇痛止泻作用研究结果表明，CAJT中剂量、CAJT高剂量对物理性疼痛及化学性疼痛均有显著的镇痛止泻功能。

三、本发明中药组合物通过SCF/C-KIT信号系统下调TRPV1治疗大鼠IBS-D内脏高敏机制研究

1.实验材料和方法：

(1)实验材料：

IBS-D的药效学研究中各实验组的大鼠。

(2)实验方法：

用1％水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后，取各组结肠组织用PBS冲洗后，取一部分制备成石蜡切片，其余取同等质量分别提取总蛋白，剩余部分分别提取RNA。

(3)评价方法：

a)肥大细胞苯甲胺蓝染色：分别将各组大鼠结肠组织石蜡切片进行苯甲胺蓝染色，结肠组织肥大细胞呈紫红色，细胞核呈浅蓝色，背景呈浅蓝色。统计各组结肠组织中肥大细胞数量并测量组织面积(mm²)，计算得到肥大细胞密度以及脱颗粒肥大细胞占比。

b)检测总蛋白含量：通过BSA标定结肠组织的蛋白含量。

c)qPCR检测：检测目的基因的表达情况，目的基因包括：5-HTR1A、SCF、C-KIT、PKC、TRPV1、SP等(各基因的引物序列如图11)。

2.实验结果：

各组大鼠结肠肥大细胞的苯甲胺蓝染色结果如图12，各组大鼠结肠SCF蛋白及SCFmRNA的表达结果如图13、14，各组大鼠结肠5-HTR1A蛋白及5-HTR1AmRNA的表达结果如图15、16，各组大鼠结肠SP蛋白及SP mRNA的表达结果如图17、18，各组大鼠结肠C-KIT蛋白及C-KIT mRNA的表达结果如图19、20，各组大鼠结肠PKC蛋白及PKC mRNA的表达结果如图21、22，各组大鼠结肠TRPV1蛋白及TRPV1 mRNA的表达结果如图23、24。(#，与正常组比较，P＜0.05。与模型组比较：*，P＜0.05；**，P＜0.01；***，P＜0.001)

干细胞因子(Stemcell factor,SCF)又被称为肥大细胞生长因子，是C-KIT的同源配体，由胃肠道平滑肌细胞大量合成，对肥大细胞的发育与存活有着至关重要的作用。C-KIT受体是C-KIT原癌基因的产物，属于酪氨酸激酶受体蛋白家族，表达于造血细胞，肥大细胞和Cajal间质细胞表面。SCF/C-KIT信号系统构成经典的配体/酪氨酸激酶受体信号系统，介导平滑肌收缩、内脏感知、炎症，为肠神经系统和肥大细胞提供营养支持，SCF/C-KIT的这些生物学功能正与IBS-D的病理生理学基础密切相关。SCF可以促进肥大细胞增生并致肥大细胞脱颗粒释放组胺、5-HT、白三烯、前列腺素等活性物质，其中的相关因子不仅会与传入神经与肠神经上相应的受体相结合而激活内脏感觉神经，而且会增加肠上皮渗透性，损坏肠道黏膜屏障而影响内脏感知。SCF还通过SP等受体的磷酸化，促进疼痛的传导，增加调节胃肠道平滑肌收缩的Cajal间质细胞内在起搏器节律。研究表明IBS-D临床患者结肠黏膜SCF、5-HT表达显著增加，内脏高敏模型大鼠结肠SCF、C-KIT蛋白及基因表达也明显增高。当用C-KIT阻滞剂甲磺酸伊马替尼阻断SCF/C-KIT信号，大鼠的内脏高敏被显著抑制，说明SCF/C-KIT信号系统在IBS内脏高敏感发病机制中极有可能发挥着重要作用。

