CN111521597A - 一种检测芬太尼/吗啡类化合物的方法及试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测样品中芬太尼类化合物/吗啡类化合物的方法，还涉及一种试剂盒，以及该试剂盒用于检测样品中芬太尼类化合物/吗啡类化合物的用途。该方法可以快速定性检测样品中是否含有芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物，也可以定量检测样品中的微量芬太尼类化合物。该方法具有灵敏、快速、易操作等优点，可用于现场快检、毒物检测、法医鉴定等多领域。

Description

一种检测芬太尼/吗啡类化合物的方法及试剂盒

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及一种检测样品中芬太尼类化合物/吗啡类化合物的方法，还涉及一种试剂盒以及该试剂盒用于检测样品中芬太尼类化合物/吗啡类化合物的用途。

背景技术

芬太尼与吗啡均属于阿片类受体激动剂，临床上常用来缓解癌症病人的疼痛以及其它慢性疼痛。目前，已有1400多种芬太尼同系物和250多种吗啡同系物被报道(ForensicToxicol.,2018,36,12-32；https://en.wikipedia.org/wiki/Morphine)。部分具有药用用途，其中以芬太尼同系物卡芬太尼镇痛活性最强，其镇痛能力比芬太尼高100倍(Arzneimittelforschung,1976,26,1521-1531)，而芬太尼的镇痛能力是吗啡的50-100倍。另外，芬太尼和吗啡类化合物镇痛的同时还能产生欣快感，极易成瘾。但极微量芬太尼的摄入便可造成机体中毒，芬太尼的半数致死剂量为0.03mg/kg(猴，静脉注射)或3.1mg/kg(兔，静脉注射)，(Arzneimittelforschung,1976,26,1548-1551.)，2mg的卡芬太尼足以使成人致死(Carfentanil:A Dangerous New Factor in the U.S.Opioid Crisis,2016)。

目前，芬太尼/吗啡类化合物的滥用带来的社会及公共安全问题已经引起了世界各国的关注。例如，作为一种源自吗啡的半合成类化合物，美国因海洛因滥用致死的人数自2010年至2016年增加了5倍，在2017年达到近1.9万人(Addict.Behav.,2017,74,63-66；NCHS Data Brief,2017,294,1-8)；另一方面，芬太尼类化合物已经代替海洛因，成为2017年美国药物滥用致死的头号杀手，致死人数达到2.9万人(NCHS Data Brief,2017,294,1-8)，多数滥用致死事件中，大量海洛因中混杂了少量芬太尼、卡芬太尼或芬太尼的其它同系物。同时，芬太尼具有易合成、结构可设计的特点(ACS Chem.Neurosci.,2018,9,2428-2437)，新的芬太尼化合物层出不穷，如2016年出现的非药用芬太尼—奥芬太尼等，给监管部门带来了极大挑战。芬太尼及其所有同系物已经被多个国家列入管制目录。

针对滥用、中毒甚至死亡的事件，从药物原料到生物医学样品，均需要一种快速区分不同基质中芬太尼/吗啡类化合物的现场检测方法，以助于正确鉴别毒物种类，和判别中毒“元凶”。例如，正确、快速区分药物原料、或多种辅料中的芬太尼类和吗啡类化合物；又例如，对于生物医学样品，需要结合代谢情况判别分析物的具体形式。例如，海洛因在人体内的血浆半衰期极短，只有1.3-7.8min(Curr.Clin.Pharmacol.2006,1,109-118)，体内被肝脏P450酶代谢后主要以代谢物吗啡的形式经肾脏排除(J.Pharmacol.Exp.Ther.1976,196,249-256)。因此，芬太尼/吗啡应作为尿液样品中芬太尼/海洛因混合物的检测形式。

目前用于芬太尼/吗啡类化合物快速筛查的方法主要有比色法、免疫法、红外光谱、离子迁移谱、常压质谱、表面增强拉曼光谱(SERS)法等。其中，SERS技术具有高灵敏度、高分辨率、简单快速、适合水相体系直接检测等优点，可同时提供化合物种类的通用谱学信息，及某一种化合物的指纹谱信息，尤其适合于痕量分析。目前,关于芬太尼/吗啡类化合物SERS检测的报道较少，并且以水溶液、甲醇溶液等简单基质中的SERS检测为主(Anal.Chem.2018,90,12678–12685；J.Light Scatter,2010,22,34-38.)。

发明内容

本发明的第一方面涉及金纳米粒子(AuNPs)和提供I^-离子的物质联合用于检测样品中芬太尼类化合物的用途，或者在制备用于检测样品中芬太尼类化合物试剂盒中的用途。

在某些实施方案中，本发明第一方面所述的用途，其中采用表面增强拉曼光谱法对样品进行检测。

本发明第二方面涉及一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，包括以下操作：

向待测样品中加入纳米金粒子，混合，再加入提供I^-的离子物质，混合，得到混合物；

采集混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

可选地，判断生物样品中是否存在芬太尼类化合物，若混合物的表面增强拉曼光谱在波数为约990-1005cm^-1处出现特征峰，确定生物样品中存在芬太尼类化合物；

可选地，利用特征峰的强度对样品中的芬太尼类化合物进行定量，

可选地，在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.05-5nM，约0.1-4nM，约0.25-2nM，约0.25-1.5nM或约0.25-1nM，例如：约0.1nM，约0.2nM，约0.25nM，约0.3nM，约0.5nM，约0.8nM，约1nM，约1.2nM，约1.5nM，约1.8nM，约2nM，约2.2nM，约2.5nM，约2.8nM，约3.0nM，约3.2nM，约3.4nM，约3.6nM，约3.8nM，约4nM，约4.2nM，约4.5nM，约4.8nM。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述混合物中提供I^-离子的物质的浓度为约50-400mM，例如约100-200mM。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述样品为生物样品(例如尿液)，并且所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.25-2nM，约0.25-1.5nM，约0.5-1.5nM，或约0.8-1.2nM，例如：约0.9nM，约1nM，约1.1nM。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用水(例如超纯水)稀释样品，优选的稀释倍数为5-10倍；

调节稀释后的样品的pH值至9-11，例如10；

用C18(octadecylsilyl silica gel，十八烷基键合硅胶)对样品进行纯化，得到待测样品。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中采用NaOH溶液调节生物样品的pH值。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中用C18对样品进行纯化的方法包括以下操作：

分别用甲醇和/或水(例如超纯水)对C18进行淋洗；

使样品与C18接触，除去样品中的液体；

用水润洗C18，弃去洗脱液；

用甲醇和甲酸水溶液的混合液对C18进行洗脱，得到洗脱液，即为待测样品。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中甲醇和甲酸水溶液的混合液中甲醇和甲酸水溶液的体积比为1:(0.8-1.2)，例如1:1。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述甲酸水溶液的浓度为0.08-0.12v/v％，例如0.1v/v％。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述样品为生物样品(例如尿液)，并且在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用水(例如超纯水)稀释样品，优选的稀释倍数为5-10倍；

调节稀释后的样品的pH值至9-11，例如10；

用C18(octadecylsilyl silica gel，十八烷基键合硅胶)对样品进行纯化，得到待测样品。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)，并且所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.1-2nM，例如约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，其中所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)，并且在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品。

本发明的第三方面涉及一种试剂盒，包括：

金纳米粒子，

提供I^-离子的物质，

C18(octadecylsilyl silica gel，十八烷基键合硅胶)。

在某些实施方案中，本发明第三方面所述的试剂盒还包括选自以下物质中的一种或多种物质：甲醇、pH调节剂、甲酸或甲酸水溶液。

在某些实施方案中，本发明第三方面所述的试剂盒还包括说明书。

在某些实施方案中，本发明第三方面所述的试剂盒还包括一个或多个滴定版(例如96孔板)。

在某些实施方案中，本发明第三方面所述的试剂盒，其中所述pH调节剂优选为NaOH或含有NaOH的溶液，所述甲酸水溶液的浓度优选为0.08-0.12v/v％，例如0.1v/v％，所述说明书中优选至少记载本发明第二方面所述的检测方法。

本发明的第四方面涉及本发明第三方面所述的试剂盒用于检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物的用途，或

在使用表面增强拉曼光谱(SERS)法检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物中的用途。

在某些实施方案中，本发明第四方面所述的用途，其中所述样品为生物样品(例如尿液)。

在某些实施方案中，本发明第四方面所述的用途，其中所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

本发明第五方面涉及金纳米粒子和提供Cl^-离子的物质联合用于检测(包括定性检测或定量检测)样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的用途，或者

