CN110927313B - 一种不同基原藁本药材uplc特征图谱的构建方法及其鉴别方法 - Google Patents

一种不同基原藁本药材uplc特征图谱的构建方法及其鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法，包含如下步骤：（1）精密称取不同基原藁本药材粉末，制备得到不同基原藁本药材供试品溶液；（2）将不同基原藁本药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到不同基原藁本药材的UPLC特征图谱。本发明构建了不同基原藁本药材UPLC特征图谱，充分展示了不同基原藁本药材的化学成分特征，所述的不同基原藁本为辽藁本、藁本、新疆藁本；本发明建立不同基原藁本药材的UPLC特征图谱，可以用来鉴别和区分辽藁本、藁本和新疆藁本三种不同基原的中药材，为藁本药材的种间鉴别提供一种快速、可靠的检测方法。

Description

一种不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法及其鉴别 方法
技术领域
本发明属于中药鉴别领域，具体公开了一种不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法及其鉴别方法。
背景技术
2015年版中国药典规定藁本为伞形科植物藁本或辽藁本的干燥根茎和根，其是我国常用中药之一，始载于东汉《神农本草经》。其味辛，性温，具有祛风散寒，除湿止痛的功效，临床用于风寒感冒，巅顶疼痛，风湿肢节痹痛等疾病的治疗。目前市场上常用的藁本药材主要来自辽藁本、藁本和新疆藁本，还混有部分同科不同属的其他植物。这些植物形态特征极为相似，容易被混淆。目前法定标准仅对藁本药材进行控制，且标准仅以阿魏酸成分进行定性、定量分析，不利于药材的质量控制。有关藁本的高效液相色谱指纹图谱鉴别已有报道，但大都耗时较长；超高效液相色谱法（UPLC）具有分析速度快、分离度好、所需流动相少等优点。本专利拟通过采用超高效液相色谱法，建立不同基原藁本药材的特征图谱，以期能够快速，准确的鉴别藁本、辽藁本及新疆藁本药材，并从整体上为藁本药材的质量控制提供理论依据。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法及其鉴别方法，本发明建立不同基原藁本药材的UPLC特征图谱，鉴别和区分辽藁本、藁本和新疆藁本三种不同基原的中药材，为藁本药材的种间鉴别提供一种快速、可靠的检测方法。
本发明所要解决的上述技术问题，通过如下技术方案予以实现：
一种不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法，包含如下步骤：
（1）精密称取不同基原藁本药材粉末，制备得到不同基原藁本药材供试品溶液；
（2）将不同基原藁本药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到不同基原藁本药材的UPLC特征图谱。
作为一种优选方案，所述不同基原藁本药材为：辽藁本、藁本、新疆藁本。
作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05~0.15%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.3~0.4ml/min，柱温为20~40℃；检测波长为230~280nm，进样量为0.5~2μl。
作为一种最优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35ml/min，柱温为30℃；检测波长为254nm，进样量为1μl。
作为一种优选方案，所述梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→10%，流动相B的体积分数变化为95%→90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→13%，流动相B的体积分数变化为90%→87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→23%，流动相B的体积分数变化为87%→77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→53%，流动相B的体积分数变化为77%→47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
作为一种优选方案，所述的供试品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入60~80%甲醇40~60ml，密塞，称定重量，加热回流1~3小时，放冷，再称定重量，用60~80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
作为一种最优选方案，所述的供试品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
本发明还提供了一种不同基原藁本药材的鉴别方法，包括如下步骤：
（1）精密称取待鉴别不同基原藁本药材粉末，制备得到待鉴别不同基原藁本药材样品溶液；
（2）精密吸取待鉴别不同基原藁本药材样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
（3）将测得的UPLC特征图谱与构建出的不同基原藁本UPLC特征图谱进行比对，若与辽藁本特征图谱一致，则待鉴别样品为辽藁本；若与藁本特征图谱一致，则待鉴别样品为藁本；若与新疆藁本特征图谱一致，则待鉴别样品为新疆藁本。
作为一种优选方案，所述不同基原藁本药材为：辽藁本、藁本、新疆藁本。
作为一种优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05~0.15%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.3~0.4ml/min，柱温为20~40℃；检测波长为230~280nm，进样量为0.5~2μl。
