CN110904050A - 工程化抗原递呈细胞、免疫调节组合物及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种工程化抗原递呈细胞、免疫调节组合物及应用。本发明的工程化抗原递呈细胞通过工程化手段在野生型抗原递呈细胞内引入外源基因从而过表达重组白介素‑15、重组白介素‑15受体α、TGF‑β结合肽和PD1‑CD80融合蛋白而得到。本发明通过各组分的协同作用促进CD3+免疫细胞的活化。

Description

工程化抗原递呈细胞、免疫调节组合物及应用

技术领域

本发明涉及免疫学以及医药领域，具体地涉及用于增强T细胞活化的工程化抗原递呈细胞、免疫调节组合物及其应用。

背景技术

传统上，肿瘤细胞免疫疗法主要为通过接种或过继细胞免疫疗法刺激免疫系统，从而引发免疫应答。这种方法是基于这样的假设：肿瘤细胞表达肿瘤特异性抗原，并被MHC复合物呈递到肿瘤细胞表面，而抗肿瘤T细胞没有被充分激活。因此，为了解决这个问题，主要是尝试通过刺激关键的正的共免疫性和先天免疫途径，如CD28，CD40L(CD154)和各种TLR受体，或者抑制负的免疫抑制途径(如CTLA-4受体)而增加这些抗原的识别。

大量研究发现，肿瘤组织及其区域淋巴结中浸润性树突状细胞(TIDC)的膜上的CD80表达明显受到抑制，使DC不能有效的诱导抗肿瘤免疫而引起局部免疫功能低下，从而导致肿瘤细胞逃逸。

近年来，DC肿瘤疫苗在肿瘤的预防和治疗中方面展现了较好的应用前景。DC相关疫苗在前列腺癌中的研究较为深入。如Sipuleucel-T直接将前列腺癌酸性磷酸酶抗原转染DC激发机体产生特异性的抗肿瘤反应。IMPACT研究显示，尽管客观有效率评价显示治疗效果有限(<5％)，Sipuleucel-T组的中位生存时间(25.8个月)要高于对照组(21.7个月)4.1个月。2010年4月，美国FDA批准Sipuleucel-T用于治疗无症状或症状轻微的转移性去势治疗无效的难治性前列腺癌(Castration-resistant prostate cancer，CRPC)。

在胶质瘤中，负载自体肿瘤裂解物的DC疫苗DC-VAX-L尚在进行III期临床试验中。有电穿孔法将自体肾脏肿瘤的RNA和CD40L mRNA电转到DC的肿瘤疫苗，与靶向药物舒尼替尼联用的报道，目前也在临床试验中。近期的研究发现，DC疫苗能显著延长患者生存期。

发明内容

本发明提供一种工程化免疫细胞，用于解决现有技术中的至少部分技术问题。本发明发现通过工程化手段改造抗原递呈细胞使其在过量表达重组白介素-15及其受体α，同时表达TGF-β结合肽和PD1-CD80融合蛋白可以大大提高其活化CD3+免疫细胞的能力。至少部分地基于该发现完成了本发明。具体地，本发明包括以下内容。

本发明的第一方面，提供一种工程化抗原递呈细胞，其通过工程化手段在野生型抗原递呈细胞内引入外源基因从而过表达重组白介素-15、白介素-15受体α、TGF-β结合肽和PD1-CD80融合蛋白而得到。

根据本发明的工程化抗原递呈细胞，优选地，所述外源基因包含编码重组白介素-15和重组白介素-15受体α的基因、编码TGF-β结合肽的基因和编码PD1-CD80的基因。

根据本发明的工程化抗原递呈细胞，优选地，所述编码重组白介素-15和白介素15受体α的基因为同时编码白介素-15和白介素15受体α两者的基因，且编码所述重组白介素-15的基因序列如SEQ ID No.2所示或与其同源性为95％以上且来源于同一物种。

根据本发明的工程化抗原递呈细胞，优选地，所述编码PD1-CD80的基因序列如SEQID No.7所示或与其同源性为95％以上且来源于同一物种。

根据本发明的工程化抗原递呈细胞，优选进一步包含抗原或编码所述抗原的核酸。更优选地，所述抗原为GPC3抗原。

根据本发明的工程化抗原递呈细胞，其中，其为树突细胞。

本发明的第二方面，提供一种免疫调节组合物，其包含第一方面所述的工程化抗原递呈细胞和/或其分泌物。

本发明的第三方面，提供一种用于活化CD3+免疫细胞的方法，其包括使第一方面所述的工程化免疫细胞或第二方面所述的免疫调节组合物与免疫耐受的CD3+免疫细胞接触的步骤。

根据用于活化CD3+免疫细胞的方法，优选地，其包括以下步骤：

(1)制备核酸构建体；

(2)进行体外转录以获得用于协同解除免疫细胞衰竭组合物的核糖核酸分子；

(3)进行体外诱导培养以获得用于表达步骤(2)核糖核酸分子的抗原递呈细胞；和

(4)通过转染使步骤(2)的核糖核酸分子导入步骤(3)的抗原递呈细胞并进行表达的步骤。

本发明在大量筛选实验的基础上发现和TGF-β结合肽、PD1-CD80可大大增强IL-15/IL-15Rα活化CD3+细胞的能力，并发挥协同作用，可促进CD3+免疫细胞例如T细胞的持续扩增，产生更多的有抗肿瘤活性的淋巴细胞，提高治疗肿瘤。

附图说明

图1为使用编码本发明组合物各组分蛋白的mRNA以及GPC3抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD8 T细胞免疫应答结果。图1的各组柱中，从左到右分别为CD8 IFN-γ+、CD8 IFN-γ+,TNF-α+、CD8 TNF-α+细胞占总CD8 T细胞的比例。

图2为使用编码本发明组合物各组分蛋白的mRNA以及GPC3抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD4 T细胞免疫应答结果。图2的各组柱中，从左到右分别为CD4 IFN-γ+、CD4 IFN-γ+,TNF-α+、CD4 TNF-α+细胞占总CD8 T细胞的比例。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

