CN110903310A - 一种硼酸酯类药物及其用途 - Google Patents

Abstract

本申请提供了适用作蛋白酶体抑制剂的硼酸酯化合物及其制备方法及用途，该化合物具有如下结构

式(I)中，R1、R2取代基为对位的非对称取代基，R1和R2均选自卤素；且当R₁为F时，R₂不为Cl；当R₁为Cl时，R₂不为Br或F，当R₁为Br时，R₂不为Cl；X₁、X₂选自羟基，或X₁、X₂共同形成一个取代或未取代的4‑10元的环，该4‑10元的环含有1‑4个任选自O、N、S的杂原子。本申请的硼酸酯化合物与现有的用作蛋白酶体抑制剂的硼酸酯化合物相比的活性更高。

Description

一种硼酸酯类药物及其用途

技术领域

本申请涉及药物化学领域。具体而言，涉及一种作为蛋白酶体抑制剂的硼酸酯类抗肿瘤药物。

背景技术

硼酸及硼酸酯类化合物由于其独特的结构特征，呈现出医药学上适用的多种生物活性。蛋白酶体是泛素-蛋白酶体系统的重要组成部分，负责大多数细胞内蛋白质的调节和降解，在调节细胞周期、细胞增殖和细胞凋亡方面起核心作用。硼酸类药物硼替佐米(Bortezomib，商品名：

)是2003年被FDA批准的第一个上市靶向蛋白酶体抑制剂，由美国Millennium制药公司研发的新型抗肿瘤药物，为注射用冻干粉针，用于治疗复发性和难治性多发性骨髓瘤。硼替佐米可以选择性的与蛋白酶体活性位点的苏氨酸结合，降解并改变机体内调节蛋白水平，破坏细胞稳定性，导致肿瘤细胞死亡。

Ixazomib Citrate(MLN9708,商品名：

)，是Millennium制药公司基于硼替佐米基础上开发的第二代蛋白酶体抑制剂，于2015年11月20日由美国FDA批准上市，用于治疗多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)。其可优先结合及抑制20S蛋白酶体的糜蛋白酶样蛋白水解(β5)位点，通过阻断蛋白酶来抑制从发性骨髓瘤细胞增殖。硼酸酯化合物MLN9708作为一个前药，在体内迅速水解为活性硼酸结构MLN2238发挥药理活性。由于将不稳定的硼酸基团转化为性质稳定的硼酸酯结构，MLN9708与MLN2238及Bortezomib相比，其最大的优势是将注射剂型改为口服胶囊剂型，极大的改善了患者药物依从性。

另外，专利文献CN103435638A在实施例中公开了一种如下结构的化合物(8l)。

现有技术中，仍然需要获得具有更高的抗癌活性的硼酸酯化合物。

发明内容

为了解决上述技术问题，本申请的一个或多个实施方式提供了如下式(I)所示的硼酸酯化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐

式(I)中，R1、R2取代基为对位的非对称取代基，R1和R2均选自卤素；且当R₁为F时，R₂不为Cl；当R₁为Cl时，R₂不为Br或F，当R₁为Br时，R₂不为Cl；

X₁、X₂选自羟基，或X₁、X₂共同形成一个取代或未取代的4-10元的环，该4-10元的环含有1-4个任选自O、N、S的杂原子。

在本申请的一个或多个实施方式中，所述X₁、X₂与硼原子共同形成一个取代或未取代的5-6元的环，该5-6元的环含有1-2个O原子，或者含有1-2个N原子。

在本申请的一个或多个实施方式中，所述X₁、X₂与硼原子共同形成的5-6元的环的结构如下所示：

其中，当n＝1时，R₃、R₄、R₅为任选H、自取代或未取代的C₁-C₆烷基、自取代或未取代的环烷基，取代或未取代的C₃-C₈烷氧基、取代或未取代的C₁-C₆烷基-COOH、-COOH、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苯基；

或者，当n＝1时，R₃、R₄共同形成一个饱和或不饱和的5-6元的环，所述饱和或不饱和的5-6元的环任选自：苯环、含0-2个不饱和烯键的环已基、含0-2个不饱和烯键的环戊基；

当n＝0时，R₃为不存在，R₄、R₅为任选为H、取代或未取代的C₁-C₆烷基、自取代或未取代的环烷基，取代或未取代的C₃-C₈烷氧基、取代或未取代的C₁-C₆烷基-COOH、-CH₂-COOH、-COOH、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苯基。

在本申请的一个或多个实施方式中，当R₁为Br时，R₂为F或I；当R₁为F时，R₂为Br或I。

在本申请的一个或多个实施方式中，当R₁为F，R₂为Br时，

当n＝1时，R₃为H，R₄和R₅任选自H、-COOH、-CH₂-COOH、苯基和苄基；优选的，R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅择一的选自苯基和氢原子；进一步优选的，R₄和R₅择一的选自-CH₂-COOH和-COOH；

或者当n＝1时，R₃和R₄共同形成一个6元环，所述6元环任选为被取代或未被取代，所述为6元环任选自：苯环或含0-2个不饱和烯键的环已基，R₅为不存在；所述的6元环，优选为苯环；

或者当n＝0时，R₃为不存在，R₄和R₅任选自H、-COOH、-CH₂-COOH、苯基和苄基；优选的，R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅任选自苯基和氢原子；进一步优选的，R₄和R₅均为-CH₂-COOH，或者R₄和R₅择一的选自苯基和氢原子，且与苯基相连的5元环上的碳原子为S构型。

在本申请的一个或多个实施方式中，当n＝1时，所述环的结构为

所述R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅择一的选自苯基和氢原子；

或者n＝1，R₃和R₄共同形成一个6元环，所述6元环的结构为

或者n＝0，所述环的结构为

所述R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅任选自苯基、氢原子。

本申请的一个或多个实施方式式(I’)的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐

当R₁为F时，R₂为Br；当R₁为Br时，R₂为F；

X₁和X₂为OH；或者

X₁和X₂与其连接的硼原子共同形成环状结构，所述环状结构为

其中

R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基、COOH、C₁-C₆烷基-COOH、OH或卤素，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

在一些实施方式中，硼酸化合物可通过使硼酸部分脱水而形成酸酐。“硼酸酐”是指由两个或两个以上硼酸化合物分子结合同时失去一个或多个水分子所形成的化合物。各硼酸酯或者各硼酸络合物经水解形成游离硼酸化合物后，也能形成硼酸酐。当与水混合时，硼酸酐化合物被水解而释放游离硼酸化合物。在各种实施方式中，硼酸酐可含有两个、三个、四个或四个以上硼酸单元，可以具有环状或线性构型。本发明硼酸酐的非限制性实施方式包括：

其中n为1-100的整数。

在本申请的一个或多个实施方式中，n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或100。

在本申请的一个或多个实施方式中，当R₁为F时，R₂为Br。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中所述环状结构为

其中

R₃和R₄各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中所述环状结构为

其中

R₅和R₆各自独立地为氢、C₁-C₆烷基或C₁-C₆烷氧基；

R₇和R₈各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；

所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中所述R₅和R₆为H，所述R₇和R₈各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中所述环状结构为

所述R₉为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基的基团取代。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中：

所述环状结构为

所述R₃和R₄各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、苯基、苄基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；优选地，所述R₃和R₄各自独立地为氢、苯基、COOH或C_1-3烷基-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₅和R₆各自独立地为氢或C₁-C₆烷基；所述R₇和R₈各自独立地为氢、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；优选地，所述R₅和R₆均为H，所述R₇和R₈各自独立地为COOH或C_1-3烷基-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₉为氢、C₁-C₆烷基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；优选地，所述R₉为氢、C₁-C₃烷基、COOH或C₁-C₃烷基-COOH。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中：

所述环状结构为

所述R₃和R₄各自独立地为氢、苯基、COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₅和R₆为氢；所述R₇和R₈各自独立地为COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₉为氢。

在本申请的一个或多个实施方式中，其中：

当R₁为F时，R₂为Br，

所述环状结构为

所述R₃和R₄各自独立地为氢、苯基、COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₅和R₆为氢；所述R₇和R₈各自独立地为氢、COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₉为氢。

在本申请的一个或多个实施方式中，本申请所述化合物为以下结构：

本申请的一个或多个实施方式还提供了药物制剂，其包含上述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者上述化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，以及药学上可接受的辅料。

本申请的一个或多个实施方式还提供了一种药物组合物，含有上述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者上述化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，以及其他至少一种以上的预防和治疗肿瘤的药物。

本申请的一个或多个实施方式提供了上述化合物及其盐、溶剂化物或络合物或者上述化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途。

在本申请的一个或多个实施方式中，所述治疗癌症的药物为蛋白酶体抑制剂类药物。

在本申请的一个或多个实施方式中，所述治疗癌症的药物为蛋白酶体抑制剂类抗癌药，包括：预防和/或治疗浆细胞瘤的药物，如预防和/或治疗多发性骨髓瘤的药物；以及预防和/或治疗淋巴瘤的药物，如预防和/或治疗非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤和/或滤泡性淋巴瘤的药物；预防和/或治疗白血病的药物；以及预防和治疗套细胞瘤、乳腺癌、肝癌、结肠癌、宫颈癌、肺癌、淋巴瘤、卵巢癌、肾癌、胃癌、鼻咽癌、白血病、黑色素瘤、甲状腺癌、胰腺癌、腺癌和鳞状细胞癌的药物。

在本申请的一个或多个实施方式中，本申请的化合物能够用于治疗浆细胞瘤、套细胞瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肺癌、淋巴瘤、白血病、卵巢癌、肾癌、胃癌、鼻咽癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌、腺癌、口腔癌、食道癌、鳞状细胞癌和结肠癌。

本申请的一个或多个实施方式还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物在制备蛋白酶体抑制剂中的用途。

本申请的一个或多个实施方式还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物在抑制蛋白酶体中的用途。

本申请的一个或多个实施方式还进一步提供了包含本申请的化合物的药物组合物或药物制剂。例如，本申请所述的化合物可以纯的形式、与其他活性成分组合或与可药用非毒性赋形剂或载体组合施用。