研究结果也显示，与正常组相比模型组大鼠结肠SCF、C-KIT的蛋白与基因表达显著升高，说明SCF/C-KIT信号在母婴分离复合醋酸灌肠模型大鼠中过度激活，而SCF/C-KIT的过度激活可导致其介导平滑肌收缩，内脏感知的生物学功能亢进。肥大细胞(mast cell，MC)广泛分布于肠道黏膜固有层和黏膜下层、肠道上皮内、肌层及浆膜层,是肠道的免疫细胞与抗原感受器，涉及肠道免疫调节以及脑肠轴之间的信息传递。压力应激、食物过敏等多种原因引起的MC活化脱颗粒，释放的活性介质如5-HT等作用于邻近的肠上皮细胞，神经元细胞，平滑肌细胞，可致IBS内脏高敏感、肠道动力异常、肠上皮通透性增高、肠道持续低度炎症的发生。据临床研究报道，IBS-D患者在结肠、回盲部、回肠末端MC的显著表达高于健康志愿者，并且与感觉痛阈值呈负相关(MC含量越高，感觉痛阈值越低，说明IBS-D肠道高敏感性增加)。在临床上用酮替芬干预IBS-D可通过减少患者肠道黏膜MC表达并降低其活性缓解患者症状，改善内脏高敏感。鉴于SCF涉及MC存活增殖、促脱颗粒作用，以及MC脱颗粒后导致可IBS-D肠道高敏感、肠上皮渗透性增加、肠道动力亢进、肠道低炎症等发病机制，本研究也探索了MC在正常组与模型组大鼠结肠的表达情况。MC苯甲胺蓝染色结果显示，模型组大鼠结肠MC的表达明显高于正常组大鼠，模型组大鼠的感觉痛阈值下降，内脏高敏性增加P物质(substance P，SP)一种神经肽，属于速激肽家族并且是肠道中的兴奋性神经递质,主要分布在神经组织，包括大脑，脊髓以及肠神经系统。SP在内脏高敏与伤害性感知中的重要作用已经被证实，SP通过感觉神经刺激并触发伤害性疼痛感，增强肠道的动力。在中枢神经系统中，内脏感觉从肠道传入神经，经过脊髓传递至感知疼痛特征的大脑。5-HT1A主要位于中枢神经系统、肠道神经系统、肌间神经丛和黏膜下神经丛,能够抑制兴奋性突触后电位,抑制肠道平滑肌收缩,另外还可抑制肥大细胞脱颗粒和活性物质的释放。5-HT1A与位于初级神经末梢上5-HT1A受体结合后增强初级神经末梢发送冲动，或抑制脊髓下行感觉传递通路,从而导致内脏高敏。鉴于HTR是CAJT网络药理学预测的靶点之一，MC脱颗粒后释放5-HT，5-HT与神经元上相应的受体(HTR)结合后把伤害信息传递至第二级神经元从而引发痛觉。SCF可通过SP受体的磷酸化激活TRPV1介导疼痛。于是本研究也研究了SP与5-HTR1A在大鼠IBS-D的作用。结果显示，模型组大鼠结肠SP、5-HTR1A的表达明显高于正常组。提示模型组大鼠内脏高敏很可能是过表达的SP激活TRPV1，5-HTR1A在脑肠之间传递伤害信息使大鼠肠道感觉痛阈值下降致内脏高敏。PKC是一种参与多种信号通路的多功能丝氨酸和苏氨酸激酶，它广泛分布于多种组织、器官和细胞主要通过磷酸化各种各样的底物，调节细胞的分裂、增殖、凋亡、离子通道及细胞分泌等生理过程。外周感觉神经元上的PKC，尤其是PKC在调节痛觉过敏中发挥重要作用。研究显示PKCε激活剂可增强TRPV1对辣椒素及温度的敏感性，而应用PKCε激活剂在TRPV1基因敲除的小鼠时，小鼠则不会出现痛觉过敏，并且PKC阻滞剂可明显缓解类胰蛋白酶引起的内脏高敏感性。SCF与C-KIT特异性结合后可激活各种不同通路，如JAK/STAT、PI3K、Ras/Erk等通路，作用于不同组织细胞，产生各种生物学效应，其中PI3K通路的下游因子PKC的过度活化可磷酸化各种底物而发挥作用。而PKC被普遍认为是磷酸化TRPV1诱导内脏高敏的主要途径。TRPV1具有PKCε介导TRPV1磷酸化位点，PKCε通过磷酸化TRPV1降低离子通道开放，阈值，内脏高敏性增加。因此PKC是SCF、C-KIT信号系统连接TRPV1的关键因子，于是本课题接下来研究了PKC在正常组与模型组大鼠结肠中的表达差异。结果显示，模型组大鼠结肠PKC的表达明显高于正常组大鼠，提示PKC在模型组大鼠激活，其可磷酸化TRPV1介导疼痛而致大鼠内脏高敏。