[工程化免疫细胞]

本发明的第一方面，提供一种工程化抗原递呈细胞，其可作为免疫调节组合物与相应抗原一起活化免疫细胞。本发明的工程化抗原递呈细胞通过工程化手段在野生型抗原递呈细胞内引入外源基因从而过表达重组白介素-15、白介素-15受体α、TGF-β结合肽和PD1-CD80融合蛋白而得到。

本发明中，野生型抗原递呈细胞一般是指从受试者机体分离得到的天然抗原递呈细胞。受试者一般为哺乳动物，其实例包括大鼠、小鼠、猪、兔和灵长类动物。受试者还优选为人类。

本发明中，外源基因是指来源于野生型抗原递呈细胞外的基因，包括与野生型抗原递呈细胞不同受试者来源或相同来源的基因，优选地，野生型抗原递呈细胞与外源基因为同一来源，例如均来源于人类。

本发明中，外源基因包含编码重组白介素-15和白介素-15受体α的基因、编码TGF-β结合肽的基因和编码PD1-CD80的基因。本发明中，IL-15(interleukin-15)可以是任何物种的IL-15。例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、牛、山羊、绵羊、马、猪、狗、猫或猴子，优选人类。

本发明的重组IL-15能够与IL-15受体α结合，激活下游的JAK1，JAK3，导致下游STAT3和STAT5的磷酸化和信号通路的激活，诱导BCL2、MAP激酶通路、LCK和SYK的磷酸化，导致细胞的增殖和成熟。另外，IL-15能够调节T细胞和NK细胞的活化和增殖，能够维持在缺乏抗原刺激下记忆性T细胞的存活。

本发明中，重组IL-15的氨基酸序列不特别限定，其实例包括SEQ ID No.1所示的序列，或与其同源性为95％以上，优选97％以上，更优选99％以上且来源于同一物种的序列。

本发明中，IL-15受体α(IL-15Rα)是IL-15受体的α、β和γ三条链中的α链，是形成高特异性、高亲和力IL-15Rαβγ的必要亚单位。本发明发现仅通过α链的过表达而无需其他两个亚基即可实现在IL-15通路的激活，实现下游信号的转导。IL-15受体α的氨基酸序列不特别限定，只要能够具备结合IL-15的功能即可，其实例包括SEQ ID No.3所示的序列，或与其同源性为95％以上，优选97％以上，更优选99％以上且来源于同一物种的序列。

在某些实施方案中，本发明的基因可以是同时编码多种蛋白的核酸，也可以是分别编码不同蛋白的核酸的组合，且每种核酸仅编码一种蛋白。优选地，本发明的编码重组IL-15及其受体α的基因为同时编码两种以上蛋白的核酸。本文中，“同时编码”是指同一个核酸分子可以编码两种以上的蛋白。此时两种以上的蛋白可以融合形式存在，但更优选地，同一核酸分子编码产生两种以上单独存在的蛋白。在同一核酸分子同时产生两种以上的蛋白的情况下，可通过使相临的两个基因之间连接例如核糖体进入位点(IRES)来实现。可选地，还可以通过使相临的两个基因之间连接编码自剪切多肽序列的核酸序列来实现。

作为示例性实例，本发明的核酸可为同时编码IL-15和IL-15Rα的核酸。此类核酸的实例包括但不限于SEQ ID No.2所示的核酸，该核酸可同时编码产生单独的IL-15蛋白和IL-15Rα蛋白。

本发明的TGF-β结合肽为一种人工多肽，其特异性与肿瘤微环境中的TGF-beta结合，阻断TGF-beta对DC细胞和T细胞的抑制作用。优选地，TGF-β结合肽包含下述(a’)至(c’)之一的序列：

(a’)SEQ ID No.4所示的氨基酸序列；

(b’)与(a’)具有相同物种来源且同源性为95％以上的氨基酸序列；

(c’)在(a’)的基础上经氨基酸突变得到的序列。

本发明的TGF-β结合肽可由例如SEQ ID No.5所示的核酸编码。

本发明的中，PD1-CD80为可溶性PD1与可溶性CD80的融合蛋白。优选地，可溶性PD1为PD1蛋白的胞外域，可溶性CD80为CD80的胞外域。本发明中，CD80属于免疫球蛋白超家族(immunogloblin superfamily，IgSF)，作为表达在APC上的重要协同刺激分子，CD80在与T细胞CD28结合后，对抗原诱导初始T细胞活化、增殖及效应功能的产生具有重要的始动调节作用，是一个正性因子。PD-1属于CD28超家族成员，与配体程序性死亡配体1(programmeddeath ligand 1，PD-L1)或者程序性死亡配体2(programmed deaTh ligand 2，PD-L2)结合后向T细胞受体(T cell receptor，TCR)传递共抑制信号。PD-1主要表达于活化的T细胞表面，也可表达于B细胞、Treg细胞、NK细胞和MDSC。其配体PD-L1和PD-L2主要表达于巨噬细胞、单核细胞等多种炎性细胞。除了免疫细胞，肿瘤细胞表面亦可表达PD-1配体，如黑色素瘤、肾细胞癌、膀胱癌和非小细胞肺癌等。T细胞的活化需要两个信号，第一信号来自TCR和抗原的特异性结合，第二信号来自CD80/CD28等辅助分子的激活。当位于T细胞表面的PD-1和配体结合，PD-1胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构域中的酪氨酸发生磷酸化，募集含两个SH结构的蛋白酪氨酸磷酸酶，使TCR和CD28下游的ζ链相关蛋白激酶70和磷脂酰肌醇3激酶发生去磷酸化，从而阻断T细胞的激活。PD-1可以在炎性介质，如干扰素γ(interferonγ，IFN-γ)作用下诱导性表达，引起T细胞对PD-1进行转录。

