CN110951805B - 一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法 - Google Patents

一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及食品工程技术领域，尤其涉及一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法。以干坛紫菜为原料，采用水提醇沉法提取紫菜多糖，利用特异性的紫菜多糖酶降解紫菜多糖制备低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖。本方法具有得率高、绿色环保、成本低等优点，采用紫菜多糖酶酶解代替传统的物理化学方法制备低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖，使不易被人体吸收利用的高粘度多糖降解成富含生理活性的低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖，实现低值紫菜的高值化利用。

Description

一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法
技术领域
本发明涉及食品工程技术领域，尤其涉及一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法。
背景技术
紫菜属于红藻门(Rhodophyta)，红毛菜科(Banjiacease)，紫菜属(Pyropia)，具有可食用性且营养价值高，是我国大规模养殖的重要经济红藻之一。紫菜多糖存在于紫菜细胞壁及细胞间隙中，是紫菜的主要多糖组分，含量约占紫菜干重的40％。紫菜多糖结构由(1→4)-6-OSO3-α-L-吡喃半乳糖(L6S)与(1→3)-β-D-吡喃半乳糖(G)交替组成。紫菜多糖被证实具有抗凝血、降血脂、抗氧化等生理调节功能。但多糖具有分子量大、粘度高且溶解性较低的缺点，导致其生物利用率低。
低分子量多糖及寡糖是多糖利用的一种重要方式。研究人员证实超声波降解紫菜多糖得到的寡糖对于SGC-7901肿瘤细胞具有抑制作用且抑制效果较多糖更为明显，且不同分子量的紫菜多糖表现出良好的清除超氧自由基和羟自由基的活性。此外，抗坏血酸和过氧化氢降解紫菜多糖得到的紫菜寡糖被证实具有还原能力且效果优于多糖。因此，低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖是潜在的功能食品功能因子，是实现紫菜高值化开发及利用的一种重要途径。
低分子量多糖及寡糖的经典制备工艺多采用化学法或(及)物理法，此类方法普适性强但存在一定缺陷，如：反应条件极端、能耗高、过程规律性差难以控制、产生有害物质污染环境等。酶是实现多糖降解的重要工具。酶法降解具有特异性强、反应条件温和、过程可控、绿色高效等优点，且降解时不破坏底物的硫酸根基团结构。紫菜多糖酶是一类可特异性降解紫菜多糖的水解酶，其断裂糖链中的β-1,4糖苷键，生成低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖。因此，利用紫菜多糖酶建立低分子量紫菜多糖及寡糖的制备方法对于紫菜多糖及紫菜资源的利用具有重要的推动作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是低分子量多糖及寡糖的经典制备工艺多采用化学法或(及) 物理法，此类方法普适性强但存在一定缺陷，如：反应条件极端、能耗高、过程规律性差难以控制、产生有害物质污染环境等。
为解决上述问题，本发明提供一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法。以干坛紫菜为原料，采用水提醇沉法提取紫菜多糖，利用特异性的紫菜多糖酶降解紫菜多糖制备低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖。
为达到上述目的，本发明具体通过以下技术方案实现：一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法，以干坛紫菜为原料，采用水提醇沉法提取紫菜多糖，利用特异性的紫菜多糖酶降解紫菜多糖制备低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖。
进一步的，紫菜多糖的提取步骤如下：以干坛紫菜为原料提取紫菜多糖，采用水提醇法提取，工艺条件：料液比1:40(w/v)、水提温度100℃、时间3h；在此条件下紫菜多糖的提取率为38.3％。