作为一种最优选方案，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35ml/min，柱温为30℃；检测波长为254nm，进样量为1μl。
作为一种优选方案，所述梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→10%，流动相B的体积分数变化为95%→90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→13%，流动相B的体积分数变化为90%→87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→23%，流动相B的体积分数变化为87%→77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→53%，流动相B的体积分数变化为77%→47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
作为一种优选方案，所述的待鉴别不同基原藁本药材样品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0.2~0.8g，精密称定，精密加入60~80%甲醇40~60ml，密塞，称定重量，加热回流1~3小时，放冷，再称定重量，用60~80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
作为一种最优选方案，所述的待鉴别不同基原藁本药材样品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
有益效果：（1）本发明构建了不同基原藁本药材UPLC特征图谱，充分展示了不同基原藁本药材的化学成分特征，所述的不同基原藁本为辽藁本、藁本、新疆藁本；（2）本发明构建的特征图谱全面的反应样品的特征峰信息，且方法稳定，精密度高，重现性较好；（3）本发明建立不同基原藁本药材的UPLC特征图谱，可以用来鉴别和区分辽藁本、藁本和新疆藁本三种不同基原的中药材，为藁本药材的种间鉴别提供一种快速、可靠的检测方法。
附图说明
图1为15批辽藁本药材特征图谱叠加图。
图2为5批新疆藁本药材特征图谱叠加图。
图3为10批藁本药材特征图谱叠加图。
图4为不同基原藁本药材UPLC特征图谱。
图5为辽藁本药材LC-HRMS定位图。
图中标记：峰4为阿魏酸；峰8为藁本内酯；峰10为肉豆蔻醚。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
不同基原藁本的UPLC特征图谱的构建
（1）精密称取不同基原藁本药材粉末，制备得到不同基原藁本药材供试品溶液；（2）将不同基原藁本药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到不同基原藁本药材的UPLC特征图谱。
1.30批实验样品来源自全国各大药材市场，并经过相关权威机构检测合格，详见表1。
表1 30批不同基原藁本来源
Figure 222256DEST_PATH_IMAGE001
2.所述不同基原藁本药材为：辽藁本、藁本、新疆藁本。
3.超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35ml/min，柱温为30℃；检测波长为254nm，进样量为1μl。
4.梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→10%，流动相B的体积分数变化为95%→90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→13%，流动相B的体积分数变化为90%→87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→23%，流动相B的体积分数变化为87%→77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→53%，流动相B的体积分数变化为77%→47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
5.供试品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
6.参照物溶液的制备：分别取阿魏酸、肉豆蔻醚、藁本内酯对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含阿魏酸30μg、肉豆蔻醚1500μg、藁本内酯100μg的溶液，即得。
7.测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，将图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行数据进行数据匹配，建立不同基原藁本药材的特征图谱，叠加图见附图1、2、3。
8.方法学考察
8.1精密度实验：取编号S7辽藁本供试品样品1份，0.5g，精密称定，制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，连续进样6次，以阿魏酸为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值。9个色谱峰相对保留时间的RSD范围在0.01%~0.44%，相对峰面积的RSD范围在0.19%~2.14%，结果表明该仪器精密度良好。
8.2重复性实验：取编号S7辽藁本药材，平行6份，精密称定，每份:0.5g，制备6份供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，以阿魏酸为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积，并计算RSD值。6个供试品溶液中9个色谱峰相对保留时间RSD范围在0.01%~0.11%，相对峰面积的RSD范围在0.24%~2.96%，表明该特征图谱方法重复性良好。
