CN110907567B - 一种n-亚硝胺的提取分离检测方法 - Google Patents

一种n-亚硝胺的提取分离检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种N‑亚硝胺的提取分离检测方法，包括以下步骤：(1)将N‑亚硝胺供试品加入水性溶剂中溶解得水性溶液；(2)在步骤(1)中的水性溶液中加入非水溶剂，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；(3)对剩余水性溶液重复步骤(2)中非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有提取液得N‑亚硝胺提取液；(4)将N‑亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1～10ml得N‑亚硝胺浓缩液；(5)对N‑亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析和/或液相色谱分析。本发明提供的提取分离检测方法，有效地解决了现有检测方法中基质干扰、系统污染的问题，可实现N‑亚硝基胺的准确测定，具有良好的应用前景。

Description

一种N-亚硝胺的提取分离检测方法
技术领域
本发明涉及化学分析领域，尤其涉及一种N-亚硝胺的提取分离检测方法。
背景技术
沙坦类药物为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，是目前治疗高血压的一线用药，常见的有缬沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦钾、替米沙坦等。此类抗高血压药生产过程中使用过量的叠氮化钠，反应结束后需要对残存的叠氮化合物进行淬灭处理。在现有技术中，通常是用亚硝酸在酸性条件下处理除去叠氮化钠。残留的微量亚硝酸会与反应系统中因各种原因带入的胺类化合物反应生成具有基因毒性的N-亚硝基胺。其他药物因受合成反应副产物、生产过程污染或自身降解等因素影响，也可能含有N-亚硝基胺杂质，为了能够实现对药物或药物组合物进行质量控制，需要对相关产品中的N-亚硝胺杂质进行检测。
现有方法以药物的甲醇或二氯甲烷溶液进样，进行气相质谱检测(国家药典会缬沙坦国家标准修订征求意见稿，Combined Direct Injection N-Nitrosodimethylamine(NDMA)and N-Nitrosodiethylamine(NDEA)Impurity Assay by GC/MS美国FDAFY19-006-DPA-S)。本申请的发明人发现采用上述现有技术，大量难挥发性的基质进入检测系统，对进样口、色谱柱、离子源均会造成污染，使系统噪声升高，灵敏度降低，稳定性降低。
因此，有必要开发一种合适的前处理方法及检测方法，以便对相关药物中的N-亚硝胺杂质进行监测和质量控制。
发明内容
本发明为解决现有技术中的上述问题，通过液液萃取和色谱分析技术的利用提出了一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，提高检测的精确度，同时减少对设备的污染。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，包括以下步骤：
(1)将N-亚硝胺供试品加入水性溶剂中溶解得水性溶液；
(2)在步骤(1)中所述的水性溶液中加入非水溶剂，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；
(3)对剩余水性溶液重复步骤(2)中所述非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有所述提取液得N-亚硝胺提取液；
(4)将所述N-亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1～10ml得N-亚硝胺浓缩液；
(5)对所述N-亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析和/或液相色谱分析。
优选地，步骤(4)中浓缩至1ml；进一步优选地，浓缩过程中可加水溶液0.1～5ml，优选为1ml。
优选地，步骤(1)中所述供试品选自可在水性溶剂中溶解的化合物及可在水性溶剂中溶解的药物的制剂中的一种或多种。
优选地，步骤(1)中所述供试品选自盐酸盐化合物及盐酸盐原料药的各种制剂中的一种或多种。
优选地，步骤(1)中所述供试品选自盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁或盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁制剂的一种或多种。
优选地，步骤(1)中所述供试品选自硫酸盐化合物及硫酸盐原料药的各种制剂中的一种或多种。
优选地，步骤(1)中所述供试品选自硫酸沙丁胺醇或硫酸沙丁胺醇制剂的一种或多种。
