CN110917408A - 一种具有抑菌作用的引导组织再生膜及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种具有抑菌作用的引导组织再生膜及其制备方法，该引导组织再生膜是由抑菌药物奥硝唑、药物载体聚乳酸‑羟基乙酸共聚物以及成膜材料羊毛角蛋白构建而成。本发明采用高压静电纺丝法，将抗菌药物奥硝唑与合成高分子化合物PLGA及天然成分羊毛角蛋白复合，构建了理化性能优良、能缓释奥硝唑、细胞相容性好以及具有抑菌作用的复合引导组织再生膜。该复合膜不仅可以阻挡来自周围组织的成纤维细胞向缺损区内迁移，使牙周膜细胞优先在牙根面迁移、附着、增殖和分化，从而诱导牙周组织的再生；而且可以在术后7天内发挥抑菌作用，防止由细菌引起的术后感染的发生，保证组织再生的效果。本发明的引导组织再生膜其制备方法简单，成膜条件温和，具有良好的细胞相容性和抑菌性能，符合生物体内应用的要求，作为一种有抑菌作用的生物膜具有良好的应用前景。

Description

一种具有抑菌作用的引导组织再生膜及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种具有抑菌作用的引导组织再生膜及其制备方法。
背景技术
牙周病是一种可引起牙齿支持组织（牙龈、牙周膜、牙槽骨和牙骨质）的破坏，最终导致牙齿松动脱落的慢性、非特异性、感染性疾病。它是人类最常见的口腔疾病之一，也是成年人牙齿缺失的首要病因。牙周病不仅会影响口腔健康，对全身健康也有一定的影响。
牙周病治疗的目标一是阻止的疾病进展，二是使丧失的牙周组织再生。其中实现牙周组织的再生是治疗成功的关键。传统的治疗方法如刮治、根面平整及植骨术等都只能恢复部分牙周组织的结构并会残留牙周袋，难以实现牙周组织的完全再生，而牙周引导组织再生术(Guided Tissue Regeneration，GTR)为解决这一难题带来了希望。牙周引导组织再生术是利用GTR膜的物理屏障作用，将不同类型的组织隔离开，使牙周膜细胞优先在牙根面迁移、附着、增殖和分化，从而诱导牙周组织的再生。
尽管大量的随机对照临床试验和病例报告研究等都已证实GTR技术对于牙周和骨缺损再生修复的疗效是肯定的，但其仍然存在着失败的风险或者不能达到预期的目标。由细菌引起的术后感染，目前被认为是GTR失败的主要原因。
众所周知，GTR术中，GTR膜材料是这项技术的关键，直接影响到最终的修复效果。但是，单纯的GTR膜只是起到了机械性阻挡和隔离作用，缺乏抑菌的能力。因此，如能将GTR膜材料进行合理的修饰或改性，与抗菌药物结合，改善GTR膜材料的性能，有望解决以上提到的目前GTR术存在的问题。
一般来说，理想的GTR膜应具备以下几个特点：(1)能满足GTR的基本要求，即有效地抑制上皮细胞和结缔组织细胞的移动，促进牙周膜细胞生长；(2)具有良好的生物相容性和细胞亲和性，同时无细胞毒性及免疫原性；(3)在体内可降解，降解产物对组织无副作用，降解速率可调节，并与组织再生速率相协调；(4)加工性能好，易塑形，具有一定的机械强度、柔韧性和外科手术可操作性。
由于单一材料一般都存在一些不足，很难满足理想的GTR材料所要求的特性，所以可以通过合适的方法将几种单一材料复合，形成复合材料，取长补短，以期解决较理想的GTR材料的问题。越来越多的研究人员也开始研究复合膜，制备满足不同组织再生需求的理想的引导组织再生膜。比如，合成材料可以容易地加工成不同的形态和结构，设计制造过程中能对材料的许多性能进行控制，包括机械强度、亲水性、降解速率等。与之相比，天然材料不易加工，物理性能受限，但天然材料具有特殊的生物活性，并且通常不易引发受体的免疫排斥反应。因此实现材料优化设计的途径之一，是将合成材料与天然成分复合在一起形成复合材料，这对于构建较理想的GTR膜具有重要作用。
目前，以Bio-Gide为主要代表的胶原膜在国外得到广泛应用，由于价格昂贵，在国内尚难大量使用，而国内生产的引导组织再生膜存在工艺复杂、价格高、不利于细胞生长增殖及组织修复以及成骨效果不稳定等缺陷。此外，国内外绝大多数GTR膜没有抑菌作用。因此，研制开发一种理想的具有抑菌作用的GTR膜材料势在必行。
发明内容
本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种具有抑菌作用的引导组织再生膜；
本发明的另一目的是提供上述引导组织再生膜的制备方法。
为实现本发明目的所采取的技术方案为：
一种具有抑菌作用的引导组织再生膜，其特征在于该引导组织再生膜中是由抗菌药物奥硝唑、药物载体聚乳酸-羟基乙酸共聚物以及成膜材料羊毛角蛋白构建而成。
