CN110891576A - 使用包含parp抑制剂、替莫唑胺和/或放射疗法的组合治疗癌症 - Google Patents

Abstract

本文公开了用于在受试者中预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者给予PARP抑制剂，具体地(R)‑2‑氟‑10a‑甲基‑7,8,9,10,10a,11‑六氢‑5,6,7a,11‑四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴‑4(5H)‑酮、其倍半水合物或其药学上可接受的盐与替莫唑胺和/或放射疗法的组合。另外，公开了药物组合及其用途，该药物组合包含PARP抑制剂，具体地(R)‑2‑氟‑10a‑甲基‑7,8,9,10,10a,11‑六氢‑5,6,7a,11‑四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴‑4(5H)‑酮、其倍半水合物或其药学上可接受的盐与替莫唑胺的组合。

Description

使用包含PARP抑制剂、替莫唑胺和/或放射疗法的组合治疗 癌症

相关申请

本申请要求于2017年7月17日提交的国际专利申请号PCT/CN2017/093192的权益，将该申请的公开内容出于所有目的通过引用以其整体特此并入。

技术领域

本文公开了用于在受试者中预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的PARP抑制剂与治疗有效量的替莫唑胺和/或放射疗法的组合。

发明背景

癌症的标志和驱动力之一是遗传不稳定性[Hanahan D和Weinberg R A,Hallmarks of cancer:the next generation.Cell,2011.144(5):第646-74页.]。特别是在家族性癌症中，乳腺癌易感性BRCA1和BRCA2肿瘤抑制基因(同源重组(HR)的关键参与者)的突变与患乳腺癌或卵巢癌的风险增加相关[Li X和Heyer W D,Homologousrecombination in DNA repair and DNA damage tolerance.Cell Res,2008.18(1):第99-113页.]。正是在此患者群体中，聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制剂最近受到关注。PARP家族成员PARP1和PARP2在DNA复制、转录调控和DNA损伤修复中发挥重要作用[RouleauM,Patel A,Hendzel M J等人,PARP inhibition:PARP1 and beyond.Nat Rev Cancer,2010.10(4):第293-301页.]。在2005年，两篇突破性的Nature论文显示，单独给予的PARP抑制剂可以杀死具有预先存在的DNA修复缺陷(特别是BRCA1/2基因突变)的癌细胞[Bryant HE,Schultz N,Thomas H D等人,Specific killing of BRCA2-deficient tumours withinhibitors of poly(ADP-ribose)polymerase.Nature,2005.434(7035):第913-7页；Farmer H,McCabe N,Lord C J等人,Targeting the DNA repair defect in BRCA mutantcells as a therapeutic strategy.Nature,2005.434(7035):第917-21页]。

PARP抑制和突变型BRCA在临床前模型中是合成致死的，表明这是一种简洁、有靶向性且最低毒性的治疗患者的方式。

神经胶质瘤的最具侵袭性的亚型胶质母细胞瘤(GB或GBM)具有一系列致癌突变。这些突变与对化学疗法和放射疗法(RT)的抗性相关。大量的这些遗传改变影响脱氧核糖核酸(DNA)修复途径中的关键参与者。

GB中影响DNA修复途径的高频率遗传改变表明，DNA损伤剂或干扰DNA修复的药剂可能能够为GB患者提供临床益处。这一假设得到了GB患者的当前护理标准的支持，但尚未对其他类别的药物(诸如聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的抑制剂)进行充分探究。

GB是成人中最常见的原发性恶性脑肿瘤，在美国(US)每年诊断出大约10,000例，尽管进行了积极的治疗，预后仍然不佳[CBTRUS统计报告：在2004-2008年美国诊断出的原发性脑和中枢神经系统肿瘤(CBTRUS statistical report:primary brain and centralnervous system tumors diagnosed in the United States in 2004-2008).http://www.cbtrusorg.2012[2012年更新；2014年8月14日引用]。由于GB的浸润性，单独的手术从未治愈。因此，大多数患者随后用RT治疗，伴有或不伴有化学疗法。在2005年，Stupp和同事发表了一项具有里程碑意义的研究，该研究通过向手术和RT中加入烷基化剂替莫唑胺(TMZ)展示出2.5个月的总生存期(OS)益处[Stupp R,Mason WP,van den Bent MJ,WellerM,Fisher B,Taphoorn MJ等人Radiotherapy plus concomitant and adjuvanttemozolomide for glioblastoma.N Engl J Med.2005；352(10):987-96]。这项大型试验的结果确立了TMZ以及最大程度安全切除和RT对于新诊断的<65岁的GB患者的治疗的作用。表明MGMT蛋白的失活赋予对TMZ的敏感性[Esteller M,Garcia-Foncillas J,Andion E,Goodman SN,Hidalgo OF,Vanaclocha V等人Inactivation of the DNA-repair geneMGMT and the clinical response of gliomas to alkylating agents.N Engl JMed.2000；343(19):1350-4.；Hegi ME,Diserens AC,Godard S,Dietrich PY,Regli L,Ostermann S等人Clinical trial substantiates the predictive value of O-6-methylguanine-DNA methyltransferase promoter methylation in glioblastomapatients treated with temozolomide.Clin Cancer Res.2004；10(6):1871-4.]以及TMZ在复发性神经胶质瘤中的功效[Yung WK,Albright RE,Olson J,Fredericks R,Fink K,Prados MD等人A phase II study of temozolomide vs.procarbazine in patientswith glioblastoma multiforme at first relapse.Br J Cancer.2000；83(5):588-93.]的初步证据充当这个大型、随机化、3期试验的支持数据。亚组分析确认，与具有足够MGMT表达(由未甲基化MGMT启动子定义)的那些相比，针对MGMT缺陷型肿瘤(由MGMT启动子甲基化定义)的生存期和对TMZ的敏感性得到改善[Hegi ME,Diserens AC,Gorlia T,Hamou MF,deTribolet N,Weller M等人MGMT gene silencing and benefit from temozolomide inglioblastoma.N Engl J Med.2005；352(10):997-1003.]。然而，关于TMZ的掺入是否应仅基于MGMT甲基化状态仍然存在重大的区域性争议[Newlands ES,Stevens MF,Wedge SR,Wheelhouse RT,Brock C.Temozolomide:a review of its discovery,chemicalproperties,pre-clinical development and clinical trials.Cancer TreatRev.1997；23(1):35-61.；Stupp R,Gander M,Leyvraz S,Newlands E.Current andfuture developments in the use of temozolomide for the treatment of braintumours.Lancet Oncol.2001；2(9):552-60.]。