在制备用于检测(包括定性检测或定量检测)样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的试剂盒中的用途。

在某些实施方案中，本发明第五方面所述的用途，其中采用表面增强拉曼光谱法对样品进行检测。

在某些实施方案中，本发明的第五方面所述的用途，其中金纳米粒子和提供Cl^-离子的物质联合用于定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的用途。

在某些实施方案中，本发明的第五方面所述的用途，其中所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

本发明的第六方面涉及一种检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，包括以下操作：

向待测样品中加入纳米金粒子，混合，再加入提供Cl^-的离子物质，混合；得到混合物；

采集混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

可选地，判断生物样品中是否存在芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物，若混合物的表面增强拉曼光谱在波数为约990-1005cm^-1处出现特征峰，确定生物样品中存在芬太尼类化合物；若混合物的表面增强拉曼光谱在波数为约620-635cm^-1处出现特征峰，确定生物样品中存在吗啡类化合物；

可选地，利用特征峰的强度对样品中的芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物进行定量，

可选地，在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理。

在某些实施方案中，本发明第六方面所述的检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述的样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

在某些实施方案中，本发明第六方面所述的检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.05-5nM，约0.1-4nM，约0.25-2nM，约0.25-1.5nM，约0.1-2nM，约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM或约0.25-1nM，例如：约0.1nM，约0.2nM，约0.25nM，约0.3nM，约0.5nM，约0.8nM，约1nM，约1.2nM，约1.5nM，约1.8nM，约2nM，约2.2nM，约2.5nM，约2.8nM，约3.0nM，约3.2nM，约3.4nM，约3.6nM，约3.8nM，约4nM，约4.2nM，约4.5nM，约4.8nM；

在某些实施方案中，本发明第六方面所述的检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.1-2nM，例如约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM。

在某些实施方案中，本发明第六方面所述的检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述混合物中提供Cl^-离子的物质的浓度为约50-400mM，例如约100-200mM。

在某些实施方案中，本发明第六方面所述的检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品。

本发明的第七方面涉及一种定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，包括以下操作：

配制芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的标准溶液；

向标准溶液中加入纳米金粒子，混合，再加入提供Cl^-的离子物质，混合，得到第一混合物；

采集第一混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

对第一混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)进行主成分(PCA)分析或偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)分析，建立PCA分析模型或PLS-DA分析模型；

向待测样品中加入纳米金粒子，混合，再加入提供Cl^-的离子物质，混合，得到第二混合物；

采集第二混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

根据PCA分析模型或PLS-DA分析模型确定样品中是否含有芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物，

可选地，在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理。

在某些实施方案中，本发明第七方面所述的定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品。

在某些实施方案中，本发明第七方面所述的定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述的样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

在某些实施方案中，本发明第七方面所述的定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述第一混合物或第二混合物中纳米金粒子的浓度为约0.1-2nM，例如约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM。

在某些实施方案中，本发明第七方面所述的定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其中所述混合物中提供Cl^-离子的物质的浓度为约50-400mM，例如约100-200mM。

本发明的第八方面涉及一种试剂盒，包括：

金纳米粒子，

提供Cl^-离子的物质，

可选地，所述试剂盒还包括说明书；

可选地，所述试剂盒还包括一个或多个滴定版(例如96孔板)。

在某些实施方案中，本发明第八方面所述的试剂盒，其中所述说明书中至少记载本发明第七方面所述的检测方法。

本发明第九方面涉及本发明第八方面所述的试剂盒用于检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的用途，或

在使用表面增强拉曼光谱(SERS)法检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物中的用途。

在某些实施方案中，本发明第八方面所述的试剂盒，其中所述的样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

在某些实施方案中，本发明所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子。

在某些实施方案中，本发明所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm。

在某些实施方案中，本发明所述的提供I^-离子的物质可以是包含I^-离子的盐，例如包含I^-离子的无机盐，包括MgI₂、KI等。在本发明所述的试剂盒中，所述的提供I^-离子的盐可以溶液形式存在，也可以固体形式存在。当以固体形式存在时，使用时可将其直接加入到液体待测样品中，也可以用水溶解后再使用。在某些实施方案中，本发明所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基。

在某些实施方案中，本发明所述芬太尼类化合物的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐。

在某些实施方案中，本发明所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合。

在某些实施方案中，本发明所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合。

在某些实施方案中，本发明所述的样品为生物样品(例如尿液)或化学样品(例如，原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

在某些实施方案中，本发明所述C18为C18膜、C18填料或者C18固相萃取柱。

在某些实施方案中，本发明所述的提供Cl^-离子的物质可以是包含Cl^-离子的盐，例如包含Cl^-离子的无机盐，包括NaCl、MgCl₂等。在本发明所述的试剂盒中，所述的提供I^-离子的盐可以溶液形式存在，也可以固体形式存在。当以固体形式存在时，使用时可将其直接加入到液体待测样品中，也可以用水溶解后再使用。在某些实施方案中，本发明所述吗啡类化合物为式II所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中：R₁为氢、烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

代表单键或双键；

R₂为羟基、烷氧基、亚甲基、氧代或酰基氧基；

R₃为羟基、烷氧基或酰基氧基；

R₄为烷基或链烯基，其中R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

R₅为羟基或烷基，其中烷基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

可选地，位置6和14之间形成乙基桥。

在某些实施方案中，本发明所述述吗啡类化合物的药学上可接受的盐为硫酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或乳酸盐；

在某些实施方案中，本发明所述吗啡类化合物选自：吗啡、3-单乙酰吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、环丙诺啡、丁丙诺啡、去甲吗啡、氢化吗啡、甲基去氧吗啡、羟二氢吗啡、二氢吗啡、二氢去氧吗啡、尼克吗啡、乙基吗啡、苄吗啡、吗啉吗啡、吗啡甲基磺酸盐、二氢埃托啡、盐酸埃托啡、乙酰可待因、烟酰可待因、二氢可待因、乙酰二氢可待因、氢化可待因、二氢可待因酮、羟吗啡酮、二氢吗啡酮、甲基二氢吗啡酮、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合。

在某些实施方案中，本发明所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合。

本发明中，所述的金纳米粒子为金的微小颗粒，其直径约为1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm。所述的金纳米粒子可以为裸金纳米粒子，也可以为核壳型金纳米粒子，优选为有孔核壳型金纳米粒子。

在某些实施方案中，本发明所述的裸金纳米粒子可以商购获得，也可以通过本领域常用的制备方法制备得到。例如，由氯金酸通过还原法制备各种不同粒径的纳米金粒子。所述的还原法包括但不限于以下还原法：PVP保护还原法(兰新哲，金志浩，PVP保护还原法制备金纳米粒子，稀有金属材料与工程，2003，32(1):50-53)、磷钼酸光催化还原剂法(王振平，吴莹，牛彩红等，磷钼酸作为光催化还原剂制备金纳米粒子，光谱实验室，2007，第3期，334-337页)、柠檬酸三钠还原法(G.Frens,Nature Phys.Sci.1973,241,20.)、紫外光引发还原法(阮伟东，吕志成，纪楠等，紫外光引发还原制备金溶胶及其SERS活性的研究，光散射学报，2005,17(14):329-331)、溶胶凝胶-模板法(邵桂妮，张兴堂，刘冰等，溶胶凝胶-模板法制备一维纳米金材料，现代化工，2006，26(1)：44-46)、硼氢化钠还原法、盐酸羟胺还原法、淀粉还原方法、葡萄糖还原方法、环糊精还原方法等。优选采用柠檬酸三钠还原法制备。

在某些实施方案中，本发明所述的核壳型金纳米粒子，是在裸金纳米粒子表面包裹不同厚度SiO2壳层形成的核壳型金纳米粒子，可参照公开J.F.Li,Y.F.Huang,Y.Ding,Z.L.Yang,S.B.Li,X.S.Zhou,F.R.Fan,W.Zhang,Z.Y.Zhou,D.Y.Wu,B.Ren,Z.L.Wang,Z.Q.Tian,Nature,2010,464,392.的方法制备，或者可参照Nat.Protoc.2012,8,52-65中公开的方法制备。