优选地，步骤(1)中所述供试品选自含联苯四氮唑结构的原料药、含联苯四氮唑结构的中间体、含联苯四氮唑结构原料药的各种制剂中的一种或多种。
优选地，所述供试品为沙坦类化合物或沙坦类化合物的制剂中的一种或多种；进一步地，所述供试品选自缬沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、氯沙坦钾中的一种或多种。
更近一步的，供试品为药物复合物时，将制剂研细，取细粉，加水性溶剂使主成份溶解，离心，取上清液，用非水溶剂提取。
优选地，步骤(4)中所述N-亚硝胺浓缩液中包括N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基甲基乙基胺(NMEA)、N-亚硝基二丙胺(NDPrA)、N-亚硝基二丁胺(NDBuA)、N-亚硝基吡咯(NPyr)、N-亚硝基哌啶(NPiP)、N-亚硝基吗啉(NMorph)、N-亚硝基二苯胺(NDPhA)、N-亚硝基二苄胺(NDBeA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基乙基异丙胺(NEIPA)中的一种或多种。
优选地，水性溶剂为中性水溶液或碱性水溶液，供试品与水性溶剂的用量比为1:1～1:100(g:ml)；进一步优选为1：10～1:30(g:ml)。
优选地，所述水性溶剂选自水、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、氨水溶液、磷酸氢二钠水溶液中的一种；进一步优选为优选氢氧化钠水溶液，氢氧化钾水溶液中的一种。
进一步地，步骤(1)中所述水性溶剂为酸性水溶液将样品溶解后，再加入碱性水溶液调至中性或碱性。
可根据基质的溶解性能选择合适的溶剂。如氯沙坦钾可选择水和碱性溶剂溶解，盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁选择用水溶解，而缬沙坦则选择碱性溶剂如氢氧化钠水溶液溶解。还可将样品在酸性水溶液中溶解后，再加碱性水溶液将溶液调至中性/碱性。
进一步地，水性溶剂包括：水，无机或有机碱或盐溶解后形成的碱性水溶液；水和碱性溶液中可加N-亚硝基二甲胺d6和/或N-亚硝基二丙胺d14，作为内标物质，其浓度为10-500ng/ml，优选为20-100ng/ml，也可不加内标。
优选地，所述碱性水溶液中盐的浓度为0.001-5mol/L；进一步优选地，优选为1-2mol/L。
优选地，非水溶剂为二氯甲烷或三氯甲烷。
优选地，步骤(2)中所述非水溶剂提取中，非水溶剂与水性溶液的体积比为1：1～1：10；进一步优选为1：2～1：4。
优选地，所述气相色谱分析具体为：将所述N-亚硝胺浓缩液进样至气相色谱质谱系统，程序升温；其中，所述气相色谱质谱系统的气相色谱柱固定相选自聚硅氧烷聚合物、聚硅氧烷共聚物和聚乙二醇中的一种或多种。
优选地，所述色谱分析具体为：将所述N-亚硝胺浓缩液进样至气相色谱质谱系统，程序升温；其中，
气相色谱条件为：
色谱柱：VF-WAXms：30m*0.25mm*0.5μm或类似性能色谱柱；
进样口温度：180～230℃；
程序升温：初始柱温为40～60℃，保持1min，随后以15℃/min的速率升温至130℃，保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃，保持10min；
质谱分析条件：
离子源温度230℃；
电压70ev；
传输线温度250～280℃；
溶剂延迟4min；
选择离子监测模式检测或多反应离子检测模式检测。
优选地，所述液相色谱分析具体为：将所述N-亚硝胺浓缩液进样至液相色谱质谱系统或液相色谱紫外系统，梯度洗脱；其中，所述液相色谱仪的色谱柱为C8或C18色谱柱，柱温为20-50℃；所述液相色谱仪的流动相选自甲醇-水溶液、乙腈-水溶液、流动相体系中可含有0.001％～5％的甲酸或甲酸铵，进一步优选为含0.01％～0.5％的甲酸。
优选地，检测器为质谱检测器或紫外检测器。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
通过液液萃取，实现了N-亚硝基胺杂质与基质的分离提取，采用本发明提供的提取分离方法，可有效地解决现有检测方法中基质干扰、系统污染的问题，可实现N-亚硝基胺的准确测定；本发明所提供的提取分离及检测方法可用于药物中N-亚硝基胺杂质的检测，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例2中GC-MS对照溶液色谱图；
图2为本发明实施例3中GC-MS对照溶液色谱图；
图3为本发明实施例5中HPLC-MSMS对照溶液色谱图；
图4为本发明实施例6中HPLC-UV对照溶液色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以便更好地理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
以下实施例中，所用主要仪器、材料与试剂包括：
