CN110917359A - 离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球 - Google Patents

离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球 Download PDF

Info

Publication number
CN110917359A
CN110917359A CN201911149800.9A CN201911149800A CN110917359A CN 110917359 A CN110917359 A CN 110917359A CN 201911149800 A CN201911149800 A CN 201911149800A CN 110917359 A CN110917359 A CN 110917359A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peg
solution
rna
antagomir
pbla
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911149800.9A
Other languages
English (en)
Inventor
殷义霞
王文武
邵锜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan University of Technology WUT
Original Assignee
Wuhan University of Technology WUT
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan University of Technology WUT filed Critical Wuhan University of Technology WUT
Priority to CN201911149800.9A priority Critical patent/CN110917359A/zh
Publication of CN110917359A publication Critical patent/CN110917359A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于生物医用领域，具体涉及通过离子键自组装制备聚(乙二醇)‑b‑聚[N‑(5‑氨基戊基)‑α,β‑天冬酰胺]‑ANTAGOMIR‑RNA微球及其制备方法。本发明所述制备方法能够通过离子键作用进行自组装制备得到PEG‑P(Asp‑AP)‑ANTAGOMIR‑RNA微球，操作步骤简单，无设备要求，成本低，操作简单；本发明方法将ANTAGOMIR‑RNA通过离子键结合装入微球，避免了ANTAGOMIR‑RNA因为外界因素而失活或变性；所制备的微球能够通过离子键的结合与断键的原理，由于病灶部位病理微环境与正常组织存在差异，从而有望实现特异性刺激相应，在靶向治疗中有独特的优势和应用前景。