进一步的，酶解步骤如下：将100mg紫菜多糖以pH7.0的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配制，底物浓度为2mg/mL；加入紫菜多糖酶酶液，在25℃反应24h，于100℃金属浴灭活5min，离心获得上清即为紫菜寡糖溶液。
进一步的，所述紫菜多糖酶为紫菜多糖酶Por16B_Wf，蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。
SEQ ID NO.1：
QQSPTFIDGEDPKPDNTKWKLVKNMSDEFNGTKVDEEKWQISGQGWIGRAPGLFLAD NVKVTNGSLQITTTMLPKPIIKNNKEFTHGGGYVGSRNGMTYGYYECEMKANKTFMSSTF WLINEGKNIKGCDKRTTELDIQECVGQITNDAEWMKNFDQAMNSNTHSRNIPEGCNYIKG SEKSGATIGAKVYNDFHVYGVWWKSKDEILFFLDGKFQSKVKPPSDFDIEMYLRMVVETY DWNPVPADGGMAYSKEDRTTTYNWVRSWTLVNPKK
该酶与其他已知酶的序列相似度最高为79％(最相近序列为Zobelliagalactanivorans所产的PorB)。利用MEGA6将Por16B_Wf与CAZy数据库中的GH16家族紫菜多糖酶序列构建系统发育树，结果如图6所示：可以看出紫菜多糖酶Por16B_Wf处于GH16家族紫菜多糖酶的系统发育树中。因此，Por16B_Wf是紫菜多糖酶GH16家族的一个新成员。将紫菜多糖酶Por16B_Wf氨基酸序列进行Blast分析并利用ClustalX2将Por16B_Wf与GH16家族已报道的4条紫菜多糖酶序列进行多序列比对，结果如图7所示：这4个紫菜多糖酶分别是来源于Bacteroidesplebeius DSM 17135的BpGH16B(Genbank EDY95423.1)，来源于Zobelliagalactanivorans DsijT的PorB(Genbank CAZ95074.1)，来源于Zobelliagalactanivorans DsijT的 PorA(Genbank CAZ96750.1)和来源于Wenyingzhuangiafucanilytica CZ1127T的Por16A_Wf (GenbankWP_068825731.1)，由图7可知，Por16B_Wf除在关键催化位点严格保守外，在其他位点均显示不同程度的特异性，表明Por16B_Wf是GH16家族中一种新颖的紫菜多糖酶。
上述紫菜多糖酶Por16B_Wf对于紫菜多糖具有高活力，其最适反应温度为40℃，其最适反应pH值为7.0，且在pH 5.0-10.0的pH值范围内基本保持稳定；该酶具有良好的贮存稳定性，在4℃下可至少稳定贮存3个月，在25℃的温度范围内放置24h后仍能保持90％的初始活力；酶动力学常数Km为2.73mg/mL，Kcat为38.20s-1，Km/Kcat为14μM-1s-1，Vmax为66.23U/mg。以上可知，相较于其他紫菜多糖酶，本发明的紫菜多糖酶Por16B_Wf酶学性质优良、稳定性好、容易贮藏，同时对于底物结合的特异性强、酶解速率快，是用于酶解紫菜多糖理想的酶。
一种编码上述紫菜多糖酶Por16B_Wf的基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2及可翻译出SEQ ID NO.1的所有基因。
SEQ ID NO.2：
CAACAGTCACCAACTTTTATTGATGGAGAAGACCCAAAACCAGACAATACAAAAT GGAAATTGGTTAAAAATATGTCCGATGAGTTTAATGGTACAAAGGTAGATGAAGAAAAA TGGCAAATATCTGGTCAAGGATGGATCGGTAGGGCGCCAGGATTATTTCTTGCTGATAAT GTAAAAGTTACAAATGGAAGTTTGCAAATAACCACAACCATGTTGCCAAAACCAATAAT AAAAAATAATAAGGAGTTTACGCATGGAGGTGGTTATGTTGGATCTAGAAACGGGATGACTTATGGTTATTATGAGTGTGAAATGAAGGCTAATAAAACATTTATGTCTTCTACTTTTTG GTTGATAAATGAAGGAAAAAACATAAAAGGCTGTGATAAAAGAACCACAGAATTAGAC ATACAAGAATGCGTTGGACAAATTACAAATGATGCTGAGTGGATGAAAAATTTTGACCA AGCCATGAATTCCAATACACATAGTCGAAATATTCCTGAAGGTTGTAATTATATTAAAGGT TCAGAAAAATCAGGAGCCACTATTGGAGCAAAGGTATATAACGATTTTCACGTGTATGGTGTTTGGTGGAAGTCTAAAGATGAAATACTTTTCTTTTTAGATGGTAAATTTCAATCGAAA GTAAAACCACCATCCGATTTTGATATTGAGATGTATTTAAGAATGGTTGTTGAAACTTATG ATTGGAATCCAGTTCCAGCTGATGGTGGAATGGCCTACTCTAAAGAAGATAGAACCACC ACTTATAATTGGGTTAGGTCTTGGACATTGGTAAATCCTAAAAAATAA