TRPV1是内脏高敏中最具代表和研究最多的伤害感受器，是介导疼痛的非选择性阳离子通道，主要负责转运钙离子，表达于初级传入神经与伤害感觉神经元上，能被许多物理化学刺激物及炎症介质激活或致敏。TRPV1激活后，离子通道开放，钙离子和钠离子从细胞外进入细胞内，神经末梢去极化，释放神经肽如SP、5-HT把伤害信息传递至第二级神经元从而引发痛觉，产生灼烧样的疼痛感。研究表明IBS-D临床患者结肠黏膜TRPV1表达显著增加，内脏高敏感性大鼠结肠TRPV1蛋白及基因表达也明显增高。而TRPV1敲除大鼠则难以形成内脏高敏感性。与文献报道一致，本课题研究结果表明，模型组大鼠结肠TRPV1的表达明显高于正常组，提示模型组大鼠TRPV1激活，大鼠肠道痛阈值降低，内脏高敏感性增加。

研究表明，防风、白术、白芍、陈皮合用能显著降低避水应激内脏高敏大鼠背根神经节的TRPV1蛋白和TRPV1mRNA的表达，还能减少大鼠血浆5-HT、SP的表达，下调结肠肥大细胞的数量,从而明显改善内脏高敏。党参、茯苓、白术、炙甘草可通过减少TRPV1蛋白和TRPV1mRNA的表达水平降低脾虚型功能性消化不良内脏高敏感性。与文献报道一致，CAJT的研究结果也显示，本发明中药组合物颗粒中剂量、本发明中药组合物颗粒高剂量显著下调SCF、C-KIT、PKC、TRPV1、SP、5-HTR1A蛋白和基因以及MC的表达，说明本发明中药组合物颗粒中剂量、本发明中药组合物颗粒高剂量能抑制SCF/C-KIT信号系统减少TRPV1的表达从而提高大鼠的肠道感觉痛阈值改善大鼠的内脏高敏。CAJT低剂量组大鼠结肠C-KIT、TRPV1的表达有所下降，但与模型组相比差异无统计学意义，可能因其用药剂量低于临床用量，血药浓度不足而致其抑制SCF/C-KIT信号系统效果不佳。

四、本发明中药组合物治疗肝郁脾虚型IBS-D临床疗效研究

1.研究方法

通过单中心、随机、对照、双盲试验，以2016年12月至2018年10月期间广州中医药大学第一附属医院住院部、门诊和社会公开招募的肝郁脾虚IBS-D患者为研究对象。研究纳入了符合IBS-D诊断标准和中医肝郁脾虚证诊断标准的130名患者，并签署了知情同意书。将130例患者随机分为两组，治疗组65例，对照组65例。治疗组和对照组分别口服CAJT颗粒剂和安慰剂共12周，1袋(8.1g)/次，2次/日，饭后半小时，温水送，1周的洗脱期，疗程共12周，患者每4周复诊，填写CRF，并收集大便样本。观察治疗前后两组受试者的评分，评价临床疗效。

安慰剂：以麦芽糊精、淀粉、糊精、苦丁茶提取物、焦糖色素、日落黄色素和1％CAJT颗粒剂为原料，适当的工艺过程制造而来，需和真实药物在物理性状上完全一致且无积极治疗作用，安慰剂的外观、规格同CAJT颗粒剂。