在某些实施方案中，本发明所述的试剂盒，其中所述的金纳米粒子、提供I^-离子的物质或提供Cl^-离子的物质被合适地包装，可分别包装在小瓶、小袋和/或任何适用于检测方法的容器中。

在某些实施方案中，本发明所述的试剂盒，其中所述的提供I^-离子的物质被合适地包装，可分别包装在小瓶、小袋和/或任何适用于检测方法的容器中。

在某些实施方案中，本发明所述的试剂盒，其中所述的提供Cl^-离子的物质被合适地包装，可分别包装在小瓶、小袋和/或任何适用于检测方法的容器中。

在某些实施方案中，本发明所述的试剂盒，其中所述的C18(octadecylsilylsilica gel，十八烷基键合硅胶)可以为C18膜、C18填料或者C18固相萃取柱。在使用时，可将C18膜或C18填料放入合适的容器中，例如色谱中，对样品进行纯化。

在某些实施方案中，本发明所述的试剂盒，其中所述甲醇、pH调节剂、甲酸或甲酸水溶液被合适地包装，可分别包装在小瓶、小袋和/或任何适用于检测方法的容器中。

在某些实施方案中，本发明第二方面所述的检测样品中芬太尼类化合物的方法，其检测流程图如图1-A所示。

在某些实施方案中，本发明的第七方面所述定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，该方法采用SIMCA-P软件(例如ver.11.5)对所采集的表面增强拉曼光谱(SERS)进行主成分(PCA)分析或偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)分析，建立PCA分析模型或PLS-DA分析模型。

在某些实施方案中，本发明的第七方面所述定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，其检测流程图如图1-B所示。

在某些实施方案中，本发明所述的试剂盒中，所述的纳米金粒子可以是制备获得的溶液(称为原始溶液)，也可以是原始溶液的浓缩液。

在某些实施方案中，本发明所述的提供I^-离子的物质也可以是能够制备I^-离子的化学原料，使用时，先将原料混合后反应制备得到含有I^-离子的物质。

在某些实施方案中，本发明所述的提供Cl^-离子的物质也可以是能够制备Cl^-离子的化学原料，使用时，先将原料混合后反应制备得到含有Cl^-离子的物质。

本发明中使用的术语“烷基”是指饱和的直链或支链一价烃基，优选具有1－12个碳原子，更有选优选具有1－10，1－8，1－6，1－4或1－3个碳原子。“烷基”的典型实例包括但不限于甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基，正戊基，叔戊基，新戊基，己基，庚基，辛基等。

本发明中使用的术语“链烯基”是指含有至少一个碳碳双键(-C＝C-)的烯属不饱和直链或支链一价烃基，优选具有2－12个碳原子，更优选具有2－10，2－8，2－6，2－4或2－3个碳原子。“烯基”的典型实例包括但不限于乙烯基，丙烯基，烯丙基，丙-2-烯-1-基，丁烯-1-基，丁烯-2-基，戊烯-1-基，戊烯-2-基，1,3-戊二烯基，己烯-1-基，己烯-2-基，1,3-己二烯基，庚烯基，辛烯基等。

本发明中使用的术语“C₃-C₆环烷基”意指具有3－6个碳原子并且具有单环的饱和环状烃基，优选具有3－4个碳原子或5－6个碳原子。“环烷基”的典型实例包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基。

本发明中使用的术语“酯基”意指-C(O)OR¹⁰，其中R¹⁰选自如本文所定义的烷基和C₃-C₆环烷基。“酯基”的典型实例包括但不限于-C(O)OCH₃，-C(O)OC₂H₅等。

本发明所用的术语“烷氧基”意指基团-OR¹¹，其中R¹¹为如本发明所定义的烷基或C₃-C₆环烷基。“烷氧基”的典型实例包括但不限于甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，叔丁氧基，仲丁氧基，正戊氧基，正己氧基，1,2-二甲基丁氧基，环己基氧基，环丁基氧基，环戊基氧基，环丙基氧基等。

本发明中使用的术语“氨基”意指-NH₂。

本发明中使用的术语“羟基”意指-OH。

本发明中使用的术语“硝基”意指-NO₂。

本发明所用的术语“卤素”意指氟，氯，溴或碘。优选的卤素基团为氟、氯或溴。

本发明所用的术语“卤代烷基”意指被卤素例如氟，氯，溴或碘单或多取代的烷基。优选的卤代烷基为氯甲基、氯乙基、二氯乙基、三氟甲基、二氟甲基、单氟甲基等。

本发明所用的术语“5-6元杂芳基”表示具有5－6个环成员的杂芳族环基团，包括单环杂芳族环和多环芳族环，其中单环芳族环与一个或多个其他芳族环稠合。杂芳基中具有一个或两个或多个选自O，S或N的杂原子。“杂芳基”的典型实例包括但不限于呋喃基，咪唑基，噻吩基，三氮唑基、四氮唑基、吡啶基，嘧啶基，三唑基等。

本发明所用的术语“5-6元杂环基”表示包含一个、两个或多个独立地选自N，O和S的杂原子的如本文所定义的环烷基。“杂环基”的典型实例包括但不限于四氢呋喃基，四氢噻吩基，吡咯烷基，哌嗪基，哌啶基和吗啉基等。

本发明所用的术语“酰基”意指基团-C(O)R¹²，其中R¹²选自氢和如本发明所定义的烷基，杂烷基，环烷基，杂环烷基，烷氨基，二烷氨基，芳基或杂芳基。“酰基”的典型实例包括但不限于甲酰基，乙酰基，丙酰基、丁酰基，异丁酰基，戊酰基，环己基羰基，苯甲酰基等。

本发明所用的术语“酰基氧基”意指-OC(O)R¹²，其中-C(O)R¹²为如本发明所定义的酰基基团。“酰基氧基”的典型实例包括但不限于甲酰氧基，乙酰基氧基，丙酰基氧基等。

本发明中，单位“M”代表mol/L，“μM”代表μmol/L,“nM”代表nmol/L，“mM”代表mmol/L。

本发明中，术语“约”在用于修饰某一数值或数值范围时，是指包括该数值或数值范围以及该数值或数值范围的本领域技术人员可接受的误差范围，例如该误差范围为±10％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％等。

本发明中，术语“原料药(Active Pharmaceutical Ingredient，API)”是指在用于药品制造中的任何一种物质或物质的混合物，而且在用于制药时，成为药品的一种活性成分。

本发明中，术语“药用辅料”是指生产药品和调配处方时使用的赋形剂和附加剂。常用的药用辅料包括溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。

本发明中，术语“食品”指各种供人食用或者饮用的成品和原料以及按照传统既是食品又是中药材的物品，但是不包括以治疗为目的的物品。一般包括固体食品、液体食品，例如不含酒精的饮料、含有酒精的饮料(包括白酒、啤酒、葡萄酒、黄酒、米酒、药酒等)。

本发明中，术语“食品添加剂”是指为改善食品品质和色、香、味以及为防腐、保鲜和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或者天然物质，包括营养强化剂。

本发明的有益技术效果

本发明第一方面所述的用途，第二方面所述的检测样品中芬太尼类化合物的方法，或第三方面所述的试剂盒，可实现复杂样品中微量芬太尼类化合物的快速选择性检出。在芬太尼/海洛因混合物的化学样品中，可实现海洛因主体中的低至0.05％芬太尼的SERS选择性检出(芬太尼浓度10ng/mL、50ng/mL)；在芬太尼与4种常见原料药或药用辅料的化学样品中，可实现药用辅料中低至0.002％芬太尼的SERS选择性检出(芬太尼浓度为10ng/mL)。在尿液样品中，可实现吗啡样品中低至0.01％芬太尼的SERS选择性检出(芬太尼浓度为50ng/mL)。该方法具有灵敏、快速、易操作等优点，可用于现场快检、毒物检测、法医鉴定等多领域。

本发明第五方面所述的用途，第六方面或第七方面所述的检测方法，或第八方面所述的试剂盒，可以快速定性检测样品中是否含有芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物，该方法具有灵敏、快速、易操作等优点，可用于现场快检、毒物检测、法医鉴定等多领域。

附图说明

图1-A检测样品中芬太尼类化合物的方法的流程图；

图1-B定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法的流程图；

图2-A AuNPs的紫外-可见光谱图；

图2-B AuNPs的透射电镜图；

图3-A芬太尼类化合物的结构；

图3-B吗啡类化合物的结构；

图4-A芬太尼类化合物的拉曼谱图；

图4-B芬太尼类化合物的SERS谱图；

图4-C吗啡类化合物的拉曼谱图；

图4-D吗啡类化合物的SERS谱图；

图5-A不同种类的无机盐对芬太尼1000cm^-1处SERS谱峰、和可待因622cm^-1处SERS谱峰强度的影响，其中芬太尼和可待因的浓度均为100ng/mL；

