CN109303794B - 一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，所述提取的步骤包括：富硒堇叶碎米荠地上部分茎叶干品经粉碎，加清水浸提，过滤得滤渣和滤液。滤渣在相同条件下再次提取，过滤得滤渣和滤液。将两次提取的滤液合并，浓缩得浓缩液。向浓缩液中加入乙醇，醇沉静置过夜。将醇沉后的液相和固相过滤分离。固相溶于水，加入乙醇，醇沉静置过夜。醇沉后的液相和固相过滤分离，固相烘干即得目标产物。采用两步醇沉法，所得富硒堇叶碎米荠提取物中总硒含量达2800mg/kg以上，其中有机硒含量达97％以上。进一步的，本发明还提供了上述富硒堇叶碎米荠提取物在肝脏保护方面的应用，疗效显著，可用于开发系列功能食品，应用范围广泛。

Description

一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用。
背景技术
聚硒植物堇叶碎米荠是十字花科碎米荠属多年生植物，主要分布在高山地带，其嫩茎、叶都可食用，味道鲜嫩可口，是一种优良的野菜资源。近年来，在恩施典型富硒区域，发现了具有很高硒含量的天然堇叶碎米荠植株，硒含量可达到数百个ppm。
硒是人体必需的微量元素，长期以一直被认为是重要的食物来源的抗氧化剂，在国际医药界和营养学界被誉为“生命之火”、“抗癌之王”、“心脏的守护神”。硒的生理作用有很多，归纳起来有十种：提高人体免疫机能、防癌抗癌、防治心脑血管疾病、保护肝脏、抗氧化及延缓衰老、参与糖尿病治疗就、保护及修复细胞、保护眼睛、提高红细胞携氧能力、解毒、防毒、抗污染。
硒对人体的作用最初是从证实硒对肝脏有很强的保护作用而发现的。人体肝是一个硒库，肝脏中硒浓度显著高于其它组织器官。硒是营养性肝坏死的主要保护因子。肝病越严重，血硒含量越低。硒能防治肝炎、预防脂肪肝等。科技人员大量调查显示，酒精肝病、肝炎、肝硬化、肝腹水等肝损伤患者体内的硒比正常人明显偏低。适量补硒能有效防治乙肝。硒是嗜酒者的保护神，适量补硒可以起到加速酒精分解代谢，进而保护肝脏。
据统计，我国72％的地区处于缺硒和低硒状态。我国13省份普查显示，人均每日硒摄入量仅为36μg，低于世界卫生组织推荐的50μg标准，更低于中国营养学会建议的成年人每日补充60—250μg的量。
亚硒酸钠是一种典型的补硒保健品，但由于其成分单一，护肝效果有限，并且其功效剂量和毒性剂量之间范围较窄，有一定的安全隐患。市面上的富硒植物和富硒酵母中主要是安全性高的有机硒成分，但单一的组分对于全面调理人体健康，保护肝脏方面的作用有限。
随着我国进入老龄化社会，我国广大居民对健康的需求日益增长，开发功效独特、安全、纯天然的富硒制品，大力开发硒资源、利用硒资源、发展硒产业，具有广阔的市场前景，必将产生巨大的经济效益和社会效益。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用，以富硒堇叶碎米荠为原料，提取富有机硒产物，并将其用于肝脏保护。
本发明第一方面提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，所述提取的步骤包括：
S1、将堇叶碎米荠地上部分茎叶干品粉碎，加入8-15倍量清水，搅拌，加热至 60～80℃浸提2～3小时，过滤得滤液和滤渣；
S2、向步骤S1所得滤渣中加入8-15倍量水，加热至60～80℃浸提2～3小时，过滤得滤液和滤渣；
S3、将步骤S1和S2所得滤液合并，浓缩得浓缩液；
S4、向步骤S3所得浓缩液中加入乙醇使乙醇体积百分比达75～85％，醇沉静置 20～30h，过滤得固相、液相；
S5、将步骤S4所得固相加至水中，再加入乙醇使乙醇体积百分比达80～85％，醇沉静置20～30h，过滤得固相、液相；
S6、将步骤S5所得固相烘干，得富硒堇叶碎米荠提取物。
本发明第二方面提供了上述富硒堇叶碎米荠提取物在肝脏保护中的应用。
本发明的有益效果是：
(1)以天然富硒堇叶碎米荠为原料，采用两步醇沉法，制备富硒堇叶碎米荠提取物，提取工艺简单、高效，所得富硒堇叶碎米荠提取物中总硒含量达2800 mg/kg以上，其中有机硒含量达97％以上。
(2)以富集并转化于富硒堇叶碎米荠全株中的有机硒为核心，将其应用于肝脏保护方面，疗效显著，可用于开发系列功能食品，应用范围广泛。
附图说明
图1为正常对照处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况图；
图2为CCl4处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况图；
图3为亚硒酸钠处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况图；
图4为富硒堇叶碎米荠提取物高剂量处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况图；