2.疗效评价：

(1)主要结局指标：IBS症状严重程度评分(Irritable bowels syndromessymptom severity score IBS-SSS)；

方法：从腹痛的程度，腹痛的频率，腹胀的程度，排便的满意度和对生活的影响共5个项目分析。转换后，每个项目的得分范围为0-100分，总得分为500分，由患者填写。患者在填写过程中存在疑问可向接诊医生提出。

疗效标准：

①IBS-SSS量表总分的计算方法：IBS-SSS量表总分＝腹痛程度评分+腹痛频率评分+腹胀程度评分+排便满意度评分+对生命点的影响。(腹痛频率积分的计算方法：腹痛频率积分＝实际腹痛天数/14×100)。

②IBS-SSS量表的治疗改善率

根据原始文献，小于75的分数被认为是在缓解期，75到175分是轻度的，在175-300之间为中度(Moderate)，在300分以上为重度(Severe)；有效率＝治愈率+明显改善率+改善率，参见表2。

表2 IBS-SSS量表的治疗疗效评定方法

序号	疗效	标准(末次治疗后)
			1	痊愈	积分＜75分
2	显效	改善2个级别
			3	有效	改善1个级别
4	无效	无改善或变差

(2)次要指标

①Bristol粪便性状量表分型(Bristol Stool Form Scale，BSFS)

IBS-D患者的大便性状由BSFS进行评估。根据粪便的形状和连续性，鳞片将粪便性状分为7种不同类型：

1型，即独立分散的干粪球，如同硬果(很难排出)；

2型，即干硬块状，似香肠形状，但上面满是团块；

3型，即硬条状大便，似香肠，但表面有裂纹；

4型，即成条软便，似香肠或蛇形，光滑、柔软；

5型，即松散软便，松软的小团块，边界清晰(容易排出)；

6型，即糊状便，蓬松片糊状，边缘稀烂，糊状大便；

7型，即水样便，水样，无固体成分，完全液态。

粪便性状分类越高，粪便特征越软，排出越容易；分类越低，粪便越硬，排出的可能性越小。

②IBS生活质量量表(Irritable bowel syndrome-quality of lifequestionnaire IBS-QOL)评价

IBS-QOL由34个评价条目构成，由患者自行填写。

IBS-QOL疗效判定表：根据IBS-QOL手册中的说明，IBS-QOL功效的比较涉及量表总分的变化和量表的积分变化，见表3。

表3IBS-QOL量表的条目及维度

序号	疗效	英文对照	条目
				1	焦虑不安	Dysphoria	1,6,7,9,10,13,16,30
2	行为障碍	Interference with activity	3,18,19,22,27,29,31
				3	躯体意念	Body image	5,21,25,26
4	健康担忧	Health worry	4,15,32
				5	进食逃避	Food avoidance	11,23,28
6	社会功能	Social reaction	2,14,17,34
				7	性行为	Sexual	12,20
8	人际关系	Relationship	8,24,33

IBS-QOL量表中每个项目的得分是反向积分，得分越高，生活质量越低。

③医院焦虑与抑郁量表(Hospitalanxiety and depressionseale，HAD)评价

民政事务总共有14项，分为焦虑量表(HADa)(7项：条目l、3、5、7、9、11、13)与抑郁子量表(HADd)(7个条目：条目2、4、6、8、10、12、14)，由患者自行填写。

HAD评分标准：HAD评分标准：条目1，3，5，6，8，10，11，13，14是反向积分，并且在调整之后，分别计算HADa和HADd的积分。焦虑和抑郁的判断是基于“行为医学量表手册”(电子版，中国医学电子音像出版社，ISBN：9787900191-38)提供的标准分为8分，8分以下是正常的，8分以上是可疑的。

3.治疗前后疗效比较

(1)主要结局指标

采用意向性分析(ITT)和符合方案(PP)分析两组间主要结局指标肠易激综合征严重程度评定量表(IBS-SSS)有效率的差异。当两者结果不一致时，应首选ITT。

ITT中IBS-SSS改善情况，根据Ridit检验，两组比较差异有统计学意义(P＝0.001)。治疗组总有效率为80％；对照组总有效率为40％。在PP中，根据Ridit检验，两组间差异有统计学意义(P＝0.001)。治疗组总有效率为88.1％；对照组总有效率为45.6％。

