CN110923250A

CN110923250A - 棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的应用

Info

Publication number: CN110923250A
Application number: CN201911116171.XA
Authority: CN
Inventors: 朱荷琴; 张向月; 冯鸿杰; 师勇强; 魏锋; 冯自力; 赵丽红
Original assignee: Institute of Cotton Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Cotton Research of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2019-11-13
Filing date: 2019-11-13
Publication date: 2020-03-27
Anticipated expiration: 2039-11-13
Also published as: CN110923250B

Abstract

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1‑1的应用。基因GhSDH1‑1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。对基因GhSDH1‑1沉默植株接种棉花黄萎病病原菌Vd080孢子悬浮液后，沉默植物表现更感病，通过机理研究发现，沉默植株中胼胝质的合成下降、ROS减少、部分防御基因的下调。转GhSDH1‑1基因拟南芥显示出较强黄萎病抗性。因此，基因GhSDH1‑1与棉花抗黄萎病呈正相关，基因GhSDH1‑1可应用于棉花抗病育种中。

Description

棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的应用

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的应用。

背景技术

棉花黄萎病(Verticillium Wilt)是由大丽轮枝菌(Verticillium dahliaeKleb.)引起的一种土传性真菌维管束病害，其严重影响棉花的产量，已经成为棉花可持续生产的主要障碍之一，尚难以得到有效控制。培育和种植抗病品种是防治棉花黄萎病最经济有效的途径，然而由于陆地棉缺乏优异的抗原、传统育种方法周期长、成本高、选择效率低，病原菌变异频繁，导致棉花抗黄萎病育种进展缓慢，育成的多数品种的抗病性较差，一些耐病品种投入生产后抗性丧失快。

过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)是活性氧(reactive oxygen species,ROS)重要的代表之一，激素等信号以及生物、非生物胁迫刺激均可诱导植物细胞内H₂O₂的产生和积累。H₂O₂在植物面临环境胁迫反应中发挥着重要的作用，比如应对逆境、产生抗病防御反应、调控植物的生长发育、参与保卫细胞气孔运动等诸多生理过程。

琥珀酸是三羧酸循环的中间产物。琥珀酸脱氢酶(SDH)是多亚基酶，结合于线粒体内膜，可将琥珀酸转化为延胡索酸，其在代谢中的作用主要有呼吸链电子传递、底物水平磷酸化、促进活性氧产生等。电子传递链的线粒体复合物II(SDH)有助于调节植物应激和防御反应中的局部mROS产生。线粒体呼吸电子传递链是拟南芥和水稻中ROS的直接来源，调节植物的发育和应激反应。另外，拟南芥琥珀酸脱氢酶SDH的突变体dsr1和sdhaf2降低了植物对逆境的初始反应，与SA信号通路有关，在植物抗逆境过程中起正调控作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的应用。