Description

离子键自组装制备PEG-P(Asp-AP)-ANTAGOMIR-RNA微球
技术领域
本发明属于生物医用领域，具体涉及通过离子键自组装制备聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球及其制备方法。
背景技术
生物活性大分子通常具有丰富的生命功能，但是它因易被体内环境广泛的RNA酶、DNA酶、蛋白酶等酶解、变性和氧化，限制了其在医用领域上的应用。MicroRNA是微小RNA的简称，是一类长度在19～25核苷酸的RNA，在人体的基因中大部分的表达都受到MicroRNA的调控。MicroRNA能够对细胞的分化、增殖、凋亡进行多种机制的调控，而在许多癌细胞中，已有文献证明MicroRNA处于正常表达之上，故认其为癌细胞的特征表达片段之一。
MicroRNA在抗癌领域方面，根据不同癌细胞的不同表达程度，被确认为可控阻碍片段，并通过实验证明使MicroRNA表达下降时，出现明显的抗癌效果。所以现在不少MicroRNA阻断剂都确认为有效特异性抗癌药物。
ANTAGOMIR-RNA是根据microRNA成熟体序列设计，经过特殊标记与化学修饰的单链小RNA，是专门用于抑制内源性microRNA的高效阻断剂，具有比普通MicroRNA阻断剂更加优异的亲细胞膜性能，而且可富集于靶向细胞，表现出高效的特异性稳定干扰，并拥有着长效性，效果最长可以持续五周左右。但是由于环境条件限制，该类阻断剂只能置于低温长期储存。
聚合物微球具有可调节核-壳结构，产生与外部环境隔离的特定空间或内核，该环境为保护生物活性大分子的活性，避免被酶解、被氧化等方面提供了条件。聚合物微球已经被设计用于细胞或细胞器模拟物，纳米/微反应器和药物的递送载体，除了简单的保护屏障之外，微球壳还具有作为通用储库的功能。两亲性嵌段共聚物微球，即聚合物微球，可以在其疏水膜中包含疏水性低分子量药物。然而，有效且稳定地嵌入生物活性大分子，特别是强亲水性或带电荷的生物活性大分子，仍是一个需要解决的难题，因为由于负载时所使用的物理或者化学方法使生物大分子易被氧化、被分解和变性等特征上限制了生物活性大分子能够嵌入共聚物中的种类，并且嵌入的生物活性大分子的量的增加更可能损害微球外壳的完整性，使微球的构成不稳定。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，目的在于提供通过离子键自组装制备聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球及其制备方法。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：
聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，包括如下步骤：
(1)将一定量的聚(乙二醇)-b-聚(β-苄基-L-天冬氨酸)(PEG-b-PBLA)溶解在N-甲基吡咯烷酮(NMP)中得到PEG-b-PBLA溶液；
(2)将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到NMP与1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1～2小时；随后冰浴条件下使用乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用HCl溶液、去离子水透析产物后，冻干，得到PEG-b-P(Asp-AP)；
(3)将PEG-b-P(Asp-AP)和ANTAGOMIR-RNA分别溶解于羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液中；通过涡旋混合将PEG-b-P(Asp-AP)溶液和ANTAGOMIR-RNA溶液混合均匀，得到前驱基底材料；
(4)将前驱基底材料与溶解在HEPES缓冲液的戊二醛(GA)溶液混合，置于25℃温育25分钟后，用甘氨酸淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。
上述方案中，所述聚(乙二醇)-b-聚(β-苄基-L-天冬氨酸)中，PEG的分子量Mn为2000～5000g/mol，PBLA的聚合度DP＝70～100。
上述方案中，所述PEG-b-PBLA与1,5-二氨基戊烷的质量体积比为100mg：2.7mL。
上述方案中，所述HCl溶液的浓度为0.01M～0.1M，透析袋截留分子量Mw＝3500～4000。
上述方案中，所述羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液的pH值为7.3～7.8之间。
上述方案中，所述PEG-b-P(Asp-AP)嵌段共聚物中的氨基与所述ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团的摩尔比为7:5～7:10。
上述方案中，所述前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比为5:2～5:4，其中剩余氨基是通过第(4)步中的投料比在理论中未反应的氨基来确定。
上述方案中，步骤(5)所述戊二醛(GA)充当交联剂的作用，溶液的浓度为10～15mM，所述甘氨酸的摩尔当量浓度为戊二醛(GA)溶液浓度的10倍。
本发明的有益效果：本发明所述制备方法能够通过离子键作用进行自组装制备得到PEG-P(Asp-AP)-ANTAGOMIR-RNA微球，操作步骤简单，无设备要求，成本低，操作简单；本发明方法将ANTAGOMIR-RNA通过离子键结合装入微球，避免了ANTAGOMIR-RNA因为外界因素而失活或变性；所制备的微球能够通过离子键的结合与断键的原理，由于病灶部位病理微环境与正常组织存在差异，从而有望实现特异性刺激相应，在靶向治疗中有独特的优势和应用前景。
附图说明
图1为本发明方法通过离子键结合制备PEG-P(Asp-AP)-ANTAGOMIR-RNA微球的原理示意图。
图2为本发明实施例1所制备的PEG-P(Asp-AP)-ANTAGOMIR-RNA微球80kv下透射电子显微镜(TEM)照片。
图3为本发明合成前驱体的化学式过程。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
实施例1
聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，包括如下步骤：
(1)将100mg冻干的PEG-b-PBLA溶解在5mL N-甲基吡咯烷酮(NMP)中得到PEG-b-PBLA溶液；将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到2.5mL NMP与2.7mL 1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1小时；完成搅拌后，在冰浴条件下使用14mL、20％(v/v)乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用0.01M HCl溶液透析产物(透析袋的截留分子量Mw为3500，透析36h)、用去离子水透析产物(透析袋的截留分子量Mw为3500，透析12h)后，冻干，得到PEG-b-P(Asp-AP)；