很少细胞毒性药物在GB中展示出功效，并且这被认为至少部分地是由于血脑屏障阻止了向这些肿瘤的充分递送。

TMZ和其他烷基化剂(包括亚硝基脲类卡莫司汀(carmustine)和洛莫司汀(lomustine))通常用于新诊断GB和复发性GB的细胞毒性化学疗法。它们通过在O⁶位甲基化鸟嘌呤来诱导细胞凋亡和细胞死亡，引发DNA中的DSB和细胞周期停滞。MGMT蛋白从鸟嘌呤的O⁶位去除损伤性烷基并修复DNA。然后烷基化蛋白降解，需要DNA修复的不断补充才能有效。

MGMT在癌细胞(包括神经胶质瘤细胞)中的高表达解释了对烷基化剂的抗性的主要机制。与此发现一致，缺乏MGMT蛋白与对DNA损伤剂(如替莫唑胺或XRT)的敏感性增加相关。已经确定GB中MGMT蛋白的缺失几乎完全是由在下文中称为“MGMT甲基化”或“甲基化GB”的MGMT基因启动子的甲基化引起的[Hegi ME,Diserens AC,Gorlia T,Hamou MF,deTribolet N,Weller M等人MGMT gene silencing and benefit from temozolomide inglioblastoma.N Engl J Med.2005；352(10):997-1003.]。

相反，与具有甲基化MGMT启动子或较低水平的MGMT蛋白的患者相比，在其肿瘤中具有未甲基化MGMT启动子或较高水平的MGMT蛋白的患者不太可能响应于烷基化剂，导致更短的生存期(表1)。

已知每次反应后MGMT失活(即自杀酶)。因此，如果DNA烷基化的速率超过MGMT蛋白合成的速率，理论上该酶可以被耗尽。若干研究显示，长期暴露于TMZ可以耗尽血细胞中的MGMT活性，这是一个可能会增加药物的抗肿瘤活性的方法[Brandes AA,Tosoni A,CavalloG,Bertorelle R,Gioia V,Franceschi E,Biscuola M,Blatt V,CrinòL,Ermani M,GICNO:Temozolomide 3weeks on and 1week off as first-line therapy for recurrentglioblastoma:phase II study from gruppo italiano cooperativo di neuro-oncologia(GICNO).Br J Cancer 95:1155-1160,2006.；Gilbert MR,Wang M,Aldape KD,Stupp R,Hegi ME,Jaeckle KA等人Dose-dense temozolomide for newly diagnosedglioblastoma:a randomized phase III clinical trial.J Clin Oncol.2013年11月10日；31(32):4085-91.；Strik HM,Buhk JH,Wrede A,Hoffmann AL,Bock HC,Christmann M,Kaina B.:Rechallenge with temozolomide with different scheduling is effectivein recurrent malignant gliomas.Mol Med Report 1:863-867,2008.；Tolcher AW,Gerson SL,Denis L,Geyer C,Hammond LA,Patnaik A,Goetz AD,Schwartz G,Edwards T,Reyderman L,Statkevich P,Cutler DL,Rowinsky EK.:Marked inactivation of O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase activity with protracted temozolomideschedules.Br J Cancer 88:1004-1011,2003.]。对TMZ的这种抗性仍然是有效治疗胶质母细胞瘤的关键障碍。

尽管用于检测MGMT甲基化的诊断方法存在差异，但研究一致证实甲基化GB患者的结果改善而不论治疗如何，显示出用TMZ的附加益处，并表明MGMT甲基化既是预后性的又是预测性的(表1)。

表1新诊断胶质母细胞瘤中的O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)状态和临床益处

来源：综述：Chen等人Eur J Neurol 2013[Chen C,Xu T,Lu Y,Chen J,Wu S.Theefficacy of temozolomide for recurrent glioblastoma multiforme.Eur JNeurol.2013年2月；20(2):223-30.]；

Stupp：Stupp等人N Engl J Med.2005[Stupp R,Mason WP,van den Bent MJ,Weller M,Fisher B,Taphoorn MJ等人Radiotherapy plus concomitant and adjuvanttemozolomide for glioblastoma.N Engl J Med.2005；352(10):987-96.]；

NOA-08：Wick等人Lancet Oncol 2012[Wick W,Platten M,Meisner C,FelsbergJ,Tabatabai G,Simon M等人Temozolomide chemotherapy alone versus radiotherapyalone for malignant astrocytoma in the elderly:the NOA-08randomised,phase3trial.Lancet Oncol.2012年7月；13(7):707-15.]；

Nordic：

等人Lancet Oncol 2012[

A,

BH,Marosi C,Stupp R,Frappaz D,Schultz H等人Temozolomide versus standard6-weekradiotherapy versus hypofractionated radiotherapy in patients olderthan60years with glioblastoma:the Nordic randomised,phase 3trial.LancetOncol.2012年9月；13(9):916-26.]；

ANOCEF：Gállego Pérez-Larraya等人J Clin Oncol 2011[Gállego Pérez-Larraya J,Ducray F,Chinot O,Catry-Thomas I,Taillandier L,Guillamo JS等人Temozolomide in elderly patients with newly diagnosed glioblastoma and poorperformance status:an ANOCEF phase II trial.J Clin Oncol.2011年8月1日；29(22):3050-5.]；