本发明的再一目的在于提供提高棉花对黄萎病抗病性的方法。

本发明提供的棉花抗黄萎病相关基因GhSDH1-1，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示：

ATGTGGCGCTGCGTTTCTCGTAGCCTTCGAGTTCCATATTCCAACAGATCAGTTGCCGCTAACTCTCTTAGATCTAACATTTCCAGTTTCTTCTCCACTCATGCTGGGTCCCCTTATACAATAGTGGATCATACGTATGATGCAGTTGTGGTTGGTGCTGGTGGTGCGGGGCTGAGAGCAGCCATTGGTCTTTCAGAGCATGGATTTAATACTGCTTGCATAACTAAGCTTTTCCCAACTCGTTCACATACTGTTGCGGCTCAGGGTGGCATAAATGCTGCTTTGGGAAATATGACTGAAGATGACTGGCGATGGCACATGTATGACACAGTTAAAGGAAGTGATTGGTTAGGTGATCAGGATGCAATTCAATATATGTGCAGGGAGGCACCAAAAGCCGTGATTGAACTCGAGAATTATGGGCTGCCTTTTTCTCGAACAGAAGATGGGAAAATATATCAGAGAGCATTTGGTGGTCAAAGCCTTGACTTTGGAAAAGGTGGACAGGCTTATCGTTGTGCATGTGCTGCTGATCGAACAGGGCATGCTCTACTGCACACTCTCTATGGCCAAGCTATGAAACATAATACCCAATTCTTTGTGGAATATTTTGCTTTGGATCTATTGATGAACAGCAATGGTAGCTGCCAGGGAGTGATAGCTTTAAACATGGAGGACGGAACACTACATCGCTTCCAGGCTTCTTCAACAATTCTGGCCACTGGGGGATATGGTAGAACCTACTTTTCTGCAACTTCAGCTCACACATGCACTGGTGATGGCAATGCTATGGTTGCACGTGCTGGGCTTCCCCTCCAGGATTTGGAGTTTGTGCAGTTCCATCCAACTGGAATCTATGGGGCTGGGTGCCTCATTACTGAAGGGTCTCGTGGTGAAGGTGGCATCCTTAGAAATAGTGAAGGTGAACGCTTTATGGAACGGTATGCTCCTACAGCCAAGGATCTTGCTTCAAGGGATGTTGTTTCGAGATCTATGACCATGGAAATCAGGGAAGGTCGTGGTGTAGGACCTTTGAAGGATCATATCTATCTCCACTTGAATCACTTGCCTCCAGAGGTGCTTAAGGAGAGGCTTCCAGGTATCTCTGAGACTGCTGCCATTTTTGCTGGTGTGGATGTTACAAAGGAGCCCATCCCAGTCTTGCCTACTGTACATTATAACATGGGTGGAATTCCAACAAATCATCATGGAGAGGTAGTTACTATCAGAGGCAGTGATCCAGATTCTGTGGTTCCTGGACTGATGGCTGCTGGAGAGGCAGCCTGTGCATCAGTTCATGGTGCTAATCGGTTGGGTGCAAATTCCCTTCTTGACATTGTCGTCTTTGGTCGGGCTTGTGCAAACCGAGTTGCAGAGATCCAAAGGCCAGGCAAGCTGTGGCAGAAGCAGAAACCTTTGGAAAAGGATGCTGGTGAGAGAACAATTGCATGGTTAGACAAAATAAGAAATTCTAATGGTTCTCTTCCAACTTCAAACATTCGATTAAATATGCAACGAGTAATGCAAAACAATGCTGCTGTTTTCCGCACACAGGAAACACTAGAGGAAGGTTGTCAGTTAATTGATAAGACATGGGAAAGCTTCCATGATGTTAAGTTGAAGGATCGCAGTTTAATATGGAACTCTGATTTGATAGAATCTATCGAGTTGGAAAATCTTTTGATAAATGCCTGTATCACCATGCACTCCGCTGAAGCTAGGAAAGAGAGCAGAGGAGCACATGCTCGTGAAGATTTTACGAAAAGAGATGATGAGAACTGGATGAAACACACATTGGGTTTTTGGGAGAATGAGAAGGTGAGACTGGATTACCGGCCAGTTCACATGAACACATTAGATGATGAAGTTGAGTCATTCCCACCTAAAGCTCGTGTCTATTAA

本发明的蛋白GhSDH1-1属于琥珀酸脱氢酶，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示：

MWRCVSRSLRVPYSNRSVAANSLRSNISSFFSTHAGSPYTIVDHTYDAVVVGAGGAGLRAAIGLSEHGFNTACITKLFPTRSHTVAAQGGINAALGNMTEDDWRWHMYDTVKGSDWLGDQDAIQYMCREAPKAVIELENYGLPFSRTEDGKIYQRAFGGQSLDFGKGGQAYRCACAADRTGHALLHTLYGQAMKHNTQFFVEYFALDLLMNSNGSCQGVIALNMEDGTLHRFQASSTILATGGYGRTYFSATSAHTCTGDGNAMVARAGLPLQDLEFVQFHPTGIYGAGCLITEGSRGEGGILRNSEGERFMERYAPTAKDLASRDVVSRSMTMEIREGRGVGPLKDHIYLHLNHLPPEVLKERLPGISETAAIFAGVDVTKEPIPVLPTVHYNMGGIPTNHHGEVVTIRGSDPDSVVPGLMAAGEAACASVHGANRLGANSLLDIVVFGRACANRVAEIQRPGKLWQKQKPLEKDAGERTIAWLDKIRNSNGSLPTSNIRLNMQRVMQNNAAVFRTQETLEEGCQLIDKTWESFHDVKLKDRSLIWNSDLIESIELENLLINACITMHSAEARKESRGAHAREDFTKRDDENWMKHTLGFWENEKVRLDYRPVHMNTLDDEVESFPPKARVY