本发明的PD1-CD80融合蛋白能够阻断PD-1与PD-L1间的相互作用，可恢复T细胞的活性和杀伤肿瘤细胞的能力。PD1-CD80融合蛋白的氨基酸序列不特别限定，包含SEQ IDNo.6所示的序列，或与其同源性为95％以上，优选97％以上，更优选99％以上且来源于同一物种的序列。优选地，本发明的PD1-CD80融合蛋白由包含SEQ ID No.7所示的序列的核酸编码。

在某些实施方案中，本发明的TGF-Β结合肽和PD1-CD80进一步含有Fc片段。优选地，Fc片段为较长的Fc片段。一般而言分子体积过大可能影响组合物的稳定性和活性。因此，Fc片段的长度或大小影响本发明目的实现。对于本发明而言，Fc片段的长度一般为200-350AA，优选220-300AA。本发明的Fc片段可包含免疫球蛋白中天然存在的片段，还可包括通过已知的基因工程手段对天然存在的Fc片段进行改造，以获得更优性能的突变型Fc片段。例如，Fc片段包含“YTE”3个突变的片段，即252、254和256位的蛋氨酸(Met，M)、丝氨酸(Ser，S)和苏氨酸(Thr，T)分别被酪氨酸(Tyr，Y)、和谷氨酸(Glu，E)替换，由此获得半衰期更长的融合蛋白。再例如，通过对Fc片段的二硫键的基因工程改造和修饰，可以使Fc融合蛋白聚集成多聚体的复合物，由此获得稳定性更优的融合蛋白。

本发明中，工程化细胞是指人为改造的细胞。本文中，抗原递呈细胞是指机体内具有摄取、处理和传递抗原信息，并将抗原递呈给免疫细胞并辅助和调节T细胞、B细胞识别抗原并诱发免疫应答作用的细胞。其实例包括但不限于巨噬细胞、树突状细胞、并指状细胞、郎罕细胞和B细胞。优选地，本发明的免疫细胞为树突状细胞，更优选为人源树突细胞。本发明的树突细胞可以是成熟的树突细胞，也可以是未成熟的树突细胞。需要注意的是，这里的树突状细胞为通过体外诱导培养获得，即，通过外周血单核细胞(PBMC)中分离出单个核细胞，在不同类型培养基和各类细胞因子的刺激下诱导单个核细胞成为DC细胞。在具体实施方案中，进行体外培养所使用的培养基包括AIM-V培养基、iDC培养基和mDC培养基，进行体外诱导培养的使用的细胞因子其实例包括但不限于粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4。

优选地，本发明的抗原递呈细胞还包含抗原或能够产生抗原的前体。“抗原”指可以被免疫系统识别，并能够通过形成抗体或/和抗原特异性T细胞而引起抗原特异的免疫应答的物质。一般地，抗原可以是包含至少一个抗原表位，由APC捕获并且可以被呈递到T细胞表面的蛋白或者多肽。在本发明中，抗原可以是mRNA翻译的产物，也可以是DNA转录翻译后的产物。在某些实施方案中，本发明的抗原为与原发性肝癌发生和发展密切相关的GPC3抗原。

[免疫调节组合物]

本发明的第二方面，提供一种免疫调节组合物，其包含第一方面所述的工程化细胞和/或其分泌物，其能够为有需要的受试者提供一种或多种抗原(优选肿瘤原)，并调节(特别是增强)该抗原的免疫性，进而减轻、缓解、延缓或治愈受试者所患病况或病症。与单独提供抗原的药物相比，或提供抗原和单独提供单一组分的组合物相比，本发明的药物组合物具有增强、提高或加强的免疫能力。本发明的免疫调节组合物可选地还可包含其他成分，例如药物学可接受载体。合适的药物学可接受载体的实例包括但不限于：1)Dulbecco磷酸缓冲盐溶液，pH约7.4，包含或不包含大约1mg/ml到25mg/ml人血清白蛋白；2)0.9％盐水(0.9％w/v氯化钠)，和3)5％(w/v)葡萄糖；也可以包含抗氧化剂例如色胺和稳定剂例如Tween20。

本领域技术人员容易理解，SEQ ID No.1-9所示的序列仅为示例性的，在该序列的基础上可进行改造而不影响本发明目的的实现。此类改造包括使用偏好性密码子对SEQ IDNo.1-9进行优化。因此，本发明还可以使用与SEQ ID No.1-9的同源性为95％以上，优选97％以上，更优选99％以上且来源于同一物种的序列。

[用于活化CD3+免疫细胞的方法]

本发明的第三方面，提供一种用于活化CD3+免疫细胞的方法，其包括使第一方面所述的工程化免疫细胞或第二方面所述的免疫调节组合物与CD3+免疫细胞接触的步骤。其中CD3+免疫细胞优选为免疫耐受的CD3+免疫细胞。本文中，CD3+免疫细胞是指表面包含CD3的细胞，优选CD3+T细胞

在示例性活化CD3+免疫细胞的方法中，其包括以下步骤：

(1)制备核酸构建体，其中核酸构建体可以是一种，也可以是多种，其包括表达重组白介素-15的核酸、表达TGF-β结合肽的核酸、表达可溶性CD80的核酸以及可选地表达抗原的核酸；

(2)进行体外转录以获得相应的核糖核酸分子；

(3)进行体外诱导培养以获得用于表达步骤(2)的核糖核酸分子的抗原递呈细胞；

(4)通过转染使步骤(2)的核糖核酸分子导入步骤(3)的抗原递呈细胞并进行表达，从而得到工程化免疫细胞；和

(5)使工程化免疫细胞与CD3+免疫细胞进行接触或共培养。

另外，本领域技术人员还应理解的是，在上述步骤(1)-(5)前后，或这些任意步骤之间还可包含其他步骤或操作，例如进一步优化和/或改善本发明所述的方法。

实施例1

本制备例用于制备编码抗原以及作为本发明组合物的DNA和mRNA

1.制备DNA和mRNA构建体

分别构建用于产生编码本发明所述TGF-β结合肽、PD1-CD80以及IL15/IL15RαmRNA的DNA序列，并且用于后续的体外转录反应。在编码序列之后是一段多聚腺苷片段。这些DNA序列信息如下表1所示。