图5为富硒堇叶碎米荠提取物中剂量处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况图；
图6为富硒堇叶碎米荠提取物低剂量处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况图。
具体实施方式
本发明第一方面提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，所述提取的步骤包括：
S1、将堇叶碎米荠地上部分茎叶干品粉碎，加入8-15倍量清水，搅拌，加热至 60～80℃浸提2～3小时，过滤得滤液和滤渣；
S2、向步骤S1所得滤渣中加入8-15倍量水，加热至60～80℃浸提2～3小时，过滤得滤液和滤渣；
S3、将步骤S1和S2所得滤液合并，浓缩得浓缩液；
S4、向步骤S3所得浓缩液中加入乙醇使乙醇体积百分比达75～85％，醇沉静置 20～30h，过滤得固相、液相；
S5、将步骤S4所得固相加至水中，再加入乙醇使乙醇体积百分比达80～85％，醇沉静置20～30h，过滤得固相、液相；
S6、将步骤S5所得固相烘干，得富硒堇叶碎米荠提取物。
采用两步醇沉法对富硒堇叶碎米荠进行提取，高效富集堇叶碎米荠中硒元素，有机硒含量达97％以上，提取工艺简单、高效。在特定条件下水提两次，有效浸提目标产物，在此基础上进一步通过醇沉的方式使目标产物有效分离出来，实现目标产物的高效富集。
优选的，步骤S1所述粉碎为粉碎得到8-20目粗粉；所述过滤采用400目纱布过滤2～3次。
优选的，步骤S3所述浓缩在70～80℃下进行。
优选的，步骤S4、S5所述加入乙醇为加入体积百分比95％的乙醇。
优选的，步骤S6所述烘干的温度为60～70℃。
优选的，所述富硒堇叶碎米荠提取物中总硒含量2800～2900mg/kg，其中有机硒含量占总硒含量98～98.5％。
本发明第二方面提供了上述富硒堇叶碎米荠提取物在肝脏保护中的应用。
优选的，将富硒堇叶碎米荠提取物用于制备保护肝脏的药物、保健品、食品。
下面将结合具体实施例对本发明提供的一种富硒堇叶碎米荠提取物及其在肝脏保护方面的应用予以进一步说明。
实施例1
本实施例提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，本实施例所用新鲜的富硒堇叶碎米荠植株采自中科院地化所-恩施州农科院-德源联合种植试验基地。所述提取的步骤包括：
(1)富硒堇叶碎米荠地上部分茎叶干品经粉碎，得约10目左右粗粉，取适量粗粉，加入到提取罐中，加10倍量清水，搅拌1-2分钟，开始加热，在75℃下浸提2.5小时，期间适时搅拌。2小时后用400目纱布过滤，过滤2-3次，得到水提滤渣和滤液。
(2)将步骤(1)中的滤渣在相同条件下再次提取2.5小时，过滤，得到滤渣和滤液。
(3)将两次提取的滤液合并，75℃以下浓缩，得浓缩液。
(4)向浓缩液中加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到80度，醇沉静置过夜。
(5)将步骤(4)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(6)将步骤(5)中的固相溶于水，加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到80度，醇沉静置过夜。
(7)将步骤(6)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(8)将步骤(7)中固相至于65℃下烘干，即得目标产物。
提取产物检测结果如下：
表1实施例一富硒堇叶碎米荠提取物检测结果
检测指标 检测值
总硒(mg/kg) 2872
有机硒(mg/kg) 2823
有机硒比例(％) 98.2
实施例二
本实施例提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，本实施例所用新鲜的富硒堇叶碎米荠植株采自中科院地化所-恩施州农科院-德源联合种植试验基地。所述提取的步骤包括：
(1)富硒堇叶碎米荠地上部分茎叶干品经粉碎，得约20目左右粗粉，取适量粗粉，加入到提取罐中，加8倍量清水，搅拌1-2分钟，开始加热，在70℃下浸提3小时，期间适时搅拌。2小时后用400目纱布过滤，过滤3次，得到水提滤渣和滤液。
(2)将步骤(1)中的滤渣在相同条件下再次提取3小时，过滤，得到滤渣和滤液。
(3)将两次提取的滤液合并，70℃下浓缩，得浓缩液。
(4)向浓缩液中加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到85度，即乙醇的体积百分比达到85％，醇沉静置过夜，静置时长24h。
(5)将步骤(4)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(6)将步骤(5)中的固相溶于水，加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到 80度，即乙醇的体积百分比达到80％，醇沉静置过夜，静置时长24h。