8.3稳定性实验：取编号S7辽藁本样品1份: 0.5g，精密称定，制备供试品溶液，按上述色谱条件，在0、2、4、6、8、12h进样，记录色谱图。以阿魏酸色谱峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间以及相对峰面积，并计算RSD值。在12小时内9个色谱峰相对保留时间的RSD<2.0%，相对峰面积的RSD<2.0%，表明供试品溶液在12小时内稳定。
9.结果
9.1 15批辽藁本药材测定结果为：以4号峰阿魏酸为参照，计算其余各峰的相对保留时间，实验结果见下表2所示。
表2 15批藁本（辽藁本）药材特征图谱各特征峰的相对保留时间
Figure 873817DEST_PATH_IMAGE002
9.2 5批新疆藁本测定结果为：以4号峰阿魏酸为参照，计算其余各峰的相对保留时间，实验结果见下表3所示。
表3 5批新疆藁本药材特征图谱各特征峰的相对保留时间
Figure 387975DEST_PATH_IMAGE003
9.3 10批藁本测定结果如下
以4号峰阿魏酸为参照，计算其余各峰的相对保留时间，实验结果见下表4所示。
表4 10批藁本(藁本)药材特征图谱各特征峰的相对保留时间
Figure 517605DEST_PATH_IMAGE004
9.4结果显示，15批辽藁本药材在UPLC特征图谱中均呈现9个特征峰，其中峰4、峰8分别与阿魏酸、藁本内酯参照物保留时间相同；与阿魏酸参照物相应的峰为S峰，计算其余各峰的相对保留时间，其相对保留时间均在在规定值的±10%范围之内，规定值为：0.17（峰1），0.52（峰2），0.87（峰3），1.17（峰5），1.38（峰6），2.02（峰7），2.09（峰9）。且在峰6和峰7之间，没有出现峰高大于峰8的色谱峰。
10批藁本药材在UPLC特征图谱中均呈现7个特征峰，其中峰4与阿魏酸参照物保留时间相同；与阿魏酸参照物相应的峰为S峰，计算其余各峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：0.18（峰1），0.58（峰2），0.88（峰3），1.33（峰6），1.02（峰11），1.63（峰12）。且在UPLC特征图谱中，稳定出现峰12。
5批新疆藁本药材在UPLC特征图谱中均呈现6个特征峰，其中峰4、峰10分别与阿魏酸、肉豆蔻醚参照物保留时间相同；与阿魏酸参照物相应的峰为S峰，计算其余峰的相对保留时间，其相对保留时间均在规定值的±10%范围之内，规定值为：0.18（峰1），0.58（峰2），0.88（峰3），1.33（峰6）。且在峰6和峰10之间，没有出现峰高大于峰10的色谱峰。本方法能快速、直观的区分辽藁本、藁本及新疆藁本药材，为藁本类药材的质量控制提供了更科学的依据。
10.共有峰的确定
取30批不同基原的藁本样品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样测定，使用《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》对30批不同基原藁本特征图谱进行共有峰标识，并生成对照图谱，得到其共有峰图，结果见图4。
11. 质谱结果
质谱条件：电喷雾离子源( ESI）；正离子模式下，Full MS-ddMS2扫描，质荷比范围:100.0 - 1500；分辨率：70000；极性：正极；鞘气流量：30arb；辅助气体流量：10arb；喷涂电压：3.8 kv；毛细管温度：350℃；辅助气加热温度：60℃。
采用上述色谱和质谱分析条件，对辽藁本药材供试品溶液进行进一步检测。通过化合物的色谱峰保留行为、精确分子量及二级质谱信息，共确定了9个化合物。
如图5所示。其中，色谱峰2可能为肉桂酸甲酯或顺式异构体，色谱峰4为阿魏酸，色谱峰7芹菜镇静素，色谱峰8为藁本内酯，色谱峰9为3-丁烯基苯酞。
12.特征图谱峰指认：在规定色谱条件下，分别对供试品溶液和对照品溶液进行检测。通过化合物的色谱峰保留时间及与对照品进行比对，共确定了3个化合物，分别为阿魏酸（峰4）、藁本内酯（峰8）、肉豆蔻醚（峰10）。
13.特征图谱分析：辽藁本药材在UPLC特征图谱中应呈现9个特征峰，其中2个峰应分别与相应的参照物保留时间相同；与阿魏酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：0.17（峰1），0.52（峰2），0.87（峰3），1.17（峰5），1.38（峰6），2.02（峰7），2.09（峰9）。与藁本及新疆藁本区别点：在UPLC特征图谱中，应稳定出现峰7、峰8、峰9三个色谱峰，且在峰6和峰7之间，不应出现峰高大于峰8的色谱峰。
藁本药材在UPLC特征图谱中应呈现7个特征峰，其中1个峰应与相应的参照物保留时间相同；与阿魏酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：0.18（峰1），0.58（峰2），0.88（峰3），1.33（峰6），1.02（峰11），1.63（峰12）。与辽藁本及新疆藁本区别点：在UPLC特征图谱中，应稳定出现峰12。
新疆藁本药材在UPLC特征图谱中应呈现6个特征峰，其中2个峰应分别与相应的参照物保留时间相同；与阿魏酸参照物相应的峰为S峰，计算各特征峰的的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内，规定值为：0.18（峰1），0.58（峰2），0.88（峰3），1.33（峰6）。与辽藁本及藁本区别点：在UPLC特征图谱中，应稳定出现峰10，且在峰6和峰10之间不应出现峰高大于峰10的色谱峰。