表4肠易激综合征严重程度评定量表有效率(％)

本研究有116例患者纳入研究，本发明中药组合物颗粒治疗组有59例，安慰剂对照组57例。两组患者治疗前IBS-SSS总分符合正态分布，使用两组独立样本t检验，两组患者的IBS-SSS总分无统计学差异(t＝0.214，P＝0.831>0.05)；两组患者治疗后IBS-SSS总分符合正态分布，使用两组独立样本t检验，两组患者的IBS-SSS总分差异有统计学意义(t＝7.398，P<0.05)；各组治疗前后总分比较用配对t检验，差异有统计学意义(t值分别为5.936和15.167，P值均<0.05)，见表5。

表5肠易激综合征严重程度评定量表各组总分

注：*表示与对照组比较，P<0.05；△表示各组治疗前后比较，P<0.05。

(2)次要结局指标

①Bristol大便评分量表

本研究有116例患者纳入研究，本发明中药组合物颗粒治疗组有59例，安慰剂对照组57例。两组患者治疗前BSFS评分符合正态分布，使用两组独立样本t检验，两组患者的BSFS评分无统计学差异(t＝0.324，P＝0.932>0.05)；两组患者治疗后BSFS评分符合正态分布，使用两组独立样本t检验，两组患者的BSFS评分差异有统计学意义(t＝8.514，P＝0.01<0.05)；对照组治疗前后总分比较用配对t检验，差异无统计学意义(t＝0.461，P＝0.69>0.05)，本发明中药组合物组治疗前后总分比较用配对t检验，差异有统计学意义(t＝13.65，P＝0.01<0.05)，见下表6。

表6Bristol大便评分量表评分结果

注：*表示与对照组比较，P<0.05；△表示各组治疗前后比较，P<0.05。

②IBS生活质量量表(IBS-QOL)评分比较

本研究有116例患者纳入研究，本发明中药组合物颗粒治疗组有59例，安慰剂对照组57例。两组患者治疗前IBS-QOL总分符合正态分布，使用两独立样本t检验，两组患者的IBS-QOL总分差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；本发明中药组合物组治疗前后总分比较用配对t检验，治疗组前后IBS-QOL总分差异有统计学意义(t＝2.961，P＝0.006<0.05)，对照组治疗前后IBS-QOL评分比较用配对t检验，治疗组前后IBS-QOL总分差异无统计学意义(t＝1.635，P＝0.114>.05)，见下表7。

表7IBS生活质量量表(IBS-QOL)评分比较

注：△表示各组治疗前后比较，P<0.05。

③医院焦虑与抑郁量表(HAD)评分比较

本研究有116例患者纳入研究，本发明中药组合物颗粒治疗组有59例，安慰剂对照组57例。两组患者治疗前和治疗后焦虑子量表评分符合正态分布，使用两独立样本t检验，两组患者治疗前焦虑子量表评分差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；两组患者治疗后焦虑子量表评分差异无统计学意义(P>0.05)；两组患者治疗前和治疗后焦虑量表评分比较用配对t检验，均无统计学差异(P>0.05)，见表8中HADa。

两组患者治疗前和治疗后抑郁子量表评分符合正态分布，使用两独立样本t检验，两组患者治疗前抑郁子量表评分差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性；两组患者治疗后抑郁量表评分无显著性差异(P>0.05)；两组患者治疗前和治疗后抑郁量表评分比较用配对t检验，两组治疗前后抑郁子量表评分差异均无统计学意义(P>0.05)，见下表8中HADd。

表8医院焦虑与抑郁(HAD)量表评分比较

4.结论：

目前，IBS的病因和发病机制尚不十分清楚。以腹痛或腹部不适伴排便习惯改变为主要特征，现代医学治疗IBS主要以对症处理为主，缺乏有效根治手段。故本研究运用本发明中药组合物颗粒进行干预，观察治疗后患者各个量表和症状条目评分的改善，探讨本发明中药组合物对肝郁脾虚IBS-D的有效性和安全性。