本发明提供基因GhSDH1-1在防治棉花黄萎病的应用，可以用于提高棉花抗性品种对黄萎病的抗病性。

棉花接种病原菌后，GhSDH1-1基因在棉花体内表达上调，表明病原菌胁迫激活了GhSDH1-1基因的表达；激素(水杨酸、茉莉酸)处理棉花后，GhSDH1-1的表达发生了改变，表明GhSDH1-1受激素的调控。

本发明还提供了一种提高棉花黄萎病抗病性的方法，所述方法包括在棉花品种过表达基因GhSDH1-1的步骤，可以通过使用水杨酸、茉莉酸促进基因GhSDH1-1的表达。

本发明的有益效果：

本发明构建了基因GhSDH1-1的沉默载体，利用病毒介导的基因沉默技术，抑制了GhSDH1-1在棉花中的表达，对基因沉默植株接种棉花黄萎病病原菌Vd080孢子悬浮液后，沉默植物表现更感病，通过机理研究发现，沉默植株中胼胝质的合成下降、ROS减少、部分防御基因的下调。转GhSDH1-1基因拟南芥显示出较强黄萎病抗性。因此，基因GhSDH1-1与棉花抗黄萎病呈正相关，基因GhSDH1-1可应用于棉花抗病育种中。

附图说明

图1显示病原菌胁迫下基因GhSDH1-1在抗病品种中的表达情况；

图2显示激素处理后GhSDH1-1在抗病品种中的表达情况；

图3显示基因沉默后的棉花叶片的白化现象及发病情况；

图4显示基因GhSDH1-1沉默后植株木质部的发病情况；

图5显示基因GhSDH1-1沉默后植株叶片胼胝质的积累情况；

图6显示基因GhSDH1-1沉默后植株叶片活性氧爆发情况；

图7显示基因GhSDH1-1沉默后棉花根部H₂O₂和NO的含量变化；

图8显示病菌处理后植株中相关防御基因的相对表达量的变化情况；

图9显示转GhSDH1-1基因拟南芥抗病性情况。

具体实施方式

实施例1获取棉花基因GhSDH1-1

以抗病品种中植棉2号和感病品种冀棉11号为植物材料，接种棉花黄萎病病原菌Vd080后，通过代谢组学分析，发现大丽轮枝菌侵染棉花后，根部细胞中琥珀酸的积累量明显降低，延胡索酸的积累量明显升高。进一步，通过对琥珀酸脱氢酶的基因分析与预试验，发现基因GhSDH1-1在抗性品种接种大丽轮枝菌后的表达量明显升高，其为构成琥珀酸脱氢酶(SDH)亚基的基因，故命名为GhSDH1-1。

实施例2考察病原菌和激素处理后棉花中GhSDH1-1基因的表达

在蛭石沙土纸钵中种植棉花抗病品种中植棉2号，伤根后接种Vd080孢子悬浮液，不同时间段提取根部RNA。

用0.01mM的水杨酸(SA)和0.1mM的茉莉酸甲酯(JA)喷施到叶面滴水为止，不同时间段提取根部RNA。

根据GhSDH1-1的基因序列和CDS序列设计其荧光定量的引物为：

GhSDH1-1-F:TGTATCACCATGCACTCCGCTG，

GhSDH1-1-R:ACTGGCCGGTAATCCAGTCTCA。

检测在病原菌和激素处理后，GhSDH1-1的表达情况。

如图1所示，在抗病品种中，接种病原菌后GhSDH1-1的表达量在所有时间段均上调表达，6h时处理与对照的差异最为显著。

如图2所示，在激素处理后，抗病品种中的GhSDH1-1均对SA和JA敏感，表明GhSDH1-1的表达受这两种激素的调控。

实施例3利用病毒介导的基因沉默技术(VIGS)研究GhSDH1-1的功能

1.棉花中GhSDH1-1的沉默

根据VIGS引物设计原则设计GhSDH1-1沉默载体的引物：

SDH-VIGS-F:CGGAATTCGAGGACGGAACACTACAT，

SDH-VIGS-R:CGAGCTCCACGAGACCCTTCAGTAA。

以抗病品种中植棉2号的cDNA为模板扩增沉默片段，并转化TRV-156载体，并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，测序验证正确后，提取TRV-156-GhSDH1-1质粒，并转化农杆菌GV3101感受态，菌落PCR验证正确后，扩大培养，以pYL-156空载为对照，以TRV-156-PDS为正对照(PDS基因被沉默后，叶片表现出白化现象)，与辅助质粒TRV-192为混合静置后，用无针头注射器注射中植棉2号棉花叶片。注射处理后暗培养24h，置于正常光照下22℃培养。待正对照出现白化表型时，利用荧光定量PCR检测沉默植株中GhSDH1-1的表达量，选取沉默效果较好的植株进行进一步试验。