另外，构建用于体外致敏的人肿瘤抗原GPC3的编码序列，本发明GPC3的氨基酸序列由SEQ ID No.8所示的序列组成，编码序列由SEQ ID No.9所示的序列组成。GPC3的序列可通过Genebank数据库获得。本实施例中使用CN107583042A中公开的抗原。

表-1基因序列表

名称	序列号
		IL-15\IL-15Rα	SEQ ID No.2
TGF-β结合肽	SEQ ID No.5
		PD1-CD80	SEQ ID No.7
GPC3	SEQ ID No.9

2.体外转录

首先使用限制性内切酶将制备得到的相应DNA质粒线性化，以线性化的质粒为模板，使用T7 RNA聚合酶体外转录制备mRNA。然后用氯化锂沉淀法纯化制备的mRNA。

3.DC细胞的体外诱导培养

无菌抽取肝细胞癌患者静脉血50ml，在超净工作台内用淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞，将单核细胞加入AIM-V培养基中，放入37℃，5％CO₂培养箱中温育，使单核细胞贴壁。2h后，去掉未贴壁细胞，贴壁细胞加入iDC培养基(AIM-V培养基中加入终浓度为800U/mL的GM-CSF，500U/mL的IL-4)，放入37℃，5％CO₂培养箱中培养6天。将一半细胞培养基转移到离心管中，500g离心收集细胞，去掉上清，加入等体积的新鲜mDC培养基(mDC新鲜培养基的配置：AIM-V培养基中加入终浓度为1600U/mL的GM-CSF和1000U/mL的IL-4，TNF-α(5ng/ml)，IL-1β(5ng/ml)，IL-6(150ng/ml)和prostaglandin E2(PGE2)(1μg/ml)，重悬细胞后，加入到培养瓶中，培养8-18个小时，诱导DC细胞成熟。

4.转染DC细胞

转染当天，用非酶类的细胞消化试剂把DC细胞消化成细胞悬液，离心后以PBS洗细胞两次，以PBS重悬细胞，调整细胞密度在25-30×10⁶DCs/ml。按照每10⁶DC细胞转染10μgmRNA的比例，混合DC细胞和抗原mRNA与不同的蛋白mRNA组合，将细胞-mRNA混合物加入电转杯，使用ECM630电转仪，将抗原mRNA转染到DC细胞中。电转后的细胞，用无细胞因子的1640培养基中重悬，调整细胞密度到2×10⁵DCs/ml，放入37℃，5％CO₂细胞培养箱中继续培养6小时。本实验中，使用的mRNA组合如下所述：

1)不加任何mRNA的对照(mDC对照组)

2)只加编码GPC3抗原的mRNA(GPC3对照组)

3)编码GPC3抗原的mRNA与IL15/IL15Rα的mRNA(IL15组)

4)编码GPC3抗原的mRNA与PD1-CD80的mRNA(PD1-CD80组)

5)编码GPC3抗原的mRNA与TGF-β结合肽的mRNA(TGF-β结合肽组)

6)编码GPC3抗原的mRNA与IL15/IL15Rα+TGF-β结合肽+PD1-CD80的mRNA(实验组)

4.将复苏过夜的外周血单核细胞PBMC以2×10⁶/ml的浓度接种到96孔板中，每个孔接种100μl细胞，进行T淋巴细胞的激活。测试分组情况为：不加DC细胞的PBMC对照组，分别用上一步骤中所述六个分组的DC细胞与PBMC细胞共培养的组；根据分组情况在不同孔中加入负载有相应mRNA的DC细胞，PBMC:DC＝10:1；将细胞于37℃培养10-12天。

5.在共培养的10-12天，进行胞内细胞因子检测。

在收集细胞前5-8h，将培养的T细胞混匀，调整细胞密度到2×10⁶/ml,按照每个孔100μl的体积分别种到96孔板中，于37℃培养箱中孵育。阳性对照为PMA(50ng/ml)+ionomycin(1μg/ml)，阴性对照仅含悬浮细胞。

准备负载抗原的DC细胞作为靶细胞。复苏已经制备的负载抗原的冻存的DC细胞，并用台盼蓝染色计数细胞，用含IL-7及IL-2细胞因子的RPMI完全培养基重悬细胞，并调整细胞浓度为2×10⁵/ml，每孔加入100μl细胞。

在细胞培养液中加入终浓度为2μM Monensin或3μg/ml Brefeldin A，充分混匀。Monensin和Brefeldin A作为蛋白运输的阻断剂，在细胞液中的时间不应超过12h，4-6小时后，进行胞内染色检测。

6.取出细胞，将细胞转移到相应的流式管中，以荧光标记的CD3、CD4、CD8抗体染色细胞后，固定并通透细胞，以荧光标记的TNF-α和IFN-γ抗体进行胞内染色。

7.用流式细胞仪检测淋巴细胞中TNF-α+和IFN-γ+细胞的比例。

结果如图1和图2所示，使用本发明提供的组合物能够显著提高CD8 T细胞亚群中IFN-γ阳性细比例和TNF-α阳性细胞比例，以及CD4 T细胞亚群中TNF-α阳性细胞比例，本发明组合物具有协同的免疫细胞活化效果。