(7)将步骤(6)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(8)将步骤(7)中固相至于70℃下烘干，即得目标产物。
提取产物检测结果如下：
表2实施例二富硒堇叶碎米荠提取物检测结果
检测指标 检测值
总硒(mg/kg) 2848
有机硒(mg/kg) 2791
有机硒比例(％) 98.0
实施例三
本实施例提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，本实施例所用新鲜的富硒堇叶碎米荠植株中科院地化所-恩施州农科院- 德源联合种植试验基地。所述提取的步骤包括：
(1)富硒堇叶碎米荠地上部分茎叶干品经粉碎，得约8目左右粗粉，取适量粗粉，加入到提取罐中，加12倍量清水，搅拌1-2分钟，开始加热，在80℃下浸提2小时，期间适时搅拌。2小时后用400目纱布过滤，过滤2次，得到水提滤渣和滤液。
(2)将步骤(1)中的滤渣在相同条件下再次提取2小时，过滤，得到滤渣和滤液。
(3)将两次提取的滤液合并，80℃下浓缩，得浓缩液。
(4)向浓缩液中加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到75度，即乙醇的体积百分比达到75％，醇沉静置过夜，静置时长20h。
(5)将步骤(4)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(6)将步骤(5)中的固相溶于水，加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到 80度，即乙醇的体积百分比达到80％，醇沉静置过夜，静置时长20h。
(7)将步骤(6)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(8)将步骤(7)中固相至于60℃下烘干，即得目标产物。
提取产物检测结果如下：
表3实施例三富硒堇叶碎米荠提取物检测结果
检测指标 检测值
总硒(mg/kg) 2831
有机硒(mg/kg) 2788
有机硒比例(％) 98.5
实施例四
本实施例提供了一种富硒堇叶碎米荠提取物，其从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，本实施例所用新鲜的富硒堇叶碎米荠植株中科院地化所-恩施州农科院- 德源联合种植试验基地。所述提取的步骤包括：
(1)富硒堇叶碎米荠地上部分茎叶干品经粉碎，得约8目左右粗粉，取适量粗粉，加入到提取罐中，加15倍量清水，搅拌1-2分钟，开始加热，在60℃下浸提2小时，期间适时搅拌。2小时后用400目纱布过滤，过滤2次，得到水提滤渣和滤液。
(2)将步骤(1)中的滤渣在相同条件下再次提取2小时，过滤，得到滤渣和滤液。
(3)将两次提取的滤液合并，80℃下浓缩，得浓缩液。
(4)向浓缩液中加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到75度，即乙醇的体积百分比达到75％，醇沉静置过夜，静置时长20h。
(5)将步骤(4)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(6)将步骤(5)中的固相溶于水，加入95％乙醇适量，使乙醇度数达到 80度，即乙醇的体积百分比达到80％，醇沉静置过夜，静置时长20h。
(7)将步骤(6)中醇沉后的液相和固相过滤分离。
(8)将步骤(7)中固相至于60℃下烘干，即得目标产物。
提取产物检测结果如下：
表4实施例四富硒堇叶碎米荠提取物检测结果
Figure BDA0001361840370000071
Figure BDA0001361840370000081
实施例五
本实施例提供了富硒堇叶碎米荠提取物在保护肝脏方面的应用，按照实施例一的提取方法所得富硒提取物对小鼠进行测试，进行富硒组合物对CCl4造成的小鼠肝损伤的保护试验，具体步骤包括：
(a)实验动物
ICR小鼠，雄性，18-22g，共60只。上海灵畅生物科技有限公司，许可证号：SCXK(沪)2013-0018
(b)动物分组，按体重随机分组，每组10只。
一共分六组，分别是：
空白(溶剂)对照
CCL4急性肝损伤模型组
富硒堇叶碎米荠提取物低剂量：60μg硒/kg
富硒堇叶碎米荠提取物中剂量：180μg硒/kg
富硒堇叶碎米荠提取物高剂量：540μg硒/kg
亚硒酸钠180μg硒/kg。
(c)样品配制：称取富硒堇叶碎米荠提取物和亚硒酸钠，分别用适量的生理盐水溶解，制成不同浓度的样品。
(d)给药方案：
给各处理组灌胃小鼠0.1ml/10g,每天一次，空白对照组和CCL4急性肝损伤模型组灌胃同等体积的生理盐水，共15天。
(e)建立急性肝损伤模型，检测相关指标：