仪器：Agilent 7890气相色谱仪，Agilent 7000A三重四级杆质谱仪，Agilent5977质谱仪，Agilent1200高效液相色谱仪，Agilent 6490三重四级杆质谱仪，数据分析软件(Agilent Masshunter软件，Agilent Chemstation软件)
色谱柱：VF-WAXms(30m*0.25mm*0.5μm)，
Agilent SB C18(150m*2.1mm，3.5μm)，
Ultimate XB C18(25cm*0.46cm，5μm)
试剂：氢氧化钾、氢氧化钠、磷酸二氢钠、氨水、甲醇、乙腈，甲酸铵，甲酸，盐酸。
实施例1
精密称取缬沙坦、替米沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦钾各100mg，加1M氢氧化钠水溶液1ml振摇使供试品完全溶解，精密称取盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁各100mg，加水溶液1ml振摇使供试品完全溶解；上述溶液均分别加入二氯甲烷2ml，振摇提取，分液得提取液，加入二氯甲烷2ml再次提取，重复提取3次，合并二氯甲烷提取液；氮吹二氯甲烷提取液浓缩至干；用甲醇1ml复溶，高效液相色谱法测得基质去除率如下表，结果表明本发明可有效除去基质。
表1基质分离效果
基质去除率(％)
缬沙坦 99.7
厄贝沙坦 97.0
替米沙坦 98.6
氯沙坦钾 99.9
盐酸雷尼替丁 99.2
盐酸二甲双胍 99.5
实施例2
精密称取缬沙坦100mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14各50ng的1M氢氧化钠水溶液1ml振摇使供试品完全溶解；加入二氯甲烷2ml，振摇提取，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取3次，合并二氯甲烷提取液；氮吹二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
分别称取N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基甲基乙基胺、N-亚硝基乙基异丙胺、N-亚硝基二异丙胺、N-亚硝基二丙胺、N-亚硝基二丁胺、N-亚硝基吡咯、N-亚硝基哌啶、N-亚硝基吗啉、N-亚硝基二苯胺、N-亚硝基二苄胺对照品适量，用二氯甲烷溶解并逐步定量稀释制成线性混合标准溶液，线性标准溶液中内标的浓度为N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 50ng/ml。
气相色谱条件为：
色谱柱：VF-WAXms(30m*0.25mm*0.5μm)；
进样口温度：230℃；
升温程序：初始柱温为50℃，保持1min，随后以15℃/min的速率升温至130℃，保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃，保持10min。
三重四极杆质谱分析条件：
离子源温度230℃；
电压70ev；
传输线温度280℃；
溶剂延迟4min；
检测模式：多反应离子监测模式。
分别取供试品溶液和混合标准品溶液1μl进样测定，典型的图谱见附图1(附图1中标记表示说明：1-NDMA；2-NDMA-d6(internal standard)；3-NMEA；4-NDEA；5-NEIPA；6-NDIPA；7-NDPrA-d14(internal standard)；8-NDPrA；9-NDBuA；10-NPiP；11-NPyr；12-NMorph；13-NDPhA；14-NDBeA)。
缬沙坦中检出N-亚硝基二甲胺0.18ppm，N-亚硝基二乙胺0.04ppm，其他N-亚硝基胺均未检出。
实施例3
精密称取厄贝沙坦100mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14各50ng的2M氢氧化钾水溶液1ml振摇使供试品完全溶解；加入二氯甲烷3ml，振摇提取，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取3次，合并二氯甲烷提取液；氮吹二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品配制同实施例2。
气相色谱条件：
色谱柱：VF-WAXms(30m*0.25mm*0.5μm)；
进样口温度：220℃；
升温程序：初始柱温为50℃，保持1min，随后以15℃/min的速率升温至130℃，保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃，保持10min。
质谱分析条件：
离子源温度230℃；
电压70ev；
传输线温度280℃；
溶剂延迟4min；
检测模式：选择离子监测模式检测。