图5-B不同浓度的NaCl对芬太尼1000cm^-1处SERS谱峰、和可待因622cm^-1处SERS谱峰强度的影响，其中芬太尼和可待因的浓度均为100ng/mL；

图6-A芬太尼/吗啡类化合物湿法检测后的主成分分析法(PCA)区分结果，其中芬太尼类化合物和吗啡类化合物的浓度均为500ng/mL；

图6-B芬太尼/吗啡类化合物的不同拉曼位移对PCA区分的贡献度；

图6-C芬太尼/吗啡类化合物干法检测后的PCA法区分结果；芬太尼和吗啡类化合物的浓度均为500ng/mL(干法检测指将样品与AuNPs混合物滴加在硅片上，挥发至干后进行SERS检测的方法)；

图6-D芬太尼/吗啡类化合物湿法检测后的偏最小二乘法(PLS-DA)区分结果；芬太尼和吗啡类化合物的浓度均为500ng/mL；

图6-E芬太尼/吗啡类化合物湿法检测后的PCA区分结果；芬太尼和吗啡类化合物的浓度均为100ng/mL；

图6-F芬太尼/吗啡类化合物干法检测后的PCA区分结果；芬太尼和吗啡类化合物的浓度均为100ng/mL；

图6-G芬太尼/吗啡类化合物湿法检测后的PLS-DA区分结果；芬太尼和吗啡类化合物的浓度均为100ng/mL；

图6-A至图6-G中，各图例的含义如下：■代表芬太尼；●代表3-甲基芬太尼；▲代表卡芬太尼；◆代表舒芬太尼；●代表瑞芬太尼；□代表吗啡；○代表6-单乙酰吗啡；△代表海洛因；◇代表可待因；

代表噻吩诺啡；

代表030418，

图7-A不同浓度芬太尼/吗啡混合物的PCA区分结果，其中各图例的含义如下：■代表芬太尼；●代表3-甲基芬太尼；▲代表卡芬太尼；◆代表舒芬太尼；●代表瑞芬太尼；□代表吗啡；○代表6-单乙酰吗啡；△代表海洛因；◇代表可待因；

代表噻吩诺啡；

代表030418；

代表芬太尼/吗啡比例为10:1；

代表芬太尼/吗啡比例为5:1；

代表芬太尼/吗啡比例为1:1；

代表芬太尼/吗啡比例为1:5；

代表芬太尼/吗啡比例为1:10)；

图7-B 8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的PCA区分结果，其中各图例的含义如下：■代表芬太尼；●代表3-甲基芬太尼；▲代表卡芬太尼；◆代表舒芬太尼；

代表瑞芬太尼；□代表吗啡；○代表6-单乙酰吗啡；△代表海洛因；◇代表可待因；

代表噻吩诺啡；

代表030418；

代表8种芬太尼类化合物，包括乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼；

代表3种吗啡类化合物，包括纳洛酮、纳曲酮、纳美芬)；

图7-C 8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的PLS-DA区分结果，其中各图例的含义同图7-B；

图7-D不同浓度芬太尼/海洛因混合物的PCA区分结果，其中各图例的含义如下：■代表芬太尼；●代表3-甲基芬太尼；▲代表卡芬太尼；◆代表舒芬太尼；●代表瑞芬太尼；□代表吗啡；○代表6-单乙酰吗啡；△代表海洛因；◇代表可待因；

代表噻吩诺啡；

代表030418；

代表海洛因/芬太尼比例为500:1；

代表海洛因/芬太尼比例为100:1；●代表海洛因/芬太尼比例为50:1；

代表海洛因/芬太尼比例为10:1；

代表海洛因/芬太尼比例为5:1；

代表海洛因/芬太尼比例为1:1；

代表海洛因/芬太尼比例为1:5；

代表海洛因/芬太尼比例为1:10)；

图8-A加入不同浓度海洛因后，芬太尼(50ng/mL)1000cm^-1处SERS谱峰的强度变化；

图8-B加入不同浓度海洛因后，芬太尼(10ng/mL)1000cm^-1处SERS峰的强度变化；

图9芬太尼与药物或药物辅料的浓度比例为1:2000时的SERS谱图；(●1000cm^-1；○622cm^-1)

图10不同前处理方法对尿液中芬太尼SERS信号的影响；(●1000cm^-1)

图11加入不同浓度吗啡后，尿液中芬太尼(50ng/mL)1000cm^-1处SERS峰的强度变化；

图12尿液中5种芬太尼类化合物的定量检测标准曲线。

具体实施方式

下面结合本发明的具体实施例来进一步说明本发明的实质性内容，应理解，以下实施例仅用于说明本发明，但并不以此来限定本发明的保护范围。下面实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的进行。所用药品或试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

虽然以下实施例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，如果未特别说明，下面实施例中所用的材料和操作方法是本领域公知的。

以下实施例中：

D-甘露醇购自Alfa Aesar(美国)；

诺芬太尼购自上海韶远科技有限公司；

芬太尼、吗啡、可待因购自中国药品生物制品检定所(北京)；

海洛因、咖啡因、6-单乙酰吗啡来自国家麻醉品实验室(北京)；

普鲁卡因、对乙酰氨基酚购自中国食品药品检定研究院(北京)；

乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、呋喃芬太尼、奥芬太尼由北京市公安局法医检验鉴定中心惠赠；

卡芬太尼、舒芬太尼、3-甲基芬太尼、瑞芬太尼、噻吩诺啡、030418、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬来自中国人民解放军军事科学院军事医学研究院。

以下实施例中用到的芬太尼类化合物和吗啡类化合物的结构式如下所示：

实施例1AuNPs的制备

1.1采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备粒径为50-55nm的AuNPs。

称取100mg三水合四氯金酸于100mL容量瓶中，以超纯水溶解并定容，得到1mg/mL的母液。量取10mL母液并用超纯水稀释至100mL，转移至250mL三颈圆底烧瓶中进行油浴，温度设置为110℃，转速设置为1100r/min，加热至沸腾并出现回流时迅速加入0.84mL质量分数为0.1％的二水合柠檬酸三钠水溶液，持续加热搅拌40min后撤去热源，自然冷却至室温后分装存储于室温，得到AuNPs。

制备的AuNPs通过紫外可见光谱和透射电镜表征，如图2-A和图2-B所示，粒径约为50-55nm。根据浓度计算公式C＝A₄₅₀/ε₄₅₀(粒径50-55nm AuNPs的ε₄₅₀为9.92×10⁹-1.33×10¹⁰M^-1cm^-1)计算实施例1得到的AuNPs的浓度约为0.05nM。

1.2制备核壳型AuNPs

取30mL采用柠檬酸三钠还原法制备的粒径为50-55nm的AuNPs，加入0.4mL浓度为1mM的氨丙基三甲氧基硅烷(APTMS)溶液，并搅拌15min，再加入3.2mL质量浓度为0.54％的硅酸钠溶液并调节至pH10.2，搅拌3min，90℃条件下水浴加热20min，得到SiO₂包覆的核壳AuNPs,SiO₂壳层的厚度为2nm。

下面实施例中用到的浓缩的AuNPs，均由实施例1中1.1制备的AuNPs浓缩得到，浓缩步骤为：取实施例1制备的AuNPs 1-4mL(浓度约为0.05nM)，6000r/min条件下离心10min，弃去上清液即得，浓缩后的AuNPs体积约为10μL。

实施例2芬太尼/吗啡类化合物的拉曼及SERS谱图

本实施例中，分析物包括芬太尼类化合物：芬太尼、瑞芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼；和吗啡类化合物：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418。上述芬太尼/吗啡类化合物的结构如图3-A和图3-B所示。

取200μL浓度为500ng/mL分析物水溶液，同时取200μL超纯水作为空白样品。向分析物水溶液或空白样品中加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入NaCl水溶液，使检测样品中NaCl的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为60mW，积分时间设置为10s，每个样品平行采集3次(n＝3)。芬太尼/吗啡类化合物的拉曼及SERS谱图如图4-A至图4-D所示。