Brandes：Brandes等人Cancer.2009[Brandes AA,Franceschi E,Tosoni A,Benevento F,Scopece L,Mazzocchi V等人Temozolomide concomitant and adjuvant toradiotherapy in elderly patients with glioblastoma:correlation with MGMTpromoter methylation status.Cancer.2009年8月1日；115(15):3512-8]；

GGN：Weller等人J Clin Oncol 2009[Weller M,Felsberg J,Hartmann C,BergerH,Steinbach JP,Schramm J等人Molecular predictors of progression-free andoverall survival in patients with newly diagnosed glioblastoma:a prospectivetranslational study of the German Glioma Network.J Clin Oncol.2009年12月1日；27(34):5743-50.]。

EFS＝无事件生存期；mMGMT＝甲基化O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子；OS＝总生存期；PFS＝无进展生存期；uMGMT＝未甲基化O⁶-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶启动子

在努力检查其肿瘤中具有未甲基化MGMT启动子或较高水平的MGMT蛋白、被认为不太可能响应于烷基化剂的新诊断胶质母细胞瘤患者时，已经进行了试验以支持省去TMZ疗法。多项欧洲主导的试验已经使用单独的RT而不是伴有化学疗法的RT作为替代TMZ的新靶标试验中的比较组[Herrlinger U,Schaefer N,Steinbach JP,Weyerbrock A,Hau P,Goldbrunner R等人Survival and quality of life in the randomized,multicenterGLARIUS trial investigating bevacizumab/irinotecan versus standardtemozolomide in newly diagnosed,MGMT-non-methylated glioblastoma patients.JClin Oncol.2014；32增刊5:2042.；Wick W,Gorlia T,van den Bent MJ,Vecht CJ,SteuveJ,Brandes AA等人Radiation therapy and concurrent plus adjuvant temsirolimus(CCI-779)versus chemo-irradiation with temozolomide in newly diagnosedglioblastoma without methylation of the MGMT gene promoter.J Clin Oncol.2014；32增刊5:2003.；Wick W,Steinbach JP,Platten M,Hartmann C,Wenz F,von Deimling A等人Enzastaurin before and concomitant with radiation therapy,followed byenzastaurin maintenance therapy,in patients with newly diagnosed glioblastomawithout MGMT promoter hypermethylation.Neuro Oncol.2013；15(10):1405-12]。GLARIUS试验(一项在新诊断未甲基化GB中的伊立替康、贝伐单抗和RT相对于TMZ和RT的随机化2期研究)发现，相对于标准组的5.9个月，实验组的9.7个月的中位无进展生存期(mPFS)显著延长[Herrlinger U,Schaefer N,Steinbach JP,Weyerbrock A,Hau P,Goldbrunner R等人Survival and quality of life in the randomized,multicenterGLARIUS trial investigating bevacizumab/irinotecan versus standardtemozolomide in newly diagnosed,MGMT-non-methylated glioblastoma patients.JClin Oncol.2014；32增刊5:2042.]。尽管在此研究中观察到mPFS益处，但两组之间的中位总生存期(mOS)是可比较的(实验组的16.6个月相比于TMZ组的17.3个月)。这表明在新诊断未甲基化患者中省去TMZ是合理的，而不会对患者的生存产生不利影响[Herrlinger U,Schaefer N,Steinbach JP,Weyerbrock A,Hau P,Goldbrunner R等人Survival andquality of life in the randomized,multicenter GLARIUS trial investigatingbevacizumab/irinotecan versus standard temozolomide in newly diagnosed,MGMT-non-methylated glioblastoma patients.J Clin Oncol.2014；32增刊5:2042.]。

在复发情况下，MGMT甲基化状态尚未指导治疗。初步数据表明，长期暴露于TMZ可抑制MGMT活性，因此使得细胞比标准的5天方案(28天周期中的第1至5天)更易感[Hegi ME,Diserens AC,Gorlia T,Hamou MF,de Tribolet N,Weller M等人MGMT gene silencingand benefit from temozolomide in glioblastoma.N Engl J Med.2005；352(10):997-1003.]。这一假设导致了对剂量密集方案的一系列研究，以防止MGMT恢复并改善对TMZ的敏感性，并将未甲基化GB患者的结果向甲基化GB患者迁移[Perry JR,Bélanger K,Mason WP,Fulton D,Kavan P,Easaw J等人Phase II trial of continuous dose-intensetemozolomide in recurrent malignant glioma:RESCUE study.J Clin Oncol.2010年4月20日；28(12):2051-7.；Weller M,Cloughesy T,Perry JR,Wick W.Standards of carefor treatment of recurrent glioblastoma--are we there yet？Neuro Oncol.2013年1月；15(1):4-27.；Weller M,Tabatabai G,Reifenberger G等人Dose-intensifiedrechallenge with temozolomide:one week on/one week off versus 3weeks on/oneweek off in patients with progressive or recurrent glioblastoma.J ClinOncol.2010；28(增刊15)Abstract TPS154.]。在新诊断GB患者的辅助治疗(adjuvantsetting)(RTOG 0525)中对剂量密集TMZ(21天给药和7天停药，以100mg/m²)的大型、随机化试验解决了标准替莫唑胺时间安排和替代性给药功效的相互矛盾的数据。不管MGMT启动子甲基化状态如何，在剂量密集TMZ下均未看到mPFS或mOS的改善[Gilbert MR,Wang M,Aldape KD,Stupp R,Hegi ME,Jaeckle KA等人Dose-dense temozolomide for newlydiagnosed glioblastoma:a randomized phase III clinical trial.J ClinOncol.2013年11月10日；31(32):4085-91.]。除了复发时剂量密集TMZ的结果[Wick W,Platten M,Weller M.New(alternative)temozolomide regimens for the treatment ofglioma.Neuro Oncol.2009年2月；11(1):69-79.]，这些发现表明通过单独增强剂量不能使未甲基化肿瘤对TMZ“敏感”。