分别取供试品溶液和混合标准品溶液1μl进样，进行测定。典型的图谱见附图2(附图中标记表示说明：1-NDMA；2-NDMA-d6(internal standard)；3-NMEA；4-NDEA；5-NEIPA；6-NDIPA；7-NDPrA-d14(internal standard)；8-NDPrA；9-NDBuA；10-NPiP；11-NPyr；12-NMorph；13-NDPhA；14-NDBeA)。
厄贝沙坦中均未检出N-亚硝基胺杂质。
实施例4
精密称取替米沙坦100mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14各50ng的1M氨水溶液2ml振摇使供试品完全溶解；加入二氯甲烷4ml，振摇提取，取出有机提取液，加入二氯甲烷再次提取，重复提取4次，合并二氯甲烷提取液；氮吹二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品配制和气相色谱分析条件同实施例2。
替米沙坦中未检出N-亚硝基胺杂质。
实施例5
精密称取氯沙坦钾200mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 20ng的水溶液1ml振摇使供试品完全溶解；加入三氯甲烷3ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入三氯甲烷再次提取，重复提取4次，合并三氯甲烷提取液；加入水1ml，旋蒸三氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
分别称取N-亚硝基胺二甲胺、N-亚硝基胺二乙胺、N-亚硝基甲基乙基胺、N-亚硝基胺二丙胺、N-亚硝基胺吡咯、N-亚硝基哌啶、N-亚硝基胺二苯胺、N-亚硝基胺二苄胺、N-亚硝基胺吗啉对照品对照品，逐步定量稀释制成混合标准溶液，标准溶液中N-亚硝基二甲胺d6、N-亚硝基二丙胺d14内标的浓度20ng/ml。
液相色谱条件为：
色谱柱：Agilent SB-C18(2.1×150mm，3.5μm)；
流动相：A：0.1％甲酸水溶液，B：甲醇，0-20分钟，B相0-90％；
柱温：35℃；
流速：0.4ml/min；
进样量：10μl。
选择各化合物特征离子进行多反应离子监测模式检测。
分别取供试品溶液和混合标准品溶液10μl进样测定，典型图谱见附图3(附图3中标记表示说明：1-NDMA；2-NDMA-d6；3-NMEA；4-NDEA；5-NDPrA-d14；6-NDPrA；7-NPiP；8-NPyr；9-NMorph；10-NDPhA；11-NDBeA)。氯沙坦钾中均未检出N-亚硝基胺杂质。
实施例6
精密称取缬沙坦500mg，精密加入1M磷酸二氢钠水溶液10ml振摇使供试品完全溶解；加入二氯甲烷40ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取3次，合并二氯甲烷提取液；旋蒸除去大部分二氯甲烷提取液，加入水1ml，氮吹提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
取N-亚硝基二甲胺对照品，配制成标准溶液。
色谱柱：Ultimate XB C18(25cm*0.46cm，5μm)
流动相：A：水B：甲醇；0-10分钟，B相5％，10-20分钟，B相5％-30％
20.1分钟，B相80％
柱温：35℃；
流速：1ml/min；
进样体积：100μl；
检测波长：228nm；
精密量取供试品溶液与对照品溶液各100μl，进行测定，典型图谱见附图4缬沙坦中检出N-亚硝基二甲胺0.17ppm。
实施例7
精密称取厄贝沙坦片剂粉末适量(含厄贝沙坦200mg)，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 50ng的1M氢氧化钠水溶液2ml，振摇使厄贝沙坦完全溶解。离心，取上清液，加入二氯甲烷6ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取4次。合并二氯甲烷提取液，氮吹二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例2。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl，进样测定，厄贝沙坦制剂中检出N-亚硝基二乙胺0.06ppm，其他N-亚硝基胺均未检出。
实施例8
精密称取厄贝沙坦氢氯噻嗪胶囊粉末适量(含厄贝沙坦500mg)，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 50ng的1M氢氧化钾水溶液10ml，振摇使厄贝沙坦完全溶解，离心，取上清液，加入二氯甲烷20ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取5次，合并二氯甲烷提取液；旋蒸二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例2。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl，进样测定，厄贝沙坦氢氯噻嗪胶囊中检出N-亚硝基二乙胺0.09ppm，其他N-亚硝基胺均未检出。