实施例3不同种类的无机盐对芬太尼1000cm^-1处SERS谱峰和可待因622cm^-1处SERS谱峰强度的影响

该实施例中以芬太尼为芬太尼类化合物的代表，以可待因为吗啡类化合物的代表。取9份浓度为100ng/mL的芬太尼水溶液，和9份浓度为100ng/mL的可待因水溶液，每份体积约为200μL。向每份样品中加入浓缩后的AuNPs，使每份检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再向9份芬太尼水溶液样品中分别加入NaCl、KCl、MgCl₂、Na₂SO₄、K₂SO₄、MgSO₄、NaI、KI、MgI₂水溶液，向9份可待因水溶液样品中分别加入NaCl、KCl、MgCl₂、Na₂SO₄、K₂SO₄、MgSO₄、KI、NaI、MgI₂水溶液，使每份检测样品中NaCl、KCl、MgCl₂、Na₂SO₄、K₂SO₄、MgSO₄、NaI、KI、MgI₂的浓度分别约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为60mW，积分时间设置为10s，每个样品平行采集3次(n＝3)。不同种类的无机盐对芬太尼1000cm^-1和可待因622cm^-1处峰强度的影响如图5-A所示。从图5-A可以看出，不同阴离子对芬太尼SERS谱峰强度的影响顺序为SO₄ ^2-<Cl^-<I^-，对可待因SERS谱峰强度的影响顺序为I^-<Cl^-<SO₄ ^2-；不同阳离子对芬太尼SERS谱峰强度的影响顺序为K⁺<Na⁺<Mg²⁺，对可待因SERS谱峰强度的影响顺序为Mg²⁺≈K⁺<Na⁺。

较之可待因，MgI₂对芬太尼具有明显的选择性SERS增强作用，同时NaCl对芬太尼和可待因的SERS增强能力适中并且相近。

实施例4不同浓度的NaCl对芬太尼1000cm^-1处SERS谱峰和可待因622cm^-1处SERS谱峰强度的影响

取5份浓度为100ng/mL芬太尼水溶液，5份浓度为100ng/mL可待因水溶液，每份体积约为200μL，每份样品中加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再向每份样品中加入NaCl，使每份检测样品中NaCl的浓度分别为50mM,100mM,200mM,300mM,或400mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为60mW，积分时间设置为10s，每个样品平行采集3次(n＝3)。不同浓度的NaCl对芬太尼1000cm^-1处SERS谱峰和可待因622cm^-1处SERS谱峰强度的影响如图5-B所示。对于100ng/mL芬太尼和可待因水溶液，加入不同浓度的NaCl后，均会出现各自的特征拉曼峰，说明该团聚剂可用于芬太尼和吗啡类化合物的无差别SERS检出，且均在检测样品中NaCl浓度约为200mM时各自的特征拉曼峰最明显。

实施例5芬太尼/吗啡类化合物的PCA区分结果(湿法检测)

本实施例中，分析物包括芬太尼类化合物：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼；和吗啡类化合物：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418。

取200μL浓度为500ng/mL的分析物水溶液，加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入NaCl，使检测样品中NaCl的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

将3次检测的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据全部导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，将化合物名称和拉曼位移设置为Primary ID，点击“下一步”，再点击“完成”，双击生成的“model”一栏，单击“workset”，选择“scale”，选择“UV”type，点击“确定”按钮，点击“Analysis”，选择PCA分析模型，点击“Autofit”，最后点击“createfour overview plots”生成结果图，进行分析。浓度为500ng/mL的芬太尼/吗啡类化合物的SERS归类图如图6-A所示，芬太尼类化合物与吗啡类化合物可以实现较好的归类区分。

实施例6芬太尼/吗啡类化合物的不同拉曼位移对SERS区分的影响

通过实施例5进行PCA分析后输出归类区分结果，得到不同拉曼位移对SERS区分的影响，分析不同拉曼位移对SERS归类区分程度的贡献。如图6-B所示，1000cm^-1处的拉曼峰使化合物趋向归类图(图6-A)的左方，589，988，1004和1024cm^-1处的拉曼峰使化合物趋向归类图(图6-A)的上方。其中，1000，1024cm^-1出现在大部分的芬太尼SERS谱图中，589cm^-1出现在3-甲基芬太尼的SERS谱图中。

实施例7芬太尼/吗啡类化合物的PCA区分结果(干法检测)

本实施例中，分析物包括芬太尼类化合物：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼；和吗啡类化合物：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418。

取200μL浓度为500ng/mL的分析物水溶液，加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入0.5μL质量分数为0.3％的十二烷基硫酸钠(SDS)，6000r/min条件下离心10min，弃去上清液得到浓缩液，滴加1μL浓缩液在硅片上，自然晾干后利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

将得到的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，将化合物名称和拉曼位移设置为Primary ID，点击“下一步”，再点击“完成”，双击生成的“model”一栏，单击“workset”，选择“scale”，选择“UV”type，点击“确定”按钮，点击“Analysis”，选择PCA分析模型，点击“Autofit”，最后点击“create fouroverview plots”生成结果图，进行分析。浓度为500ng/mL的芬太尼/吗啡类化合物的SERS区分图如图6-C所示，干法检测的区分效果仍然存在，但弱于湿法检测的区分效果。

实施例8芬太尼/吗啡类化合物的PLS-DA区分结果(湿法检测)

本实施例中，分析物包括芬太尼类化合物：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼；和吗啡类化合物：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418。

取200μL浓度为500ng/mL的分析物水溶液，加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入NaCl，使检测样品中NaCl的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

将得到的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，将化合物名称和拉曼位移设置为Primary ID，点击“下一步”，再点击“完成”，双击生成的“model”一栏，单击“workset”，选择“scale”，选择“UV”type，点击“确定”按钮，点击“Analysis”，选择PLS-DA分析模型，点击“Autofit”，最后点击“create fouroverview plots”生成结果图，进行分析。浓度为500ng/mL的芬太尼/吗啡类化合物的SERS区分图如图6-D所示，PLS-DA法亦能很好实现芬太尼类化合物与吗啡类化合物的归类区分。

实施例9不同浓度芬太尼/吗啡类化合物的PCA区分结果(湿法检测)

分析物种类酮实施例5，分析物浓度为100ng/mL，其它操作步骤参照实施例5。结果如图6-E所示。结果显示，较之分析物浓度为500ng/mL时，分析物浓度为100ng/mL时，仍可实现PCA法区分，但区分效果稍逊。

实施例10不同浓度芬太尼/吗啡类化合物的PCA区分结果(干法检测)分析物种类酮实施例7，分析物浓度为100ng/mL，其它操作步骤参照实施例7，结果如图6-F所示。结果显示，较之分析物浓度为500ng/mL时，分析物浓度为100ng/mL时，仍可实现PCA法区分，但区分效果稍逊。分析物浓度相同时，较之相同浓度的湿法检测结果，干法检测的区分效果稍逊。

实施例11不同浓度芬太尼/吗啡类化合物的PLS-DA区分结果(湿法检测)

分析物种类同实施例8，分析物浓度为100ng/mL，操作步骤参照实施例8，结果如图6-G所示。结果显示，PLS-DA法与PCA法都能较好实现芬太尼/吗啡类化合物的区分。

实施例12不同浓度芬太尼/吗啡混合物的PCA区分结果

制备不同浓度的芬太尼水溶液和吗啡水溶液，芬太尼水溶液的浓度为50-500ng/mL，吗啡水溶液的浓度为50-500ng/mL。取相同体积、不同浓度的芬太尼水溶液和吗啡水溶液，混合，获得具有不同浓度比的5个吗啡/芬太尼混合物水溶液样品，5个样品中吗啡和芬太尼的浓度比分别为1:10、1:5、1:1、5:1、10:1。

取200μL芬太尼/吗啡混合物水溶液样品，加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入NaCl，使检测样品中NaCl的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

将得到的不同浓度比的芬太尼/吗啡混合物的SERS谱图数据，以及实施例5获得的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，将化合物名称和拉曼位移设置为Primary ID，点击“下一步”，再点击“完成”，双击生成的“model”一栏，单击“workset”，选择“scale”，选择“UV”type，点击“确定”按钮，点击“Analysis”，选择PCA分析模型，点击“Autofit”，最后点击“create four overview plots”生成结果图，进行分析。结果如图7-A所示，当吗啡与芬太尼的比例大于1时，混合物趋向于归类于吗啡类化合物；比例小于1时，混合物趋向于芬太尼类化合物；比例等于1时处于两类化合物之间。