如表1所总结，GB具有影响DNA修复途径的遗传改变的高发生率，这提高了PARP抑制剂可能能够有助于GB患者的临床益处的可能性。尽管这一假设尚未在临床中得到充分探究，但一种这样的改变(PTEN丢失)的非临床数据支持PARP抑制与除BRCA1/2之外的其他途径的合成致死性概念。在GB中经常观察到包含PTEN基因的染色体10的缺失[Endersby R,Baker SJ.PTEN signaling in brain:neuropathology andtumorigenesis.Oncogene.2008年9月18日；27(41):5416-30.；Li L,Ross AH.Why is PTENan important tumor suppressor？J Cell Biochem.2007年12月15日；102(6):1368-74.,34]并且估计该缺失在约三分之一GB中发生[Smith JS,Tachibana I,Passe SM,HuntleyBK,Borell TJ,Iturria N,O'Fallon JR等人PTEN Mutation,EGFR Amplification,andOutcome in Patients With Anaplastic Astrocytoma and Glioblastoma Multiforme.JNatl Cancer Inst.2001；93(16):1246-1256]。PTEN是一种脂质磷酸酶，具有抑制PI3K/Akt信号传导的作用，并且PTEN丢失导致PI3K/Akt通路超激活。然而，PTEN也在维持基因组稳定性中发挥作用，如使用小鼠胚胎PTEN-/-细胞所证明的。此表型与重要的HR组分RAD51表达的调控缺陷有关[Shen WH,Balajee AS,Wang J,Wu H,Eng C,Pandolfi PP等人Essentialrole for nuclear PTEN in maintaining chromosomal integrity.Cell.2007年1月12日；128(1):157-70.]。PTEN丢失和PARP抑制的合成致死性得到了PARP抑制剂维利帕尼(veliparib)在降低PTEN-/-人GB细胞系存活方面非常有效的数据的支持，而具有完整PTEN基因的星形胶质细胞对维利帕尼不太敏感。PTEN缺陷型星形胶质细胞和GB细胞对作用机制与TMZ非常相似的甲基化剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)也更敏感[McEllin B,Camacho CV,Mukherjee B,Hahm B,Tomimatsu N,Bachoo RM等人PTEN loss compromiseshomologous recombination repair in astrocytes:implications for glioblastomatherapy with temozolomide or poly(ADP-ribose)polymerase inhibitors.CancerRes.2010年7月1日；70(13):5457-64.]。这些数据表明，具有DNA修复途径缺陷的GB可能对PARP抑制敏感，特别是当与DNA损伤剂组合时。

PARP-1和PARP-2在对由TMZ产生的N-甲基嘌呤(N7-甲基鸟嘌呤和N3-甲基腺嘌呤)的碱基切除修复(BER)中起关键作用。在存在功能性BER系统的情况下，这些受损的碱基被迅速修复并限制TMZ细胞毒性。BER过程的第一步是通过N-甲基嘌呤糖基化酶(MPG)切除修饰碱基，产生随后被脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶裂解的脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点。最终通过PARP-1、DNA聚合酶，XRCC1和连接酶III的协调干预修复所得的DNA切口。抑制PARP活性阻碍PARP-1和PARP-2的PAR化，从而中断BER介导的修复过程的完成[Kim YJ,Wilson DM3rd.Overview of base excision repair biochemistry.Curr Mol Pharmacol.2012年1月；5(1):3-13.]。将PARP抑制与损伤DNA的TMZ组合使得DNA损伤增加，这导致细胞凋亡和/或生长停滞。使用TMZ和PARP抑制剂的重复治疗还下调肿瘤细胞中BER组分的转录并延缓其恢复[Tentori,L.；Turriziani,M.；Franco,D.；Serafino,A.；Levati,L.；Roy,R.；Bonmassar,E.；Graziani,G.Treatment with temozolomide and poly(ADP-ribose)polymerase inhibitors induces early apoptosis and increases base excisionrepair gene transcripts in leukemic cells resistant to triazenecompounds.Leukemia 1999,13,901-909.；Tentori,L.；Portarena,I.；Vernole,P.；DeFabritiis,P.；Madaio,R.；Balduzzi,A.；Roy,R.；Bonmassar,E.；Graziani,G.Effects ofsingle or split exposure of leukemic cells to temozolomide,combined with poly(ADP-ribose)polymerase inhibitors on cell growth,chromosomal aberrations andbase excision repair components.Cancer Chemother.Pharmacol.2001,47,361-369.]。此机制可能进一步增强TMZ与PARP抑制剂的组合的细胞毒性作用。

自在BRCA缺陷型细胞中发现PARP抑制剂的合成致死性以来，由催化PARP抑制引起的未修复SSB的积累被认为是PARP抑制剂作用机制的核心。最近，已经证明PARP抑制剂还在DNA损伤位点捕获PARP1-和PARP2-DNA复合物，并且PARP捕获可以比未修复的SSB更具细胞毒性[Kedar PS,Stefanick DF,Horton JK,Wilson SH.Increased PARP-1associationwithDNAin alkylation damaged,PARP-inhibited mouse fibroblasts.Mol CancerRes2012；10:360-8；Murai J,Huang SY,Das BB,Renaud A,Zhang Y,Doroshow JH等人Trapping of PARP1 and PARP2 by Clinical PARP Inhibitors.Cancer Res.2012；72:5588-5599；Murai J,Huang SY,Renaud A,Zhang Y,Ji J,Takeda S等人StereospecificPARP Trapping by BMN 673and Comparison with Olaparib and Rucaparib.Mol CancerTher 2014.；13:433-443；Fojo T和Bates S.Mechanisms of resistance to PARPinhibitors-three and counting.Cancer Discov 2013；3:20-23.]。Murai和同事研究了PARP捕获是否对临床中目前正研究的化学疗法组合是重要的。为此目的，将具有强力的PARP捕获活性的PARP抑制剂奥拉帕尼(olaparib)与具有类似催化PARP抑制但具有显著更小的PARP捕获活性的PARP抑制剂维利帕尼进行比较。两种药物与拓扑异构酶I抑制剂喜树碱显示出高度协同效应，符合催化PARP抑制对此组合的活性是重要的。然而，与烷基化剂TMZ组合时，奥拉帕尼比维利帕尼显著更有效，这表明PARP捕获对组合活性至关重要[MuraiJ,Zhang Y,Morris J,Ji J,Takeda S,Doroshow JH,Pommier Y.Rationale for Poly(ADP-ribose)Polymerase(PARP)Inhibitors in Combination Therapy withCamptothecins or Temozolomide Based on PARP Trapping versus CatalyticInhibitions.J Pharmacol Exp Ther 349:408-416,2014年6月]。Gill和同事同样表明，对PARP抑制剂的敏感性是由于DNA捕获活性，并且TMZ介导的PARP抑制剂活性增强与PARP1-DNA复合物的捕获增强相关[Gill SJ,Travers J,Pshenichnaya I,Kogera FA,BarthorpeS,Mironenko T.Combinations of PARP Inhibitors with Temozolomide Drive PARP1Trapping and Apoptosis in Ewing's Sarcoma.PLoS One.2015年10月27日；10(10).]。这些数据表明TMZ与具有强力的DNA捕获活性的PARP抑制剂的组合可能是特别令人感兴趣的。