实施例9
精密称取盐酸二甲双胍2.0g，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 50ng的水溶液10ml，振摇使供试品完全溶解，离心，取上清液，加入二氯甲烷20ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取4次。合并二氯甲烷提取液，旋蒸除去大部分二氯甲烷，氮吹浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例2。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl，进样测定，盐酸二甲双胍中检出N-亚硝基二甲胺0.002ppm、N-亚硝基二丁胺0.001ppm、N-亚硝基吗啉0.001ppm。
实施例10
精密称取盐酸雷尼替丁100mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 20ng的水溶液1ml振摇使供试品完全溶解；加入二氯甲烷3ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取4次，合并二氯甲烷提取液；加入水1ml，旋蒸二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例5。
分别取供试品溶液和混合标准品溶液10μl进样测定，盐酸雷尼替丁中检出N-亚硝基二甲胺0.17ppm。
实施例11
精密称取盐酸雷尼替丁胶囊细粉适量(约含雷尼替丁100mg)，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 20ng的水溶液1ml振摇使供盐酸雷尼替丁品完全溶解；离心，取上清液，加入二氯甲烷2ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取4次，合并二氯甲烷提取液；氮吹，近干时加入1ml水，浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例5。
分别取供试品溶液和混合标准品溶液10μl进样测定，盐酸雷尼替丁中检出N-亚硝基二甲胺0.15ppm。
实施例12
精密称取硫酸沙丁胺醇100mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 50ng的水溶液1ml振摇使供试品完全溶解；加入二氯甲烷2ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取4次，氮吹二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例2。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl，进样测定，硫酸沙丁胺醇中未检出N-亚硝基胺。
实施例13
精密称取马来酸氯苯那敏100mg，精密加入每1ml含N-亚硝基二甲胺d6和N-亚硝基二丙胺d14 50ng的水溶液1ml、1M盐酸水溶液0.2ml，振摇使供试品完全溶解，再加1M氢氧化钠溶液0.2ml，摇匀；加入二氯甲烷4ml，振摇提取，静置，取出有机提取液，水性溶液加入二氯甲烷再次提取，重复提取5次，氮吹二氯甲烷提取液浓缩至1ml，得N-亚硝胺浓缩液。
对照品溶液配制和色谱分析条件同实施例2。
精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μl，进样测定，马来酸氯苯那敏中检出N-亚硝基胺二甲胺0.05ppm。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (3)

1.一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将N-亚硝胺供试品加入水或碱性水溶液中溶解得水性溶液，或用酸性水溶液将供试品溶解后，再加入碱性水溶液调至中性或碱性得水性溶液；
（2）在步骤（1）中所述的水性溶液中加入二氯甲烷或三氯甲烷，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；
（3）对剩余水性溶液重复步骤（2）中非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有提取液得N-亚硝胺提取液；
（4）将所述N-亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1~10ml得N-亚硝胺浓缩液；
（5）对所述N-亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析；步骤（1）中所述供试品选自盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁或盐酸二甲双胍制剂、盐酸雷尼替丁制剂的一种或多种；或选自硫酸沙丁胺醇或硫酸沙丁胺醇制剂的一种或多种；或选自沙坦类化合物或沙坦类化合物的制剂中的一种或多种；