(2)将PEG-b-P(Asp-AP)和ANTAGOMIR-RNA分别以0.25～1.0mg/mL溶解于10mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.3)中，并通过0.22μm膜滤器过滤；通过涡旋混合将PEG-b-P(Asp-AP)嵌段共聚物溶液中的氨基和ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团以7：5的比例混合均匀，得到前驱基底材料；
(3)将前驱基底材料与溶解在10mM HEPES缓冲液(pH7.3)的戊二醛(GA)溶液混合，其中前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比为5：2，置于25℃温育25分钟后，随后用10摩尔当量于GA的甘氨酸在25℃处理24小时以淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。
实施例2
聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，包括如下步骤：
(1)将100mg冻干的PEG-b-PBLA溶解在5mL N-甲基吡咯烷酮(NMP)中得到PEG-b-PBLA溶液；将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到2.5mL NMP与2.7mL 1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1小时；完成搅拌后，在冰浴条件下使用14mL、20％(v/v)乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用0.01M HCl溶液透析产物(透析袋的截留分子量Mw为3500，透析36h)、用去离子水透析产物(透析袋的截留分子量Mw为3500，透析12h)后，冻干，得到PEG-b-P(Asp-AP)；
(2)将PEG-b-P(Asp-AP)和ANTAGOMIR-RNA分别以0.25～1.0mg/mL溶解于10mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.3)中，并通过0.22μm膜滤器过滤；通过涡旋混合将PEG-b-P(Asp-AP)嵌段共聚物溶液中的氨基和ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团以7：5的比例混合均匀，得到前驱基底材料；
(3)将前驱基底材料与溶解在10mM HEPES缓冲液(pH7.3)的戊二醛(GA)溶液混合，其中前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比为5：4，置于25℃温育25分钟后，随后用10摩尔当量于GA的甘氨酸在25℃处理24小时以淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。
实施例3
聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，包括如下步骤：
(1)将100mg冻干的PEG-b-PBLA溶解在5mL N-甲基吡咯烷酮(NMP)中得到PEG-b-PBLA溶液；将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到2.5mL NMP与2.7mL 1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1小时；完成搅拌后，在冰浴条件下使用14mL、20％(v/v)乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用0.01M HCl溶液透析产物(透析袋的截留分子量Mw为3500，透析36h)、用去离子水透析产物(透析袋的截留分子量Mw为3500，透析12h)后，冻干，得到PEG-b-P(Asp-AP)；
(2)将PEG-b-P(Asp-AP)和ANTAGOMIR-RNA分别以0.25～1.0mg/mL溶解于10mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.3)中，并通过0.22μm膜滤器过滤；通过涡旋混合将PEG-b-P(Asp-AP)嵌段共聚物溶液中的氨基和ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团以7：10的比例混合均匀，得到前驱基底材料；
(3)将前驱基底材料与溶解在10mM HEPES缓冲液(pH7.3)的戊二醛(GA)溶液混合，其中前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比5：2，置于25℃温育25分钟后，随后用10摩尔当量于GA的甘氨酸在25℃处理24小时以淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。
实施例4
聚(乙二醇)-b-聚[N-(5-氨基戊基)-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，包括如下步骤：
(1)将100mg冻干的PEG-b-PBLA溶解在5mL N-甲基吡咯烷酮(NMP)中得到PEG-b-PBLA溶液；将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到2.5mL NMP与2.7mL 1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1小时；完成搅拌后，在冰浴条件下使用14mL、20％(v/v)乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用0.01M HCl溶液透析产物(透析袋的透析分子量Mw为3500，透析36h)、用去离子水透析产物(透析袋的透析分子量Mw为3500，透析12h)后，冻干，得到PEG-b-P(Asp-AP)；
(2)将PEG-b-P(Asp-AP)和ANTAGOMIR-RNA分别以0.25～1.0mg/mL溶解于10mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)缓冲液(pH7.3)中，并通过0.22μm膜滤器过滤；通过涡旋混合将PEG-b-P(Asp-AP)嵌段共聚物溶液中的氨基和ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团以7:10比例混合均匀，得到前驱基底材料；
(3)将前驱基底材料与溶解在10mM HEPES缓冲液(pH7.3)的戊二醛(GA)溶液混合，其中前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比为5：4，置于25℃温育25分钟后，随后用10摩尔当量于GA的甘氨酸在25℃处理24小时以淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。