在神经胶质瘤细胞中，PARP活性的药理学调节增加了TMZ在p53-野生型和p53-突变型胶质母细胞瘤细胞中进行的生长抑制，并且将TMZ IC50明显降低至低于可在经治疗的患者的血浆或脑中检测到的TMZ浓度的水平。由于高MGMT水平或MMR缺陷，在对TMZ具有抗性的肿瘤细胞中观察到最明显的作用。事实上，在源自手术标本的神经胶质瘤细胞的短期原代培养物中，由PARP抑制剂诱导的对TMZ的化学敏感性的增强在MGMT健全型(proficient)细胞中尤其明显。此外，在MGMT抑制剂将无效的MMR缺陷型神经胶质瘤细胞系中，TMZ与PARP抑制剂的组合恢复了对甲基化化合物的抗性[Tentori,L.；Portarena,I.；Vernole,P.；DeFabritiis,P.；Madaio,R.；Balduzzi,A.；Roy,R.；Bonmassar,E.；Graziani,G.Effects ofsingle or split exposure of leukemic cells to temozolomide,combined with poly(ADP-ribose)polymerase inhibitors on cell growth,chromosomal aberrations andbase excision repair components.Cancer Chemother.Pharmacol.2001,47,361-369.；Tentori,L.；Portarena,I.；Torino,F.；Scerrati,M.；Navarra,P.；Graziani,G.Poly(ADP-ribose)polymerase inhibitor increases growth inhibition and reduces G(2)/Mcell accumulation induced by temozolomide in malignant glioma cells.Glia2002,40,44-54.；Tentori,L.；Leonetti,C.；Scarsella,M.；D'Amati,G.；Vergati,M.；Portarena,I.；Xu,W.；Kalish,V.；Zupi,G.；Zhang,J.；Graziani,G.Systemicadministration of GPI15427,a novel poly(ADP-ribose)polymerase-1inhibitor,increases the antitumour activity of temozolomide against intracranialmelanoma,glioma,lymphoma.Clin.Cancer Res.2003,9,5370-5379.]。这些数据表明，由于缺乏MGMT启动子甲基化而从当前护理标准中获益较少的GB患者可能受益于包括PARP抑制剂的组合方案。

已经使用PARP抑制剂(奥拉帕尼、卢卡帕尼(rucaparib)和维利帕尼)与TMZ的组合进行了若干项临床研究。为了确定这些研究中的MTD，在增加PARP抑制剂剂量的情况下以标准剂量(150至1000mg/m²)给予TMZ。所有研究都经历了显著的作为剂量限制性毒性的骨髓抑制的挑战，并且观察到的抗肿瘤活性仅是适度的[Gabrielson A,Tesfaye AA,MarshallJL,Pishvaian MJ,Smaglo B,Jha R,Dorsch-Vogel K,Wang H,He AR.Phase II study oftemozolomide and veliparib combination therapy for sorafenib-refractoryadvanced hepatocellular carcinoma.Cancer Chemother Pharmacol.2015；76(5):1073-9.；Gojo I,Beumer JH,Pratz KW,McDevitt MA,Baer MR,Blackford AL等人A Phase1Study of the PARP Inhibitor Veliparib in Combination with Temozolomide inAcute Myeloid Leukemia.Clin Cancer Res.2017；23(3):697-706.；Hussain M,CarducciMA,Slovin S,Cetnar J,Qian J,McKeegan EM等人Targeting DNA repair withcombination veliparib(ABT-888)and temozolomide in patients with metastaticcastration-resistant prostate cancer.Invest New Drugs.2014；32(5):904-12.；Middleton MR,Friedlander P,Hamid O,Daud A,Plummer R,Falotico N等人Randomizedphase II study evaluating veliparib(ABT-888)with temozolomide in patientswith metastatic melanoma.Ann Oncol.2015；26(10):2173-9.；Plummer R,Lorigan P,Steven N,Scott L,Middleton MR,Wilson RH等人A phase II study of the potentPARP inhibitor,Rucaparib(PF-01367338,AG014699),with temozolomide in patientswith metastatic melanoma demonstrating evidence of chemopotentiation.CancerChemother Pharmacol.2013；71(5):1191-9.；Su JM,Thompson P,Adesina A,Li XN,Kilburn L,Onar-Thomas A等人A phase I trial of veliparib(ABT-888)andtemozolomide in children with recurrent CNS tumors:a pediatric brain tumorconsortium report.Neuro Oncol.2014；16(12):1661-8.]。这与具有非常好的DNA捕获活性的PARP抑制剂他拉唑帕尼(talazoparib)的最近研究形成对比。在患非BRCA1/2突变癌症的受试者中给予标准剂量的他拉唑帕尼(0.5-1mg)和低剂量的TMZ[Wainberg ZA,HechtJR,Konecny GE,Goldman JW,Sadeghi S,Chmielowski B等人Safety and efficacyresults from a phase I dose-escalation trial of the PARP inhibitortalazoparib in combination with either temozolomide or irinotecan in patientswith advanced malignancies.Abstract CT011；AACR Annual Meeting 2016.]。TMZ的起始剂量为25mg/m²(治疗剂量的大约12.5％)并且确定MTD为1mg他拉唑帕尼加37mg/m² TMZ。此方案比先前研究报道的耐受性更好，血小板减少和中性粒细胞减少更少。此外，观察到有希望的功效，11名受试者(61％)经历部分响应或稳定疾病。这些初步临床结果支持这样的假设，即具有强DNA捕获活性的PARP抑制剂可能仅需要相对低的TMZ剂量水平来发挥其抗肿瘤活性。