所述气相色谱条件为：
色谱柱：VF-WAXms：30m*0.25mm*0.5μm；
进样口温度：180~230℃；
程序升温：初始柱温为40~60℃，保持1min，随后以15℃/min的速率升温至130℃，保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃，保持10min；
步骤（4）中所述N-亚硝胺浓缩液中包括N-亚硝基二甲胺、N-亚硝基二乙胺、N-亚硝基甲基乙基胺、N-亚硝基二丙胺、N-亚硝基二丁胺、N-亚硝基吡咯、N-亚硝基哌啶、N-亚硝基吗啉、N-亚硝基二苯胺、N-亚硝基二苄胺、N-亚硝基二异丙胺和N-亚硝基乙基异丙胺。
2.根据权利要求1所述的N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，步骤（1）中供试品与水性溶剂的用量比为1:1~1:100g:ml；所述碱性水溶液选自氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、氨水溶液、磷酸氢二钠水溶液中的一种；所述磷酸氢二钠水溶液中盐的浓度为0.001-5mol/L。
3.根据权利要求1所述的N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，步骤（2）中非水溶剂提取中，非水溶剂与水性溶液的体积比为1：1~1：10。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111537634B (zh) * 2020-04-30 2022-05-27 湖南师范大学 一种替丁类药物中ndma含量的检测方法
CN111965273B (zh) * 2020-08-04 2022-06-14 迪嘉药业集团有限公司 一种坎地沙坦酯中基因毒杂质的hplc法检测方法
CN112083088A (zh) * 2020-08-19 2020-12-15 重庆康刻尔制药股份有限公司 一种盐酸二甲双胍缓释片中n-亚硝基二甲胺的gc-ms联用检测方法
CN112129853A (zh) * 2020-09-07 2020-12-25 天地恒一制药股份有限公司 一种坎地沙坦酯中亚硝胺类杂质的检测方法
CN112526005A (zh) * 2020-10-14 2021-03-19 江苏汉斯通药业有限公司 雷尼替丁类药物中亚硝胺类物质的高效液相色谱分析方法
CN114487142A (zh) * 2020-11-11 2022-05-13 江苏天士力帝益药业有限公司 替莫唑胺中n-亚硝基二甲胺和n-亚硝基二乙胺的残留量测定
CN112710763B (zh) * 2021-01-06 2023-07-28 湖南威特制药股份有限公司 一种hplc法检测尼扎替丁中n-亚硝基二甲胺的方法
WO2023075826A1 (en) * 2021-10-28 2023-05-04 The Texas A&M University System Compositions of stable metformin and similar drug products with control on nitroso impurities
CN113899834B (zh) * 2021-12-07 2022-04-01 北京联嘉医药科技开发有限公司 一种药物中亚硝胺类杂质的检测方法
CN116735760B (zh) * 2023-08-16 2024-02-09 山东道可化学有限公司 一种氟乐灵中n,n-二丙基亚硝胺的检测方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9212979B2 (en) * 2014-01-15 2015-12-15 King Fahd University Of Petroleum And Minerals Automated microextraction technique for the analysis of N-nitrosamines in water
CN104076106B (zh) * 2014-07-15 2016-05-11 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 适用食品接触类橡胶制品中9种n-亚硝胺的同时检测法
CN106324122A (zh) * 2016-08-09 2017-01-11 国家烟草质量监督检验中心 烟草、烟草制品及烟气中挥发性n‑亚硝胺的测定方法
CN109060984A (zh) * 2018-08-21 2018-12-21 山东省食品药品检验研究院 一种检测缬沙坦及其制剂中n-二甲基亚硝胺含量的方法

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