所述引导组织再生膜中，奥硝唑含量1～5%，聚乳酸－羟基乙酸共聚物含量 15～20%，羊毛角蛋白1.0%～1.5% ，上述成分以质量体积计，其溶剂为三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液。
上述具有抑菌作用的引导组织再生膜的制备方法，其特征在于其工艺步骤为：
1）纺丝液制备：将药物载体聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂中，然后依次加入成膜材料羊毛角蛋白和抗菌药物奥硝唑，充分搅拌并超声震荡，作为纺丝液备用；
2）复合膜制备：将纺丝液采用静电纺丝技术复合成纤维复合膜。
所述三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂配比为8:2～5:5。
所述超声震荡30～60min。
所述静电纺丝技术参数为：电压15～20 kV，接收距离14 ～16cm，流量0.025～0.04mL/min。
奥硝唑(Ornidazole)是一种第三代新型硝基咪唑类衍生物，具有耐受性好、不良反应小、药效持久等特点，并且对绝大多数厌氧菌均有较强的抑制杀灭作用，可以有效消除口腔内细菌对组织再生创面的感染，维持一个有利的愈合环境。
本发明依据材料优化设计的思想，利用高压静电纺丝技术,以奥硝唑为抑菌药物、聚乳酸-羟基乙酸共聚物为药物载体、羊毛角蛋白为成膜材料构建了理化性能优良、能缓释奥硝唑、细胞相容性好以及具有抑菌作用的载奥硝唑的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA]/羊毛角蛋白复合GTR膜，该复合膜不仅可以阻挡来自周围组织的成纤维细胞向缺损区内迁移，使牙周膜细胞优先在牙根面迁移、附着、增殖和分化，从而诱导牙周组织的再生；而且可以在术后7天内发挥抑菌作用，防止由细菌引起的术后感染的发生，保证组织再生的效果。
本发明的引导组织再生膜其制备方法简单，成膜条件温和，具有良好的细胞相容性和抑菌性能，符合生物体内应用的要求，作为一种有抑菌作用的生物膜具有良好的应用前景。
本发明为具有药物缓释功能的抑菌引导组织再生膜的开发以及牙周病的再生治疗提供实验基础和理论依据。且将来组织工程的发展方向必将与材料学、药物学、分子生物学、细胞学、基因学及多种技术结合。通过与本发明综合应用，且未来如果将类似的药物缓释系统能够研制成功，并且能够做成生物支架的形式，对以后多功能组织工程支架的构建与应用将会提供更广阔的前景。
以下是针对本发明载奥硝唑的聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA]/羊毛角蛋白复合GTR膜的表面形貌、理化性能、包封率、药物体外释放行为、细胞毒性及体外抑菌性能的检测试验。
一、载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜的制备、理化性能表征及药物体外释放行为检测
（1）主要试剂
聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）（中国，济南岱罡生物），羊毛角蛋白（中国，广州禾大），奥硝唑（中国，大连美仑）。
（2）仪器与设备 静电纺丝机（中国，永康乐业），X射线衍射仪（日本，Rigaku），s-3400N扫描电子显微镜（日本，HITACHI），傅里叶变换红外光谱仪（美国，Nicolet），高效液相色谱仪（日本，HITACHI）。
（3）实验方法
① 静电纺丝法制备载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜
纺丝液制备：将PLGA溶解在三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂（比例8:2-5:5）中，配置成15～20% w/v的PLGA溶液，加入1.0%～1.5% w/v的羊毛角蛋白，充分搅拌，然后分别加入含量为1～5% w/v的奥硝唑，充分搅拌并超声震荡60min，作为纺丝液备用。
复合膜制备：采用静电纺丝技术成膜，具体过程为，将纺丝液装入注射器，将一个7号金属针头尖端磨平并与注射器相连，将注射器安放在螺杆驱动器上，同时使注射器的金属针头与高压电源相连。开启螺杆驱动器电源，装有纺丝液的注射器便由螺杆驱动器推动并控制流量，纺丝液供给到喷丝头（针头）然后流入形成滴液。开启高压静电发生器电源，喷丝头上即加载了高压静电，电压到达一定值时，纺丝液射流即从喷丝头中喷出，开始静电纺丝。电纺参数为：电压15～20 kV，接收距离14～16cm，流量0.025～0.04mL/min。在高压静电纺丝过程中，具有三维结构的载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白超细纤维不断沉积在接收装置上形成纤维复合膜。纺丝结束后，即可制备得到载奥硝唑PLGA/羊毛角蛋白复合膜。