进一步的，紫菜多糖酶Por16B_Wf的制备方法如下：以菌株Wenyingzhuangiafucanilytica 基因组DNA为模板，克隆紫菜多糖酶Por16B_Wf基因全长819bp，构建重组质粒 pET28a-por16B；将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中，经过卡那霉素抗性筛选得到转化子，接种至LB液体培养基中于37℃培养12h，再进行传代培养，培养约3h至 OD600≈0.4，添加异丙基硫代半乳糖苷诱导，添加量为0.5mM，继续培养12h得到诱导后的菌体；利用超声破碎仪对诱导后的菌体进行破碎，离心收集上清液即为粗酶液。
进一步的，所述紫菜多糖酶Por16B_Wf的添加量、反应时间与反应产物分子量呈线性关系，根据目标产物的分子量控制。
紫菜多糖降解产物的液相色谱分析：将上述制备的酶解产物紫菜寡糖溶液用0.22μm水系微孔滤膜过滤。采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)测定酶解产物的寡糖轮廓，分析柱采用Superdex Peptide 10/300GL，检测器为示差检测器，以50mM甲酸铵为流动相，流速为0.5mL/min，柱温30℃。酶解分析结果表明，紫菜多糖酶 Por16B_Wf为内切酶，在反应过程中生成一系列不同聚合度的寡糖，在加酶量超过5U后产物轮廓基本保持不变即获得终产物组成。
紫菜多糖降解产物的液相色谱-质谱联用仪分析：降解终产物冻干后以25％乙腈(含5 mmol/L甲酸铵)复溶，利用高效液相色谱-电喷雾质谱串联技术(LC-MS)对产物进行分析。色谱柱使用Superdex 30increase 10/300GL，质谱分析流动相为25％乙腈(含5mmol/L甲酸铵)，离子源为负离子模式，源温为300℃，毛细管电压为4000V，分子量扫描范围为100～2000 Da。质谱分析结果表明，降解产物为二糖、四糖及六糖，其中二糖为主要产物。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明以紫菜为原料，采用水提醇沉法提取紫菜多糖，具有得率高、绿色环保、成本低等优点；采用紫菜多糖酶酶解代替传统的物理化学方法制备低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖，使不易被人体吸收利用的高粘度多糖降解成富含生理活性的低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖，实现低值紫菜的高值化利用。
(2)本发明提供了一种紫菜多糖酶，该酶与其他已知酶的序列相似度最高为79％。其酶学性质优良、稳定性好、容易贮藏，同时对于底物结合的特异性强、酶解速率快，有助于降低紫菜寡糖的生产成本。
附图说明
图1：本发明的紫菜多糖酶Por16B_Wf反应进程HPLC分析图；
图2：本发明的紫菜多糖酶Por16B_Wf降解终产物HPLC分析图；
图3：本发明的紫菜多糖酶Por16B_Wf降解终产物质谱图；
图4：本发明的紫菜多糖酶Por16B_Wf目的基因电泳图谱；
图5：本发明的紫菜多糖酶Por16B_Wf纯化后的电泳图；
图6：Por16B_Wf与所有已知GH16家族紫菜多糖酶构建的系统发育树；其中，星号为紫菜多糖酶Por16B_Wf；
图7：Por16B_Wf多序列比对结果；其中，黑框内为Por16B_Wf的保守残基。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：干坛紫菜提取紫菜多糖的工艺优化
以干坛紫菜为原料，采用水提醇沉法提取紫菜多糖。在单因素实验的基础上，采用正交试验进行紫菜多糖的提取条件优化。按L9(34)正交表进行料液比(1：20，1：40，1：60)、温度(80℃，90℃，100℃)、时间(3h，4h，5h)正交试验，实验结果如表1所示。
表1干坛紫菜提取紫菜多糖的正交试验
实验序号 料液比(g/mL) 温度(℃) 时间(h) 得率(％)
1 1/20 80 3 28.2
2 1/20 90 4 30.5
3 1/20 100 5 32.1
4 1/40 80 4 29
5 1/40 90 5 35.7
6 1/40 100 3 38.3