本申请的一个或多个实施方式还提供了治疗和/或预防癌症或肿瘤的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物。

在本申请的一个或多个实施方式中，所述癌症或肿瘤选自浆细胞瘤、套细胞瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肺癌、淋巴瘤、白血病、卵巢癌、肾癌、胃癌、鼻咽癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌、腺癌、口腔癌、食道癌、鳞状细胞癌和结肠癌。

本申请的一个或多个实施方式还提供了抑制蛋白酶体的方法，所述方法包括向有此需要的对象施用本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物。

本申请的一个或多个实施方式还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物，其用作药物。

本申请的一个或多个实施方式还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症或肿瘤的方法。

在本申请的一个或多个实施方式中，所述癌症或肿瘤选自浆细胞瘤、套细胞瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肺癌、淋巴瘤、白血病、卵巢癌、肾癌、胃癌、鼻咽癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌、腺癌、口腔癌、食道癌、鳞状细胞癌和结肠癌。

本申请的一个或多个实施方式还提供了本申请的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者本申请的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，或者上述药物制剂或药物组合物，其用于抑制蛋白酶体的方法。

以下对本申请的技术方案中使用的术语进行说明。如在说明书和所附的权利要求书中所使用的，除非有相反的特定说明，否则本申请的术语具有如下表示的意义：

术语“化合物”，包括所有立体异构体，几何异构体，互变异构体。本文中所述的“化合物”，可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如单独的对映异构体和非对映异构体或其他立体异构体形式或它们的混合物。本文中含有不对称碳原子的化合物，可以以光学活性纯的形式或外消旋体形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。本文所述的“化合物”，还包括几何异构形式，几何异构形式指化合物在双键或环上的取代基有不同的顺反异构而不具手性的形式。本文所述的“化合物”，还包括互变异构体形式。互变异构体形式可来源于一个单键与相邻的双键交换并一起伴随一个质子的迁移。

本文的化合物，无论是中间体或式(I)化合物，均还可以通过使其中的一个或多个原子被具有不同的原子质量或质量数的原子替代而被同位素标记。此类经同位素标记的(即，放射性标记的)化合物被视为处于在本文的范围内。本文的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，各同位素间分别具有相同的质子数，但质量数不同。

术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”，是指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“羟基”，是指-OH。

术语“羧基”，是指-COOH。

“巯基”基团是指“-SH”基团。

“羰基”基团是指C＝O基团。

“异氰酸基”基团是指“-NCO”基团。

“硫氰酸基”基团是指“-CNS”基团。

“异硫氰酸基”基团是指“-NCS”基团。

“CA至CB”或“CA-CB”是指烷基、烯基或炔基中的碳原子数，或芳基、杂芳基中的碳原子数，其中“A”和“B”是整数。即，烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基可包含“A”至“B”个碳原子。因此，例如，“C1至C4烷基”或“C1-C4烷基”基团是指具有1至4个碳的所有烷基，即CH₃-、CH₃CH₂-、CH₃CH₂CH₂-、(CH₃)₂CH-、CH₃CH₂CH₂CH₂-、CH₃CH₂CH(CH₃)-和(CH₃)₃C-。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基基团，该术语包括直链和支链烃基。例如，C1-C20烷基，优选为C1-C6烷基。C1-C20烷基指具有1至20个碳原子的烷基，例如具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子、10个碳原子、11个碳原子、12个碳原子、13个碳原子、14个碳原子、15个碳原子、16个碳原子、17个碳原子、18个碳原子、19个碳原子或20个碳原子的烷基。烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基等。所述烷基可以是非取代的或被一个或多个取代基所取代，所述取代基包括但不限于烷基、烷氧基、氰基、羟基、羰基、羧基、芳基、杂芳基、胺基、卤素、磺酰基、亚磺酰基、膦酰基等。

术语“烯基”是指在直链或支链烃链中包含一个或多个双键的烃基。烯基可为未取代的或取代的。烯基可具有1至20个碳原子，诸如“1至20”的数值范围是指给定范围中的各个整数；例如，“1至20个碳原子”是指可包含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子、10个碳原子、11个碳原子、12个碳原子、13个碳原子、14个碳原子、15个碳原子、16个碳原子、17个碳原子、18个碳原子、19个碳原子或20个碳原子的烯基。

术语“炔基”是指在直链或支链烃链中包含一个或多个叁键的烃基。炔基可为未取代的或取代的。炔基可具有1至20个碳原子，诸如“1至20”的数值范围是指给定范围中的各个整数；例如，“1至20个碳原子”是指可包含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子、10个碳原子、11个碳原子、12个碳原子、13个碳原子、14个碳原子、15个碳原子、16个碳原子、17个碳原子、18个碳原子、19个碳原子或20个碳原子的炔基。术语“环烷基”是指具有单环或多环(包括稠环、桥环及螺环系统)的环状烷基，包括3至8个碳原子(例如，3个、4个、5个、6个、7个、或8个碳原子)和氢原子组成的环状烷基。环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、螺[3.4]辛烷基、二环[1.1.1]戊烷基、二环[3.1.0]己烷基等。

术语“杂环烷基”，指饱和的非芳香性的含一个或多个(例如，1个、2个、3个或4个)杂原子的单环、稠合、桥环和螺环。其中所述杂原子典型的为N、O、S或SO₂

杂环烷基可为3元至10元(例如，包含3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个环原子)的单环或双环或三环。杂环烷基的实例包括但不限于哌嗪基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢-2H-吡喃基等。杂环烷基可以是非取代的，也可以被一个或多个取代基所取代，所述取代基包括但不限于卤素、烷基、卤代烷基、氨基、氰基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、羰基、环烷基、杂环烷基、任选由C1-C3烷基取代的磺酰基、芳基和杂芳基等。

术语“芳基”，指具有完全共轭的π电子体系的全碳单环或全碳稠合环，通常具有5-14个碳原子，例如，6个、10个、12个、14个碳原子。芳基可以是非取代的，或被一个或多个取代基所取代，所述取代基包括但不限于烷基、烷氧基、氰基、羟基、羧基、芳基、芳烷基、胺基、卤素、磺酰基、亚磺酰基、膦酰基。非取代的芳基实例包括但不限于苯基、萘基和蒽基。

术语“杂芳基”，是指具有6-12个环原子(例如，6个、10个、12个、14个环原子)的单环或稠合环，其中含有1-4个(例如，1个、2个、3个或4个)选自N、O、S的杂原子，其余环原子为C，且具有完全共轭π-电子体系，包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基，异噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、喹啉基、异喹啉基、三唑基、苯并咪唑、苯并三唑等。杂芳基可以是非取代的或取代的，所述取代基包括但不限于烷基、烷氧基、氰基、羟基、羰基、羧基、芳基、芳烷基、胺基、卤素、磺酰基、亚磺酰基、膦酰基。

“烷氧基”是指式-OR，其中R为本文定义的烷基。烷氧基的非限制性列举为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基。烷氧基可为取代的或未取代的。

“酰基”是指通过羰基连接的作为取代基的氢、烷基、烯基、炔基或芳基。实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基和丙烯酰基。酰基可为取代的或未取代的。

“卤代烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤素取代(例如，单卤代烷基、二卤代烷基和三卤代烷基)的烷基。这类基团包括但不限于氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟甲基和2-氟异丁基。卤代烷基可为取代的或未取代的。

“卤代烷氧基”是指其中一个或多个氢原子被卤素(例如，单卤代烷氧基、二卤代烷氧基和三卤代烷氧基)取代的烷氧基。这类基团包括但不限于氯甲氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、1-氯-2-氟甲氧基和2-氟异丁氧基。卤代烷氧基可为取代的或未取代的。

“芳硫基”是指RS-，其中R为芳基，例如但不限于苯基。芳硫基可为取代的或未取代的。

“硫代羰基”基团是指“-C(＝S)R”基团，其中R与关于O-羧基中的R的定义相同。硫代羰基可为取代的或未取代的。

“烃硫基”基团是指“-SR”基团，其中R可为烷基(此时的“烃硫基”为“烷硫基”)、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。烃硫基可为取代的或未取代的。

“亚磺酰基”基团是指“-S(＝O)-R”基团，其中R与烃硫基中的R定义相同。亚磺酰基可为取代的或未取代的。

“磺酰基”基团是指“SO₂R”基团，其中R与烃硫基中的R的定义相同。磺酰基可为取代的或未取代的。

“DMSO”指二甲基亚砜。

“C-酰氨基”基团是指“-C(＝O)N(R_AR_B)”基团，其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。C-酰氨基可为取代的或未取代的。

“N-酰氨基”基团是指“RC(＝O)N(R_A)-”基团，其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。N-酰氨基可为取代的或未取代的。

“S-磺酰氨基”基团是指“-SO₂N(R_AR_B)”基团，其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。S-磺酰氨基可为取代的或未取代的。

“N-磺酰氨基”基团是指“RSO₂N(R_A)-“基团，其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。N-磺酰氨基可为取代的或未取代的。

“O-氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝O)N(R_AR_B)”基团，其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。O-氨基甲酰基可为取代的或未取代的。

“N-氨基甲酰基”基团是指“ROC(＝O)N(R_A)-“基团，其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。N-氨基甲酰基可为取代的或未取代的。

“O-硫代氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝S)-N(R_AR_B)”基团，其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。O-硫代氨基甲酰基可为取代的或未取代的。

“N-硫代氨基甲酰基”基团是指“ROC(＝S)N(R_A)-“基团，其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、(杂芳基)烷基或(杂脂环基)烷基。N-硫代氨基甲酰基可为取代的或未取代的。

术语“取代”在本文中是指任何基团由指定取代基单取代或多取代至这种单取代或多取代(包括在相同部分的多重取代)在化学上允许的程度，每个取代基可以位于该基团上任何可利用的位置，且可以通过所述取代基上任何可利用的原子连接。“任何可利用的位置”是指通过本领域已知的方法或本文教导的方法可化学得到，并且不产生过度不稳定的分子的所述基团上的任何位置。当在任何基团上有两个或多个取代基时，每个取代基独立于任何其它取代基而定义，因此可以是相同或不同的。