② 表面形貌、理化性能表征
用扫描电子显微镜检测载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜的表面形貌。用X射线衍射仪观察复合膜的晶态结构。管压40kV，管流30mA，扫描速率8°/min，扫描范围为3～60°。用傅里叶变换红外光谱仪分析复合膜在4000cm-1到400cm-1区间的红外光谱图。将复合膜分别剪成18mm×18mm大小，每组3个样品，称重并编号。将样品放在37℃水浴的磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer saline，PBS)中，共16周。PBS液每周更换一次。在预定的时间（2、4、6、8、12、16周）将样品取出，蒸馏水清洗、干燥、称重，计算不同时间段复合膜的失重率。
③ 包封率
称取10mg的奥硝唑，完全溶于1ml二甲基亚砜中，加甲醇定容到10ml进行萃取，超声震荡2h，离心吸出上清，上清液用0.22um过滤器过滤后，在318nm处进行高效液相法检测，绘制奥硝唑标准曲线（c18柱，水：甲醇=40:60）奥硝唑吸收峰。
准确称量10mg载药复合膜，加入1ml 二甲基亚砜，超声震荡直至复合膜完全溶解，甲醇加至10ml，超声震荡（昆山，超声有限公司）2h后离心取上清液，上清液用0.22um过滤器过滤后，使用高效液相色谱仪检测奥硝唑载318nm处的吸收峰，通过标准曲线得到奥硝唑的含量。分别利用公式算出包封率，每组膜3个样品，结果取平均值。
包封率(%)＝纤维膜中实际药物量(mg)/纤维膜中理论药物量(mg)×100%
④ 药物释放
准确称量10mg复合膜，每组复合膜取3个样品，放入5ml PBS液中，密封，在37℃恒温振荡器中震荡。第4h、12h、24h、2d、7d时各取出1ml浸泡液测高效液相，余下液体吸出后，重新加入5ml新鲜的PBS溶液，继续置于37℃恒温振荡器中震荡。通过标准曲线绘出不同时间不同样品释放的药物浓度，取检测结果的平均值，做出药物释放曲线。
⑤ 结果
扫描电子显微镜（scanning electron microscopy，SEM）结果（图1）显示，PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜可见微小的奥硝唑结晶体附着在纤维表面，纤维直径均匀。随着奥硝唑含量的增加，覆盖在纤维表面的奥硝唑结晶体数量和体积逐渐增加。PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜表面可见大块结晶体。
X射线衍射（X-ray diffraction，XRD）结果显示，奥硝唑在2θ=13.3°、15.8°、20.0°、20.8°、24.4°、25.2°、27.4°和30.2°均显示出高而窄特征峰。PLGA/羊毛角蛋白复合膜为非晶态，仅在2θ=18°附近有一个较宽的峰。PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜的XRD曲线均与PLGA/羊毛角蛋白复合膜相似，并没有出现奥硝唑的特征峰，分析可能是因为奥硝唑含量较少以及被包裹于纤维内部的原因。
红外光谱（Fourier transform infrared spectroscopy，FTIR）结果显示，奥硝唑粉末在655cm-1处出现碳氯伸缩振动峰，1191cm-1，1537cm-1处为碳氮双键伸缩振动峰，1269cm-1处为碳氮单键伸缩振动峰，1363cm-1左右为硝基伸缩振动峰，1470～1490cm-1区间的峰，主要由碳碳双键(C=C)的伸缩振动所引起，碳氢伸缩振动吸收峰在3126cm-1处。PLGA/羊毛角蛋白复合膜在约1752 cm-1处出现了C=O的伸缩振动峰。其它所观察到的明显的特征峰还有866 cm-1的C-C基团，1089 cm-1的 C-O-C基团，1130 cm-1的C-O基团，1186 cm-1的A型C-O-C基团，1267 cm-1的O-H基团，1451 cm-1 的C-H基团和2941cm-1的C-H2基团。PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜的红外光谱曲线与PLGA/羊毛角蛋白复合膜很相似，并没有出现奥硝唑的特征峰。
