CN107412254B - 金线莲多糖提取物的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药领域，尤其涉及金线莲多糖提取物的应用，金线莲多糖提取物用于制备抗疲劳的药物，所述的金线莲多糖提取物具有显著的抗疲劳作用，能显著延长小鼠负重游泳时间，降低游泳后血清乳酸脱氢酶水平，降低血清尿素氮含量，提高小鼠在应激状态下的抗氧化能力，提高肝糖原和肌糖原含量。

Description

金线莲多糖提取物的应用
技术领域
本发明涉及一种金线莲多糖提取物的应用，具体地说是金线莲多糖提取物在制备抗疲劳药物中的应用，属于医药领域。
背景技术
疲劳是普遍存在的生理现象之一，随着社会节奏的加快，长期的工作紧张，竞争压力大以及情绪不稳定都容易导致疲劳的发生。疲劳虽是机体常见的生理状态，但疲劳引起的运动能力下降、工作效率降低、中枢与外周神经灵敏度变化是不能忽视的。所以针对疲劳的预防与恢复一直是当今研究的热点。
目前市场上用于抗疲劳的化学药物如苯丙胺类、莫达非尼、咖啡因等在延缓疲劳和消除疲劳方面具有一定的效果，但是长期服用，具有一定的成瘾性和依赖性，因此限制了其临床应用。因此，从天然植物资源中，尤其是药食两用植物中提取安全、有效、不含对人体有害成分的抗疲劳成分已成为近年来抗疲劳药物的研究热点。
近些年来，中药在抗疲劳方面以其毒副作用低，效果明显等优势受到国内外学者的广泛重视。金线莲Anoectochilus Herba是兰科开唇兰属植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.的新鲜或干燥全草。具有清热解毒、凉血、祛风利湿等功效，用于肾炎、膀胱炎、糖尿病、风湿性关节炎、小儿急惊风以及毒蛇咬伤等病症。金线莲的主要活性成分有黄酮类、内酯苷类、多糖类等成分，其多糖具有降血糖、抗氧化、保肝等多方面的药理作用。但是，关于金线莲中多糖类成分的抗疲劳活性还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种金线莲多糖提取物的应用，满足人们对抗疲劳药物的需要，所要解决的技术问题是确立金线莲多糖抗疲劳的药理作用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的技术方案是金线莲多糖提取物的制备，并通过小鼠抗疲劳作用的药理实验，以确立金线莲多糖提取物的抗疲劳的作用。
本发明所称的金线莲多糖提取物在制备抗疲劳药物中的应用。
所述的纯化是金线莲药材原料脱脂后，再经过水提取、醇沉淀得到粗多糖，粗多糖经过透析、离子交换层析脱去蛋白、色素，除去小分子化学成分，制成较高纯度的金线莲多糖。本发明金线莲多糖提取物中多糖的含量以葡萄糖计，所述多糖的含量占金线莲多糖提取物重量百分比80％以上。
具体方法为：所述的金线莲多糖提取物制备方法包括如下：取金线莲粉末，用12倍重量75%-95%的乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，将乙醇提取金线莲后的药渣，采用10-12倍重量水加热提取3次，每次1.5小时，合并提取液，将提取液浓缩，浓缩液与原药材的体积质量比为1～4：1，加入95%的乙醇至含醇量为80％，静置12h，收集沉淀，将沉淀经2-5次醇洗后，再将沉淀物干燥，即得金线莲粗多糖提取物；将金线莲粗多糖提取物用水溶解，上清液用截留相对分子量为3500以上的透析袋透析48h，透析液再通过阳离子交换树脂，用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，收集水洗脱液，将水洗脱液减压浓缩、真空干燥，即得金线莲多糖提取物。
本发明的优点在于：
本纯化的金线莲多糖提取物提取物经药效学实验表明能显著延长小鼠负重游泳时间，降低小鼠游泳后血清尿素氮含量，降低血清乳酸脱氢酶水平，提高小鼠在应激状态下的抗氧化能力，提高肝糖原和肌糖原含量，具有明显的抗疲劳作用。
具体实施方式
实施例1
（一）金线莲多糖提取物的制备
取金线莲粉末，用12倍重量85%的乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，将乙醇提取金线莲后的药渣，采用水为溶剂，加热提取3次，每次1.5小时，合并提取液，将提取液浓缩，浓缩液与原药材的体积质量比为2:1，加入95%的乙醇至含醇量为80％进行沉淀，静置12h，收集沉淀，将沉淀经5次乙醇洗涤后，再将沉淀物干燥，即得金线莲粗多糖提取物。将金线莲粗多糖提取物用水溶解，上清液用截留相对分子量为3500以上的透析袋透析48h，透析液再通过阳离子交换树脂，用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，收集水洗脱液，将水洗脱液减压浓缩、真空干燥，即得金线莲多糖提取物。采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖为标准品进行测定，金线莲多糖提取物中多糖含量在80%以上。
（二）金线莲多糖的抗疲劳实验
1.试验动物及分组