当基团被描述为“任选取代的”时，则基团可为未取代的或被一个或多个以下的取代基取代：氢、氟、氯、溴、碘、硝基、三氟甲基、二氟甲基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、甲氧基、酰基、烷氧基、杂环烷基、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、杂芳烷基、(杂脂环基)烷基、羟基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、卤素、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰氨基、N-磺酰氨基、羧基、异氰酸基、硫氰酸基、异硫氰酸基、甲硅烷基、烃硫基、亚磺酰基、磺酰基、卤代烷基、卤代烷氧基和氨基。

术语“取代或未取代的”在本文中是指任何基团由指定取代基单取代或多取代至这种单取代或多取代(包括在相同部分的多重取代)在化学上允许的程度，每个取代基可以位于该基团上任何可利用的位置，且可以通过所述取代基上任何可利用的原子连接。“任何可利用的位置”是指通过本领域已知的方法或本文教导的方法可化学得到，并且不产生过度不稳定的分子的所述基团上的任何位置。当在任何基团上有两个或多个取代基时，每个取代基独立于任何其它取代基而定义，因此可以是相同或不同的。所述取代基是指由下列各基团组成的群组：氢、氟、氯、溴、碘、硝基、三氟甲基、二氟甲基、三氟甲氧基、二氟甲氧基、甲氧基、烷基、酰基、烷氧基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，其中所述各基团如本文中所定义。

术语“本申请的化合物”(除非另有具体指明)在本文中是指权利要求所保护的化合物及其所有纯的氮氧化物、硫氧化物、溶剂合物、及同位素标记的化合物和任何药学上可接受的盐。本申请的化合物的溶剂合物是指与化学计量和非化学计量的溶剂结合的化合物或其盐，如水合物、乙醇合物、甲醇合物等。化合物也可以一种或多种结晶状态存在，即作为共晶体、多晶型物，或其可以无定形固体存在。所有此种形式均被权利要求所涵盖。

本申请硼酸酯化合物可以进一步形成盐，例如从无机酸或有机酸衍生得到的“医药上可接受的盐”。这些包括但并不限于下列所述：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、延胡索酸盐、氢氯化物、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、盐酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、果胶酯酸盐、硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐和癸酸盐。另外，碱性含氮基团可以与以下试剂发生季铵化反应生成季铵盐：如低碳烷基卤化物，包括甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；如二烷基硫酸盐，包括二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸盐；如长链卤化物，包括癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；如芳烷基卤化物，如苯甲基和苯乙基的溴化物等。

本申请还包括同位素标记的本申请化合物，即与上述所公开的结构相同，但该结构中一个或多个原子被与其具有相同质子数但不同中子数的原子所替代。结合本申请化合物的同位素实施例包括氢、碳、氧、硫、氟、氯、碘的同位素，分别如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl和¹³¹I等。

术语“药学上可接受”表示物质或组合物在化学上和/或毒理学上必须与构成制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物相容。

本申请的一个或多个实施方式中还涵盖以下化合物：

2-氟-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(5R)-4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺；以及

2-氟-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(5S)-4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰；等化合物及其盐、硼酸络合物、硼酸酯和硼酸酐。

本申请所称的“药物制剂”，可以是申请所述药物组合物直接，或加上其他活性成分组合一起，与可药用辅料或载体组合而成。所述制剂包括：片剂、药丸、胶囊、颗粒剂和悬浮液和乳状液剂等。所述可药用辅料或载体包括：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖；分散剂如褐藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁；助流剂如胶状二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或调味剂如薄荷油、水杨酸甲酯或橙味剂；非水溶剂如二甲基亚砜、醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯；水性载体如醇和水的混合物，缓冲的介质和盐水；以及防腐剂、抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、染料、色素或香料等。

本申请的一个或多个实施方式中所述癌症具体为组织细胞性淋巴癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、宫茎癌、脑癌、食道癌、骨癌、睾丸癌、黑色素癌、皮肤癌、上皮细胞癌、前列腺癌、鼻咽癌、口腔癌、白血病、浆细胞瘤或套细胞瘤，以及脑、生殖系统、淋巴系统、消化系统肿瘤、呼吸系统肿瘤和皮肤肿瘤中的任一种或多种。

所述可与本申请的化合物一起构成药物组合物的其他抗肿瘤药物包括：细胞毒类药物、激素类药物、抗代谢类药物、肿瘤靶向药物，以及辅助治疗药物等。细胞毒类药物，如卡铂、顺铂、伊立替康、紫杉醇、氟脲嘧啶、阿糖胞苷、来拉度胺、维甲酸；激素类药物，如地塞米松、氟维司群、他莫昔芬等；抗代谢类药物，氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、呋喃氟尿嘧啶、阿糖胞苷；分子靶向药物，如替尼类药物的伊马替尼、厄洛替尼、拉帕替尼等，以及PARP抑制剂类药物，如Olaparib、Rubraca、Zejula等；辅助治疗类药物，如重组人粒细胞集落刺激因子、促红细胞生成素、帕米膦酸二钠、唑来膦酸等。此外，还包括抗肿瘤生物药，如Keytruda、Opdiv、Tecentriq、Imfinzi、Bavencio等。

本申请的一个或多个实施方案的化合物与现有的用做蛋白酶体抑制剂的相关硼酸酯类化合物相比活性更强。例如相比现有化合物(化合物6a、6c以及MLN9708等)，本申请化合物对肿瘤组织具有更强的抑制作用，对肿瘤组织增殖具有更好的抑制作用。

本申请的一个或多个实施方案的化合物具有较高的安全性。

本申请的一个或多个实施方案的化合物具有较好的理化性质和成药性前景。例如在稳定性试验中，本申请化合物经高温、高湿加速试验条件下，主药成分含量变化小、杂质生成少，性质稳定。在溶解实验中，本申请化合物体现出良好的溶解性。

附图说明

图1示出了在给药各种蛋白酶体抑制剂的情况下，MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型平均肿瘤体积随给药时间的变化。

图2为MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型肿瘤体积测量图。

具体实施方式

下面结合实施例对本申请进一步说明，给出本申请的实施细节，但需要指出的是下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本申请，而不能理解为对本申请的限制。对于本领域技术人员根据现有技术对其进行修改或替代仍属于本申请的保护范围。本申请实施例中使用的试剂均可通过商购获得。

制备例1

化合物3b：2-氟-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入8.28g[(2-氟-5-溴苯甲酰基)氨基]乙酸(化合物1b,30.0mmol)，加入70mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，冰浴条件下搅拌10min后加入10.60gTBTU(33.0mmol,1.10eq.)，搅拌15min后加入12.0g(R)-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧杂环戊硼烷-2-基]-3-甲基-1-丁胺-2,2,2-三氟乙酸盐(化合物2,31.5mmol,1.05eq.)，冰浴条件搅拌10min后，滴加13.06mL DIPEA(75.0mmol,2.50eq.)与15mL DMF的混合液，约15min左右滴加完毕。滴毕，反应混合液逐渐恢复至室温反应约4h后，TLC检测反应原料1b完全消失。反应结束后，向反应体系中加入150mL乙酸乙酯分散反应液，并加入150mL水萃取并分液，水相再用50mL乙酸乙酯反萃一次，合并乙酸乙酯相，并依次用100mL 3％K₂CO₃溶液、100mL 3％H₃PO₄溶液、100mL 50％的氯化钠溶液洗涤，收集乙酸乙酯有机相，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至干，烘干后可得白色固体产物——化合物(3b)：2-氟-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺，共14.0g，收率89.0％。

制备例2

化合物4b：[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物3b共14.0g(26.75mmol)，搅拌条件下加入70mL甲醇使之溶解，随后加入70mL正庚烷，室温搅拌下加入5.45g异丁基硼酸(53.5mmol,2.0eq.)，搅拌15min后滴加1N HCl溶液40.1mL(40.12mmol,1.5eq.)，约20min左右滴加完毕，滴毕反应混合液在室温条件下剧烈搅拌过夜，TLC检测反应情况至原料3b完全消失。反应结束后，静置反应液，分离两相，甲醇相用50mL×2正庚烷洗涤两次，收集甲醇相，随后将甲醇相浓缩至剩余1/4体积，冰浴条件下，向甲醇相中加入50mL二氯甲烷及50mL水，混合液搅拌条件下用2N NaOH溶液中和至碱性(PH＝10左右)，萃取并分液，水相再用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，收集水相。冰浴条件下，随后再向水相中加入80mL二氯甲烷，并用1NHCl溶液中和至弱酸性(PH＝4左右)，萃取并分液，水相用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，合并二氯甲烷相，二氯甲烷相用100mL 50％的氯化钠溶液洗涤一次后，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后在搅拌条件下向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入60mL正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物——化合物(4b)：[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸，共7.80g，收率75.0％。

制备例3

化合物6b：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物4b共1.56g(4.0mmol)，搅拌条件下加入20mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.84g一水合柠檬酸(化合物5,4.0mmol,1.0eq.)，约反应0.5h后体系中有白色固体产生，随后继续加热条件下反应1h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6b)：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸，共1.75g，收率80.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.12(s,2H),10.64(s,1H),8.88(dd,J＝8.4,5.2Hz,1H),7.91(dd,J＝6.4,2.8Hz,1H),7.77(m,1H),7.34(t,10.0Hz,1H),4.42–4.18(m,2H),2.89(m,1H),2.82–2.51(m,4H),1.68(m,1H),1.44–1.08(m,2H),0.86(d,J＝6.4Hz,6H).ESI-MS:[C₂₀H₂₃BBrFN₂O₉-H]的计算值544.12，实测值544.66；[C₂₀H₂₃BBrFN₂O₉+Na⁺]的计算值568.11，实测值568.69。

制备例4

化合物6d：4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-氟-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸的制备

在圆底烧瓶中，参照实施例3的方法制备化合物6d，只是替换其中的一水合柠檬酸为无水柠檬酸，其余步骤参照进行，从而得到4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-氟-5-溴苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸化合物6d。