仅仅使用编码GPC3抗原的mRNA负载的DC细胞，仅能引起少部分的CD4以及CD8 T细胞应答。在使用了编码IL15/IL15Rα、TGF-Β结合肽或者PD1-CD80 mRNA后，不管是CD4 T细胞应答还是CD8 T细胞应答，相比不使用这些mRNA的组相比，均没有提高。而使用本发明所述组合(IL15/IL15Rα+TGF-Β结合肽+PD1-CD80)的实验组中，不管与只使用GPC3抗原mRNA的组(GPC3对照组)，还是与使用了本发明所述组合物的部分组分的组相比，其CD4以及CD8T细胞的应答均有显著的提高。如IFN-γ阳性的CD8 T细胞比例为2.19％，比GPC3对照组的0.66％提高了2.32倍。同样的，TNF-α阳性CD8 T细胞比例为1.32％，比GPC3组的0.33％提高了3倍。TNF-α和IFN-γ双阳性CD8 T细胞的比例在实验组中为0.72％，比GPC3组的0.14％提高了4.12倍。在CD4 T细胞中，实验组IFN-γ阳性细胞的比例为2.24％，是GPC3组1.53％的1.46倍。TNF-α阳性细胞比例为1.43％，比GPC3组的0.97％提高了47.4％。TNF-α和IFN-γ双阳性CD4 T细胞的比例在实验组中为0.49％，比GPC3组的0.2％提高了1.45倍。

尽管本发明已经参考示例性实施方案进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的示例性实施方案做多种调整或变化。权利要求的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。

序列表

<110> 启辰生生物科技（珠海）有限公司

<120> 工程化抗原递呈细胞、免疫调节组合物及应用

<141> 2019-12-16

<160> 9

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 162

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 1

Met Arg Ile Ser Lys Pro His Leu Arg Ser Ile Ser Ile Gln Cys Tyr

1 5 10 15

Leu Cys Leu Leu Leu Asn Ser His Phe Leu Thr Glu Ala Gly Ile His

20 25 30

Val Phe Ile Leu Gly Cys Phe Ser Ala Gly Leu Pro Lys Thr Glu Ala

35 40 45

Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile

50 55 60

Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His

65 70 75 80

Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln

85 90 95

Val Ile Ser Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu

100 105 110

Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val

115 120 125

Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile

130 135 140

Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn

145 150 155 160

Thr Ser

<210> 2

<211> 1951

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 2

atgagaattt cgaaaccaca tttgagaagt atttccatcc agtgctactt gtgtttactt 60

ctaaacagtc attttctaac tgaagctggc attcatgtct tcattttggg ctgtttcagt 120

gcagggcttc ctaaaacaga agccaactgg gtgaatgtaa taagtgattt gaaaaaaatt 180

gaagatctta ttcaatctat gcatattgat gctactttat atacggaaag tgatgttcac 240

cccagttgca aagtaacagc aatgaagtgc tttctcttgg agttacaagt tatttcactt 300

gagtccggag atgcaagtat tcatgataca gtagaaaatc tgatcatcct agcaaacaac 360

agtttgtctt ctaatgggaa tgtaacagaa tctggatgca aagaatgtga ggaactggag 420

gaaaaaaata ttaaagaatt tttgcagagt tttgtacata ttgtccaaat gttcatcaac 480

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gaccccatca tccaattccg cccccccccc ctaacgttac tggccgaagc cgcttggaat 600

aaggccggtg tgcgtttgtc tatatgttat tttccaccat attgccgtct tttggcaatg 660

tgagggcccg gaaacctggc cctgtcttct tgacgagcat tcctaggggt ctttcccctc 720

tcgccaaagg aatgcaaggt ctgttgaatg tcgtgaagga agcagttcct ctggaagctt 780

cttgaagaca aacaacgtct gtagcgaccc tttgcaggca gcggaacccc ccacctggcg 840

acaggtgcct ctgcggccaa aagccacgtg tataagatac acctgcaaag gcggcacaac 900

cccagtgcca cgttgtgagt tggatagttg tggaaagagt caaatggctc tcctcaagcg 960

tattcaacaa ggggctgaag gatgcccaga aggtacccca ttgtatggga tctgatctgg 1020

ggcctcggtg cacatgcttt acatgtgttt agtcgaggtt aaaaaacgtc taggcccccc 1080

gaaccacggg gacgtggttt tcctttgaaa aacacgatga taatatggcc acaacgtcga 1140

cgccaccatg gctcctagga gagccagagg gtgtaggaca ctgggactgc cagctctgct 1200

gctgctgctg ctgctgagac ctccagctac aaggggaatc acctgccctc ctcctatgag 1260

cgtggagcac gccgacattt gggtgaagag ctacagcctg tacagccggg agcgctacat 1320

ttgcaacagc ggcttcaaga ggaaggccgg aacaagctct ctcaccgagt gcgtgctgaa 1380

caaggccacc aacgtggccc attggacaac ccctagcctg aagtgcatca gggacccagc 1440

actggtgcac cagagaccag ctcctcctag cacagtgacc acagccggag tgacacctca 1500

gccagaaagc ctgagcccta gcggaaaaga accagccgcc tctagcccca gcagcaataa 1560

taccgccgcc acaacagccg ctattgtgcc aggaagccag ctgatgccta gcaagagccc 1620

tagcaccggc acaacagaga tcagcagcca cgagagcagc cacggaacac ctagccagac 1680

cacagccaag aattgggagc tgaccgccag cgccagccac cagcctccag gagtgtaccc 1740

tcagggacac agcgatacca ccgtggccat ctctaccagc acagtgctgc tgtgcggact 1800

gtcagctgtg tccctgctgg cttgctacct gaagagcaga cagacccctc ctctggccag 1860

cgtggaaatg gaggctatgg aggccctgcc agtgacttgg ggaacctcta gcagagacga 1920

ggacctggag aattgcagcc accacctgta g 1951

<210> 3

<211> 267

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 3

Met Ala Pro Arg Arg Ala Arg Gly Cys Arg Thr Leu Gly Leu Pro Ala

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Arg Pro Pro Ala Thr Arg Gly Ile Thr

20 25 30

Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val Lys Ser

35 40 45

Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Phe Lys

50 55 60

Arg Lys Ala Gly Thr Ser Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn Lys Ala

