CN110923189A - 一种多种溶剂液态分离相的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多种溶剂液态分离相的制备方法，包括以下步骤：步骤一，溶剂基体的制备：将15‑25份的二亚苄基山梨醇加入到50‑60份的乙醇溶剂中，然后以100‑200r/min的低转速进行搅拌20‑30min，随后再加入5‑10份的改性的纳米二氧化硅，继续以300‑500r/min的转速进行搅拌15‑25min，搅拌结束，再加入4‑10份的聚乙二醇，继续搅拌20‑30min，得到溶剂基体。本发明溶剂基体采用二亚苄基山梨醇、乙醇溶剂作为常规的分离溶剂，向其中加入的聚乙二醇增强溶剂的分散性，加入的纳米二氧化硅本身比表面积大，能够提高与细胞的承载效果。
Description
技术领域
本发明涉及细胞分离技术领域，具体涉及一种多种溶剂液态分离相的制备方法。
背景技术
大豆通称黄豆。豆科大豆属一年生草本，高30-90厘米。茎粗壮，直立，密被褐色长硬毛。叶通常具3小叶；托叶具脉纹，被黄色柔毛；叶柄长2-20厘米；小叶宽卵形，纸质；总状花序短的少花，长的多花；总花梗通常有5-8朵无柄、紧挤的花；苞片披针形，被糙伏毛；小苞片披针形，被伏贴的刚毛；花萼披针形，花紫色、淡紫色或白色，基部具瓣柄，翼瓣蓖状。
细胞分离技术需要应用到分离相溶剂，而现有技术中采用液态分离相的溶剂来促进细胞分离效果还不是很好，因而仍需进一步改善处理。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多种溶剂液态分离相的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种多种溶剂液态分离相的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶剂基体的制备：将15-25份的二亚苄基山梨醇加入到50-60份的乙醇溶剂中，然后以100-200r/min的低转速进行搅拌20-30min，随后再加入5-10份的改性的纳米二氧化硅，继续以300-500r/min的转速进行搅拌15-25min，搅拌结束，再加入4-10份的聚乙二醇，继续搅拌20-30min，得到溶剂基体；
步骤二，固态助剂的制备：将琼脂糖、琼脂、明胶先加入到黑枸杞提取剂中进行超声分散20-30min，超声功率为100-200W，随后再加入葡萄糖溶液，继续以120-140r/min的转速搅拌20-30min，搅拌结束，得到固态助剂；
步骤三，分离助剂的制备：将醋酸钾与十二烷基硫酸钠按照重量比1:2加入到反应瓶中，采用超声振荡的方法处理10-20min，得到分离助剂；
步骤四，多溶剂液态分离相的制备：将步骤一制备的溶剂基体、步骤二制备的固态助剂、步骤三制备的分离助剂依次加入到搅拌器中进行搅拌，搅拌转速为100-200r/min，搅拌10-20min，然后再升至500-700r/min的转速继续搅拌20-30min，得到多溶剂液态分离相。
优选地，所述改性的纳米二氧化硅的改性方法为：将纳米二氧化硅在采用高温活化，然后再采用等离子辐照处理，辐照结束，再置于分散剂中超声分散10-20min，超声功率为300-400W，超声结束，离子、干燥，即可。
优选地，所述高温活化的温度为700-1000℃，高温时间为45-55min。
优选地，所述高温活化的温度为850℃，高温时间为50min。
优选地，所述等离子辐照处理的功率为500-1000W，辐照时间为10-20min。
优选地，所述等离子辐照处理的功率为750W，辐照时间为15min。
优选地，所述分散剂的制备方法为将柠檬酸钠加入到稀土氯化镧溶液中进行搅拌20-30min，搅拌转速为500-900r/min，然后再加入磷酸调节pH至5.0-6.0，即可。
优选地，所述黑枸杞提取剂的制备方法为将黑枸杞先采用紫外照射20-30min，照射功率为1000-2000W，随后再置于100℃的水中进行超声分散处理，超声功率为200-300W，超声20min后结束，得到黑枸杞提取剂。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明溶剂基体采用二亚苄基山梨醇、乙醇溶剂作为常规的分离溶剂，向其中加入的聚乙二醇增强溶剂的分散性，加入的纳米二氧化硅本身比表面积大，能够提高与细胞的承载效果，从而提高两者细胞的分离效果，加入的固态助剂可满足细胞分离时的能量，从而加快细胞分离效果，分离助剂的加入促进溶剂本身的溶解性，从而更易与细胞融合。