或者可参照制备例3的方法制备化合物6d，替换其中的一水合柠檬酸为无水柠檬酸，同时调整反应后处理方式：

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4b共1.56g(4.0mmol)，搅拌条件下加入20mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.77g无水柠檬酸(4.0mmol,1.0eq.)，搅拌混合液反应0.5h后，将溶液缓慢冷却(约0.33℃/min)直至内部温度为约60℃且将混合物搅拌2h，继续将所得浆液缓慢冷却(约0.12℃/min)直至内部温度为约25℃且将混合物搅拌过夜，反应体系中即有大量白色固体析出，随后抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6d)：4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-氟-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸，共1.85g，收率85.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.12(s,2H),10.64(s,1H),8.88(dd,J＝8.4,5.2Hz,1H),7.91(dd,J＝6.4,2.8Hz,1H),7.77(m,1H),7.34(t,10.0Hz,1H),4.42–4.18(m,2H),2.89(m,1H),2.82–2.51(m,4H),1.68(m,1H),1.44–1.08(m,2H),0.86(d,J＝6.4Hz,6H).ESI-MS:[C₂₀H₂₃BBrFN₂O₉-H]的计算值544.12，实测值544.66；[C₂₀H₂₃BBrFN₂O₉+Na⁺]的计算值568.11，实测值568.88。

制备例5

化合物6e：2-氟-5-溴-N-(2-{[(1R)-3-甲基-1-(4-氧代-4H-1,3,2-苯并二氧硼戊环-2-基)丁基]氨基}-2-氧代乙基)苯甲酰胺的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4b共1.17g(3.0mmol)，搅拌条件下加入23mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.44g水杨酸(3.15mmol,1.05eq.)，约反应5min后体系中即有大量白色固体产生，随后继续加热条件下反应1h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6e)：2-氟-5-溴-N-(2-{[(1R)-3-甲基-1-(4-氧代-4H-1,3,2-苯并二氧硼戊环-2-基)丁基]氨基}-2-氧代乙基)苯甲酰胺，共1.22g，收率83.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝10.89(s,1H),8.94(d,J＝2.8Hz,1H),7.87(d,J＝4.4Hz,1H),7.78(m,2H),7.54–7.42(m,1H),7.34(m,1H),6.94(dd,J＝15.4,8.0Hz,2H),4.28(d,J＝5.2Hz,2H),2.90–2.72(m,1H),1.65(m,1H),1.52–1.32(m,2H),0.88(t,J＝6.8Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ＝176.44,163.41,160.46,158.96,157.95,136.28,135.60,133.33,129.73,124.72,120.30,119.46,119.22,118.62,116.56,116.19,39.01,38.81,26.01,23.32,22.71。

制备例6

化合物6f：2-氟-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4b共1.17g(3.0mmol)，搅拌条件下加入23mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.48g扁桃酸(3.15mmol,1.05eq.)，加热反应1h后，体系中无固体析出，随后冷却至室温反应2h后往混合液中加入30mL正庚烷，体系中即有大量白色固体析出，继续搅拌0.5h后，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的正庚烷洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6f)：2-氟-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺，共1.42g，收率93.4％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝10.88(s,1H),9.02(s,1H),7.93(s,1H),7.81(d,J＝3.5Hz,1H),7.53–7.23(m,6H),5.19(m,J＝27.7Hz,1H),4.47–4.28(m,2H),2.80(d,J＝7.2Hz,1H),1.67(m,1H),1.56–1.26(m,2H),0.91(d,J＝6.4Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ＝176.75,163.36,160.54,158.03,139.77,136.36,133.31,128.42,127.91,126.53,124.73,119.53,119.29,116.66,76.62,75.67,39.06,26.20,25.92,23.38,22.51。

制备例7

化合物6g：{(4S)-2-[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴苯甲酰基)氨基]-乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]-5-氧代-1,3,2-二氧硼戊烷-4-基}乙酸的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4b共1.17g(3.0mmol)，搅拌条件下加入23mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.40g L-苹果酸(3.0mmol,1.0eq.)，加热反应1h后，体系中无固体析出，随后冷却至室温反应2h，最后将反应混合液浓缩至干，油泵真空抽干后即有大量泡沫状固体生成，将白色泡沫状固体用15mL×2的正庚烷洗涤两次，再真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6g)：{(4S)-2-[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴苯甲酰基)氨基]-乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]-5-氧代-1,3,2-二氧硼戊烷-4-基}乙酸：共1.34g，收率92.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.34(s,1H),10.81(s,1H),9.17(t,J＝5.6Hz,1H),7.89(m,1H),7.68(dd,J＝8.6,2.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,1H),4.43(m,1H),4.32(d,J＝4.5Hz,2H),2.66(d,J＝16.1Hz,2H),2.45(m,1H),1.68(m,1H),1.52–1.26(m,2H),1.01–0.75(m,6H)。

制备例8

化合物6h：4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-溴-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸的制备

参照制备例1的方法制备化合物4d，将其中的[(2-氟-5-溴苯甲酰基)氨基]乙酸替换为[(2-溴-5-氟苯甲酰基)氨基]乙酸；

参照制备例4的方法制备化合物6h，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4d共1.56g(4.0mmol)，搅拌条件下加入20mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.77g柠檬酸(4.0mmol,1.0eq.)，搅拌混合液反应0.5h后，将溶液缓慢冷却(约0.33℃/min)直至内部温度为约60℃且将混合物搅拌2h，继续将所得浆液缓慢冷却(约0.12℃/min)直至内部温度为约25℃且将混合物搅拌过夜，反应体系中即有大量白色固体析出，随后抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6h)：4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-溴-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸，共1.70g，收率78.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.12(s,2H),10.64(s,1H),8.88(dd,J＝8.4,5.2Hz,1H),7.91(dd,J＝6.4,2.8Hz,1H),7.77(m,1H),7.34(t,10.0Hz,1H),4.42–4.18(m,2H),2.89(m,1H),2.82–2.51(m,4H),1.68(m,1H),1.44–1.08(m,2H),0.86(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例9

化合物6i：2-溴-5-氟-N-(2-{[(1R)-3-甲基-1-(4-氧代-4H-1,3,2-苯并二氧硼戊环-2-基)丁基]氨基}-2-氧代乙基)苯甲酰胺的制备

参照制备例5的方法制备化合物6i，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4d共1.17g(3.0mmol)，搅拌条件下加入23mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.44g水杨酸(3.15mmol,1.05eq.)，约反应5min后体系中即有大量白色固体产生，随后继续加热条件下反应1h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6i)：2-溴-5-氟-N-(2-{[(1R)-3-甲基-1-(4-氧代-4H-1,3,2-苯并二氧硼戊环-2-基)丁基]氨基}-2-氧代乙基)苯甲酰胺，共1.20g，收率81.6％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝10.89(s,1H),8.94(d,J＝2.8Hz,1H),7.87(d,J＝4.4Hz,1H),7.78(m,2H),7.54–7.42(m,1H),7.34(m,1H),6.94(dd,J＝15.4,8.0Hz,2H),4.28(d,J＝5.2Hz,2H),2.90–2.72(m,1H),1.65(m,1H),1.52–1.32(m,2H),0.88(t,J＝6.8Hz,6H)。

制备例10

化合物6j：2-溴-5-氟-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备

参照实制备例6的方法制备化合物6j，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色固体产物(6j)：2-溴-5-氟-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝10.88(s,1H),9.02(s,1H),7.93(s,1H),7.71–7.25(m,7H),5.19(m,J＝27.7Hz,1H),4.47–4.28(m,2H),2.80(d,J＝7.2Hz,1H),1.67(m,1H),1.56–1.26(m,2H),0.91(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例11

化合物6k：{(4S)-2-[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]-乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]-5-氧代-1,3,2-二氧硼戊烷-4-基}乙酸的制备

参照制备例7的方法制备化合物6k，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色泡沫状固体产物(6k)：{(4S)-2-[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]-乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]-5-氧代-1,3,2-二氧硼戊烷-4-基}乙酸：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.34(s,1H),10.81(s,1H),9.20(m,1H),7.89(m,1H),7.68(m,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,1H),4.43(m,1H),4.32(d,J＝4.5Hz,2H),2.66(d,J＝16.1Hz,2H),2.45(m,1H),1.68(m,1H),1.52–1.26(m,2H),1.01–0.75(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例12

化合物6l：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-溴-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

参照制备例3的方法制备化合物6l，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-溴-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色固体产物(6l)：(R)-2,2'-(2-(1-(2-(2-溴-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.12(s,2H),10.64(s,1H),8.90(m,1H),7.95(dd,J＝6.4,2.8Hz,1H),7.77(m,1H),7.34(m,1H),4.42–4.18(m,2H),2.89(m,1H),2.82–2.51(m,4H),1.68(m,1H),1.44–1.08(m,2H),0.90(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例13

化合物6m：4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-氟-5-氯-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸的制备

参照制备例4的方法制备化合物6m，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色固体产物(6m)：4-(R,S)-(羧基甲基)-2-((R)-1-(2-(2-氟-5-氯-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4-甲酸：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.16(s,2H),10.66(s,1H),8.90(d,J＝2.8Hz,1H),7.90(m,1H),7.77(m,1H),7.49–7.33(m,1H),4.29(s,2H),2.88(m,1H),2.74–2.51(m,4H),1.67(s,1H),1.41–1.12(m,2H),0.85(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例14

化合物6n：2-氟-5-氯-N-(2-{[(1R)-3-甲基-1-(4-氧代-4H-1,3,2-苯并二氧硼戊环-2-基)丁基]氨基}-2-氧代乙基)苯甲酰胺的制备

参照制备例5的方法制备化合物6n，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色固体产物(6n)：2-氟-5-氯-N-(2-{[(1R)-3-甲基-1-(4-氧代-4H-1,3,2-苯并二氧硼戊环-2-基)丁基]氨基}-2-氧代乙基)苯甲酰胺：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝10.89(s,1H),9.05(d,J＝2.8Hz,1H),7.90(d,J＝4.4Hz,1H),7.78(m,2H),7.54–7.42(m,1H),7.34(m,1H),6.96(m,2H),4.28(d,J＝5.2Hz,2H),2.90–2.72(m,1H),1.65(m,1H),1.52–1.32(m,2H),0.85(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例15