用于临床治疗GB的电离辐射主要产生单链断裂(SSB)和较小程度的DSB。通过BER途径修复单链断裂，这通过短补丁(short patch)或长补丁(long patch)修复亚途径进行操作，该亚途径在修复补丁的大小和所涉及的酶上不同。PARP-1在短补丁中的作用已经充分确立，但其在长补丁中的贡献仍不清楚。在非复制细胞中，PARP抑制仅延缓由辐射诱导的SSB的修复，而对细胞存活的影响极小。相反，PARP抑制明显增强增殖细胞的放射敏感性，因为未修复的SSB与DNA复制机器碰撞，产生DSB。因此，PARP抑制剂具有通过防止DNA损伤修复和增加细胞毒性DNA损伤来增加RT的抗肿瘤作用的潜力[Godon,C.；Cordelieres,F.P.；Biard,D.；Giocanti,N.；Mégnin-Chanet,F.；Hall,J.；Favaudon,V.PARP inhibitionversus PARP-1silencing:different outcomes in terms of single-strand breakrepair and radiation susceptibility.Nucleic Acids Res.2008,36,4454-4464.；Noel,G.；Godon,C.；Fernet,M.；Giocanti,N.；Mégnin-Chanet,F.；Favaudon,V.Radiosensitization by the poly(ADPribose)polymerase inhibitor 4-amino-1,8-naphthalimide is specific of the S phase of the cell cycle and involvesarrest of DNA synthesis.Mol.Cancer Ther.2006,5,564-574.；Dungey,F.A.；Loser,D.A.；Chalmers,A.J.Replicationdependent radiosensitization of human gliomacells by inhibition of poly(ADP-Ribose)polymerase:replication-dependentradiosensitization of human glioma cells by inhibition of poly(ADP-ribose)polymerase:Mechanisms and therapeutic Int.J.Radiat.Biol.Phys.2008,72,1188-1197.]。

尽管已经尝试将诸如维利帕尼、奥拉帕尼等Parp抑制剂与TMZ和/或放射组合的各种临床试验用于治疗实体瘤，但是没有公开显著的临床益处，尤其是在诸如GBM的脑癌的治疗中。那些临床试验的失败可能归因于组合疗法加剧了出乎意料的骨髓抑制不良作用，因此患者不能充分获得Parp抑制剂、TMZ和/或放射的组合治疗的益处。非常希望发现有效的组合治疗而没有严重的不良作用，诸如骨髓抑制。

WO2013/097225A1披露了一系列具有以下通式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，

具体地，WO2013/097225A1中披露的(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(下文中化合物A)具有高选择性且强力的PARP1/2抑制活性。

WO2017032289A也披露了化合物A的结晶形式，具体地，(R)-2-氟-10a甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物(下文中化合物B)。

本申请的发明人在临床前和临床研究中出乎意料地发现，特定PARP抑制剂(特别是上述化合物A或化合物B)与替莫唑胺和/或放射的组合疗法在治疗实体癌中(特别是在治疗GBM中)展现出比单独的每种上述活性药剂的单一疗法更好的抗肿瘤活性。更具体地，本申请的发明人出乎意料地发现，本文公开的组合疗法不会产生如其他组合中报道的严重的骨髓抑制毒性；并且所要求保护的组合疗法为GBM患者提供更长的生存时间和/或恒定减小的肿瘤体积。

发明概述

本文公开了用于在受试者中预防实体癌(特别是脑癌)、延缓实体癌(特别是脑癌)的进展或治疗实体癌(特别是脑癌)的方法，该方法包括向有需要的受试者给予PARP抑制剂(具体地(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮或其药学上可接受的盐、(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物)与替莫唑胺和/或放射疗法的组合。本文还公开了药物组合及其用途，该药物组合包含PARP抑制剂(具体地(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮或其药学上可接受的盐、(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物)与替莫唑胺和/或放射疗法的组合。

在第一方面，本文公开了用于在受试者中预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者给予治疗有效量的具有式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物与治疗有效量的替莫唑胺和/或放射疗法的组合。

在第二方面，本文公开了用于预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的药物组合，该药物组合包含具有式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物与治疗有效量的替莫唑胺和/或放射疗法的组合。

在第三方面，本文公开了具有式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，其与治疗有效量的替莫唑胺和/或放射疗法组合用于预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症。在此方面的一个实施方案中，本文公开了替莫唑胺和/或放射疗法，其与具有式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物组合用于预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症。

在第四方面，本文公开了药物组合在制造用于预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的药物中的用途，所述药物组合包含具有式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物和替莫唑胺。

在第五方面，本文公开了制品或“试剂盒”，其包括第一容器、第二容器和包装说明书，其中第一容器包含至少一个剂量的包含具有式(I)的PARP抑制剂或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物的药物；第二容器包含至少一个剂量的包含替莫唑胺的药物，并且包装说明书包括用于使用该药物治疗受试者的癌症的说明书。