(2)纳米二氧化硅改性采用高温活化、等离子辐照处理、再置于分散剂分散，采用三种操作方法来提高纳米二氧化硅的活性，进而提高细胞的承载能力，固态助剂中加入的黑枸杞提取剂，目的是进一步提高溶剂内的能量，从而保证细胞的分离效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本实施例的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶剂基体的制备：将15份的二亚苄基山梨醇加入到50份的乙醇溶剂中，然后以100r/min的低转速进行搅拌20min，随后再加入5份的改性的纳米二氧化硅，继续以300r/min的转速进行搅拌15min，搅拌结束，再加入4份的聚乙二醇，继续搅拌20min，得到溶剂基体；
步骤二，固态助剂的制备：将琼脂糖、琼脂、明胶先加入到黑枸杞提取剂中进行超声分散20min，超声功率为100W，随后再加入葡萄糖溶液，继续以120r/min的转速搅拌20min，搅拌结束，得到固态助剂；
步骤三，分离助剂的制备：将醋酸钾与十二烷基硫酸钠按照重量比1:2加入到反应瓶中，采用超声振荡的方法处理10min，得到分离助剂；
步骤四，多溶剂液态分离相的制备：将步骤一制备的溶剂基体、步骤二制备的固态助剂、步骤三制备的分离助剂依次加入到搅拌器中进行搅拌，搅拌转速为100r/min，搅拌10min，然后再升至500r/min的转速继续搅拌20min，得到多溶剂液态分离相。
优选地，所述改性的纳米二氧化硅的改性方法为：将纳米二氧化硅在采用高温活化，然后再采用等离子辐照处理，辐照结束，再置于分散剂中超声分散10-20min，超声功率为300-400W，超声结束，离子、干燥，即可。
本实施例的高温活化的温度为700℃，高温时间为45min。
本实施例的等离子辐照处理的功率为500W，辐照时间为10min。
本实施例的分散剂的制备方法为将柠檬酸钠加入到稀土氯化镧溶液中进行搅拌20min，搅拌转速为500r/min，然后再加入磷酸调节pH至5.0，即可。
本实施例的黑枸杞提取剂的制备方法为将黑枸杞先采用紫外照射20min，照射功率为1000W，随后再置于100℃的水中进行超声分散处理，超声功率为200W，超声20min后结束，得到黑枸杞提取剂。
实施例2：
本实施例的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶剂基体的制备：将25份的二亚苄基山梨醇加入到60份的乙醇溶剂中，然后以200r/min的低转速进行搅拌30min，随后再加入10份的改性的纳米二氧化硅，继续以500r/min的转速进行搅拌25min，搅拌结束，再加入10份的聚乙二醇，继续搅拌30min，得到溶剂基体；
步骤二，固态助剂的制备：将琼脂糖、琼脂、明胶先加入到黑枸杞提取剂中进行超声分散30min，超声功率为200W，随后再加入葡萄糖溶液，继续以140r/min的转速搅拌30min，搅拌结束，得到固态助剂；
步骤三，分离助剂的制备：将醋酸钾与十二烷基硫酸钠按照重量比1:2加入到反应瓶中，采用超声振荡的方法处理20min，得到分离助剂；
步骤四，多溶剂液态分离相的制备：将步骤一制备的溶剂基体、步骤二制备的固态助剂、步骤三制备的分离助剂依次加入到搅拌器中进行搅拌，搅拌转速为200r/min，搅拌20min，然后再升至700r/min的转速继续搅拌30min，得到多溶剂液态分离相。
优选地，所述改性的纳米二氧化硅的改性方法为：将纳米二氧化硅在采用高温活化，然后再采用等离子辐照处理，辐照结束，再置于分散剂中超声分散20min，超声功率为400W，超声结束，离子、干燥，即可。
本实施例的高温活化的温度为1000℃，高温时间为55min。
本实施例的等离子辐照处理的功率为1000W，辐照时间为10min。
本实施例的分散剂的制备方法为将柠檬酸钠加入到稀土氯化镧溶液中进行搅拌30min，搅拌转速为900r/min，然后再加入磷酸调节pH至6.0，即可。
本实施例的黑枸杞提取剂的制备方法为将黑枸杞先采用紫外照射30min，照射功率为2000W，随后再置于100℃的水中进行超声分散处理，超声功率为300W，超声20min后结束，得到黑枸杞提取剂。
实施例3：
本实施例的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，溶剂基体的制备：将20份的二亚苄基山梨醇加入到55份的乙醇溶剂中，然后以150r/min的低转速进行搅拌25min，随后再加入7.5份的改性的纳米二氧化硅，继续以400r/min的转速进行搅拌20min，搅拌结束，再加入7份的聚乙二醇，继续搅拌20-30min，得到溶剂基体；
步骤二，固态助剂的制备：将琼脂糖、琼脂、明胶先加入到黑枸杞提取剂中进行超声分散25min，超声功率为150W，随后再加入葡萄糖溶液，继续以130r/min的转速搅拌25min，搅拌结束，得到固态助剂；
步骤三，分离助剂的制备：将醋酸钾与十二烷基硫酸钠按照重量比1:2加入到反应瓶中，采用超声振荡的方法处理15min，得到分离助剂；