化合物6o：2-氟-5-氯-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备

参照实制备例6的方法制备化合物6o，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色固体产物(6o)：2-氟-5-氯-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[4-氧代-5-苯基-1,3,2-二氧硼戊烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝10.88(s,1H),8.95(s,1H),7.93(s,1H),7.80–7.28(m,7H),5.19(m,J＝27.7Hz,1H),4.47–4.28(m,2H),2.80(d,J＝7.2Hz,1H),1.67(m,1H),1.56–1.26(m,2H),0.95(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例16

化合物6p：{(4S)-2-[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]-乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]-5-氧代-1,3,2-二氧硼戊烷-4-基}乙酸的制备

参照制备例7的方法制备化合物6k，将其中的[(1R)-1-({[(2-氟-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸替换为[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸。

可得白色泡沫状固体产物(6p)：{(4S)-2-[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]-乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]-5-氧代-1,3,2-二氧硼戊烷-4-基}乙酸：¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.38(s,1H),10.81(s,1H),9.20(m,1H),7.89(m,1H),7.68(m,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,1H),4.43(m,1H),4.32(d,J＝4.5Hz,2H),2.65-2.45(m,3H),1.68(m,1H),1.52–1.26(m,2H),1.05–0.85(d,J＝6.4Hz,6H)。

制备例17：化合物6q：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-氯-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

第一步：化合物3q：2-氟-5-氯-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备：

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入5.79g[(2-氟-5-氯苯甲酰基)氨基]乙酸(化合物1q,25.0mmol)，加入29mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，冰浴条件下搅拌10min后加入9.63gTBTU(30.0mmol,1.20eq.)，搅拌15min后加入9.95g(R)-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧杂环戊硼烷-2-基]-3-甲基-1-丁胺-2,2,2-三氟乙酸盐(化合物2,26.25mmol,1.05eq.)，冰浴条件搅拌10min后，滴加10.89mL DIPEA(62.50mmol,2.50eq.)，约15min左右滴加完毕。滴毕，反应混合液逐渐恢复至室温反应约4h后，TLC检测反应原料1q完全消失。反应结束后，向反应体系中加入60mL乙酸乙酯分散反应液，并加入40mL水萃取并分液，水相再用50mL乙酸乙酯反萃一次，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用80mL 3％K₂CO₃溶液、80mL 3％H₃PO₄溶液、80mL 50％的氯化钠溶液洗涤，收集乙酸乙酯有机相，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至干，可得白色固体产物——化合物(3q)：2-氟-5-氯-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺，不经纯化直接投入下一步反应。

第二步：化合物4e：[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物3q粗品，搅拌条件下加入58mL甲醇使之溶解，随后加入48mL正庚烷，室温搅拌下加入3.82g异丁基硼酸(37.50mmol,1.5eq.)，搅拌15min后滴加1N HCl溶液37.50mL(37.50mmol,1.5eq.)，约15min左右滴加完毕，滴毕反应混合液在室温条件下剧烈搅拌过夜，TLC检测反应情况至原料3q完全消失。反应结束后，静置反应液，分离两相，甲醇相用50mL×2正庚烷洗涤两次，收集甲醇相，随后将甲醇相浓缩至剩余1/4体积，冰浴条件下，向甲醇相中加入50mL二氯甲烷及50mL水，混合液搅拌条件下用2N NaOH溶液中和至碱性(PH＝10左右)，萃取并分液，水相再用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，收集水相。冰浴条件下，随后再向水相中加入80mL二氯甲烷，并用1N HCl溶液中和至弱酸性(PH＝4左右)，萃取并分液，水相用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，合并二氯甲烷相，二氯甲烷相用100mL 50％的氯化钠溶液洗涤一次后，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后在搅拌条件下向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入60mL正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物——化合物(4e)：[(1R)-1-({[(2-氟-5-氯-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸，共6.26g，收率72.7％。

第三步：化合物6q：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-氯-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4e共1.72g(5.0mmol)，搅拌条件下加入35mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入1.07g一水合柠檬酸(化合物5,5.10mmol,1.02eq.)，约反应5min后体系中有白色固体产生，随后继续加热条件下反应2h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6q)：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-氯-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸，共1.69g，收率67.6％。¹HNMR(400MHz,DMSO)δ＝12.16(s,2H),10.66(s,1H),8.90(d,J＝2.8Hz,1H),7.78(dd,J＝6.0,2.8Hz,1H),7.66(m,1H),7.49–7.33(m,1H),4.29(s,2H),2.88(m,1H),2.74(m,1H),2.68–2.51(m,3H),1.67(s,1H),1.41–1.12(m,2H),0.85(d,J＝6.4Hz,6H).ESI-MS:[C₂₀H₂₃BClFN₂O₉-H]的计算值499.67，实测值498.98，[C₂₀H₂₃BClFN₂O₉+Na⁺]的计算值523.11，实测值522.97。

制备例18

化合物6a：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氯-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

第一步：化合物3a：2-氯-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备

在20.0L反应釜中，称量并加入990.0g[(2-氯-5-溴苯甲酰基)氨基]乙酸(化合物1a,3.38mol)，加入8.4L二氯甲烷，冰浴条件下搅拌10min后加入712.8g EDCI(3.72mol,1.10eq.)及502.9g HOBT(3.72mol,1.10eq.)，搅拌15min后加入1347.7g(R)-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧杂环戊硼烷-2-基]-3-甲基-1-丁胺-2,2,2-三氟乙酸盐(化合物2,3.55mol,1.05eq.)，冰浴条件搅拌10min后，滴加1471.9mL DIPEA(8.45mol,2.50eq.)与1.5L二氯甲烷的混合液，约1.5小时左右滴加完毕。滴毕，反应混合液逐渐恢复至室温反应过夜，TLC检测反应情况至原料1a完全消失。反应结束后，反应液依次用5.0L水、5.0L 3％K₂CO₃溶液、5.0L 3％H₃PO₄溶液、5.0L水、5.0L 50％NaCl溶液洗涤，收集二氯甲烷有机相，并用500g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入5.0L正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物——化合物(3a)：2-氯-5-溴-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺共1510.0g，收率82.8％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ＝9.11–8.87(m,2H),7.77–7.64(d,J＝2.4Hz,1H),7.64–7.61(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,1H),4.18–3.92(m,2H),2.22(m,1H),2.11–2.00(m,1H),1.90–1.64(m,4H),1.43–1.18(m,10H),0.94–0.70(m,10H)。

第二步：化合物4a：[(1R)-1-({[(2-氯-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸的制备

在20.0L反应釜中，称量并加入上步所得的化合物3a共1300.0g(2.41mol)，搅拌条件下加入6.5L甲醇使之溶解，随后加入6.5L正庚烷，室温搅拌下加入491.4g异丁基硼酸(4.82mol,2.0eq.)，搅拌15min后滴加1N HCl溶液3.62L(3.62mol,1.5eq.)，约1.5h左右滴加完毕，滴毕反应混合液在室温条件下剧烈搅拌过夜，TLC检测反应情况至原料3a完全消失。反应结束后，静置反应液，分离两相，甲醇相用2.6L×2正庚烷洗涤两次，收集甲醇相，随后将甲醇相浓缩至剩余1/4体积，冰浴条件下，向甲醇相中加入2.6L二氯甲烷及1.0L水，混合液搅拌条件下用2N NaOH溶液中和至碱性(PH＝10左右)，萃取并分液，水相再用2.6L×2二氯甲烷洗涤两次，收集水相。随后冰浴条件下再向水相中加入5.2L二氯甲烷，并用1N HCl溶液中和至弱酸性(PH＝4左右)，萃取并分液，水相用2.6L×2二氯甲烷洗涤两次，合并二氯甲烷相，二氯甲烷相用2.6L 50％的氯化钠溶液洗涤一次后，并1000g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后在搅拌条件下向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入6.0L正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物化合物(4a)：[(1R)-1-({[(2-氯-5-溴-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸，共752.0g，收率77.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝9.03-8.93(m,1H),8.75(m,1H),7.83-7.76(d,J＝4.8,1H),7.67(m,1H),7.49(dd,J＝8.8,4.8Hz,1H),4.05(d,J＝6.4Hz,2H),2.71-2.64(m,1H),1.63(m,1H),1.45-1.22(m,2H),0.85(dd,J＝6.4,2.0Hz,6H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ＝171.85,168.16,165.65,138.07,134.19,132.22,130.08,120.18,55.37,25.66,23.43,23.35,22.57；熔点118-120℃。

第三步：化合物6a：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氯-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物4a共12.16g(30mmol)，搅拌条件下加入120mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入6.30g一水合柠檬酸(化合物5,30mmol,1.0eq.)，约反应0.5h后体系中有白色固体产生，随后继续加热条件下反应1h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6a)：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氯-5-溴-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸，共14.0g，收率83.1％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.16(s,2H),10.71(s,1H),9.17(t,J＝5.6Hz,1H),7.82(d,J＝2.4Hz,1H),7.68(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),4.32(d,J＝4.0Hz,2H),2.72–2.87(m,5H),1.68(m,1H),1.02–1.26(m,2H),0.87(d,J＝6.4Hz,6H).ESI-MS:[C₂₀H₂₃BBrClN₂O₉+Na⁺]的计算值583.03，实测值583.10。

制备例19

化合物6c：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

第一步：化合物3c：2-氟-5-三氟甲基-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入10.60g[(2-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基)氨基]乙酸(化合物1c,40.0mmol)，加入100mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，冰浴条件下搅拌10min后加入14.13g TBTU(44.0mmol,1.10eq.)，搅拌15min后加入15.93g(R)-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧杂环戊硼烷-2-基]-3-甲基-1-丁胺-2,2,2-三氟乙酸盐(化合物2,42.0mmol,1.05eq.)，冰浴条件搅拌10min后，滴加19.16mLDIPEA(110.0mmol,2.50eq.)与20mL DMF的混合液，约15min左右滴加完毕。滴毕，反应混合液逐渐恢复至室温反应约4h后，TLC检测反应原料1c完全消失。反应结束后，向反应体系中加入150mL乙酸乙酯分散反应液，并加入150mL水萃取并分液，水相再用50mL乙酸乙酯反萃一次，合并乙酸乙酯相，并依次用100mL 3％K₂CO₃溶液、100mL 3％H₃PO4溶液、100mL 50％的氯化钠溶液洗涤，收集乙酸乙酯有机相，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至干，烘干后可得白色固体产物——化合物(3c)：2-氟-5-三氟甲基-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺，共18.0g，收率87.8％。