(1)主要结局指标讨论

IBS-SSS用于评价IBS的严重程度。本发明中药组合物组和安慰剂对照组患者治疗前IBS-SSS总分比较无显著性差异，具有可比性。根据各组治疗前后IBS-SSS总分比较，各组治疗前后总分比较有显著性差异，提示本发明中药组合物颗粒和安慰剂均能降低IBS-SSS总分，症状较治疗前改善。两组患者治疗后IBS-SSS总分的比较差异有统计学意义，提示本发明中药组合物降低IBS-SSS总分的功效优于安慰剂，能有效改善IBS-D患者症状。

本发明中药组合物治疗肝郁脾虚IBS-D患者的治愈率为27.7％，有效率为80％，而安慰剂治愈率为6.2％，有效率为40％，差异有统计学意义。说明本发明中药组合物对肝郁脾虚IBS-D治疗具有显著性疗效。

IBS-D以腹痛或腹部不适伴排便习惯改变为特征。泄泻病肝郁脾虚证的典型症状为腹痛欲泻，便意急迫，泻后痛减。IBS-SSS条目主要包括腹痛、腹胀、排便习惯满意度和疾病对生活的影响程度，因此用于评价IBS-D的症状严重程度最为适合。

IBS-D患者辨证以肝郁脾虚证最为多见，肝主疏泄、调畅全身气机，肝郁则疏泄失职、条畅失司，导致气机郁滞，气滞则腹部胀满，气滞甚者因不通而痛；肝为将军之官，其性最急，喜条达而恶抑郁，肝郁则肝气横逆克脾、上逆犯胃则见腹痛，下迫大肠则腹痛欲泻且便意急迫，泻后气机得以暂时疏通而腹痛减或消失。治当柔肝缓急、疏肝健脾，本发明中药组合物方中白芍酸苦、微寒，养肝体而缓肝急，于土中泄木，《内经》云“肝苦急，急食甘以缓之”，配炙甘草则为缓急止痛之祖方芍药甘草汤，芍药甘草酸甘化阴以养肝体，符合肝的生理特性“体阴用阳”。《素问·藏气法时论》云“肝欲散，急食辛以散之，以辛补之，以酸泻之。”故用味辛之防风疏肝气以助肝用，辛温之木香、陈皮疏肝行气以消胀、止痛。本病病机为肝郁脾虚，故在治肝的基础上着重健脾，以太子参、白术、茯苓、炙甘草益气健脾以固本，共奏疏肝健脾之功效。

(2)次要结局指标

①Bristol大便评分量表

两组患者治疗前Bristol大便评分比较无显著性差异，具有可比性；两组患者治疗后Bristol大便评分比较有显著性差异；本发明中药组合物组治疗前后BSFS评分比较有统计学差异，对照组无统计学差异。说明本发明中药组合物颗粒能有效改善IBS-D患者的大便性状。

IBS-D的主要病因病机为肝郁脾虚，脾虚则运化失常而水湿停聚，湿蕴久化热，湿热下注大肠，则大肠传导失司，故见大便稀烂、大便次数增多。治疗当以疏肝健脾、清利湿热为法，本发明中药组合物方中太子参补气健脾，白术健脾燥湿，茯苓利水渗湿以健脾，陈皮理气化湿，黄连苦寒燥湿清热，共用则脾健而水湿除，水湿除则大便自实，虽无止泻之品，却能奏止泻之功，符合《内经》“治病必求于本”之宗旨。

②IBS生活质量量表(IBS-QOL)评分比较

两组患者治疗前IBS-QOL总分无显著性差异，具有可比性；本发明中药组合物组治疗前后IBS-QOL总分有显著性差异，对照组治疗前后IBS-QOL总分无显著性差异。说明本发明中药组合物对IBS-D患者生存质量有一定的改善作用。

IBS为一种慢性肠道功能性疾病，易反复发作，虽然不像器质性病变对机体组织器官造成很大损害，但会严重影响患者生活质量，因此如何更有效地治疗IBS显得至关重要。本发明中药组合物可以改善IBS-D患者生活质量，能减轻患者痛苦。