于末次给药后2h，除正常对照组外其余各组分别一次性腹腔注射0.3％的CCl4 的橄榄油溶液10ml/kg，诱导急性化学性肝损伤。空白对照组腹腔注射同体积的橄榄油，禁食不禁水。
24小时后，将小鼠摘眼球取血，静置至血液分层后离心取血清检测AST， ALT。处死小鼠取肝脏，检测肝脏GPx酶活性和MDA含量，做肝脏病理切片， HE染色后观察肝脏组织病变情况。结果如表5、表6、附图1所示。
表5：富硒堇叶碎米荠提取物对CCl4肝损伤模型小鼠血清AST，ALT的影响
Figure BDA0001361840370000091
注：“**”表示P<0.01,“*”表示P<0.05
由表5可见，与CCl4模型对照组相比，富硒堇叶碎米荠提取物组低、中、高剂量组对血清AST，ALT的升高都有一定的抑制作用，并且有剂量依赖性作用。与CCl4组相比,低剂量组的结果具有显著性差异(P<0.05)，中高剂量组有极显著的差异(P<0.01)。另一对照样品亚硒酸钠的含硒量和富硒堇叶碎米荠提取物中剂量组相同，与CCl4模型对照组相比，亚硒酸钠组小鼠血清中AST有显著的降低(P<0.05)，但小鼠血清中ALT没有明显的下降(P>0.05)。
表6：富硒堇叶碎米荠提取物对CCl4肝损伤模型小鼠肝脏SOD、GSH-Px活性和MDA生成的影响
Figure BDA0001361840370000092
注：“**”表示P<0.01,“*”表示P<0.05
由表6可见，CCl4损伤后的小鼠肝脏SOD酶活性明显低于正常值，与CCl4模型对照组相比，富硒堇叶碎米荠提取物的低、中、高剂量和亚硒酸钠对肝脏 SOD酶活性都有明显的提高，各组结果与模型对照相比都具有显著性差异 (P<0.01)。
与CCl4模型对照组相比，富硒堇叶碎米荠提取物的中、高剂量对肝脏含硒抗氧化酶GPx的活性都有显著的提高(P<0.01)，并且其效果具有剂量依赖性，而亚硒酸钠对小鼠肝脏GPx的活性没有明显的提高作用。
MDA是肝脏细胞脂质过氧化标志性产物之一，CCl4造成小鼠肝脏MDA含量高于正常值，而富硒堇叶碎米荠提取物的中、高剂量组明显减少小鼠肝脏MDA 的产生(P<0.01)，此效应可能是由于富硒堇叶碎米荠提取物提高了肝脏抗氧化酶的活性从而降低过氧化产物MDA的水平，亚硒酸钠对此指标没有明显的影响。
因此富硒堇叶碎米荠提取物在提高肝脏抗氧化酶SOD和GPx活性，以及减少脂质过氧化损伤产生的MDA方面，整体效果优于亚硒酸钠。
附图1～6为各处理组小鼠肝脏发生细胞灶性坏死和炎症细胞浸润的情况，图中显微镜下放大倍数为200倍。由图1～6可见，与正常对照组的肝脏组织相比， CCl4肝损伤模型组小鼠的肝组织出现明显的灶性肝细胞坏死，大量炎性细胞浸润其中。亚硒酸钠预治疗的小鼠肝脏的细胞坏死和炎性细胞浸润情况有轻微的改善。富硒堇叶碎米荠提取物低、中和高剂量组小鼠肝脏组织中出现的小灶性肝细胞坏死范围均显著缩小，低剂量组炎性细胞浸润情况有所减轻，中、高剂量组观察不到明显的炎性细胞浸润。结果表明富硒堇叶碎米荠提取物对CCl4引起的急性肝细胞损伤和急性炎症有明显的预防作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种富硒堇叶碎米荠提取物在制备治疗肝损伤药物中的应用，其特征在于：所述提取物从堇叶碎米荠地上部分茎叶中提取，所述提取的步骤包括：
S1、将堇叶碎米荠地上部分茎叶干品粉碎，加入8-15倍量水，搅拌，加热至60～80℃浸提2～3小时，过滤得滤液和滤渣；
S2、向步骤S1所得滤渣中加入8-15倍量水，加热至60～80℃浸提2～3小时，过滤得滤液和滤渣；
S3、将步骤S1和S2所得滤液合并，浓缩得浓缩液；
S4、向步骤S3所得浓缩液中加入乙醇使乙醇体积百分比达75～85％，醇沉静置20～30h，过滤得固相、液相；
S5、将步骤S4所得固相加至水中，再加入乙醇使乙醇体积百分比达80～85％，醇沉静置20～30h，过滤得固相、液相；
S6、将步骤S5所得固相烘干，得富硒堇叶碎米荠提取物；
所述富硒堇叶碎米荠提取物中总硒含量2800～2900mg/kg，其中有机硒含量占总硒含量98～98.5％。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤S1所述粉碎为粉碎得到8-20目粗粉；所述过滤采用400目纱布过滤2～3次。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤S3所述浓缩在70～80℃下进行。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤S4、S5所述加入乙醇为加入体积百分比95％的乙醇。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：步骤S6所述烘干的温度为60～70℃。
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