65 70 75 80

Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile Arg Asp

85 90 95

Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val Thr Thr

100 105 110

Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly Lys Glu

115 120 125

Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr Thr Ala

130 135 140

Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro Ser Thr

145 150 155 160

Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr Pro Ser

165 170 175

Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser His Gln

180 185 190

Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Val Ala Ile

195 200 205

Ser Thr Ser Thr Val Leu Leu Cys Gly Leu Ser Ala Val Ser Leu Leu

210 215 220

Ala Cys Tyr Leu Lys Ser Arg Gln Thr Pro Pro Leu Ala Ser Val Glu

225 230 235 240

Met Glu Ala Met Glu Ala Leu Pro Val Thr Trp Gly Thr Ser Ser Arg

245 250 255

Asp Glu Asp Leu Glu Asn Cys Ser His His Leu

260 265

<210> 4

<211> 391

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 4

Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu

1 5 10 15

Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val

20 25 30

Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro

35 40 45

Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln

50 55 60

Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro

65 70 75 80

Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr

85 90 95

Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile

100 105 110

Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys

115 120 125

Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn

130 135 140

Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Glu

145 150 155 160

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

165 170 175

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

180 185 190

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

195 200 205

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

210 215 220

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

225 230 235 240

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

245 250 255

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

260 265 270

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

275 280 285

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

290 295 300

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

305 310 315 320

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

325 330 335

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

340 345 350

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

355 360 365

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

370 375 380

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

385 390

<210> 5

<211> 1176

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 5

atgggtcggg ggctgctcag gggcctgtgg ccgctgcaca tcgtcctgtg gacgcgtatc 60

gccagcacga tcccaccgca cgttcagaag tcggttaata acgacatgat agtcactgac 120

aacaacggtg cagtcaagtt tccacaactg tgtaaatttt gtgatgtgag attttccacc 180

tgtgacaacc agaaatcctg catgagcaac tgcagcatca cctccatctg tgagaagcca 240

caggaagtct gtgtggctgt atggagaaag aatgacgaga acataacact agagacagtt 300

tgccatgacc ccaagctccc ctaccatgac tttattctgg aagatgctgc ttctccaaag 360

tgcattatga aggaaaaaaa aaagcctggt gagactttct tcatgtgttc ctgtagctct 420

gatgagtgca atgacaacat catcttctca gaagaatata acaccagcaa tcctgacgag 480

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg 540

ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 600

cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 660

tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 720

aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 780

aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 840

tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat 900

gagctgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 960

atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1020

gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg 1080

tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1140

acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaatga 1176

<210> 6

<211> 622

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 6

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

165 170 175

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

180 185 190

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

195 200 205

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

210 215 220

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

225 230 235 240

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

245 250 255

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

260 265 270

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

275 280 285

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

290 295 300

Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

305 310 315 320

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

325 330 335

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

340 345 350

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

355 360 365

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

370 375 380

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu

385 390 395 400

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Val Ile

405 410 415

His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys Gly His

420 425 430

Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp Gln Lys

435 440 445

Glu Lys Lys Met Val Leu Thr Met Met Ser Gly Asp Met Asn Ile Trp

450 455 460

Pro Glu Tyr Lys Asn Arg Thr Ile Phe Asp Ile Thr Asn Asn Leu Ser

465 470 475 480

Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr Glu Cys

485 490 495

Val Val Leu Lys Tyr Glu Lys Asp Ala Phe Lys Arg Glu His Leu Ala

500 505 510

Glu Val Thr Leu Ser Val Lys Ala Asp Phe Pro Thr Pro Ser Ile Ser

515 520 525

Asp Phe Glu Ile Pro Thr Ser Asn Ile Arg Arg Ile Ile Cys Ser Thr

530 535 540

Ser Gly Gly Phe Pro Glu Pro His Leu Ser Trp Leu Glu Asn Gly Glu

545 550 555 560

Glu Leu Asn Ala Ile Asn Thr Thr Val Ser Gln Asp Pro Glu Thr Glu

565 570 575

Leu Tyr Ala Val Ser Ser Lys Leu Asp Phe Asn Met Thr Thr Asn His

580 585 590

Ser Phe Met Cys Leu Ile Lys Tyr Gly His Leu Arg Val Asn Gln Thr

595 600 605

Phe Asn Trp Asn Thr Thr Lys Gln Glu His Phe Pro Asp Asn

610 615 620

<210> 7

<211> 1869

<212> DNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 7

atgcagatcc cacaggcgcc ctggccagtc gtctgggcgg tgctacaact gggctggcgg 60

ccaggatggt tcttagactc cccagacagg ccctggaacc cccccacctt ctccccagcc 120

ctgctcgtgg tgaccgaagg ggacaacgcc accttcacct gcagcttctc caacacatcg 180

gagagcttcg tgctaaactg gtaccgcatg agccccagca accagacgga caagctggcc 240

gccttccccg aggaccgcag ccagcccggc caggactgcc gcttccgtgt cacacaactg 300

cccaacgggc gtgacttcca catgagcgtg gtcagggccc ggcgcaatga cagcggcacc 360

tacctctgtg gggccatctc cctggccccc aaggcgcaga tcaaagagag cctgcgggca 420

gagctcaggg tgacagagag aagggcagaa gtgcccacag cccaccccag cccctcaccc 480

aggccagccg gccagttcca agagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 540

tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 600

gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 660

gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 720

acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 780

ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 840

ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 900

tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 960

gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1020

aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1080

aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1140

catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaagag 1200

cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagttatcca cgtgaccaag 1260

gaagtgaaag aagtggcaac gctgtcctgt ggtcacaatg tttctgttga agagctggca 1320

caaactcgca tctactggca aaaggagaag aaaatggtgc tgactatgat gtctggggac 1380

atgaatatat ggcccgagta caagaaccgg accatctttg atatcactaa taacctctcc 1440

attgtgatcc tggctctgcg cccatctgac gagggcacat acgagtgtgt tgttctgaag 1500

tatgaaaaag acgctttcaa gcgggaacac ctggctgaag tgacgttatc agtcaaagct 1560

gacttcccta cacctagtat atctgacttt gaaattccaa cttctaatat tagaaggata 1620

atttgctcaa cctctggagg ttttccagag cctcacctct cctggttgga aaatggagaa 1680

gaattaaatg ccatcaacac aacagtttcc caagatcctg aaactgagct ctatgctgtt 1740

agcagcaaac tggatttcaa tatgacaacc aaccacagct tcatgtgtct catcaagtat 1800

ggacatttaa gagtgaatca gaccttcaac tggaatacaa ccaagcaaga gcattttcct 1860

gataactga 1869

<210> 8

<211> 618

<212> PRT

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 8

Met Arg Ala Leu Trp Val Leu Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Thr Phe