7 1/60 80 5 28.9
8 1/60 90 3 29.5
9 1/60 100 4 33.4
由上表可得，干坛紫菜提取紫菜多糖的最优工艺条件为：料液比1:40、温度100℃、水提时间3h，在此条件下紫菜多糖的得率最高为38.3％。
实施例2：紫菜多糖酶Por16B_Wf在大肠杆菌中发酵制备
在2216E培养基中培养Wenyingzhuangiafucanilytica CZ1127T直至对数末期并提取全基因组DNA，根据目的基因设计上下游引物(5’- GACACGGATCCAAAGACAAAGTAGCAGTAAATGATACTACA；5’- GACACCTCGAGCTATTGATATACTCTTACATAATCTATTTC)，以全基因组为模板进行PCR， PCR反应条件为：95℃3min，95℃20s，42℃22s，72℃60s，22个循环，最后72℃持续5min，得到了紫菜多糖酶Por16B_Wf基因片段，连接至pET-28a(+)载体，构成重组质粒。将重组质粒导入BL21(DE3)感受态细胞中构成重组菌株。在含卡那霉素的LB培养基中利用异丙基硫代半乳糖苷进行诱导表达，诱导温度为17℃，诱导时间为12h。离心收集菌体，加入一定量的20mM柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液悬浮，然后在冰水浴中进行超声破碎(功率400W，工作2s，间隙6s，循环99次)，离心收集上清，此即为紫菜多糖酶Por16B_Wf的粗酶液。
紫菜多糖酶酶活测定方法：吸取50μL紫菜多糖溶液(以柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液配制， pH7.0，底物浓度2mg/mL)与10μL酶液混合进行反应，加入40μL缓冲液补足并于40℃反应10min，反应后于100℃金属浴放置5min使酶灭活；再加入pHBH溶液，于100℃金属浴放置5min显色5min，迅速冷却至室温后离心取上清液，测定上清液的吸光值，检测波长为415。
根据以上定义酶活力单位为：在上述反应条件下，1min内生成1μmol还原糖所需酶量为一个酶活单位(U)。
实施例3：HPLC分析紫菜多糖酶Por16B_Wf反应进程
以HPLC对1U紫菜多糖酶Por16B_Wf不同时间(10min，30min，1h，2h，5h，24h) 的酶解产物进行寡糖轮廓分析。如图1所示，Por16B_Wf在反应初期即看到15min处排阻峰的急剧下降，并伴随着不同聚合度的寡糖生成，且随着酶解时间的延长，寡糖在不断积累。
HPLC分析方法：将酶解产物以0.22μm水系微孔滤膜过滤，进行HPLC分析。分析条件：色谱柱：Superdex Peptide 10/300GL；流动相：50mM甲酸铵；流速：0.5mL/min。
实施例4：HPLC分析紫菜多糖酶Por16B_Wf反应终产物
以HPLC对紫菜多糖酶Por16B_Wf不同加酶量的酶解产物进行寡糖轮廓分析。如图2所示，加酶量超过5U后，寡糖的峰型基本保持不变。
HPLC分析方法：将酶解产物以0.22μm水系微孔滤膜过滤，进行HPLC分析。分析条件：色谱柱：Superdex Peptide 10/300GL；流动相：50mM甲酸铵；流速：0.5mL/min。
实施例5：LC-MS分析紫菜多糖酶Por16B_Wf反应终产物
以LC-MS分析5U紫菜多糖酶Por16B_Wf的酶解终产物，降解产物冻干后以25％乙腈(含5mmol/L甲酸铵)复溶，以0.45μm有机系微孔滤膜过滤，进行LC-MS分析。如图3 所示，质谱分析结果表明，降解产物为二糖、四糖及六糖，其中二糖为主要产物。
LC-MS分析方法：色谱柱：Superdex 30increase 10/300GL；流动相：25％乙腈(含5mmol/L 甲酸铵)；离子源：负离子模式；源温：300℃，毛细管电压：4000V；分子量扫描范围：100～2000Da。
实施例6：紫菜多糖酶Por16B_Wf酶解制备不同分子量紫菜多糖
控制紫菜多糖的浓度为1％，以加酶量、反应时间为变量，制备反应终产物。所得产物以高效凝胶排阻色谱联合多角度激光光散射仪以及示差检测器(HPSEC-MALLS-RI)测定分子量。色谱柱：Shodex OHpak LB-806M(8.0×300mm)；流动相：含0.15mol/L NaCl的20mmol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠(pH 7.4)；流速：0.5mL/min；柱温：40℃；进样体积： 80μL。分子量检测结果如表2所示。
表2紫菜多糖酶Por16B_Wf酶解产物分子量
Figure BDA0002336181640000071