Claims (8)

1.聚（乙二醇）-b-聚[N-（5-氨基戊基）-α,β-天冬酰胺]-ANTAGOMIR-RNA微球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将一定量的聚（乙二醇）-b-聚（β-苄基-L-天冬氨酸）（PEG-b-PBLA）溶解在N-甲基吡咯烷酮（NMP）中得到PEG-b-PBLA溶液；
（2）将PEG-b-PBLA溶液逐滴添加到NMP与1,5-二氨基戊烷互溶溶液中，5℃条件下剧烈搅拌1~2小时；随后冰浴条件下使用乙酸中和反应所得混合物，再置于4℃条件下依次用HCl溶液、去离子水透析产物后，冻干，得到PEG-b-P（Asp-AP）；
（3）将PEG-b-P（Asp-AP）和ANTAGOMIR-RNA分别溶解于羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液中；通过涡旋混合将PEG-b-P（Asp-AP）溶液和ANTAGOMIR-RNA溶液混合均匀，得到前驱基底材料；
（4）将前驱基底材料与溶解在HEPES缓冲液的戊二醛（GA）溶液混合，置于25℃温育25分钟后，用甘氨酸淬灭过量的GA，得到PEG-b-PBLA-ANTAGOMIR-RNA微球。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚（乙二醇）-b-聚（β-苄基-L-天冬氨酸）中PEG的分子量Mn为2000~5000g/mol，PBLA的聚合度DP=70~100。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PEG-b-PBLA与1,5-二氨基戊烷的质量体积比为100mg：2.7mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述HCl溶液的浓度为0.01M~0.1M，透析袋截留分子量Mw=3500~4000。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）缓冲液的pH值为7.3~7.8之间。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述PEG-b-P（Asp-AP）嵌段共聚物中的氨基与所述ANTAGOMIR-RNA中的磷酸基团的摩尔比为7:5~7:10。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述前驱基底材料中未反应氨基的量与戊二醛的摩尔比为5:2~5:4，其中剩余氨基是通过第（4）步中的投料比在理论中未反应的氨基来确定。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）所述戊二醛（GA）充当交联剂的作用，溶液的浓度为10~15mM，所述甘氨酸的摩尔当量浓度为戊二醛（GA）溶液浓度的10倍。
CN201911149800.9A 2019-11-21 2019-11-21 离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球 Pending CN110917359A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911149800.9A CN110917359A (zh) 2019-11-21 2019-11-21 离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911149800.9A CN110917359A (zh) 2019-11-21 2019-11-21 离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110917359A true CN110917359A (zh) 2020-03-27

Family

ID=69850610

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911149800.9A Pending CN110917359A (zh) 2019-11-21 2019-11-21 离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110917359A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070123482A1 (en) * 2005-08-10 2007-05-31 Markus Stoffel Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof
WO2009100955A1 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 Istituto Superiore di Sanità Antisense rna targeting cxcr4
EP2327783A1 (en) * 2009-11-27 2011-06-01 Universitätsklinikum Freiburg Pharmaceutical composition comprising miRNA-100 and its use in the modulation of blood vessel growth
CN104278030A (zh) * 2013-07-05 2015-01-14 上海交通大学医学院 小分子化合物Antagomir-31制备方法及应用
CN104352440A (zh) * 2014-11-07 2015-02-18 中国科学院过程工程研究所 一种阳离子脂质体核酸类药物制剂及其制备方法和应用
CN105229151A (zh) * 2013-01-24 2016-01-06 皮埃尔法伯制药股份有限公司 包含包封的antagomir的组合物