SPF级健康ICR小鼠32只，雄性，18-22g，随机分为4组，每组8只，连续给药7天，具体给药方式如下：空白対照组连续灌胃7天生理盐水；阳性对照组连续灌胃7天红参提取物(200mg/kg)；金线莲多糖提取物低剂量组和金线莲多糖提取物高剂量组，连续灌胃7天金线莲多糖水溶液，剂量分别为200mg/kg/d和400mg/kg/d。
2.负重游泳实验及力竭游泳时间的测定
末次给药1h后，各组小鼠分别进行负重游泳力竭实验。在小鼠尾根部各负荷其体重10％的铅丝作为重物，放入玻璃缸内，水深35cm，水温(25±0.5)℃，保证小鼠在水中不能用尾巴接触箱底。当小鼠头部沉入水中，10 s内不能浮出水面的时间，此时间即为小鼠力竭游泳时间。
3. 检测指标
3.1小鼠血清血清尿素氮（BUN）、乳酸脱氢酶（LDH）和谷胱甘肽（GSH）的测定
小鼠负重游泳至力竭，休息15 min之后，摘眼球取血，用南京建成试剂盒测定小鼠血清尿BUN、LDH、GSH含量。
3.2小鼠肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肝糖原和肌肉组织肌糖原的测定
处死小鼠后迅速取出肝脏和腓肠肌，制备肝组织匀浆，按试剂盒说明书测定肝脏SOD、MDA、肝糖原含量；按照肌糖原测定试剂盒的要求对腓肠肌进行处理，测定肌糖原的含量。
3.3统计分析
数据采用SPSS软件处理，不同组间各指标的差异采用单因素方差分析，结果以
Figure DEST_PATH_IMAGE001
表示。
4.实验结果
4.1对小鼠力竭游泳时间的影响
由表1可知，与空白对照组比较，金线莲多糖提取物低剂量组、金线莲多糖提取物高剂量组小鼠的负重游泳力竭时间均延长，显著高于空白对照组（p<0.01）。
表1 金线莲多糖提取物对小鼠力竭游泳时间的影响（n=8，
Figure 991925DEST_PATH_IMAGE001
）
Figure 864066DEST_PATH_IMAGE002
注：*p<0.05，**p<0.01，与空白对照组比较
4.2对小鼠血清BUN、LDH和GSH的影响
由表2可知，与空白对照组比较，金线莲多糖提取物高剂量组的小鼠血清BUN含量显著减低（p<0.05）；与空白对照组比较，金线莲多糖提取物低剂量组、金线莲多糖提取物高剂量组的小鼠血清LDH含量显著减低（p<0.01）；与空白对照组比较，金线莲多糖提取物低剂量组、金线莲多糖提取物高剂量组GSH含量显著升高（p<0.01，p<0.05）。
表2 金线莲多糖提取物对小鼠血清BUN、LDH和GSH的影响（n=8，
Figure 247643DEST_PATH_IMAGE001
）
Figure 657764DEST_PATH_IMAGE003
注：*p<0.05，**p<0.01，与空白对照组比较
4.3对小鼠血清肝组织SOD和MDA的影响
由表3可知，与空白对照组比较，金线莲多糖提取物高剂量组能显著提高小鼠肝组织SOD含量（p<0.01），与空白对照组比较，金线莲多糖提取物低剂量组、金线莲多糖提取物高剂量组的小鼠血清MDA含量显著减低（p<0.01）。
表3 金线莲多糖提取物对小鼠肝组织SOD、MDA的影响（n=8，
Figure 598038DEST_PATH_IMAGE001
）
Figure 980478DEST_PATH_IMAGE004
注：*p<0.05，**p<0.01，与空白对照组比较
4.4对小鼠肝糖原和肌糖原的影响
由表4可知，与空白对照组比较，金线莲多糖提取物低剂量组、金线莲多糖提取物高剂量组均能显著提高小鼠肝糖原和肌糖原的含量（p<0.01）。
表4 金线莲多糖提取物对小鼠肌糖原的影响（n=8，
Figure 549605DEST_PATH_IMAGE001
）
Figure 712602DEST_PATH_IMAGE005
注：*p<0.05，**p<0.01，与空白对照组比较。
5.结论
综上所述，本发明金线莲多糖提取物能显著提高小鼠负重游泳时间，降低小鼠血清中的BUN和LDH含量，提高血清中GSH含量，提高肝组织中SOD含量，降低肝组织中MDA水平，增加肝糖原和肌糖原含量，由此表明，本发明中金线莲多糖提取物具有明显的抗疲劳作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (2)

1.金线莲多糖提取物在制备抗疲劳药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的金线莲多糖提取物制备方法包括如下：取金线莲粉末，用12倍重量75%-95%的乙醇加热回流提取3次，每次1.5小时，将乙醇提取金线莲后的药渣，采用10-12倍重量水加热提取3次，每次1.5小时，合并提取液，将提取液浓缩，浓缩液与原药材的体积质量比为1～4：1，加入95%的乙醇至含醇量为80％，静置12h，收集沉淀，将沉淀经2-5次醇洗后，再将沉淀物干燥，即得金线莲粗多糖提取物；将金线莲粗多糖提取物用水溶解，上清液用截留相对分子量为3500以上的透析袋透析48h，透析液再通过阳离子交换树脂，用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，收集水洗脱液，将水洗脱液减压浓缩、真空干燥，即得金线莲多糖提取物。
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