利用stata数据统计软件，对表2的实验结果进行回归分析，得到回归方程： z＝197.68-4767.51x-9.88y，P＝0.00且R2＝0.93，证明拟合方程的线性关系具有显著性且拟合效果较好。利用六组数据进行模型验证，实验结果如表3所示。结果表明，分子量的实测值与预测值的相关系数R2＝0.99，且相对误差均在3％以内，说明该模型实现了对样本值的较好的拟合，可以实现酶解条件与分子量的快速、简便的预测，实现紫菜多糖的可控降解。
表3模型验证
Figure BDA0002336181640000081
最后需要说明，以上实施例虽然描述了本发明的具体实施方式，但是并非限制本发明；本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书所限定的。而一切进行修改或等同替换，其均应包含在本发明的保护范围中。
序列表
<110> 中国海洋大学
<120> 一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法
<130> 中国海洋大学
<140> 1
<141> 2019-12-10
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gln Gln Ser Pro Thr Phe Ile Asp Gly Glu Asp Pro Lys Pro Asp Asn
1 5 10 15
Thr Lys Trp Lys Leu Val Lys Asn Met Ser Asp Glu Phe Asn Gly Thr
20 25 30
Lys Val Asp Glu Glu Lys Trp Gln Ile Ser Gly Gln Gly Trp Ile Gly
35 40 45
Arg Ala Pro Gly Leu Phe Leu Ala Asp Asn Val Lys Val Thr Asn Gly
50 55 60
Ser Leu Gln Ile Thr Thr Thr Met Leu Pro Lys Pro Ile Ile Lys Asn
65 70 75 80
Asn Lys Glu Phe Thr His Gly Gly Gly Tyr Val Gly Ser Arg Asn Gly
85 90 95
Met Thr Tyr Gly Tyr Tyr Glu Cys Glu Met Lys Ala Asn Lys Thr Phe
100 105 110
Met Ser Ser Thr Phe Trp Leu Ile Asn Glu Gly Lys Asn Ile Lys Gly
115 120 125
Cys Asp Lys Arg Thr Thr Glu Leu Asp Ile Gln Glu Cys Val Gly Gln
130 135 140
Ile Thr Asn Asp Ala Glu Trp Met Lys Asn Phe Asp Gln Ala Met Asn
145 150 155 160
Ser Asn Thr His Ser Arg Asn Ile Pro Glu Gly Cys Asn Tyr Ile Lys
165 170 175
Gly Ser Glu Lys Ser Gly Ala Thr Ile Gly Ala Lys Val Tyr Asn Asp
180 185 190
Phe His Val Tyr Gly Val Trp Trp Lys Ser Lys Asp Glu Ile Leu Phe
195 200 205
Phe Leu Asp Gly Lys Phe Gln Ser Lys Val Lys Pro Pro Ser Asp Phe
210 215 220
Asp Ile Glu Met Tyr Leu Arg Met Val Val Glu Thr Tyr Asp Trp Asn
225 230 235 240
Pro Val Pro Ala Asp Gly Gly Met Ala Tyr Ser Lys Glu Asp Arg Thr
245 250 255
Thr Thr Tyr Asn Trp Val Arg Ser Trp Thr Leu Val Asn Pro Lys Lys
260 265 270
<210> 2
<211> 819
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
caacagtcac caacttttat tgatggagaa gacccaaaac cagacaatac aaaatggaaa 60
ttggttaaaa atatgtccga tgagtttaat ggtacaaagg tagatgaaga aaaatggcaa 120
atatctggtc aaggatggat cggtagggcg ccaggattat ttcttgctga taatgtaaaa 180