在接菌3d时，检测棉花叶片胼胝质的积累，检测棉花叶片活性氧的爆发。15d时检测叶片细胞坏死情况和维管束变色情况。20d时，调查植株发病情况。

如图3所示，统计病情后计算得沉默植株的病情指数为40.39±3.85，病株率为91.03±1.28％，而对照的病情指数为23.02±2.57，病株率为66.68±0.77％，沉默植株与对照之间的病情指数和病株率均存在显著差异。

如图4所示，将棉花幼苗茎秆横切，可见沉默植株与非沉默植株相比维管束显著变黑，发病更严重。

如图5所示，利用苯胺蓝染色棉花叶片，紫外激发光下可见沉默植株的胼胝质的积累量低于对照。

如图6所示，活性氧爆发的研究同样显示在沉默植物的叶片中褐色沉淀更少，说明活性氧爆发更弱。

如图7所示，沉默GhSDH1-1基因后，棉花根部H₂O₂含量明显降低，NO的含量在20min内现在升高，之后开始降低，直到与H₂O₂形成平衡。利用苯胺蓝染色棉花叶片，在沉默植株中可以观察到的更多的细胞坏死。

2.沉默植株的抗病性研究

选取沉默效果较好的植株，待一片真叶初现时，接种10mL大丽轮枝菌孢子液(浓度为1×10⁷CFU/mL)，置于25℃温室中正常光照生长。接菌后不同时间段取样提取沉默植株RNA用于表1中检测防御相关基因的表达。

表1棉花防御相关基因的RT-qPCR引物

如图8所示，接种病菌后的不同时间段沉默植株中的防御酶基因或防御酶代谢基因，如苯丙氨酸解氨酶(GhPAL)、过氧化物酶(GhPOD)和多酚氧化酶(GhPPO)在沉默植株中的表达量，在接种病原菌后具有不同程度的降低。棉花中过敏反应的标识基因GhHIN1在沉默植株中的表达量在接菌后也显著低于对照。GhPR3是乙烯(ET)信号通路的标识基因，在沉默植株中的表达量低于对照。GhNPR1、GhPR1是水杨酸(SA)信号通路上的标识基因，接菌后沉默植株的表达量与对照相比显著降低，表明SA在GhSDH1-1抗病中起正调控作用。因此，GhSDH1-1在棉花抗黄萎病中具有重要的正调控作用，其可应用于棉花抗黄萎病育种工作中。

实施例4转GhSDH1-1基因拟南芥的获得及抗病性鉴定

以中植棉2号cDNA为模板，克隆GhSDH1-1的CDS序列，构建pCAMBIA2300-GhHMGB2的过表达载体，通过蘸花法转化拟南芥，使拟南芥过表达GhSDH1-1基因，通过连续3代抗性筛选及分子验证，获得阳性转基因苗。

栽培转基因拟南芥和野生型拟南芥，接种大丽轮枝菌病原菌。如图9所示，接种大丽轮枝菌10天后野生型拟南芥叶片开始出现变黄、枯萎的症状，而转基因拟南芥相较于野生型，表现出明显的抗黄萎病性。

本发明的GhSDH1-1基因在棉花抗黄萎病中具有重要的正调控作用，可作为棉花抗黄萎病育种的重要候选基因。

序列表

<110> 中国农业科学院棉花研究所

<120> 棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1902

<212> DNA

<213> 棉花(Gossypium spp)

