CN110898086B - 黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食用菌有效成分提取及制剂的制备，尤其涉及一种黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂及其制备方法和用途。复合抗病毒制剂，以重量百分比计，所述制剂包括10％‑70％的醇提物和30％‑90％的水提物，所述醇提物为黑虎掌菌子实体的醇提物，所述水提物为黑虎掌菌子实体的醇提后滤渣的水提物。通过实验验证发现，本发明的制剂副作用低，对单纯疱疹病毒和肠道病毒具有良好的抑制效果，且无耐药性现象。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌有效成分提取及抗病毒制剂的制备，尤其涉及一种黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂及其制备方法和用途。
背景技术
病毒是引起感染性疾病的主要元凶，危害性极大、影响面甚广。在科学高速发展的今天，仍是发达国家和许多发展中国家面临的最大困惑之一。近年来，由于病毒的肆意蔓延，抗病毒类药物发展较快，已成为抗感染药物中举足轻重的品种，而具有高度选择性、作用于细胞病毒代谢，对宿主无明显损害的药物仍是目前研究的重点。20世纪90年代以来，在组合化学、高通量筛选技术的推动下，对病毒学和分子生物学理论的研究中，人们对病毒的复制环节、发病机理、抗病毒作用靶点有了进一步的认识，从而使抗病毒药物快速地发展。由于病毒变异的速度远远高于新药的研制速度，并且容易对人工合成的化学药物产生抗药性，因此在药物市场中，天然药物异军突起，在提高免疫和抑制病毒方面发挥了重要作用。但是，由于天然药物的成分难以获得并且效果不显著等缺陷而阻碍了天然药物的发展。
黑虎掌菌(Sarcodon aspratus)在历史上被视为菌中之珍品，是历代向王朝纳贡的贡品之一，主要出产于云南楚雄彝族自治州和丽江纳西自治县。其含有丰富的蛋白质、多糖类物质、挥发油、氨基酸、矿物质、微量元素和维生素等营养成分，具有丰富的营养价值和经济价值。在我国医学中，黑虎掌菌还有一定的药理作用，该菌性平味甘，有追风散寒、舒筋活血、降低血液中胆固醇和防癌保健等功效，有利于人体的强壮和病体康复，具有很高的食用和药用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种辅助治疗单纯疱疹病毒和肠道病毒感染的复合抗病毒制剂，以黑虎掌子实体为原料，采用多种提取技术制得并且复配得到。
本发明通过以下方案达到上述目的：
第一方面，提供一种黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂，以重量百分比计，所述制剂包括10％-70％的醇提物和30％-90％的水提物，所述醇提物为黑虎掌菌子实体的醇提物，所述水提物为黑虎掌菌子实体的醇提后滤渣的水提物。
第二方面，提供一种抗病毒制剂的制备方法，包括：
(1)、将黑虎掌菌子实体在20℃以下的低温中脱水粉碎；
(2)、加入2-10倍体积浸提1-3次，每次1-4小时，并使用超声波震荡，速活性物质溶解，抽滤后合并滤液，将滤液浓缩干燥得到醇提物；
(3)、将醇提后的滤渣加入5-30倍水超声提取1-4次，每次1-4小时，过滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥得到水提物；
(4)、将水提物粉末、醇提物按30％-90％：10％-70％的重量比例混合得到抗病毒制剂。
在上述制备方法中，水提物和醇提物配合比例以及分别的提取时间对于提高提取率、缩短提取时间、增强活性物质保留等方面的效果具有显著影响。
第三方面，提供一种上述制备方法制备得到的复合抗病毒制剂。
第四方面，提供一种上述复合抗病毒制剂的用途，所述用途包括用于治疗单纯疱疹病毒引起的疾病和/或肠道病毒引起的疾病。
第五方面，提供一种上述复合抗病毒制剂的用途，所述用途包括用于制备治疗单纯疱疹病毒引起的疾病和/或肠道病毒引起的疾病的药物。