第二步：化合物4c：[(1R)-1-({[(2-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物3c共13.7g(26.75mmol)，搅拌条件下加入70mL甲醇使之溶解，随后加入70mL正庚烷，室温搅拌下加入5.45g异丁基硼酸(53.5mmol,2.0eq.)，搅拌15min后滴加1N HCl溶液40.1mL(40.12mmol,1.5eq.)，约20min左右滴加完毕，滴毕反应混合液在室温条件下剧烈搅拌过夜，TLC检测反应情况至原料3c完全消失。反应结束后，静置反应液，分离两相，甲醇相用50mL×2正庚烷洗涤两次，收集甲醇相，随后将甲醇相浓缩至剩余1/4体积，冰浴条件下，向甲醇相中加入50mL二氯甲烷及50mL水，混合液搅拌条件下用2N NaOH溶液中和至碱性(PH＝10左右)，萃取并分液，水相再用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，收集水相。冰浴条件下，随后再向水相中加入80mL二氯甲烷，并用1NHCl溶液中和至弱酸性(PH＝4左右)，萃取并分液，水相用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，合并二氯甲烷相，二氯甲烷相用100mL 50％的氯化钠溶液洗涤一次后，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后在搅拌条件下向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入60mL正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物——化合物(4c)：[(1R)-1-({[(2-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸，共7.50g，收率74.1％，¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝9.03(s,1H),8.75(s,1H),7.83-7.76(d,J＝4.8,1H),7.87(m,1H),7.79(m,1H),4.05(d,J＝6.4Hz,2H),2.71-2.64(m,1H),1.63(m,1H),1.48(m,2H),0.85(d,J＝6.4,6H).ESI-MS:[C₁₅H₁₉BF₄N₂O₄-H]的计算值377.14，实测值377.14。

第三步：化合物6c：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4c共1.51g(4.0mmol)，搅拌条件下加入20mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入0.84g一水合柠檬酸(化合物5,4.0mmol,1.0eq.)，约反应0.5h后体系中有白色固体产生，随后继续加热条件下反应1h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-三氟甲基-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸6c共1.75g，收率82.0％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.12(s,2H),10.64(s,1H),8.88(m,1H),7.61(m,1H),7.47(m,1H),7.34(m,1H),4.42–4.18(m,2H),2.89(m,1H),2.82–2.51(m,4H),1.68(m,1H),1.24–1.08(m,2H),0.86(d,J＝6.4Hz,6H).ESI-MS:[C₂₁H₂₃BF₄N₂O₉-H]的计算值533.23，实测值532.99；[C₂₁H₂₃BF₄N₂O₉+Na⁺]的计算值557.13，实测值557.03。

制备例20

化合物6r：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-甲基-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

第一步：化合物3r：2-氟-5-甲基-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备：

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入5.28g[(2-氟-5-甲基-苯甲酰基)氨基]乙酸(化合物1r,25.0mmol)，加入29mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，冰浴条件下搅拌10min后加入9.63g TBTU(30.0mmol,1.20eq.)，搅拌15min后加入9.95g(R)-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧杂环戊硼烷-2-基]-3-甲基-1-丁胺-2,2,2-三氟乙酸盐(化合物2,26.25mmol,1.05eq.)，冰浴条件搅拌10min后，滴加10.89mL DIPEA(62.50mmol,2.50eq.)，约15min左右滴加完毕。滴毕，反应混合液逐渐恢复至室温反应约4h后，TLC检测反应原料1r完全消失。反应结束后，向反应体系中加入60mL乙酸乙酯分散反应液，并加入40mL水萃取并分液，水相再用50mL乙酸乙酯反萃一次，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用80mL 3％K₂CO₃溶液、80mL 3％H₃PO₄溶液、80mL 50％的氯化钠溶液洗涤，收集乙酸乙酯有机相，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至干，可得白色固体产物——化合物(3r)：2-氟-5-甲基-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺，不经纯化直接投入下一步反应。

第二步：化合物4f：[(1R)-1-({[(2-氟-5-甲基-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物3r粗品，搅拌条件下加入58mL甲醇使之溶解，随后加入48mL正庚烷，室温搅拌下加入3.82g异丁基硼酸(37.50mmol,1.5eq.)，搅拌15min后滴加1N HCl溶液37.50mL(37.50mmol,1.5eq.)，约15min左右滴加完毕，滴毕反应混合液在室温条件下剧烈搅拌过夜，TLC检测反应情况至原料3r完全消失。反应结束后，静置反应液，分离两相，甲醇相用50mL×2正庚烷洗涤两次，收集甲醇相，随后将甲醇相浓缩至剩余1/4体积，冰浴条件下，向甲醇相中加入50mL二氯甲烷及50mL水，混合液搅拌条件下用2N NaOH溶液中和至碱性(PH＝10左右)，萃取并分液，水相再用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，收集水相。冰浴条件下，随后再向水相中加入80mL二氯甲烷，并用1N HCl溶液中和至弱酸性(PH＝4左右)，萃取并分液，水相用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，合并二氯甲烷相，二氯甲烷相用100mL 50％的氯化钠溶液洗涤一次后，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后在搅拌条件下向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入60mL正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物——化合物(4f)：[(1R)-1-({[(2-氟-5-甲基-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸，共5.95g，收率73.5％。

第三步：化合物6r：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-甲基-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4f共1.62g(5.0mmol)，搅拌条件下加入35mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入1.07g一水合柠檬酸(化合物5,5.10mmol,1.02eq.)，约反应5min后体系中有白色固体产生，随后继续加热条件下反应2h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6r)：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-甲基-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸，共2.15g，收率89.5％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝11.98(s,2H),10.66(s,1H),8.67(dd,J＝9.7,5.3Hz,1H),7.64–7.49(m,1H),7.45–7.30(m,1H),7.19(m,1H),4.27(d,J＝4.4Hz,2H),2.89(d,J＝14.2Hz,1H),2.75(m,1H),2.56(m,3H),2.32(s,3H),1.67(s,1H),1.42–1.04(m,2H),0.85(d,J＝6.4Hz,6H).ESI-MS:[C₂₁H₂₆BFN₂O₉-H]的计算值479.25，实测值479.47；[C₂₁H₂₆BFN₂O₉+Na⁺]的计算值503.24，实测值502.99。

制备例21

化合物6s：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

第一步：化合物3s：2-氟-5-氟-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺的制备：

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入5.38g[(2-氟-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酸(化合物1s,25.0mmol)，加入29mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，冰浴条件下搅拌10min后加入9.63gTBTU(30.0mmol,1.20eq.)，搅拌15min后加入9.95g(R)-1-[(3aS,4S,6S,7aR)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧杂环戊硼烷-2-基]-3-甲基-1-丁胺-2,2,2-三氟乙酸盐(化合物2,26.25mmol,1.05eq.)，冰浴条件搅拌10min后，滴加10.89mL DIPEA(62.50mmol,2.50eq.)，约15min左右滴加完毕。滴毕，反应混合液逐渐恢复至室温反应约4h后，TLC检测反应原料1s完全消失。反应结束后，向反应体系中加入60mL乙酸乙酯分散反应液，并加入40mL水萃取并分液，水相再用50mL乙酸乙酯反萃一次，合并乙酸乙酯相，乙酸乙酯相依次用80mL 3％K₂CO₃溶液、80mL 3％H₃PO₄溶液、80mL 50％的氯化钠溶液洗涤，收集乙酸乙酯有机相，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至干，可得白色固体产物——化合物(3s)：2-氟-5-氟-N-[2-({(1R)-3-甲基-1-[(3aR,4R,6R,7aS)-3a,5,5-三甲基六氢-4,6-桥亚甲基-1,3,2-苯并二氧硼烷-2-基]丁基}氨基)-2-氧代乙基]苯甲酰胺，不经纯化直接投入下一步反应。

第二步：化合物4g：[(1R)-1-({[(2-氟-5-甲基-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸的制备

在250mL圆底烧瓶中，称量并加入上步所得的化合物3s粗品，搅拌条件下加入58mL甲醇使之溶解，随后加入48mL正庚烷，室温搅拌下加入3.82g异丁基硼酸(37.50mmol,1.5eq.)，搅拌15min后滴加1N HCl溶液37.50mL(37.50mmol,1.5eq.)，约15min左右滴加完毕，滴毕反应混合液在室温条件下剧烈搅拌过夜，TLC检测反应情况至原料3s完全消失。反应结束后，静置反应液，分离两相，甲醇相用50mL×2正庚烷洗涤两次，收集甲醇相，随后将甲醇相浓缩至剩余1/4体积，冰浴条件下，向甲醇相中加入50mL二氯甲烷及50mL水，混合液搅拌条件下用2N NaOH溶液中和至碱性(PH＝10左右)，萃取并分液，水相再用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，收集水相。冰浴条件下，随后再向水相中加入80mL二氯甲烷，并用1N HCl溶液中和至弱酸性(PH＝4左右)，萃取并分液，水相用50mL×2二氯甲烷洗涤两次，合并二氯甲烷相，二氯甲烷相用100mL 50％的氯化钠溶液洗涤一次后，并50g无水硫酸钠干燥1h后真空浓缩至剩余极少体积，随后在搅拌条件下向浓缩剩余的二氯甲烷液体中加入60mL正庚烷，体系中即有大量白色固体产生，抽滤，滤饼烘干后可得白色固体产物——化合物(4g)：[(1R)-1-({[(2-氟-5-氟-苯甲酰基)氨基]乙酰基}氨基)-3-甲基丁基]硼酸，共5.48g，收率66.8％。