gttacaaatg gaagtttgca aataaccaca accatgttgc caaaaccaat aataaaaaat 240
aataaggagt ttacgcatgg aggtggttat gttggatcta gaaacgggat gacttatggt 300
tattatgagt gtgaaatgaa ggctaataaa acatttatgt cttctacttt ttggttgata 360
aatgaaggaa aaaacataaa aggctgtgat aaaagaacca cagaattaga catacaagaa 420
tgcgttggac aaattacaaa tgatgctgag tggatgaaaa attttgacca agccatgaat 480
tccaatacac atagtcgaaa tattcctgaa ggttgtaatt atattaaagg ttcagaaaaa 540
tcaggagcca ctattggagc aaaggtatat aacgattttc acgtgtatgg tgtttggtgg 600
aagtctaaag atgaaatact tttcttttta gatggtaaat ttcaatcgaa agtaaaacca 660
ccatccgatt ttgatattga gatgtattta agaatggttg ttgaaactta tgattggaat 720
ccagttccag ctgatggtgg aatggcctac tctaaagaag atagaaccac cacttataat 780
tgggttaggt cttggacatt ggtaaatcct aaaaaataa 819

Claims (3)

1.一种低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法，其特征在于：以干坛紫菜为原料，采用水提醇沉法提取紫菜多糖，利用特异性的紫菜多糖酶降解紫菜多糖制备低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖；
酶解步骤如下：将紫菜多糖溶解在缓冲液中配置成底物浓度为2mg/mL的溶液；向上述溶液中加入紫菜多糖酶酶液，在25℃反应后于100℃金属浴灭活5min，离心获得上清即为紫菜寡糖溶液；
所述紫菜多糖酶为紫菜多糖酶Por16B_Wf，蛋白序列如SEQ ID NO.1所示；
所述紫菜多糖酶Por16B_Wf的添加量、反应时间与反应产物分子量呈线性关系，根据目标产物的分子量控制；将各参数代入回归方程：z=197.68-4767.51x-9.88y，得到预测值，其中，z为酶解产物分子量，x为加酶量，y为酶解时间。
2.如权利要求1所述的低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法，其特征在于：紫菜多糖的提取步骤如下：以干坛紫菜为原料提取紫菜多糖，采用水提醇法提取，工艺条件为料液比1:40、水提温度100°C、时间3h。
3.如权利要求1所述的低分子量紫菜多糖及紫菜寡糖的酶解制备方法，其特征在于：紫菜多糖酶Por16B_Wf对于紫菜多糖具有高活力，其最适反应温度为40℃，其最适反应pH值为7.0，且在pH 5.0-10.0的pH值范围内保持稳定；该酶具有良好的贮存稳定性，在4°C下可至少稳定贮存3个月，在25°C的温度范围内放置24h后仍能保持90%的初始活力；酶动力学常数Km为2.73mg/mL， Kcat为38.20s-1，Km/Kcat为14μM−1 s−1，Vmax为66.23 U/mg。
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family 16 glycosylhydrolase [Wenyingzhuangia fucanilytica];佚名;《GenBank》;20191223;第1页ORIGIN部分 *
Yuying Zhang等.Expression and characterization of a novel #-porphyranase from marine bacterium Wenyingzhuangia fucanilytica: A biotechnological tool for degrading porphyran.《J. Agric. Food Chem.》.2019,第1-31页. *
坛紫菜多糖提取工艺的优化及抗氧化研究;杨欣然等;《河北北方学院学报(自然科学版)》;20170428(第04期);全文 *
酶法降解坛紫菜多糖及其产物分析;韩莎莎等;《食品科学》;20151231(第21期);全文 *

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