实施例13 8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的PCA区分结果

8种芬太尼类化合物包括乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼。3种吗啡类化合物包括纳洛酮、纳曲酮、纳美芬。

每种化合物浓度均为500ng/mL，操作步骤参照实施例5，得到8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的SERS谱图数据。

参照实施例5，将8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的SERS谱图数据，以及实施例5获得的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，进行PCA分析，结果如图7-B所示。当加入8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物后，芬太尼/吗啡类化合物仍能实现较好区分。

实施例14 8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的PLS-DA区分结果

参照实施例8，将实施例13得到的8种芬太尼类化合物和3种吗啡类化合物的SERS谱图数据，以及实施例8得到的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，进行PLS-DA，结果如图7-C所示。结果显示，PLS-DA法也能实现芬太尼/吗啡类化合物的区分。

实施例15不同浓度芬太尼/海洛因混合物的PCA区分结果

制备不同浓度的芬太尼水溶液和海洛因水溶液，芬太尼水溶液的浓度为50-500ng/mL，海洛因水溶液的浓度为50-25000ng/mL。取相同体积、不同浓度的芬太尼水溶液和海洛因水溶液，混合，获得8个具有不同浓度比例的芬太尼/海洛因混合物水溶液样品，8个样品中吗啡与海洛因的浓度比分别为500:1、100:1、50:1、10:1、5:1、1:1、1:5、1:10。

取200μL芬太尼/海洛因混合物水溶液样品，加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入NaCl，使检测样品中NaCl的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

将得到的不同浓度比的芬太尼/海洛因混合物的SERS谱图数据，以及实施例5获得的5种芬太尼类化合物和6种吗啡类化合物的SERS谱图数据导入到软件SIMCA-P(ver.11.5)中，将化合物名称和拉曼位移设置为Primary ID，点击“下一步”，再点击“完成”，双击生成的“model”一栏，单击“workset”，选择“scale”，选择“UV”type，点击“确定”按钮，点击“Analysis”，选择PCA分析模型，点击“Autofit”，最后点击“create four overview plots”生成结果图，进行分析。结果如图7-D所示，当芬太尼/海洛因的比例≧1:1的条件下，方可归类于芬太尼；当芬太尼/海洛因的比例<1:1时，无法归类为芬太尼类或吗啡类。

实施例15海洛因共存时微量芬太尼的SERS选择性检测1

配制200μL的芬太尼/海洛因混合物水溶液，芬太尼浓度为50ng/mL，芬太尼与海洛因的浓度比例分别为1:1，1:5，1:10，1:50，1:100，1:500，1:1000，1:2000。

向200μL的芬太尼/海洛因混合物水溶液加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入MgI₂水溶液，使检测样品中MgI₂的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

加入不同浓度的海洛因后，芬太尼(50ng/mL)在1000cm^-1处SERS谱峰强度的变化如图8-A所示，图中可以看出，虽然随着共存海洛因浓度的增加，芬太尼在1000cm^-1处拉曼峰的强度有所下降，说明海洛因在部分程度上影响了芬太尼的SERS谱峰强度，但仍可实现高达2000倍海洛因共存时的微量芬太尼的SERS选择性检测。

实施例16海洛因共存时微量芬太尼的SERS选择性检测2

芬太尼浓度10ng/mL，芬太尼与海洛因的浓度比例分别为1:1，1:5，1:10，1:50，1:100，1:500，1:1000，1:2000，其它操作步骤参考实施例15。加入不同浓度的海洛因后，芬太尼(10ng/mL)在1000cm^-1处SERS谱峰强度的变化如图8-B所示，10ng/mL的芬太尼同样可以在高达2000倍海洛因共存时被正确检出。

实施例17其它药物或药物辅料共存时微量芬太尼的SERS选择性检测

4种药物或药物辅料分别为咖啡因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、D-甘露醇，配制200μL含有不同浓度药物或药物辅料的芬太尼混合物水溶液，芬太尼浓度为10ng/mL，芬太尼与4种药物或药物辅料的浓度比例分别为1:1，1:10，1:100，1:1000，1:10000，1:50000。同时取200μL超纯水作为空白样品。

向200μL含有不同浓度药物或药物辅料的芬太尼水溶液或空白样品中加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入MgI₂水溶液，使检测样品中MgI₂的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s。采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

结果显示，10ng/mL的芬太尼仍然可以在高达50000倍药物或药物辅料的存在下被检出。图9所示的为芬太尼与药物或药物辅料的浓度比例为1:2000时的SERS谱图。

实施例18前处理对尿液中芬太尼SERS谱峰强度的影响

取健康人尿液，将其用超纯水稀释5倍和10倍，得到稀释5倍的尿液和稀释10倍的尿液，即20％尿液和10％尿液。

取芬太尼储备液，分别用超纯水、尿液原液、稀释5倍的尿液和稀释10倍的尿液作为溶剂，配制得到4种浓度均为500ng/mL的芬太尼样品，标记为1号样品(溶剂为超纯水)、2号样品(溶剂为尿液原液)、3号样品(溶剂为稀释5倍的尿液)、4号样品(溶剂为稀释10倍的尿液)，各取200μL。另取200μL稀释10倍的尿液作为空白对照样品。

a)分别向200μL2-4号样品和200μL空白对照样品中加入浓缩后的AuNPs，使检测样品中AuNPs的浓度约为0.25nM，混匀，再加入MgI₂水溶液，使检测样品中MgI₂的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s，采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

b)将200μL1号样品、4号样品和空白对照样品分别用NaOH溶液调节至pH约为10.0，其中4号样品设置2个平行样。然后将它们分别加入到4只自制的C18柱(C18柱的制备方法：取2片直径1.5mm的C18膜，填入300μL容量的移液枪枪头中，使枪头中C18膜的装填高度约2-4mm，即得。在使用前对C18柱预先活化，活化的方法为：先用200μL的甲醇淋洗，再用200μL超纯水淋洗)中，5206r/min(2000g)下离心1min，再加入200μL超纯水润洗，弃去润洗液，最后加入200μL甲醇-0.1v/v％甲酸水溶液(50:50，v/v)进行洗脱，得到的4份洗脱液。

向洗脱液中加入AuNPs浓缩液，使1号样品洗脱液中AuNPs的浓度约为1nM、2个4号样品洗脱液中AuNPs的浓度分别约为0.25nM和1nM,空白对照样品中AuNPs的浓度约为0.25nM。然后分别向4份洗脱液中加入MgI₂水溶液，使每份检测样品中MgI₂的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s。采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

前处理对尿液中芬太尼SERS信号的影响如图10所示，图中可以看出，当利用C18柱进行样品前处理后，芬太尼在1000cm^-1处SERS信号明显提高，同时样品中AuNPs浓浓度约为1nM时，尿液样品中芬太尼在1000cm^-1处的SERS信号与水溶液中相当，即回收率约为100％。

实施例19尿样中海洛因主要代谢产物吗啡共存时微量芬太尼的SERS选择性检测

取健康人尿液，将其用超纯水稀释10倍作为溶剂，配制200μL含有不同浓度吗啡的芬太尼/吗啡混合物尿液样品，其中芬太尼浓度为50ng/mL，芬太尼与吗啡的浓度比例分别为1:1，1:10，1:100，1:1000，1:2000，1:10000。然后用NaOH溶液将混合物样品调节至pH约为10.0，再分别将样品加入到自制的C18柱中(C18柱预先活化，活化的方法为：先用200μL的甲醇淋洗，再用200μL超纯水淋洗)，5206r/min(2000g)条件下离心1min，再加入200μL超纯水洗去杂质，最后加入200μL甲醇-0.1v/v％甲酸水溶液(50:50，v/v)进行洗脱，得到的洗脱液。

向洗脱液中加入AuNPs浓缩液，使检测样品中AuNPs的浓度为1nM，然后向其中加入MgI₂水溶液，使检测样品中MgI₂的浓度约为200mM，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s。采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

加入不同浓度吗啡后，尿液中芬太尼(50ng/mL)1000cm^-1处SERS谱峰的强度变化如图11所示。随着尿液样品中吗啡浓度的升高，芬太尼在1000cm^-1处的SERS信号几乎不受影响，最终尿液样品中50ng/mL的芬太尼可在高达10000倍吗啡的存在下被检出。