第三步：化合物6s：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸的制备

在100mL圆底烧瓶中，称量并加入化合物4s共1.64g(5.0mmol)，搅拌条件下加入35mL乙酸乙酯使之溶解，加热至70℃，随后搅拌下加入1.07g一水合柠檬酸(化合物5,5.10mmol,1.02eq.)，约反应10min后体系中有白色固体产生，随后继续加热条件下反应2h后停止加热，反应液冷却至室温，抽滤，白色固体滤饼用15mL×2的乙酸乙酯洗涤两次，真空油泵抽干后，可得白色固体产物(6s)：(R)-2,2’-(2-(1-(2-(2-氟-5-氟-苯甲酰基氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧杂硼烷-4,4-二基)二乙酸，共1.95g，收率80.5％。¹H NMR(400MHz,DMSO)δ＝12.12(s,2H),10.73(s,1H),8.87(d,J＝3.2Hz,1H),7.56(m,1H),7.50–7.23(m,2H),4.30(s,2H),3.02–2.69(m,2H),2.56(m,3H),1.68(m,1H),1.46–1.04(m,2H),0.85(d,J＝5.6Hz,6H).ESI-MS:[C₂₀H₂₃BF₂N₂O₉-H]的计算值483.22，实测值483.50；[C₂₀H₂₃BF₂N₂O₉+Na⁺]的计算值507.22，实测值507.03。

活性实验例1：人多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226人多发性骨髓瘤细胞MM.1S的活性测试实验

将细胞RPMI-8226(人多发性骨髓瘤细胞，其来源于ATCC(美国典型培养物保藏中心)，ATCC CCL-155)和MM.1S(人多发性骨髓瘤细胞，其来源于ATCC(美国典型培养物保藏中心)，ATCC CRL-2974)在37℃、5％CO₂条件下，在含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养至对数生长期。分别将细胞以每孔合适数量接种至96孔培养板中。在37℃、5％CO₂条件下培养24小时后，向细胞中加入溶剂对照DMSO或溶解于DMSO的试验化合物(试验化合物以0.3μM为起始浓度，每次稀释3倍，共稀释5次得到6个浓度梯度)。在37℃、5％CO₂条件下将试验化合物同细胞孵育48小时。向各孔中添加CCK-8试剂，并按照试剂说明书要求在37℃孵育2小时，使用分光光度计在450nm波长下读取各孔的光密度值。

将药物作用0时的细胞光密度值设为Tz值，代表药物加入时细胞的值。溶剂对照DMSO作用48小时的细胞光密度值设为C值；试验化合物作用48小时的细胞光密度值设为Ti值。根据美国NIH–NCI提出的方法计算细胞对药物的响应：当Ti≥Tz时，为[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100；当Ti<Tz时，为[(Ti-Tz)/Tz]×100。根据上述计算，应用XLfit软件中的4Parameter Logistic Model计算GI50值(细胞生长抑制率为50％时所需的试验化合物的浓度)。活性数据如下表1所示：

表1

活性实验例2：MM.1S人源性多发性骨髓瘤细胞的CB17-SCID小鼠移植瘤模型活性试验

本实验所用模型为人源性多发性骨髓瘤细胞系MM.1S的CB17-SCID小鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)移植瘤模型。冻存的MM.1S细胞经复苏后按常规进行体外培养，在对数生长期时收集细胞，用无血清的培养液或PBS稀释成浓度为5×10⁷/ml的肿瘤细胞悬液。用1ml注射器取上述制备好肿瘤细胞悬液，注射于小鼠的左侧腋下靠背侧皮下，每个接种部位注射0.2ml。培养肿瘤细胞注射接种于CB17-SCID小鼠后约1-2周，腋下触及肿瘤，待肿瘤体积大于100mm³以上时，测量并计算肿瘤体积，按照肿瘤体积大小进行随机分组。

不同受试样的给药剂量均为等摩尔剂量，具体剂量为0.00831mmol/kg。

给药方式及频率：口服灌胃给药，给药体积10ml/kg，模型组给予等体积溶媒。每周2次，共给药5次(给药剂量为0.00831mmol/kg，即以MLN9708为4.30mg/kg，化合物6a为4.67mg/kg，化合物6b为4.53mg/kg)，时程为19天。即在第1、4、8、11和15天给药，第19天实验结束。

每天观测小鼠的精神状态、活动、进食等一般情况，每周测两次体重；每周两次用游标卡尺测量各小鼠肿瘤的短径(a)及长径(b)，按(a²×b)/2公式计算肿瘤体积。根据测量计算的肿瘤体积计算出相对肿瘤体积(RTV)，RTV＝V_t/V₀。其中V₀为随机分组(即d₀)时的肿瘤体积，V_t为每一次测量(即d_n)时的肿瘤体积。按下列公式计算抗肿瘤活性评价指标相对肿瘤增殖率：相对肿瘤增殖率T/C(％)：

注：T_RTV：治疗组_RTV；C_RTV：模型对照组RTV。疗效的评价标准T/C％≤40％，并经统计学处理P<0.05为有效。

第19天时称重测量肿瘤后处死各组动物，剖取肿瘤并称重。

根据瘤重计算抑瘤率(TGI)＝((模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重)×100％。

各受试样品对MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型肿瘤情况的影响结果如表2和表3以及图1所示。

表2：蛋白酶体抑制剂抗MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型相对肿瘤增殖率T/C(％)(T/C(％)＝T_RTV/C_RTV，T_RTV为给药组平均的肿瘤相对体积，C_RTVV_d

为同时期模型对照组平均的肿瘤相对体积)

注：^▲：与同期MLN9708组RTV原始数据比较p<0.05，^▲▲：p<0.01

(RTV原始数据指以每一实验动物肿瘤组织体积实测值计算的RTV值)

表3：蛋白酶体抑制剂抗MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型肿瘤重量

及抑瘤率情况

注：^★：与模型组比较p<0.05，^★★：与模型组比较p<0.01

^▲：与6b组比较p<0.05，^▲▲：与6b组比较p<0.01；

以上试验结果表明：在0.00831mmol/kg的低剂量下，化合物6b能显著抑制MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤的肿瘤生长；化合物6b抑制肿瘤生长的作用显著强于MLN9708(p<0.01)和化合物6a(p<0.01)，差异具有显著性。

此外，经相同方法和步骤的CB17-SCID小鼠移植瘤模型活性试验，实验数据表明化合物6b对MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤的肿瘤生长的抑制作用显著强于6c，差异具有统计学显差。

活性实验例3：人多发性骨髓瘤细胞KMS-11的活性测试实验

将细胞KMS-11(人多发性骨髓瘤细胞，其来源于JCRB((Japanese Collection ofResearch Bioresources Cell Bank)，JCRB1179)在37℃、5％CO₂条件下，在含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养至对数生长期。分别将细胞以每孔合适数量接种至96孔培养板中。在37℃、5％CO₂条件下培养24小时后，向细胞中加入溶剂对照DMSO或溶解于DMSO的试验化合物(试验化合物以0.3μM为起始浓度，每次稀释3倍，共稀释5次得到6个浓度梯度)。在37℃、5％CO₂条件下将试验化合物同细胞孵育48小时。向各孔中添加CCK-8试剂，并按照试剂说明书要求在37℃孵育2小时，使用分光光度计在450nm波长下读取各孔的光密度值。

将药物作用0时的细胞光密度值设为Tz值，代表药物加入时细胞的值。溶剂对照DMSO作用48小时的细胞光密度值设为C值；试验化合物作用48小时的细胞光密度值设为Ti值。根据美国NIH–NCI提出的方法计算细胞对药物的响应：当Ti≥Tz时，为[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100；当Ti<Tz时，为[(Ti-Tz)/Tz]×100。根据上述计算，应用XLfit软件中的4Parameter Logistic Model计算GI50值(细胞生长抑制率为50％时所需的试验化合物的浓度)。活性数据如下表4所示：

表4

活性实验例4：MM.1S人源性多发性骨髓瘤细胞的CB17-SCID小鼠移植瘤模型活性试验

本试验所用模型为人源性多发性骨髓瘤细胞系MM.1S的CB17-SCID小鼠移植瘤模型。冻存的MM.1S细胞经复苏后按常规进行体外培养，在对数生长期时收集细胞，用无血清的培养液或PBS稀释成浓度为5×10⁷/ml的肿瘤细胞悬液。用1ml注射器取上述制备好肿瘤细胞悬液，注射于小鼠的左侧腋下靠背侧皮下，每个接种部位注射0.2ml。培养肿瘤细胞注射接种于CB17-SCID小鼠后约1-2周，腋下触及肿瘤，待肿瘤体积大于100mm³以上时，测量并计算肿瘤体积，按照肿瘤体积大小进行随机分组。

不同受试样的给药剂量均为等摩尔剂量，具体剂量为0.00554mmol/kg。

同一动物实验模型曾使用0.00831mmol/kg的给药剂量，本试验进一步以低剂量测试各化合物活性。MLN9708(即

)在临床使用中，部分因药物副反应而需要根据说明书降低给药剂量、或停止给药。高效价的化合物可以更低剂量给药，有助于提高耐受性、降低副反应。

给药方式及频率：口服灌胃给药，给药体积10ml/kg，模型组给予等体积溶媒。每周2次，共给药5次，给药剂量为0.00554mmol/kg，即以MLN9708为2.86mg/kg，化合物6q为2.77mg/kg，化合物6f为2.80mg/kg，化合物6b为3.02mg/kg，时程为17天。即在第1、5、8、12和15天给药，第17天实验结束。

每天观测小鼠的精神、活动、进食等一般情况，每周测两次体重；每周两次用游标卡尺测量各小鼠肿瘤的短径(a)及长径(b)，按(a²×b)/2公式计算肿瘤体积。根据测量计算的肿瘤体积计算出相对肿瘤体积(RTV)，RTV＝V_t/V₀。其中V₀为随机分组(即d₀)时的肿瘤体积，V_t为每一次测量(即d_n)时的肿瘤体积。按下列公式计算抗肿瘤活性评价指标相对肿瘤增殖率：相对肿瘤增殖率T/C(％)：