<400> 1

atgtggcgct gcgtttctcg tagccttcga gttccatatt ccaacagatc agttgccgct 60

aactctctta gatctaacat ttccagtttc ttctccactc atgctgggtc cccttataca 120

atagtggatc atacgtatga tgcagttgtg gttggtgctg gtggtgcggg gctgagagca 180

gccattggtc tttcagagca tggatttaat actgcttgca taactaagct tttcccaact 240

cgttcacata ctgttgcggc tcagggtggc ataaatgctg ctttgggaaa tatgactgaa 300

gatgactggc gatggcacat gtatgacaca gttaaaggaa gtgattggtt aggtgatcag 360

gatgcaattc aatatatgtg cagggaggca ccaaaagccg tgattgaact cgagaattat 420

gggctgcctt tttctcgaac agaagatggg aaaatatatc agagagcatt tggtggtcaa 480

agccttgact ttggaaaagg tggacaggct tatcgttgtg catgtgctgc tgatcgaaca 540

gggcatgctc tactgcacac tctctatggc caagctatga aacataatac ccaattcttt 600

gtggaatatt ttgctttgga tctattgatg aacagcaatg gtagctgcca gggagtgata 660

gctttaaaca tggaggacgg aacactacat cgcttccagg cttcttcaac aattctggcc 720

actgggggat atggtagaac ctacttttct gcaacttcag ctcacacatg cactggtgat 780

ggcaatgcta tggttgcacg tgctgggctt cccctccagg atttggagtt tgtgcagttc 840

catccaactg gaatctatgg ggctgggtgc ctcattactg aagggtctcg tggtgaaggt 900

ggcatcctta gaaatagtga aggtgaacgc tttatggaac ggtatgctcc tacagccaag 960

gatcttgctt caagggatgt tgtttcgaga tctatgacca tggaaatcag ggaaggtcgt 1020

ggtgtaggac ctttgaagga tcatatctat ctccacttga atcacttgcc tccagaggtg 1080

cttaaggaga ggcttccagg tatctctgag actgctgcca tttttgctgg tgtggatgtt 1140

acaaaggagc ccatcccagt cttgcctact gtacattata acatgggtgg aattccaaca 1200

aatcatcatg gagaggtagt tactatcaga ggcagtgatc cagattctgt ggttcctgga 1260

ctgatggctg ctggagaggc agcctgtgca tcagttcatg gtgctaatcg gttgggtgca 1320

aattcccttc ttgacattgt cgtctttggt cgggcttgtg caaaccgagt tgcagagatc 1380

caaaggccag gcaagctgtg gcagaagcag aaacctttgg aaaaggatgc tggtgagaga 1440

acaattgcat ggttagacaa aataagaaat tctaatggtt ctcttccaac ttcaaacatt 1500

cgattaaata tgcaacgagt aatgcaaaac aatgctgctg ttttccgcac acaggaaaca 1560

ctagaggaag gttgtcagtt aattgataag acatgggaaa gcttccatga tgttaagttg 1620

aaggatcgca gtttaatatg gaactctgat ttgatagaat ctatcgagtt ggaaaatctt 1680

ttgataaatg cctgtatcac catgcactcc gctgaagcta ggaaagagag cagaggagca 1740

catgctcgtg aagattttac gaaaagagat gatgagaact ggatgaaaca cacattgggt 1800

ttttgggaga atgagaaggt gagactggat taccggccag ttcacatgaa cacattagat 1860

gatgaagttg agtcattccc acctaaagct cgtgtctatt aa 1902

<210> 2

<211> 633

<212> PRT

<213> 棉花(Gossypium spp)