实施例20尿液中五种芬太尼的定量检测

取健康人尿液，将其用超纯水稀释10倍作为溶剂，配制200μL不同浓度的5种芬太尼类化合物尿液样品，然后用NaOH溶液将混合物尿液样品调节至pH约为10，再分别加入到自制的C18柱中(C18柱预先活化，活化的方法为：先用200μL的甲醇淋洗，再用200μL超纯水淋洗)，5206r/min(2000g)条件下离心1min，再加入200μL超纯水润洗，弃去润洗液，最后加入200μL甲醇-0.1v/v％甲酸水溶液(50:50，v/v)进行洗脱，得到的洗脱液。

向洗脱液中加入AuNPs浓缩液，使检测样品中AuNPs的浓度为1nM，然后向其中加入MgI₂水溶液使检测样品中MgI₂的浓度约为200mM，，混匀，利用便携式拉曼光谱仪进行SERS检测，激光功率设置为90mW，积分时间设置为10s。采集SERS谱图，每个样品平行采集3次(n＝3)。

以芬太尼在1000cm^-1处SERS谱峰强度为纵坐标，芬太尼浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图12所示，其中A)为芬太尼的标准曲线；B)为卡芬太尼的标准曲线；C)为4-氟丁酰芬太尼的标准曲线；D)为诺芬太尼的标准曲线；E)为瑞芬太尼的标准曲线。线性范围为，芬太尼：50-100ng/mL；卡芬太尼：100-2000ng/mL；4-氟丁酰芬太尼：500-5000ng/mL；诺芬太尼：2000-50000ng/mL；瑞芬太尼：2000-20000ng/mL。检测限为，芬太尼：50ng/mL；卡芬太尼：100ng/mL；4-氟丁酰芬太尼：500ng/mL；诺芬太尼或瑞芬太尼：2000ng/mL。

最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (14)

1.金纳米粒子和提供I^-离子的物质联合用于检测样品中芬太尼类化合物的用途，或者在制备用于检测样品中芬太尼类化合物试剂盒中的用途，

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供I^-离子的物质是包含I^-离子的盐或是能够制备得到I^-离子的化学原料，例如包含I^-离子的无机盐，包括MgI₂、KI等；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合；

优选地，所述的样品为生物样品(例如尿液)或化学样品(例如，原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

2.一种检测样品中芬太尼类化合物的方法，包括以下操作：

向待测样品中加入纳米金粒子，混合，再加入提供I^-的离子物质，混合，得到混合物；

采集混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

可选地，判断生物样品中是否存在芬太尼类化合物，若混合物的表面增强拉曼光谱在波数为约990-1005cm^-1处出现特征峰，确定生物样品中存在芬太尼类化合物；

可选地，利用特征峰的强度对样品中的芬太尼类化合物进行定量，

可选地，在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理；

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供I^-离子的物质是包含I^-离子的盐或是能够制备得到I^-离子的化学原料，例如包含I^-离子的无机盐，包括MgI₂、KI等；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合；

优选地，所述的样品为生物样品(例如尿液)或化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)；

优选地，所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.05-5nM，约0.1-4nM，约0.25-2nM，约0.25-1.5nM或约0.25-1nM，例如：约0.1nM，约0.2nM，约0.25nM，约0.3nM，约0.5nM，约0.8nM，约1nM，约1.2nM，约1.5nM，约1.8nM，约2nM，约2.2nM，约2.5nM，约2.8nM，约3.0nM，约3.2nM，约3.4nM，约3.6nM，约3.8nM，约4nM，约4.2nM，约4.5nM，约4.8nM；

优选地，所述混合物中提供I^-离子的物质的浓度为约50-400mM，例如约100-200mM。

3.权利要求2的检测方法，其中：所述样品为生物样品(例如尿液)，所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.25-2nM，约0.25-1.5nM，约0.5-1.5nM，或约0.8-1.2nM，例如：约0.9nM，约1nM，约1.1nM。

4.权利要求3的检测方法，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用水(例如超纯水)稀释样品，优选的稀释倍数为5-10倍；

调节稀释后的样品的pH值至9-11，例如10；

用C18(octadecylsilyl silica gel，十八烷基键合硅胶)对样品进行纯化，得到待测样品；

优选地，用NaOH溶液调节生物样品的pH值。

5.权利要求4的检测方法，其中：用C18对样品进行纯化的方法包括以下操作：

分别用甲醇和/或水(例如超纯水)对C18进行淋洗；

使样品与C18接触，除去样品中的液体；

用水润洗C18，弃去洗脱液；

用甲醇和甲酸水溶液的混合液对C18进行洗脱，得到洗脱液，即为待测样品，

优选地，甲醇和甲酸水溶液的混合液中甲醇和甲酸水溶液的体积比为1:(0.8-1.2)，例如1:1；

优选地，所述甲酸水溶液的浓度为0.08-0.12v/v％，例如0.1v/v％。

6.权利要求2的检测方法，其中：所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)，

所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.1-2nM，例如约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM。

7.权利要求6的检测方法，其中对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品。

8.试剂盒，包括：

金纳米粒子，

提供I^-离子的物质，

C18(octadecylsilyl silica gel，十八烷基键合硅胶)，

可选地，所述试剂盒还包括选自以下物质中的一种或多种物质：甲醇、pH调节剂、甲酸或甲酸水溶液；

可选地，所述试剂盒还包括说明书；

可选地，所述试剂盒还包括一个或多个滴定版；

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供I^-离子的物质是包含I^-离子的盐或是能够制备得到I^-离子的化学原料，例如包含I^-离子的无机盐，包括MgI₂、KI等；

优选地，所述C18为C18膜、C18填料或者C18固相萃取柱；

优选地，所述pH调节剂为NaOH或含有NaOH的溶液；

优选地，所述甲酸水溶液的浓度为0.08-0.12v/v％，例如0.1v/v％；

优选地，所述说明书中至少记载权利要求3-5任一项所述的检测方法。

9.权利要求8的试剂盒用于检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物的用途，或

在使用表面增强拉曼光谱(SERS)法检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物中的用途；

优选地，所述样品为生物样品(例如尿液)；

优选地，所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；优选地，所述芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合。

10.金纳米粒子和提供Cl^-离子的物质联合用于检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的用途，或者

在制备用于检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的试剂盒中的用途，或者

用于定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的用途，

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供Cl^-离子的物质是包含Cl^-离子的盐或是能够制备得到Cl^-离子的化学原料，例如包含Cl^-离子的无机盐，包括NaCl、MgCl₂等；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；优选地，所述芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物为式II所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中：R₁为氢、烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

代表单键或双键；

R₂为羟基、烷氧基、亚甲基、氧代或酰基氧基；

R₃为羟基、烷氧基或酰基氧基；

R₄为烷基或链烯基，其中R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

R₅为羟基或烷基，其中烷基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

可选地，位置6和14之间形成乙基桥；

优选地，所述的药学上可接受的盐为硫酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或乳酸盐；优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、3-单乙酰吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、环丙诺啡、丁丙诺啡、去甲吗啡、氢化吗啡、甲基去氧吗啡、羟二氢吗啡、二氢吗啡、二氢去氧吗啡、尼克吗啡、乙基吗啡、苄吗啡、吗啉吗啡、吗啡甲基磺酸盐、二氢埃托啡、盐酸埃托啡、乙酰可待因、烟酰可待因、二氢可待因、乙酰二氢可待因、氢化可待因、二氢可待因酮、羟吗啡酮、二氢吗啡酮、甲基二氢吗啡酮、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)。

11.一种检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，包括以下操作：

向待测样品中加入纳米金粒子，混合，再加入提供Cl^-的离子物质，混合；得到混合物；

采集混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

可选地，判断生物样品中是否存在芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物，若混合物的表面增强拉曼光谱在波数为约990-1005cm^-1处出现特征峰，确定生物样品中存在芬太尼类化合物；若混合物的表面增强拉曼光谱在波数为约620-635cm^-1处出现特征峰，确定生物样品中存在吗啡类化合物；

可选地，利用特征峰的强度对样品中的芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物进行定量，

可选地，在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理；

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供Cl^-离子的物质是包含Cl^-离子的盐或是能够制备得到Cl^-离子的化学原料，例如包含Cl^-离子的无机盐，包括NaCl、MgCl₂等；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物为式II所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中：R₁为氢、烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