辽藁本、藁本和新疆藁本的区分，见图4的黑圈标记：辽藁本UPLC特征图谱中，稳定出现峰7、峰8、峰9三个色谱峰，且在峰6和峰7之间，不应出现峰高大于峰8的色谱峰；藁本UPLC特征图谱中，稳定存在峰12；新疆藁本UPLC特征图谱中，稳定出现峰10，且在峰6和峰10之间，不应出现峰高大于峰10的色谱峰。
实施例2
辽藁本药材的鉴别
辽藁本药材的鉴别步骤为：
（1）精密称取待鉴别辽藁本药材，制备得到待鉴别辽藁本药材样品溶液；
（2）精密吸取待鉴别辽藁本药材样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
（3）将测得的UPLC特征图谱与构建出的辽藁本药材的UPLC特征图谱进行比较比对，若构建出的与辽藁本药材特征图谱一致，则待鉴别样品为辽藁本。
1.超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35ml/min，柱温为30℃；检测波长为254nm，进样量为1μl。
2.梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→10%，流动相B的体积分数变化为95%→90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→13%，流动相B的体积分数变化为90%→87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→23%，流动相B的体积分数变化为87%→77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→53%，流动相B的体积分数变化为77%→47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
3.辽藁本药材待鉴别样品溶液的配制：取辽藁本药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
4.测定法：精密吸取待鉴别样品溶液溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
5.数据处理
利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件和SPSS20.0对数据进行处理分析。
将其与构建的辽藁本药材特征图谱比对，两者特征图谱一致，则待鉴别样品为辽藁本药材。
实施例3
藁本药材的鉴别
藁本药材的鉴别步骤为：
（1）精密称取待鉴别藁本药材，制备得到待鉴别藁本药材样品溶液；
（2）精密吸取待鉴别藁本药材样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
（3）将测得的UPLC特征图谱与构建出的藁本药材的UPLC特征图谱进行比较比对，若构建出的与藁本药材特征图谱一致，则待鉴别样品为藁本。
1.超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35ml/min，柱温为30℃；检测波长为254nm，进样量为1μl。
2.梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→10%，流动相B的体积分数变化为95%→90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→13%，流动相B的体积分数变化为90%→87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→23%，流动相B的体积分数变化为87%→77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→53%，流动相B的体积分数变化为77%→47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
3.藁本药材待鉴别样品溶液的配制：取藁本药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
4.测定法：精密吸取溶液和待鉴别样品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
5.数据处理
利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件和SPSS20.0对数据进行处理分析。
将其与构建的藁本药材特征图谱比对，两者特征图谱一致，则待鉴别样品为藁本药材。
实施例4
新疆藁本药材的鉴别
新疆藁本药材的鉴别步骤为：
（1）精密称取待鉴别新疆藁本药材，制备得到待鉴别新疆藁本药材样品溶液；
（2）精密吸取待鉴别新疆藁本药材样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
（3）将测得的UPLC特征图谱与构建出的新疆藁本药材的UPLC特征图谱进行比较比对，若构建出的与新疆藁本药材特征图谱一致，则待鉴别样品为新疆藁本。
1.超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.35ml/min，柱温为30℃；检测波长为254nm，进样量为1μl。
2.梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→10%，流动相B的体积分数变化为95%→90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→13%，流动相B的体积分数变化为90%→87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→23%，流动相B的体积分数变化为87%→77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→53%，流动相B的体积分数变化为77%→47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