③医院焦虑与抑郁量表(HAD)评分比较

两组患者治疗前和治疗后焦虑子量表评分比较无显著性差异，具有可比性；两组患者治疗后焦虑子量表评分比较有无显著性差异；两组患者治疗前后焦虑子量表评分比较比较无显著性差异，对照组治疗前后焦虑子量表评分比较无显著性差异。说明尚不能认为本发明中药组合物颗粒对IBS-D患者的焦虑状况有改善作用。

两组患者治疗前和治疗后抑郁子量表评分比较无显著性差异，具有可比性；两组患者治疗后抑郁子量表评分比较无显著性差异；两组患者治疗前后抑郁子量表评分比较无显著性差异。说明尚不能认为本发明中药组合物颗粒对IBS-D患者的抑郁状况有改善作用。所以，本研究显示本发明中药组合物颗粒通过疏肝健脾、清利湿热的功效可以调节肝郁客脾对肝郁脾虚型IBS-D发病机制的影响，显著改善肝郁脾虚IBS-D的症状严重程度和大便性状，从而提高IBS-D患者的生存质量。

五、本发明中药组合物干预对肝郁脾虚IBS-D患者肠道菌群的影响

1.实验方法

通过单中心、随机、对照、双盲试验，以2016年12月至2018年10月期间广州中医药大学第一附属医院住院部、门诊和社会公开招募的肝郁脾虚IBS-D患者为研究对象。研究纳入了符合IBS-D诊断标准和中医肝郁脾虚证诊断标准的130名患者，并签署了知情同意书。将130例患者随机分为两组，治疗组65例，对照组65例(即临床疗效研究中的患者)。治疗组和对照组分别口服CAJT颗粒剂和安慰剂共12周。

所有纳入研究的患者分别在治疗前和治疗结束后各留一次粪便样本，对粪便样本进行菌群测序，包括OUT及其丰度分析：OUT统计、OUT Venn图分析、OUT PCA分析、OUT Rank曲线；物种及其丰度分析：物种注释分析、物种热图分析；样品多样性分析：Alpha多样性和Beta多样性分析；样品组间显著性差异分析：Wilcox分析、LEFSE分析。

2.实验结果：

(1)OUT及其丰度分析：通过绘制样品的OTU Venn图分析、OTU PCA分析、OTU PLS-DA分析、OTU Rank曲线，发现对照组治疗前、后和治疗组治疗前患者肠道微生物群落的物种丰富程度与均匀度与健康志愿者有显著性差异，健康对照组样品中物种更丰富、更均匀，而对照组治疗前、后和治疗组治疗前患者样品中物种组成的丰富程度较低、且均匀度也较低。经CAJT颗粒治疗12周后，治疗组的样品OTU丰度和均匀度较治疗前增加，且OTU丰度分布离健康组距离更近。

(2)样品多样性分析：对照组治疗前、后和治疗组治疗前的Alpha多样性小于健康组，治疗组治疗后Alpha多样性大于治疗组治疗前；对照组治疗前、后和治疗组治疗前组间Beta多样性差异较小，与健康组差异较大；治疗组治疗后与治疗前Beta多样性差异较大。

(3)物种注释分析：样品门分类水平，对照组治疗前、后和治疗组治疗前肠道菌群改变主要集中在拟杆菌门、厚壁菌门、丙型变形菌门，CAJT治疗后拟杆菌门和丙型变形菌门丰度水平降低且趋于均匀；样品属分类水平，对照组治疗前、后和治疗组治疗前肠道菌群改变主要集中在梭菌属、埃希氏杆菌属、粪杆菌属、乳杆菌属。CAJT治疗后拟杆菌属丰度水平升高且趋于均匀。