1 5 10 15

Gly Ser Val Arg Ala Asp Asp Glu Val Asp Val Gln Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Pro Pro Asp Ala Thr Cys His Gln Val Arg Ser Phe Phe Gln Arg Leu

35 40 45

Gln Pro Gly Leu Lys Trp Val Pro Glu Thr Pro Val Pro Gly Ser Asp

50 55 60

Leu Gln Val Cys Leu Pro Lys Gly Pro Thr Cys Cys Ser Arg Lys Met

65 70 75 80

Glu Glu Lys Tyr Gln Leu Thr Ala Arg Leu Asn Met Glu Gln Leu Leu

85 90 95

Gln Ser Ala Ser Met Glu Leu Lys Phe Leu Ile Ile Gln Asn Ala Ala

100 105 110

Val Phe Gln Glu Ala Phe Glu Ile Val Val Arg His Ala Lys Asn Tyr

115 120 125

Thr Asn Ala Met Phe Lys Asn Asn Tyr Pro Ser Leu Thr Pro Gln Ala

130 135 140

Phe Glu Phe Val Gly Glu Phe Phe Thr Asp Val Ser Leu Tyr Ile Leu

145 150 155 160

Gly Ser Asp Ile Asn Val Asp Asp Met Val Asn Glu Leu Phe Asp Ser

165 170 175

Leu Phe Pro Val Ile Tyr Thr Gln Leu Met Asn Pro Gly Leu Pro Asp

180 185 190

Ser Ala Leu Asp Ile Asn Glu Cys Leu Arg Gly Ala Arg Arg Asp Leu

195 200 205

Lys Val Phe Gly Asn Phe Pro Lys Leu Ile Met Thr Gln Val Ser Lys

210 215 220

Ser Leu Gln Val Thr Arg Ile Phe Leu Gln Ala Leu Asn Leu Gly Ile

225 230 235 240

Glu Val Ile Asn Thr Thr Asp His Leu Lys Phe Ser Lys Asp Cys Gly

245 250 255

Arg Met Leu Thr Arg Met Trp Tyr Cys Ser Tyr Cys Gln Gly Leu Met

260 265 270

Met Val Lys Pro Cys Gly Gly Tyr Cys Asn Val Val Met Gln Gly Cys

275 280 285

Met Ala Gly Val Val Glu Ile Asp Lys Tyr Trp Arg Glu Tyr Ile Leu

290 295 300

Ser Leu Glu Glu Leu Val Asn Gly Met Tyr Arg Ile Tyr Asp Met Glu

305 310 315 320

Asn Val Leu Leu Gly Leu Phe Ser Thr Ile His Asp Ser Ile Gln Tyr

325 330 335

Val Gln Lys Asn Ala Gly Lys Leu Thr Thr Thr Ile Gly Lys Leu Cys

340 345 350

Ala His Ser Gln Gln Arg Gln Tyr Arg Ser Ala Tyr Tyr Pro Glu Asp

355 360 365

Leu Phe Ile Asp Lys Lys Val Leu Lys Val Ala His Val Glu His Glu

370 375 380

Glu Thr Leu Ser Ser Arg Arg Arg Glu Leu Ile Gln Lys Leu Lys Ser

385 390 395 400

Phe Ile Ser Phe Tyr Ser Ala Leu Pro Gly Tyr Ile Cys Ser His Ser

405 410 415

Pro Val Ala Glu Asn Asp Thr Leu Cys Trp Asn Gly Gln Glu Leu Val

420 425 430

Glu Arg Tyr Ser Gln Lys Ala Ala Arg Asn Gly Met Lys Asn Gln Phe

435 440 445

Asn Leu His Glu Leu Lys Met Lys Gly Pro Glu Pro Val Val Ser Gln

450 455 460

Ile Ile Asp Lys Leu Lys His Ile Asn Gln Leu Leu Arg Thr Met Ser

465 470 475 480

Met Pro Lys Gly Arg Val Leu Asp Lys Asn Leu Asp Glu Glu Gly Phe

485 490 495

Glu Ser Gly Asp Cys Gly Asp Asp Glu Asp Glu Cys Ile Gly Gly Ser

500 505 510

Gly Asp Gly Met Ile Lys Val Lys Asn Gln Leu Arg Phe Leu Ala Glu

515 520 525

Leu Ala Tyr Asp Leu Asp Val Asp Asp Ala Pro Gly Asn Ser Gln Gln

530 535 540

Ala Thr Pro Lys Asp Asn Glu Ile Ser Thr Phe His Asn Leu Gly Asn

545 550 555 560

Val His Ser Pro Leu Lys Leu Leu Thr Ser Met Ala Ile Ser Val Val

565 570 575

Cys Phe Phe Phe Leu Val His Leu Ile Pro Ile Ala Val Gly Gly Ala

580 585 590

Leu Ala Gly Leu Val Leu Ile Val Leu Ile Ala Tyr Leu Val Gly Arg

595 600 605

Lys Arg Ser His Ala Gly Tyr Gln Thr Ile

610 615

<210> 9

<211> 1985

<212> RNA

<213> 人(Homo sapiens)