在12周内，随着时间的延长，复合膜失重率逐渐增加。第2周到第8周，PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜与PLGA/羊毛角蛋白复合膜的降解情况无差别。第8周时，三组复合膜的失重率均为25%左右。到第12周时，PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜的失重率大于PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜，达60%以上。16周时，三组复合膜的失重率均达到95%以上，基本完全降解。
PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜的包封率分别为59%和76%。
药物释放结果表明，4h时，PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜的药物累计释放百分率分别为82.49%，23.36%；12h时，奥硝唑的释放分别达到85.92%，30.01%；到24h时已达到88.21%，31.53%。第7d时，PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜的奥硝唑累计释放率达89.58%和30.05%。
二、载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜的细胞毒性检测
（1）主要试剂
DMEM/F-12培养基、PBS、胎牛血清（美国Hyclone），3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]细胞增殖-细胞毒性检测试剂盒。
（南京，凯基）。
（2）仪器与设备 s-3400N扫描电子显微镜（日本，HITACHI），CO2 培养箱(德国，Heraeus)。
（3）实验方法
① 细胞毒性检测
将本发明复合膜(每组复合膜，每个时间段n=3/孔）剪成直径为10mm的圆形，灭菌，然后放入24孔培养板中备用。将第4代hPDLFs细胞以1×105个/ml的密度接种于复合膜表面，每孔加入1ml。7天时，取出一块复合膜，吸去培养液，固定，脱水，干燥，喷金，扫描电镜观察细胞在复合膜表面生长的情况。
将第4代hPDLFs细胞以1×105个/ml的密度接种于铺好复合膜的24孔培养板中（每组复合膜，每个时间段n=3/孔），作为实验组，对照组将细胞按照相同密度接种于24孔板中，但不加复合膜。放入细胞培养箱培养，隔天换液。1、3、5、7天取出培养板，吸去培养液，每孔加入MTT（1mg/ml）500ul，37℃孵育4h，吸出上清液，每孔加入1000μl二甲基亚砜，摇床摇匀。用酶标仪测定波长550nm处吸光度（OD）值。
② 结果
SEM结果（图2）显示，7天时，PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜表面细胞未完全铺展，部分细胞仍呈梭形。PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜表面可见细胞已完全铺展，连接成片状，覆盖膜表面积达90%以上，说明这两种复合膜有利于细胞的粘附和增殖。
MTT结果（图3）显示，第1天至第7天时，载奥硝唑的复合膜吸光度均大于hPDLFs的吸光度，结果具有统计学差异（P<0.05）。说明PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜及PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜可促进hPDLFs的生长，有利于细胞的粘附和增殖。
三、载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜的抑菌性能检测
（1）主要试剂
血平板（广州，环凯），牙龈卟啉单胞菌（ATCC33277）、厌氧消化链球菌（ATCC27337）、具核梭杆菌（ATCC25586）（上海，复祥生物），厌氧产气包、厌氧发生指示条（美国， BD），厌氧培养盒（日本，三菱）。
（2）仪器与设备 细菌培养箱（广州，瑞丰），生物安全柜（美国，Labconco）。
（3）实验方法
① 抑菌性能检测
使用牙周病原菌牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg，ATCC33277）、具核梭杆菌（Fusobacterium nucleatum，Fn，ATCC25586）、厌氧消化链球菌（Peptostreptococcus anaerobius，Pa，ATCC27337）测试复合膜的抑菌性能。在血平板上37℃厌氧培养牙龈卟啉单胞菌，具核梭杆菌，厌氧消化链球菌。将载药复合膜剪成直径为4mm的圆形，消毒后备用。调整牙龈卟啉单胞菌，具核梭杆菌，厌氧消化链球菌三种细菌浓度至0.5麦氏单位，在无菌操作台内用无菌棉拭子蘸取配制好的菌液均匀涂抹于平板表面，3-5min后，将消毒好的载药复合膜均匀贴于平板表面（每组支架，每组细菌n=3/个），厌氧环境下37℃孵育，观察并测量抑菌直径。于3、7、14、21 天取出观察并测量抑菌圈直径，21天时拍照。