(4)样品组间显著性差异分析：①门分类水平比较，CAJT治疗后，厚壁菌门和放线菌门丰度均增加，差异有统计学意义；对照组治疗前后门分类水平无统计学差异。②属分类水平比较，CAJT治疗前后，瘤胃球菌属水平增加，差异有统计学意义。对照组治疗前后属分类水平无统计学差异。③LEFSE分析：CAJT颗粒治疗前有显著性差异的菌群有拟杆菌门、拟杆菌纲、拟杆菌目、肠杆菌科、肠杆菌目；CAJT治疗后有显著性差异的菌群有放线菌门、放线菌纲、双歧杆菌目、双歧杆菌科，厚壁菌门、梭菌纲、梭菌目、梭菌科、乳杆菌科、瘤胃菌科。对照组治疗前后比较未发现有显著性差异的菌群。

3.结论

①说明IBS-D患者肠道菌群结构发生改变，菌群的数量及种类较健康人下降，安慰剂对菌群无显著疗效，CAJT颗粒对IBS-D患者肠道菌群失调有调节作用，可增加肠道菌群的数量和种类。

②CAJT颗粒能调节IBS-D患者肠道菌群的多样性及稳定性。

③CAJT颗粒治疗后，肠道菌群各分类水平增加情况如下：门分类水平，厚壁菌门和放线菌门、放线菌门；纲分类水平，梭菌纲、放线菌纲、Blautia；目分类水平，梭菌目、双歧杆菌目；科分类水平，瘤胃菌科、双歧杆菌科、梭菌科、乳杆菌科；属分类水平，瘤胃球菌属、双歧杆菌属、梭菌属、粪球菌属、放线菌属、Butyricicoccus、Dorea、Anaerostipes。

综上，以上研究数据说明本发明中药组合物治疗肝郁脾虚IBS-D患者的治愈率为27.7％，有效率为80％，而安慰剂治愈率为6.2％，有效率为40％，差异有统计学意义。说明本发明中药组合物对肝郁脾虚IBS-D治疗具有显著性疗效，可显著降低Bristol大便评分，能改善IBS-D患者的大便性状；本发明中药组合物可提高IBS-D患者生存质量。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：太子参15～25份、白术5～15份、茯苓15～25份、炙甘草3～10份、防风5～15份、白芍10～20份、蒸陈皮3～10份、黄连片3～10份和木香5～15份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：太子参20份、白术10份、茯苓20份、炙甘草6份、防风10份、白芍15份、蒸陈皮5份、黄连片5份和木香10份。

3.如权利要求1所述的中药组合物在制备镇痛药物、止泻药物或治疗腹泻型肠易激综合征药物中的应用。

4.一种药物，其特征在于，所述药物包括如权利要求1所述的中药组合物，具有镇痛、止泻或治疗腹泻型肠易激综合征的作用。

5.如权利要求4所述的药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。

6.如权利要求4所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型包括颗粒剂。

7.如权利要求6所述颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)原药料的前处理：按处方比例，称取处方中的药材，清洗后粉碎得到饮片；

(2)原药料的提取与浓缩：将所述步骤(1)制得的饮片加水煎煮2次，然后将水提液合并，经滤网过滤，并进行减压浓缩，制得相对密度为1.07～1.09g/mL的药膏，再将药膏过筛得颗粒药膏；

(3)喷雾干燥：取步骤(2)所述的颗粒药膏于配料罐中，加热煮沸，喷雾干燥，然后收集喷干粉；

(4)粉碎与混合：取步骤(3)所述的喷干粉，用高速粉碎机粉碎过振荡筛，置于固定料斗混合机中混合，制得中药配方颗粒提取物；

(5)制粒与分装：取步骤(4)所述的中药配方颗粒提取物，用干式造粒机干压制粒。

8.如权利要求1所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，所述方法为液相色谱-质谱联用法。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱联用法中的液相色谱检测的具体方法为：色谱柱为Phenomenex Luna C18(250*4.6mm,5μm)；0-60min，以乙腈和0.1％甲酸水溶液为流动相；柱温25℃；流速：1mL/min；检测波长：254nm。

10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-质谱联用法中的质谱条件为：扫描模式为正离子模式；离子源温度：550℃；离子源电压：5500V；MS扫描范围：50-1500Da；MS/MS扫描范围：50-1500Da；MS诱导碰撞电压：10V；MS/MS诱导碰撞电压：35V。

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