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070123482A1 (en) * 2005-08-10 2007-05-31 Markus Stoffel Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof
WO2009100955A1 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 Istituto Superiore di Sanità Antisense rna targeting cxcr4
EP2327783A1 (en) * 2009-11-27 2011-06-01 Universitätsklinikum Freiburg Pharmaceutical composition comprising miRNA-100 and its use in the modulation of blood vessel growth
CN105229151A (zh) * 2013-01-24 2016-01-06 皮埃尔法伯制药股份有限公司 包含包封的antagomir的组合物
CN104278030A (zh) * 2013-07-05 2015-01-14 上海交通大学医学院 小分子化合物Antagomir-31制备方法及应用
CN104352440A (zh) * 2014-11-07 2015-02-18 中国科学院过程工程研究所 一种阳离子脂质体核酸类药物制剂及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BEOB SOO KIM ET AL: "Self-Assembly of siRNA/PEG‑b‑Catiomer at Integer Molar Ratio into 100 nm-Sized Vesicular Polyion Complexes (siRNAsomes) for RNAi and Codelivery of Cargo Macromolecules", 《JACS》 *
余欢，等: "多功能靶向聚天冬酰胺改性聚合物胶束药物载体的研究", 《2015 年全国高分子学术论文报告会》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101503501B (zh) 可生物降解的无毒两亲性多嵌段聚氨酯材料及其制备方法
KR100918524B1 (ko) 온도 및 피에치 민감성 블록공중합체 고분자 하이드로겔을이용한 주사가능한 약물전달체 및 약물전달방법
Sun et al. Transcellular delivery of messenger RNA payloads by a cationic supramolecular MOF platform
CN102516552B (zh) 一种可降解的酸敏感高分子两亲性阳离子嵌段共聚物与胶束粒子及其制备方法
US20080160096A1 (en) Polymeric nanoparticles by ion-ion interactions
CN102688195A (zh) 一种具有pH敏感性的包载盐酸阿霉素的壳聚糖羧甲基壳聚糖纳米缓释微粒的制备方法
CN105534878B (zh) 一种双响应性可注射超分子智能水凝胶的制备
CN102093555A (zh) 聚合物纳米水凝胶及其制备方法
CN101836970A (zh) 一种聚丙烯酸纳米凝胶微球及其制法和用途
CN106890336B (zh) 一种siRNA药物载体聚合物及其制备方法和在siRNA靶向输送中的应用
CN110585136A (zh) 一种负载蛋白多肽的生物素修饰三甲基壳聚糖纳米粒及其制备方法
CN115073769A (zh) 一种促组织再生的活性氧响应超分子水凝胶及其制备方法
Xia et al. Advances in stimuli‐responsive chitosan hydrogels for drug delivery systems
CN106866978B (zh) 自催毁嵌段聚合物及其制备方法
CN110917359A (zh) 离子键自组装制备PEG-P（Asp-AP）-ANTAGOMIR-RNA微球
CN101235384B (zh) 一种新型非病毒阳离子型基因载体的制备方法
Kim et al. Self-assembled nanocomplex using cellulose nanocrystal based on zinc/DNA nanocluster for gene delivery
CN110302146B (zh) 一种可注射凹凸棒石复合超分子水凝胶的制备和应用
CN103709411A (zh) 含有吗啉-2，5-二酮衍生物共聚物的两亲性三嵌段共聚物及制备方法及用途
CN114917360B (zh) 一种小分子药物与siRNA共输送的小粒径纳米体系的构建方法及应用
CN114106348B (zh) 苯硼酸修饰的胞内可降解超支化聚（β-氨基酯）及其制备方法和蛋白递送应用
CN101361976B (zh) 一种透明质酸修饰聚氰基丙烯酸烷基酯纳米粒及其制备方法和应用
US9783637B2 (en) Drug delivery using electrochemically-triggered biodegradable electroactive materials
CN116003787A (zh) 含疏水烷基链的高度支化聚（β-氨基酯）及其制备方法和mRNA递送应用
CN111234163B (zh) 一种兼具抗菌修复性能的纳米凝胶及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200327