② 结果
针对三种细菌，奥硝唑含量为0%的PLGA/羊毛角蛋白复合膜所在的血平板长满细菌，说明其不具有抑菌作用，而PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜、PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜周围都出现了抑菌圈，且奥硝唑含量越高抑菌圈越大（图4、图5、图6）。这说明载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜对具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌及厌氧消化链球菌均有较好的抑菌能力，并且随着奥硝唑含量增加，抑菌作用越强。
表1载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜对Fn21天的抑菌圈直径(`x±s，n=3，cm)
天数（d） 3 7 14 21
PLGA/羊毛角蛋白复合膜 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00
PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜 39.40±1.25 39.21±1.93 39.12±2.22 39.12±1.27
PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜 52.74±3.85 52.11±2.72 52.41±2.58 52.86±3.14
表2载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜对Pg21天的抑菌圈直径(`x±s，n=3，cm)
天数（d） 3 7 14 21
PLGA/羊毛角蛋白复合膜 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00
PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜 37.49±0.63 38.16±0.66 38.24±0.65 38.31±0.73
PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜 61.24±6.92 62.89±7.38 63.07±6.46 62.72±6.36
表3载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜对Pa21天的抑菌圈直径(`x±s，n=3，cm)
天数（d） 3 7 14 21
PLGA/羊毛角蛋白复合膜 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00
PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜 38.660±3.38 38.54±3.87 38.54±4.41 38.39±3.82
PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜 54.98±2.50 54.78±2.18 57.55±4.65 57.36±2.91
附图说明
图 1为PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜（左）和PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜（右）的SEM图。
图 2为 hPDLFs在PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜（左）和PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜（右）培养7天SEM图。
图3为hPDLFs在载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白复合膜表面培养的MTT图。
图 4为PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜（左）和PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜（右）在Fn上21天的抑菌圈。