3. 新疆藁本药材待鉴别样品溶液的配制：取新疆藁本药材粉末0.5g，精密称定，精密加入70%甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
4.测定法：精密吸取待鉴别样品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
5.数据处理
利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件和SPSS20.0对数据进行处理分析。
将其与构建的新疆藁本药材特征图谱比对，两者特征图谱一致，则待鉴别样品为新疆藁本药材。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求的保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (8)

1.一种不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包含如下步骤：
（1）精密称取不同基原藁本药材粉末，制备得到不同基原藁本药材供试品溶液；
（2）将不同基原藁本药材供试品溶液采用超高效液相色谱仪分析，得到不同基原藁本药材的UPLC特征图谱；
所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0 .05~0 .15%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0 .3~0 .4ml/min，柱温为20~40℃；检测波长为230~280nm，进样量为0.5~2μl；
所述梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→ 10%，流动相B的体积分数变化为95%→ 90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→ 13%，流动相B的体积分数变化为90%→ 87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→ 23%，流动相B的体积分数变化为87%→ 77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→ 53%，流动相B的体积分数变化为77%→ 47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
2.根据权利要求1所述的不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述不同基原藁本药材为：辽藁本、藁本、新疆藁本。
3.根据权利要求1所述的不同基原藁本药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的供试品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0 .2~0 .8g，精密称定，精密加入60~80%甲醇40~60ml，密塞，称定重量，加热回流1~3小时，放冷，再称定重量，用60~80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
4.一种不同基原藁本药材的鉴别方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）精密称取待鉴别不同基原藁本药材粉末，制备得到待鉴别不同基原藁本药材样品溶液；
（2）精密吸取待鉴别不同基原藁本药材样品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
（3）将测得的UPLC特征图谱与权利要求1~3任一项方法构建出的不同基原藁本UPLC特征图谱进行比对，若与辽藁本特征图谱一致，则待鉴别样品为辽藁本；若与藁本特征图谱一致，则待鉴别样品为藁本；若与新疆藁本特征图谱一致，则待鉴别样品为新疆藁本。
5.根据权利要求4所述的不同基原藁本药材的鉴别方法，其特征在于，所述不同基原藁本药材为：辽藁本、藁本、新疆藁本。
6.根据权利要求4所述的不同基原藁本药材的鉴别方法，其特征在于，所述超高效液相色谱仪分析的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0 .05~0 .15%乙酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0 .3~0 .4ml/min，柱温为20~40℃；检测波长为230~280nm，进样量为0.5~2μl。
7.根据权利要求6所述的不同基原藁本药材的鉴别方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：0~2min，流动相A的体积分数为5%，流动相B的体积分数为95%；2~4min，流动相A的体积分数变化为5%→ 10%，流动相B的体积分数变化为95%→ 90%；4~8min，流动相A的体积分数变化为10%→ 13%，流动相B的体积分数变化为90%→ 87%；8~12min，流动相A的体积分数变化为13%→ 23%，流动相B的体积分数变化为87%→ 77%；12~23min，流动相A的体积分数变化为23%→ 53%，流动相B的体积分数变化为77%→ 47%；23~30min，流动相A的体积分数为53%，流动相B的体积分数为47%。
8.根据权利要求4所述的不同基原藁本药材的鉴别方法，其特征在于，所述的待鉴别不同基原藁本药材样品溶液制备方法为：取不同基原藁本药材粉末0 .2~0 .8g，精密称定，精密加入60~80%甲醇40~60ml，密塞，称定重量，加热回流1~3小时，放冷，再称定重量，用60~80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
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