本发明的制备过程控制在低温的条件下进行，有效预防活性成分的分解和失活，本发明方法根据醇与水之间的相溶性，增加了提取率，缩短了总的提取时间，进一步保持食用菌中活性物质的原始结构状态，以维持其天然药理作用，使其活性成份得到充分释放。
通过实验验证发现，本发明的制剂副作用低，对单纯疱疹病毒和肠道病毒具有良好的抑制效果，且无耐药性现象。
具体实施方式
第一方面，提供一种黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂，以重量百分比计，所述制剂包括10％-70％的醇提物和30％-90％的水提物，所述醇提物为黑虎掌菌子实体的醇提物，所述水提物为黑虎掌菌子实体的醇提后滤渣的水提物。
通过将醇提物与水提物以特定比例进行混合，使得其效果与单独的两种提取物相比具有更好和更广谱的抗病毒效果。
优选的，所述黑虎掌菌子实体的醇提物通过以下方法制备得到：将黑虎掌菌子实体在20℃以下低温中脱水粉碎，加入2-10倍体积的醇类物质浸提1-3次，每次1-4小时，并使用超声波震荡，速活性物质溶解，抽滤后合并滤液，将滤液浓缩干燥得到醇提物。
优选的，所述醇类物质为乙醇，例如90％的乙醇。
优选的，所述干燥为冷冻干燥。
优选的，所述黑虎掌菌子实体的水提物通过以下方法制备得到：将醇提后的滤渣加入5-30倍水超声提取1-4次，每次1-4小时，过滤后合并滤液，将滤液浓缩干燥得到水提物。
优选的，所述水为20℃-25℃水。
所述干燥为冷冻干燥。
第二方面，提供一种抗病毒制剂的制备方法，包括：
(1)、将黑虎掌菌子实体在20℃以下的低温中脱水粉碎；
(2)、加入2-10倍体积浸提1-3次，每次1-4小时，并使用超声波震荡，速活性物质溶解，抽滤后合并滤液，将滤液浓缩干燥得到醇提物；
(3)、将醇提后的滤渣加入5-30倍水超声提取1-4次，每次1-4小时，过滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥得到水提物；
(4)、将水提物粉末、醇提物按30％-90％：10％-70％的重量比例混合得到抗病毒制剂。
优选的，所述醇类物质为乙醇，例如90％的乙醇。
优选的，所述步骤(2)的干燥为冷冻干燥。
优选的，所述步骤(3)加入的水为20℃-25℃水。
优选的，所述步骤(3)的干燥为冷冻干燥。
第三方面，提供一种上述制备方法制备得到的复合抗病毒制剂。
第四方面，提供一种上述复合抗病毒制剂的用途，所述用途包括用于治疗单纯疱疹病毒引起的疾病和/或肠道病毒引起的疾病。
其中，单纯疱疹病毒引起的疾病包括但不限于：龈口炎、角膜结膜炎、脑炎等。
其中，肠道病毒引起的疾病包括但不限于：手足口病、脑干脑炎等。
第五方面，提供一种上述复合抗病毒制剂的用途，所述用途包括用于制备治疗单纯疱疹病毒引起的疾病和/或肠道病毒引起的疾病的药物。
其中，单纯疱疹病毒引起的疾病包括但不限于：龈口炎、角膜结膜炎、脑炎等。
其中，肠道病毒引起的疾病包括但不限于：手足口病、脑干脑炎等。
本发明通过病毒感染细胞实验对制剂进行抗病毒功效检验。
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
将黑虎掌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎，加入8倍体积90％的乙醇浸提3次，每次3小时，并使用超声波震荡，速活性物质溶解，抽滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥成粉末得到醇提物。将醇提后的滤渣加入10倍20℃水超声提取3次，每次2小时，过滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥成粉末得到水提物。最后将水提物粉末、醇提物的粉末混合得到复合抗病毒制剂，其中水提物重量百分比例为85％，醇提物的重量百分比例为15％。
实施例2