图5为PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜（左）和PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜（右）在Pg上21天的抑菌圈。
图6为PLGA/羊毛角蛋白/1%奥硝唑复合膜（左）和PLGA/羊毛角蛋白/5%奥硝唑复合膜（右）在Pa上21天的抑菌圈。
具体实施方式
本发明通过以下实施例进一步详述，但实施例所叙述的技术内容是说明性的，而不是限定性的，不应依此来局限本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1
纺丝液制备：将PLGA溶解在三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂（比例8:2-5:5）中，配置成15% （w/v）的PLGA溶液，加入羊毛角蛋白，其在溶液中浓度为1.5% （w/v），充分搅拌，然后加入奥硝唑，其在溶液中浓度3% （w/v），充分搅拌并超声震荡60min，作为纺丝液备用。
采用静电纺丝技术制备复合膜，具体过程为，将纺丝液装入注射器，将一个7号金属针头尖端磨平并与注射器相连，将注射器安放在螺杆驱动器上，同时使注射器的金属针头与高压电源相连。开启螺杆驱动器电源，装有纺丝液的注射器便由螺杆驱动器推动并控制流量，纺丝液供给到喷丝头（针头）然后流入形成滴液。开启高压静电发生器电源，喷丝头上即加载了高压静电，电压到达一定值时，纺丝液射流即从喷丝头中喷出，开始静电纺丝。电纺参数为：电压15～20 kV，接收距离14～16cm，流量0.025～0.04mL/min。在高压静电纺丝过程中，具有三维结构的载奥硝唑的PLGA/羊毛角蛋白超细纤维不断沉积在接收装置上形成纤维复合膜。纺丝结束后，即可制备得到载奥硝唑PLGA/羊毛角蛋白复合膜。
实施例2
纺丝液制备：将PLGA溶解在三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂（比例8:2-5:5）中，配置成20% （w/v）的PLGA溶液，加入羊毛角蛋白，其在溶液中浓度为1.2% （w/v），充分搅拌，然后加入奥硝唑，其在溶液中浓度5% （w/v），充分搅拌并超声震荡50min，作为纺丝液备用。
采用静电纺丝技术制备复合膜，具体过程同实施例1。
实施例3
纺丝液制备：将PLGA溶解在三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂（比例8:2-5:5）中，配置成16% （w/v）的PLGA溶液，加入羊毛角蛋白，其在溶液中浓度为1.0% （w/v），充分搅拌，然后加入奥硝唑，其在溶液中浓度1% （w/v），充分搅拌并超声震荡30min，作为纺丝液备用。
采用静电纺丝技术制备复合膜，具体过程同实施例1。

Claims (6)

1.一种具有抑菌作用的引导组织再生膜，其特征在于该引导组织再生膜中是由抗菌药物奥硝唑、药物载体聚乳酸-羟基乙酸共聚物以及成膜材料羊毛角蛋白构建而成。
2.按照权利要求1所述的具有抑菌作用的引导组织再生膜，其特征在于所述引导组织再生膜中，奥硝唑含量1～5%，聚乳酸－羟基乙酸共聚物含量 15～20%，羊毛角蛋白1.0%～1.5% ，上述成分以质量体积计，其溶剂为三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺的混合溶液。
3.一种如权利要求1或2所述的具有抑菌作用的引导组织再生膜的制备方法，其特征在于其工艺步骤为：
1）纺丝液制备：将药物载体聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂中，然后依次加入成膜材料羊毛角蛋白和抗菌药物奥硝唑，充分搅拌并超声震荡，作为纺丝液备用；
2）复合膜制备：将纺丝液采用静电纺丝技术复合成纤维复合膜。
4.按照权利要求3所述的具有抑菌作用的引导组织再生膜的制备方法，其特征在于所述三氯甲烷与N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂配比为8:2～5:5。
5.按照权利要求3所述的具有抑菌作用的引导组织再生膜的制备方法，其特征在于所述超声震荡30～60min。
6.按照权利要求3所述的具有抑菌作用的引导组织再生膜的制备方法，其特征在于所述静电纺丝技术参数为：电压15～20 kV，接收距离14 ～16cm，流量0.025～0.04mL/min。
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