在一些实施方案中，PARP抑制剂为化合物A。在其他实施方案中，PARP抑制剂为化合物B。

在一些实施方案中，PARP抑制剂在治疗周期期间连续或间歇给予。

在一些实施方案中，该方法包括1至3个治疗周期，并且每个治疗周期包括1至4周。

在一些实施方案中，替莫唑胺以标准给药方案给予，包括20mg-120mg，每天一次(QD)。

在一些实施方案中，放射疗法以1.8至2Gy/部分给予QD×5天/周，持续6至7周，总剂量高达60Gy。

在一些实施方案中，维持期中PARP抑制剂的量为1-120mg，优选5-120mg(以母体化合物计)，给予频率为每天一次至两次；优选地，PARP抑制剂的给予剂量为5-80mg(以母体化合物计)，并且给予频率为每天两次(BID)。在其他实施方案中，PARP抑制剂以60mg的剂量每天两次(BID)地给予。

本文公开的方法和药物组合作为组合疗法比单独的任一单一药剂产生更有效的抗肿瘤响应。

在上述方面中的每一个的一个实施方案中，癌症为实体癌。在一些实施方案中，癌症选自结肠直肠癌、胃癌、小细胞肺癌(SCLC)、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、黑素瘤、胶质母细胞瘤或淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症为具有未甲基化MGMT启动子的胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性/难治性胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，癌症为局部晚期或转移性实体瘤或新诊断或复发性/难治性胶质母细胞瘤。

在上述五个方面中的每一个的一个实施方案中，PARP抑制剂为(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮(化合物A)或其药学上可接受的盐。在上述五个方面中的每一个的一个实施方案中，PARP抑制剂为(R)-2-氟-10a-甲基-7,8,9,10,10a,11-六氢-5,6,7a,11-四氮杂环庚并[def]环戊并[a]芴-4(5H)-酮倍半水合物(化合物B)。在上述五个方面中的每一个的一个实施方案中，PARP抑制剂和替莫唑胺和/或放射疗法同时、依序或间歇给予。

附图简述

图1示出了晶体化合物B的X射线衍射图。

图2示出了晶体化合物B的¹H-NMR。

图3示出了晶体化合物B的¹³C-NMR。

图4示出了化合物B和替莫唑胺在H209小细胞肺癌异种移植模型中的组合活性。

图5示出了化合物B和替莫唑胺在H209-T颅内模型中的组合活性。

发明详述

定义

除非在本文件中的其他地方明确定义，否则本文所用的全部其他技术与科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。

除非上下文另外清楚地指示，否则如本文(包括所附权利要求书)所用，单数形式的单词诸如“一个/种(a，an)”和“该(the)”包括其对应复数提及物。

除非上下文另外清楚地指示，否则术语“或”用于意指术语“和/或”，并且可与术语“和/或”互换使用。

贯穿本说明书和随附的权利要求书，除非上下文另外要求，否则单词“包含(comprise)”和变型诸如“包含(comprises和comprising)”将理解为暗示包括活性剂(例如，mAb或Btk抑制剂)或所陈述的氨基酸序列，但不排除任何其他活性成分或氨基酸序列。当在本文中使用时，术语“包含”可与术语“含有(containing)”或“包括(including)”互换。

本文的术语“烷基”是指选自直链饱和烃基和支链饱和烃基的烃基，其包含1至18(诸如1至12，进一步诸如1至6)个碳原子。烷基的例子可以选自甲基、乙基、1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)和1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)。烷基的其他例子可以选自1-戊基(正戊基，-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₃)、3-戊基(-CH(CH₂CH₃)₂)、2-甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH₂CH₃)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH₃)CH(CH₃)₂)、3-甲基-1-丁基(-CH₂CH₂CH(CH₃)₂)、2-甲基-1-丁基(-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₃)、1-己基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₃)、2-己基(-CH(CH₃)CH₂CH₂CH₂CH₃)、3-己基(-CH(CH₂CH₃)(CH₂CH₂CH₃))、2-甲基-2-戊基(-C(CH₃)₂CH₂CH₂CH₃)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH(CH₃)CH₂CH₃)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)₂)、3-甲基-3-戊基(-C(CH₃)(CH₂CH₃)₂)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH₂CH₃)CH(CH₃)₂)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH₃)₂CH(CH₃)₂)和3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH₃)C(CH₃)₃)基团。

本文的术语“烯基”是指选自直链烃基和支链烃基的烃基，其包含至少一个C＝C双键和2至18(诸如2至6)个碳原子。烯基的例子可以选自乙烯基(ethenyl或vinyl)(-CH＝CH₂)、丙-1-烯基(-CH＝CHCH₃)、丙-2-烯基(-CH₂CH＝CH₂)、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和己-1,3-二烯基。

本文的术语“炔基”是指选自直链烃基和支链烃基的烃基，其包含至少一个C≡C三键和2至18(诸如2至6)个碳原子。炔基的例子包括乙炔基(-C≡CH)、1-丙炔基(-C≡CCH₃)、2-丙炔基(炔丙基，-CH₂C≡CH)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。

本文的术语“环烷基”是指选自饱和的和部分不饱和的环状烃基的烃基，其包含单环和多环(例如双环和三环)基团。例如，环烷基可以包含3至12(诸如3至8，进一步诸如3至6、3至5或3至4)个碳原子。甚至进一步例如，环烷基可以选自包含3至12(诸如3至8、3至6)个碳原子的单环基团。单环环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一基和环十二基。双环环烷基的例子包括具有7至12个环原子的那些，其排列成选自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]环系的双环，或选自双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.2]壬烷的桥接双环。环可以是饱和的或具有至少一个双键(即部分不饱和的)，但不是完全共轭的，并且不是芳族的，因为芳族在本文中被定义。