<400> 9

gagaccggcc ucgagcagcu gaagcuuccu gcaggucgac ucuagagcca ccaugagggc 60

ccugugggug cugggccucu gcugcguccu gcugaccuuc gggucgguca gagcugacga 120

ugaaguugau gugcagccuc cuccuccucc uccagacgcu acaugucacc agguccgcuc 180

cuucuuccag aggcugcagc caggacucaa gugggugcca gagacaccag ugccaggaag 240

cgaucugcag gucugucugc cuaagggccc uaccuguugc ucccggaaga uggaggagaa 300

guaccagcug accgccaggc ugaacaugga acagcugcug cagagcgcca gcauggagcu 360

gaaguuccug aucauccaga acgccgccgu guuccaggag gccuucgaga ucgucgugcg 420

gcacgccaag aacuacacca acgccauguu caagaacaac uaccccagcc ugacaccuca 480

ggccuuugag uucguggggg aguucuucac cgacgugucu cuguacaucc ugggcagcga 540

caucaacgug gacgacaugg ugaacgagcu guucgacagc cuguuccccg ugaucuacac 600

ccagcugaug aacccaggcc ugccagauag cgcucuggau aucaacgagu gccugagggg 660

agccagaaga gaccugaagg uguucggcaa cuuccccaag cugaucauga cccagguguc 720

caagagccug caggucacca ggaucuuccu gcaggcccug aaccugggca ucgaggucau 780

caacaccacc gaccaccuga aguucagcaa ggauugcggc cggaugcuca cccgcaugug 840

guauuguagc uauugccagg gccugaugau ggugaagccu ugcggcggcu auugcaacgu 900

cgugaugcag gguuguaugg ccggcguggu ggagaucgac aaguauuggc gggaguacau 960

ccugagccug gaggagcugg ugaacggcau guaccggauc uacgacaugg agaacgugcu 1020

gcugggccug uucuccacca uccacgacag cauccaguac gugcagaaga acgccggcaa 1080

gcugacaacc accaucggaa agcucugcgc ccacucucag cagaggcagu acagaagcgc 1140

cuacuacccc gaggaccugu ucaucgacaa gaaggugcug aagguggccc acguggaaca 1200

cgaagagaca cugagcagcc ggaggagaga gcugauccag aagcugaagu ccuucaucuc 1260

cuucuacagc gcccugccag gcuacauuug cagccacagc ccaguggccg agaacgacac 1320

ccucuguugg aacggccagg agcuggugga gagauacucu cagaaggccg ccaggaacgg 1380

caugaagaac caguucaacc ugcacgagcu gaagaugaag ggcccagagc cagugguguc 1440

ccagaucauc gacaagcuga agcacaucaa ccagcugcug cggaccauga gcaugccuaa 1500

gggcagggug cuggacaaga accuggacga ggagggcuuc gagucaggag auugcggcga 1560

cgacgaagac gaguguauug gcggaagcgg cgacggcaug aucaagguca agaaccagcu 1620

gcgguuccug gccgaacugg ccuacgaucu ggacguggac gacgcuccag gcaauucuca 1680

gcaggccaca ccuaaggaca acgagaucag caccuuccac aaccugggca acgugcacuc 1740

uccucugaag cugcugacca gcauggccau uagcgucguc ugcuucuucu uccuggugca 1800

ucugaucccc aucgcugugg guggugcccu ggcggggcug guccucaucg uccucaucgc 1860

cuaccucguc ggcaggaaga ggagucacgc aggcuaccag acuaucuagg aauucuuaau 1920

uaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980

aaaaa 1985

Claims (10)

1.一种工程化抗原递呈细胞，其特征在于，其通过工程化手段在野生型抗原递呈细胞内引入外源基因从而过表达重组白介素-15、重组白介素-15受体α、TGF-β结合肽和PD1-CD80融合蛋白而得到。

2.根据权利要求1所述的工程化抗原递呈细胞，其特征在于，所述外源基因包括编码重组白介素-15和重组白介素-15受体α的基因、编码TGF-β结合肽的基因和编码PD1-CD80的基因。

3.根据权利要求2所述的工程化抗原递呈细胞，其特征在于，所述编码重组白介素-15和白介素15受体α的基因包含IRES序列。

4.根据权利要求1所述的工程化抗原递呈细胞，其特征在于，所述重组白介素-15具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，所述白介素15受体α具有SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，所述TGF-β结合肽具有SEQ ID No.4所示的氨基酸序列，所述PD1-CD80融合蛋白具有SEQ IDNo.6所示的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的工程化抗原递呈细胞，其特征在于，其进一步包含抗原或编码所述抗原的核酸。

6.根据权利要求5所述的工程化抗原递呈细胞，其特征在于，所述抗原为GPC3抗原。

7.根据权利要求1-6任一项所述的工程化抗原递呈细胞，其特征在于，其为树突细胞。

8.一种免疫调节组合物，其特征在于，包含根据权利要求1-7任一项所述的工程化抗原递呈细胞和/或其分泌物。

9.一种用于活化CD3+免疫细胞的方法，其特征在于，其包括使根据权利要求1-7任一项所述的工程化免疫细胞或根据权利要求8所述的免疫调节组合物与免疫耐受的CD3+免疫细胞接触的步骤，其中所述CD3+免疫细胞为体外细胞。

10.根据权利要求9所述的用于活化CD3+免疫细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备核酸构建体；

(2)进行体外转录以获得用于协同解除免疫细胞衰竭组合物的核糖核酸分子；

(3)进行体外诱导培养以获得用于表达步骤(2)核糖核酸分子的抗原递呈细胞；和

(4)通过转染使步骤(2)的核糖核酸分子导入步骤(3)的抗原递呈细胞并进行表达，从而得到工程化免疫细胞；和

(5)使工程化免疫细胞与CD3+免疫细胞进行接触或共培养。

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