注：T_RTV：治疗组_RTV；C_RTV：模型对照组RTV。根据中国国家药品管理监督局发布的《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》中疗效的评价标准T/C％≤40％，并经统计学处理P<0.05为有效。

第19天时称重测量肿瘤后处死各组动物，剖取肿瘤并称重。

根据瘤重计算抑瘤率(TGI)＝((模型组平均瘤重-给药组平均瘤重)/模型组平均瘤重)×100％。

各受试样品对MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型肿瘤情况的影响结果如表5和表6以及图2所示。

表5：蛋白酶体抑制剂抗MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型相对肿瘤增殖率T/C(％)(T/C(％)＝T_RTV/C_RTV，T_RTV为给药组平均的肿瘤相对体积，C_RTV为同时期模型对照组平均的肿瘤相对体积)

注：^▲：与同期MLN9708组RTV原始数据比较p<0.05，^▲▲：p<0.01；

^●：与同期6b组RTV原始数据比较p<0.05，^●●：p<0.01；

RTV原始数据指以每一实验动物肿瘤组织体积实测值计算的RTV值

表6：蛋白酶体抑制剂抗MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型肿瘤重量

及抑瘤率情况

注：^★：与模型组比较p<0.05，^★★：与模型组比较p<0.01

^▲：与MLN9708组比较p<0.05，^▲▲：与MLN9708组比较p<0.01；

^●：与6b组比较p<0.05，^●●：与6b组比较p<0.01。

以上试验结果表明：在0.00554mmol/kg的低剂量下，化合物6b能显著抑制MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤的肿瘤生长；MLN9708在此剂量下未见抑制肿瘤生长的作用，化合物6b抑制肿瘤生长的作用显著强于MLN9708(p<0.01)，差异具有显著性。

在0.00554mmol/kg的低剂量下，化合物6f和6q也能显著抑制肿瘤生长，但抑制作用较化合物6b弱。

同时，就药物抑制肿瘤生长的起效时间而言，早期、快速抑制肿瘤生长，可有效减缓肿瘤组织对正常机体的各种损伤，有助于提高生存率。实验数据显示，在给药第5天，6b给药组的相对肿瘤增殖率为18％，而6f和6q给药组的相对肿瘤增殖率均在60％以上；第12天，6b给药组的相对肿瘤增殖率仅为9.04％，6f给药组为31.17％，而6q给药组为67.42％。实验数据表明，化合物6b抑制肿瘤生长起效最快，抑制活性最强；化合物6f实现控制肿瘤生长的起效时间比6b长，抑制活性比6b弱。尽管在最后第17天，6q给药组的相对肿瘤增殖率降为29.00％，但其有效控制肿瘤生产的起效时间长于6f，也显著长于6b。

此外，依据国家药品管理监督局《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》中疗效的评价标准T/C％≤40％(且经统计学处理P<0.05为有效)考察，化合物6b达到该标准的时间为实验第5天，早于6f的第12天(差异具有显著性)，也显著早于6q的第17天(差异具有显著性)。

另一方面，根据图2所示的MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤模型肿瘤体积测量图，以肿瘤体积vs.时间曲线的曲线下面积从小到大对对化合物6b、6f和6q排序，依次为化合物6b＜6f＜6q，该曲线下面积反映了在整个实验期间的肿瘤体积大小情况。

综上所述，各受试样对MM.1S人多发性骨髓瘤SCID鼠移植瘤肿瘤生长的抑制作用，由强到弱排序为：6b＞6f＞6q＞MLN9708。

Claims (22)

1.式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐

式(I)中，R1、R2取代基为对位的非对称取代基，R1和R2均选自卤素；且当R₁为F时，R₂不为Cl；当R₁为Cl时，R₂不为Br或F，当R₁为Br时，R₂不为Cl；

X₁、X₂选自羟基，或X₁、X₂共同形成一个取代或未取代的4-10元的环，该4-10元的环含有1-4个任选自O、N、S的杂原子。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐，其特征在于，所述X₁、X₂与硼原子共同形成一个取代或未取代的5-6元的环，该5-6元的环含有1-2个O原子，或者含有1-2个N原子。

3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐，其特征在于，所述X₁、X₂与硼原子共同形成的5-6元的环的结构如下所示：

其中，当n＝1时，R₃、R₄、R₅为任选自氢原子、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的C₃-C₈环烷基，取代或未取代的C₁-C₆烷氧基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的C₁-C₆烷基-COOH和-COOH；

或者，当n＝1时，R₃、R₄共同形成一个饱和或不饱和的5-6元的环，所述饱和或不饱和的5-6元的环任选自：苯环、含0-2个不饱和烯键的环已基、含0-2个不饱和烯键的环戊基；

当n＝0时，R₃为不存在，R₄、R₅为任选自氢原子、取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的C₃-C₈环烷基，取代或未取代的C₁-C₆烷氧基、取代或未取代的C₁-C₆烷基-COOH、-CH₂-COOH、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苯基。

4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐，其特征在于，当R₁为Br时，R₂为F或I；当R₁为F时，R₂为Br或I。

5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐，其特征在于，R₁为F，R₂为Br；

其中，n＝1，R₃为氢原子，R₄和R₅任选自COOH、-CH₂-COOH、苯基和苄基；优选的，R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅择一的选自苯基和氢原子；进一步优选的，R₄和R₅择一的选自-CH₂-COOH和-COOH；

或者n＝1，R₃和R₄共同形成一个6元环，所述6元环任选为被取代或未被取代，所述为6元环任选自：苯环或含0-2个不饱和烯键的环已基，R₅为不存在；所述的6元环，优选为苯环；

或者n＝0，R₄和R₅任选自H、-COOH、-CH₂-COOH、苯基或苄基；优选的，R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅任选自苯基、氢原子；进一步优选的，R₄和R₅均为-CH₂-COOH，或者R₄和R₅为择一的选自苯基、氢原子，且与苯基相连的5元环上的碳原子为S构型。

6.如权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐，其中

n＝1，所述环的结构为

所述R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅择一的选自苯基和氢原子；

或者n＝1，R₃和R₄共同形成一个6元环，所述6元环的结构为

或者n＝0，所述环的结构为

所述R₄和R₅任选自-COOH和-CH₂-COOH，或者R₄和R₅任选自苯基、氢原子。

7.式(I’)的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐

当R₁为F时，R₂为Br；当R₁为Br时，R₂为F；

X₁和X₂为OH；或者

X₁和X₂与其连接的硼原子共同形成环状结构，所述环状结构为

其中

R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈和R₉各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基、COOH、C₁-C₆烷基-COOH、OH或卤素，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烯基、C₁-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

8.如权利要求7所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中当R₁为F时，R₂为Br。

9.如权利要求7所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中所述环状结构为

其中R₃和R₄各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

10.如权利要求7所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，

其中所述环状结构为

其中

R₅和R₆各自独立地为氢、C₁-C₆烷基或C₁-C₆烷氧基；

R₇和R₈各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；

所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、3-7元杂环烷基、苯基、苄基、5-10元杂芳基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

11.如权利要求10所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中所述R₅和R₆为H，所述R₇和R₈各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基、3-7元杂环烷基、C5-C10芳基和5-10元杂芳基的基团取代。

12.如权利要求7所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中所述环状结构为

所述R₉为氢、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH，所述C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₈环烷基和C₁-C₆烷基-COOH任选地被选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、氨基、氰基、酰基、羧基、C₁-C₆烷基-COOH、羟基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷氧基、羰基的基团取代。

13.如权利要求7所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中

所述环状结构为

所述R₃和R₄各自独立地为氢、C₁-C₆烷基、苯基、苄基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；优选地，所述R₃和R₄各自独立地为氢、苯基、COOH或C_1-3烷基-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₅和R₆各自独立地为氢或C₁-C₆烷基；所述R₇和R₈各自独立地为氢、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；优选地，所述R₅和R₆均为H，所述R₇和R₈各自独立地为COOH或C_1-3烷基-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₉为氢、C₁-C₆烷基、COOH或C₁-C₆烷基-COOH；优选地，所述R₉为氢、C₁-C₃烷基、COOH或C₁-C₃烷基-COOH。

14.如权利要求书8所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中

所述环状结构为

所述R₃和R₄各自独立地为氢、苯基、COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₅和R₆为氢；所述R₇和R₈各自独立地为COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₉为氢。

15.如权利要求书7所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物、前药或硼酸酐，其中当R₁为F时，R₂为Br，

所述环状结构为

所述R₃和R₄各自独立地为氢、苯基、COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₅和R₆为氢；所述R₇和R₈各自独立地为氢、COOH或CH₂-COOH；或者

所述环状结构为

所述R₉为氢。

16.化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，选自以下结构：

17.化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，选自以下结构

18.药物制剂，含有权利要求1-6中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者权利要求7-17中任一项所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，以及药学上可接受的辅料。

19.药物组合物，含有权利要求1-6中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者权利要求7-17中任一项所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，以及其他至少一种以上的预防和治疗肿瘤的药物。

20.权利要求1-6中的任一项所述的化合物或其盐、溶剂化物、络合物或硼酸酐或者权利要求7-17中任一项所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药或者权利要求18所述的药物制剂或者权利要求19所述的药物组合物在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的用途；所述肿瘤优选为：浆细胞瘤、套细胞瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、肝癌、宫颈癌、肺癌、淋巴瘤、白血病、卵巢癌、肾癌、胃癌、鼻咽癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌、腺癌、口腔癌、食道癌、鳞状细胞癌和结肠癌。

21.权利要求1-6中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者权利要求7-17中任一项所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药或者权利要求18所述的药物制剂或者权利要求19所述的药物组合物在制备蛋白酶体抑制剂中的用途。

22.权利要求1-6中的任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂合物、络合物或硼酸酐或者权利要求7-17中任一项所述的化合物或其立体异构体、对映异构体或互变异构体或其混合物，或其药物可接受的盐、溶剂化物或前药或者权利要求18所述的药物制剂或者权利要求19所述的药物组合物在抑制蛋白酶体中的用途。

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