将黑虎掌子实体在20℃以下的低温中进行脱水粉碎，加入6倍体积90％的乙醇浸提3次，每次3小时，并使用超声波震荡，速活性物质溶解，抽滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥成粉末得到醇提物。将醇提后的滤渣加入15倍20℃水超声提取3次，每次2小时，过滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥成粉末得到水提物。最后将水提物粉末、醇提物的粉末混合得到复合抗病毒制剂，其中水提物的重量比例为80％，醇提物的重量比例为20％。
试验例1
1、细胞和病毒处理
(1)培养中瓶vero细胞至90％以上(一般细胞数量约1*107个)，以4*105/孔的细胞浓度接种至24孔板，每孔终体积1mL的完全培养基。
(2)37℃、5％CO2培养过夜至单层细胞铺满底板95％以上。
(3)用病毒维持液做10倍系列梯度稀释病毒液，即100μL病毒液加入到900μL维持液，混匀后吸取100μL到下一个梯度，依此类推，一般稀释到10-7即可。
(4)将实施例1制备的抗病毒复合制剂梯度稀释成500μg/mL、100μg/mL、20μg/mL、4μg/mL、0.8μg/mL、0.16μg/mL六个浓度，和100TCID50病毒共同培养细胞，以显微镜观察为主，结合MTT法测定细胞活性。
2、抑制单纯疱疹病毒结果
对于单纯疱疹病毒(HSV-1)进行测定并计算抑制率、CC50、EC50、TI等，结果如表1和表2所示。
表1：
表2：
其中，CC50表示对半数细胞产生毒性作用所需浓度。
其中，EC50表示药物安全性指标，表示引起50％个体有效的药物浓度。
其中，TI表示：治疗指数，药物的安全性指标，通常将半数致死量(LD50)与半数有效量(ED50)的比值称为治疗指数。
从表1和表2的结果可以看出：本发明对HSV-1的CC50为10316μg/mL，半有效浓度EC50为406μg/mL，治疗指数(TI)为25.4，提示本发明的复合抗病毒制剂对于治疗单纯疱疹病毒引起的疾病具有较好的开发前景。
3、抑制肠道病毒(PTPS、CSFI4)结果
对于肠道病毒(PTPS、CSFI4)进行测定并计算抑制率、CC50、EC50、TI等，结果如表3和表4所示。
表3：
表4：
表3和表4的结果表明：本发明对肠道病毒(PTPS)的CC50为10316μg/mL，半有效浓度EC50为108μg/mL，治疗指数(TI)为95；对肠道病毒(CSFI4)的CC50为10316μg/mL，半有效浓度EC50为92μg/mL，治疗指数(TI)为112。这提示本发明的抗病毒制剂对于肠道病毒引起的疾病具有较好的开发前景。
比较例1
将实施例1制备的抗病毒复合制剂与实施例1中制备的醇提物、水提物采用上述试验例1的方法进行HSV-1、PTPS、CSFI4的EC50检测，结果如表5所示。
表5不同样品EC50对比
从表5可以看出，与单纯的水提物和醇提物相比，混合物制剂对于单纯疱疹病毒(HSV-1)、肠道病毒(PTPS、CSFI4)半有效浓度值适宜，并且具有更加广谱的抗病毒效果。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (1)
1.一种黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂在制备抑制PTPS、CSFI4肠道病毒药物中的用途，其特征在于，所述黑虎掌提取物的复合抗病毒制剂通过以下方法制备得到：将黑虎掌子实体在20℃以下的温度中进行脱水粉碎，加入8倍体积90%的乙醇浸提3次，每次3小时，并使用超声波震荡，速活性物质溶解，抽滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥成粉末得到醇提物，将醇提后的滤渣加入10倍20℃水超声提取3次，每次2小时，过滤后合并滤液，将滤液浓缩冷冻干燥成粉末得到水提物，最后将水提物粉末、醇提物的粉末混合得到复合抗病毒制剂，其中水提物的重量百分比例为85%，醇提物的重量百分比例为15%。
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