<400> 2

Met Trp Arg Cys Val Ser Arg Ser Leu Arg Val Pro Tyr Ser Asn Arg

1 5 10 15

Ser Val Ala Ala Asn Ser Leu Arg Ser Asn Ile Ser Ser Phe Phe Ser

20 25 30

Thr His Ala Gly Ser Pro Tyr Thr Ile Val Asp His Thr Tyr Asp Ala

35 40 45

Val Val Val Gly Ala Gly Gly Ala Gly Leu Arg Ala Ala Ile Gly Leu

50 55 60

Ser Glu His Gly Phe Asn Thr Ala Cys Ile Thr Lys Leu Phe Pro Thr

65 70 75 80

Arg Ser His Thr Val Ala Ala Gln Gly Gly Ile Asn Ala Ala Leu Gly

85 90 95

Asn Met Thr Glu Asp Asp Trp Arg Trp His Met Tyr Asp Thr Val Lys

100 105 110

Gly Ser Asp Trp Leu Gly Asp Gln Asp Ala Ile Gln Tyr Met Cys Arg

115 120 125

Glu Ala Pro Lys Ala Val Ile Glu Leu Glu Asn Tyr Gly Leu Pro Phe

130 135 140

Ser Arg Thr Glu Asp Gly Lys Ile Tyr Gln Arg Ala Phe Gly Gly Gln

145 150 155 160

Ser Leu Asp Phe Gly Lys Gly Gly Gln Ala Tyr Arg Cys Ala Cys Ala

165 170 175

Ala Asp Arg Thr Gly His Ala Leu Leu His Thr Leu Tyr Gly Gln Ala

180 185 190

Met Lys His Asn Thr Gln Phe Phe Val Glu Tyr Phe Ala Leu Asp Leu

195 200 205

Leu Met Asn Ser Asn Gly Ser Cys Gln Gly Val Ile Ala Leu Asn Met

210 215 220

Glu Asp Gly Thr Leu His Arg Phe Gln Ala Ser Ser Thr Ile Leu Ala

225 230 235 240

Thr Gly Gly Tyr Gly Arg Thr Tyr Phe Ser Ala Thr Ser Ala His Thr

245 250 255

Cys Thr Gly Asp Gly Asn Ala Met Val Ala Arg Ala Gly Leu Pro Leu

260 265 270

Gln Asp Leu Glu Phe Val Gln Phe His Pro Thr Gly Ile Tyr Gly Ala

275 280 285

Gly Cys Leu Ile Thr Glu Gly Ser Arg Gly Glu Gly Gly Ile Leu Arg

290 295 300

Asn Ser Glu Gly Glu Arg Phe Met Glu Arg Tyr Ala Pro Thr Ala Lys

305 310 315 320

Asp Leu Ala Ser Arg Asp Val Val Ser Arg Ser Met Thr Met Glu Ile

325 330 335

Arg Glu Gly Arg Gly Val Gly Pro Leu Lys Asp His Ile Tyr Leu His

340 345 350

Leu Asn His Leu Pro Pro Glu Val Leu Lys Glu Arg Leu Pro Gly Ile

355 360 365

Ser Glu Thr Ala Ala Ile Phe Ala Gly Val Asp Val Thr Lys Glu Pro

370 375 380

Ile Pro Val Leu Pro Thr Val His Tyr Asn Met Gly Gly Ile Pro Thr

385 390 395 400

Asn His His Gly Glu Val Val Thr Ile Arg Gly Ser Asp Pro Asp Ser

405 410 415

Val Val Pro Gly Leu Met Ala Ala Gly Glu Ala Ala Cys Ala Ser Val

420 425 430

His Gly Ala Asn Arg Leu Gly Ala Asn Ser Leu Leu Asp Ile Val Val

435 440 445

Phe Gly Arg Ala Cys Ala Asn Arg Val Ala Glu Ile Gln Arg Pro Gly

450 455 460

Lys Leu Trp Gln Lys Gln Lys Pro Leu Glu Lys Asp Ala Gly Glu Arg

465 470 475 480

Thr Ile Ala Trp Leu Asp Lys Ile Arg Asn Ser Asn Gly Ser Leu Pro

485 490 495

Thr Ser Asn Ile Arg Leu Asn Met Gln Arg Val Met Gln Asn Asn Ala

500 505 510

Ala Val Phe Arg Thr Gln Glu Thr Leu Glu Glu Gly Cys Gln Leu Ile

515 520 525

Asp Lys Thr Trp Glu Ser Phe His Asp Val Lys Leu Lys Asp Arg Ser

530 535 540

Leu Ile Trp Asn Ser Asp Leu Ile Glu Ser Ile Glu Leu Glu Asn Leu

545 550 555 560

Leu Ile Asn Ala Cys Ile Thr Met His Ser Ala Glu Ala Arg Lys Glu

565 570 575

Ser Arg Gly Ala His Ala Arg Glu Asp Phe Thr Lys Arg Asp Asp Glu

580 585 590

Asn Trp Met Lys His Thr Leu Gly Phe Trp Glu Asn Glu Lys Val Arg

595 600 605

Leu Asp Tyr Arg Pro Val His Met Asn Thr Leu Asp Asp Glu Val Glu

610 615 620

Ser Phe Pro Pro Lys Ala Arg Val Tyr

625 630

Claims

1.棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的应用，其中，基因GhSDH1-1的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

2.棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1在防治棉花黄萎病方面的应用，其中，基因GhSDH1-1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1在培育棉花黄萎病抗性品种方面的应用，其中，基因GhSDH1-1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.提高棉花对黄萎病抗病性的方法，其特征在于，所述方法包括在棉花中过表达棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1的步骤，其中，基因GhSDH1-1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

5.根据权利要求4所述的提高棉花对黄萎病抗病性的方法，其特征在于，所述方法还包括使用水杨酸和/或茉莉酸促进棉花黄萎病抗性相关基因GhSDH1-1表达的步骤。