步骤四，多溶剂液态分离相的制备：将步骤一制备的溶剂基体、步骤二制备的固态助剂、步骤三制备的分离助剂依次加入到搅拌器中进行搅拌，搅拌转速为150r/min，搅拌15min，然后再升至600r/min的转速继续搅拌25min，得到多溶剂液态分离相。
优选地，所述改性的纳米二氧化硅的改性方法为：将纳米二氧化硅在采用高温活化，然后再采用等离子辐照处理，辐照结束，再置于分散剂中超声分散15min，超声功率为350W，超声结束，离子、干燥，即可。
本实施例的高温活化的温度为850℃，高温时间为50min。
本实施例的等离子辐照处理的功率为750W，辐照时间为15min。
本实施例的分散剂的制备方法为将柠檬酸钠加入到稀土氯化镧溶液中进行搅拌25min，搅拌转速为700r/min，然后再加入磷酸调节pH至5.5，即可。
本实施例的黑枸杞提取剂的制备方法为将黑枸杞先采用紫外照射25min，照射功率为1500W，随后再置于100℃的水中进行超声分散处理，超声功率为250W，超声20min后结束，得到黑枸杞提取剂。
实施例1-3性能测试结果如下
| 细胞分离程度(％) | |
| 实施例1 | 95.3 |
| 实施例2 | 93.4 |
| 实施例3 | 94.2 |
从实施例1-3得出，本发明实施例3的细胞分离程度均达到90％以上，且实施例3的细胞分离程度可达到94.2％。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (8)
1.一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，溶剂基体的制备：将15-25份的二亚苄基山梨醇加入到50-60份的乙醇溶剂中，然后以100-200r/min的低转速进行搅拌20-30min，随后再加入5-10份的改性的纳米二氧化硅，继续以300-500r/min的转速进行搅拌15-25min，搅拌结束，再加入4-10份的聚乙二醇，继续搅拌20-30min，得到溶剂基体；
步骤二，固态助剂的制备：将琼脂糖、琼脂、明胶先加入到黑枸杞提取剂中进行超声分散20-30min，超声功率为100-200W，随后再加入葡萄糖溶液，继续以120-140r/min的转速搅拌20-30min，搅拌结束，得到固态助剂；
步骤三，分离助剂的制备：将醋酸钾与十二烷基硫酸钠按照重量比1:2加入到反应瓶中，采用超声振荡的方法处理10-20min，得到分离助剂；
步骤四，多溶剂液态分离相的制备：将步骤一制备的溶剂基体、步骤二制备的固态助剂、步骤三制备的分离助剂依次加入到搅拌器中进行搅拌，搅拌转速为100-200r/min，搅拌10-20min，然后再升至500-700r/min的转速继续搅拌20-30min，得到多溶剂液态分离相。
2.根据权利要求1所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述改性的纳米二氧化硅的改性方法为：将纳米二氧化硅在采用高温活化，然后再采用等离子辐照处理，辐照结束，再置于分散剂中超声分散10-20min，超声功率为300-400W，超声结束，离子、干燥，即可。
3.根据权利要求1所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述高温活化的温度为700-1000℃，高温时间为45-55min。
4.根据权利要求3所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述高温活化的温度为850℃，高温时间为50min。
5.根据权利要求1所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述等离子辐照处理的功率为500-1000W，辐照时间为10-20min。
6.根据权利要求5所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述等离子辐照处理的功率为750W，辐照时间为15min。
7.根据权利要求2所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述分散剂的制备方法为将柠檬酸钠加入到稀土氯化镧溶液中进行搅拌20-30min，搅拌转速为500-900r/min，然后再加入磷酸调节pH至5.0-6.0，即可。
8.根据权利要求1所述的一种多种溶剂液态分离相的制备方法，其特征在于，所述黑枸杞提取剂的制备方法为将黑枸杞先采用紫外照射20-30min，照射功率为1000-2000W，随后再置于100℃的水中进行超声分散处理，超声功率为200-300W，超声20min后结束，得到黑枸杞提取剂。
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