代表单键或双键；

R₂为羟基、烷氧基、亚甲基、氧代或酰基氧基；

R₃为羟基、烷氧基或酰基氧基；

R₄为烷基或链烯基，其中R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

R₅为羟基或烷基，其中烷基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

可选地，位置6和14之间形成乙基桥；

优选地，所述的药学上可接受的盐为硫酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或乳酸盐；优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、3-单乙酰吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、环丙诺啡、丁丙诺啡、去甲吗啡、氢化吗啡、甲基去氧吗啡、羟二氢吗啡、二氢吗啡、二氢去氧吗啡、尼克吗啡、乙基吗啡、苄吗啡、吗啉吗啡、吗啡甲基磺酸盐、二氢埃托啡、盐酸埃托啡、乙酰可待因、烟酰可待因、二氢可待因、乙酰二氢可待因、氢化可待因、二氢可待因酮、羟吗啡酮、二氢吗啡酮、甲基二氢吗啡酮、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述的样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)；

优选地，所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.05-5nM，约0.1-4nM，约0.25-2nM，约0.25-1.5nM，约0.1-2nM，约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM或约0.25-1nM，例如：约0.1nM，约0.2nM，约0.25nM，约0.3nM，约0.5nM，约0.8nM，约1nM，约1.2nM，约1.5nM，约1.8nM，约2nM，约2.2nM，约2.5nM，约2.8nM，约3.0nM，约3.2nM，约3.4nM，约3.6nM，约3.8nM，约4nM，约4.2nM，约4.5nM，约4.8nM；

优选地，所述混合物中纳米金粒子的浓度为约0.1-2nM，例如约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM；

优选地，所述混合物中提供Cl^-离子的物质的浓度为约50-400mM，例如约100-200mM；

优选地，对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品。

12.一种定性检测样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的方法，包括以下操作：

配制芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的标准溶液；

向标准溶液中加入纳米金粒子，混合，再加入提供Cl^-的离子物质，混合，得到第一混合物；

采集第一混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

对第一混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)进行主成分(PCA)分析或偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)分析，建立PCA分析模型或PLS-DA分析模型；

向待测样品中加入纳米金粒子，混合，再加入提供Cl^-的离子物质，混合，得到第二混合物；

采集第二混合物的表面增强拉曼光谱(SERS)；

根据PCA分析模型或PLS-DA分析模型确定样品中是否含有芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物，

可选地，在向待测样品中加入纳米金粒子之前，对样品进行预处理；

优选地，对样品进行预处理的方法包括以下操作：

用溶剂(例如水(优选超纯水))溶解样品，得到待测样品溶液，

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供Cl^-离子的物质是包含Cl^-离子的盐或是能够制备得到Cl^-离子的化学原料，例如包含Cl^-离子的无机盐，包括NaCl、MgCl₂等；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物为式II所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中：R₁为氢、烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

代表单键或双键；

R₂为羟基、烷氧基、亚甲基、氧代或酰基氧基；

R₃为羟基、烷氧基或酰基氧基；

R₄为烷基或链烯基，其中R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

R₅为羟基或烷基，其中烷基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

可选地，位置6和14之间形成乙基桥；

优选地，所述的药学上可接受的盐为硫酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或乳酸盐；

优选地，所述的药学上可接受的盐为硫酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或乳酸盐；

优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、3-单乙酰吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、环丙诺啡、丁丙诺啡、去甲吗啡、氢化吗啡、甲基去氧吗啡、羟二氢吗啡、二氢吗啡、二氢去氧吗啡、尼克吗啡、乙基吗啡、苄吗啡、吗啉吗啡、吗啡甲基磺酸盐、二氢埃托啡、盐酸埃托啡、乙酰可待因、烟酰可待因、二氢可待因、乙酰二氢可待因、氢化可待因、二氢可待因酮、羟吗啡酮、二氢吗啡酮、甲基二氢吗啡酮、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物选自：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述的样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)；

优选地，所述第一混合物或第二混合物中纳米金粒子的浓度为约0.1-2nM，例如约0.25-1.5nM，约0.1-0.5nM，约0.2-0.3nM，约0.2-0.4nM、约0.6-0.8nM、约1.2-1.8nM；

优选地，所述混合物中提供Cl^-离子的物质的浓度为约50-400mM，例如约100-200mM。

13.试剂盒，包括：

金纳米粒子，

提供Cl^-离子的物质，

可选地，所述试剂盒还包括说明书；

可选地，所述试剂盒还包括一个或多个滴定版；

优选地，所述的纳米金粒子为裸金纳米粒子或核壳型金纳米粒子，例如有孔核壳型金纳米粒子；

优选地，所述的纳米金粒子的直径为约1-200nm，例如：约10-150nm，约30～70nm，约50-55nm，约40-60nm；

优选地，所述的提供Cl^-离子的物质是包含Cl^-离子的盐或是能够制备得到Cl^-离子的化学原料，例如包含Cl^-离子的无机盐，包括NaCl、MgCl₂等；

优选地，所述说明书中至少记载权利要求11或12所述的检测方法。

14.权利要求13的试剂盒用于检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物和/或吗啡类化合物的用途，或

在使用表面增强拉曼光谱(SERS)法检测(包括定性检测或定量)样品中芬太尼类化合物中的用途；

优选地，所述的样品为化学样品(例如原料药(包括海洛因、普鲁卡因、对乙酰氨基酚、咖啡因等)、药用辅料(包括D-甘露醇)、食品(包括固体食品、液体食品)、食品添加剂)；

优选地，所述芬太尼类化合物为式I所示化合物或其药学上可接受的盐：

其中：R₁为氢或R₆-乙基，其中R₆为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基、5-6元杂芳基或酯基，所述R₆可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₂为烷基、链烯基、烷氧基、酯基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基或硝基；

R₃为烷基、酯基或酰基，所述R₃可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₄为烷基或酰基，所述R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

R₅为苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，所述R₅可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：烷基、链烯基、烷氧基、羟基、卤素、卤代烷基、氨基和硝基；

优选地，所述的药学上可接受的盐为枸橼酸盐或盐酸盐；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、3-甲基硫代芬太尼、α-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、乙酰-α-甲基芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、丁酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、4-氟异丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼、环丙基芬太尼、环戊基芬太尼、β-羟基芬太尼、β-羟基-3-甲基芬太尼、1-苯基环己基胺、阿芬太尼(Alfentanil)、Thiafentanil、1-piperidinocyclohexanecarbonitrile(PCC)、4-anilino-N-phenethyl-4-piperidine(ANPP)及其组合；

优选地，所述的芬太尼类化合物选自：芬太尼、3-甲基芬太尼、卡芬太尼、舒芬太尼、瑞芬太尼、乙酰芬太尼、戊酰芬太尼、丙烯酰芬太尼、异丁酰芬太尼、4-氟丁酰芬太尼、奥芬太尼、呋喃芬太尼、诺芬太尼及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物为式II所示化合物或其药学上可接受的盐，

其中：R₁为氢、烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基，其中烷基、苯基、C₃-C₆环烷基、5-6元杂环基或5-6元杂芳基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

代表单键或双键；

R₂为羟基、烷氧基、亚甲基、氧代或酰基氧基；

R₃为羟基、烷氧基或酰基氧基；

R₄为烷基或链烯基，其中R₄可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

R₅为羟基或烷基，其中烷基可选地被选自以下的一个或多个取代基取代：卤素、烷氧基、羟基、硝基、卤代烷基、氨基；

可选地，位置6和14之间形成乙基桥；

优选地，所述的药学上可接受的盐为硫酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐或乳酸盐；

优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、3-单乙酰吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、环丙诺啡、丁丙诺啡、去甲吗啡、氢化吗啡、甲基去氧吗啡、羟二氢吗啡、二氢吗啡、二氢去氧吗啡、尼克吗啡、乙基吗啡、苄吗啡、吗啉吗啡、吗啡甲基磺酸盐、二氢埃托啡、盐酸埃托啡、乙酰可待因、烟酰可待因、二氢可待因、乙酰二氢可待因、氢化可待因、二氢可待因酮、羟吗啡酮、二氢吗啡酮、甲基二氢吗啡酮、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合；

优选地，所述吗啡类化合物类化合物选自：吗啡、6-单乙酰吗啡、海洛因、可待因、噻吩诺啡、030418、纳洛酮、纳曲酮、纳美芬及其组合。

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