本文的术语“芳基”是指选自以下项的基团：

5-和6-元碳环芳族环，例如苯基；

双环体系，诸如7至12元双环体系，其中至少一个环是碳环和芳族的，选自例如萘和二氢化茚；以及

三环体系，诸如10至15元三环体系，其中至少一个环是碳环和芳族的，例如芴。

例如，芳基选自与5-至7-元环烷基或杂环稠合的5和6-元碳环芳族环，该杂环任选地包含至少一个选自N、O和S的杂原子，前提条件是当碳环芳族环与杂环稠合时，连接点在碳环芳族环上，并且当碳环芳族环与环烷基稠合时，连接点可以在碳环芳族环上或环烷基上。由取代的苯衍生物形成并且在环原子处具有自由价的二价基团被称为取代的亚苯基。其名称以“-基”结尾的一价多环烃基通过从具有自由价的碳原子除去一个氢原子衍生的二价基团通过向对应的一价基团的名称添加“-亚基”来命名，例如具有两个连接点的萘基被称为亚萘基。然而，芳基不以任何方式包括或重叠于下面单独定义的杂芳基。因此，如本文所定义，如果一个或多个碳环芳族环与杂环芳族环稠合，则所得的环系是杂芳基，而不是芳基。

本文的术语“芳基烷基”是指被如上文所定义的芳基取代的如上文所定义的烷基。

本文的术语“卤素”或“卤代”是指F、Cl、Br或I。

本文的术语“杂芳基”是指选自以下项的基团：

5-至7-元芳族单环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个，或在一些实施方案中，1至3个杂原子，其余环原子是碳；

8-至12-元双环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个，或在一些实施方案中，1至3个，或在其他实施方案中，1或2个杂原子，其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳族的并且芳族环中存在至少一个杂原子；以及

11-至14-元三环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个，或在一些实施方案中，1至3个，或在其他实施方案中，1或2个杂原子，其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳族的并且芳族环中存在至少一个杂原子。

例如，杂芳基包括与5-至7-元环烷基环稠合的5-至7-元杂环芳族环。对于其中仅一个环包含至少一个杂原子的此类稠合的双环杂芳基环系，连接点可以在杂芳族环上或环烷基环上。

当杂芳基中S和O原子的总数超过1时，那些杂原子彼此不相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S和O原子的总数不大于2。在一些实施方案中，芳族杂环中S和O原子的总数不大于1。

杂芳基的例子包括但不限于(从指定为优先次序1的连接位置开始编号)吡啶基(诸如2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基)、噌啉基、吡嗪基、2,4-嘧啶基、3,5-嘧啶基、2,4-咪唑基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、四唑基、噻吩基、三嗪基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、酞嗪基、吡嗪基、哒嗪基、吡咯基、三唑基、喹啉基、异喹啉基、吡唑基、吡咯并吡啶基(诸如1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)、吡唑并吡啶基(诸如1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-5-基)、苯并噁唑基(诸如苯并[d]噁唑-6-基)、蝶啶基、嘌呤基、1-氧杂-2,3-二唑基、1-氧杂-2,4-二唑基、1-氧杂-2,5-二唑基、1-氧杂-3,4-二唑基、1-硫杂-2,3-二唑基、1-硫杂-2,4-二唑基、1-硫杂-2,5-二唑基、1-硫杂-3,4-二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基、呋喃并吡啶基、苯并噻唑基(诸如苯并[d]噻唑-6-基)、吲唑基(诸如1H-吲唑-5-基)和5,6,7,8-四氢异喹啉。

本文的术语“杂环的”或“杂环”或“杂环基”是指选自4-至12-元单环、双环和三环的饱和及部分不饱和环的环，除至少一个选自氧、硫和氮的杂原子，诸如1-4个杂原子，进一步诸如1-3个，或进一步诸如1或2个杂原子外，其还包含至少一个碳原子。本文的“杂环”还指与5-、6-和/或7-元环烷基、碳环芳族环或杂芳族环稠合的包含至少一个选自N、O和S的杂原子的5-至7-元杂环，前提条件是当杂环与碳环芳香环或杂芳族环稠合时，连接点在杂环上，并且当杂环与环烷基稠合时，连接点可以在环烷基上或杂环上。本文的“杂环”还指包含至少一个选自N、O和S的杂原子的脂族螺环，前提条件是连接点在杂环上。环可以是饱和的或具有至少一个双键(即部分不饱和的)。杂环可以被氧代基取代。连接点可以是杂环中的碳或杂原子。杂环不是如本文所定义的杂芳基。

杂环的例子包括但不限于(从指定为优先次序1的连接位置开始编号)1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、2,4-咪唑烷基、2,3-吡唑烷基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2,5-哌嗪基、吡喃基、2-吗啉基、3-吗啉基、氧杂环丙烷基、氮杂环丙烷基、硫杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2-二硫杂环丁烷基、1,3-二硫杂环丁烷基、二氢吡啶基、四氢吡啶基、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、高哌啶基、氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、1,4-氧硫杂环己烷基(1,4-oxathianyl)、1,4-二氧杂环庚烷基、1,4-氧硫杂环庚烷基、1,4-氧氮杂环庚烷基、1,4-二硫杂环庚烷基、1,4-硫氮杂环庚烷基和1,4-二氮杂环庚烷、1,4-二硫杂环己烷基(1,4-dithianyl)、1,4-氮硫杂环己烷基(1,4-azathianyl)、氧氮杂

基(oxazepinyl)、二氮杂

基(diazepinyl)、硫氮杂

基(thiazepinyl)、二氢噻吩基、二氢吡喃基、二氢呋喃基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1,4-二噁烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、二硫杂环己烷基(dithianyl)、二硫杂环戊烷基(dithiolanyl)、吡唑烷基、咪唑啉基、嘧啶酮基、1,1-二氧代-硫代吗啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基和氮杂双环[2.2.2]己基。取代的杂环还包括被一个或多个氧代基部分取代的环系，诸如哌啶基N-氧化物、吗啉基-N-氧化物、1-氧代-1-硫代吗啉基和1,1-二氧代-1-硫代吗啉基。

本文所述的化合物可以含有不对称中心，并且因此可以作为对映异构体存在。当本文所述的化合物具有两个或更多个不对称中心时，它们可以另外作为非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体属于更广泛的立体异构体类别。旨在包括作为基本上纯的拆分对映异构体、其外消旋混合物，以及非对映异构体混合物的所有这些可能的立体异构体。旨在包括本文公开的化合物的所有立体异构体和/或其药学上可接受的盐。除非另外明确提及，否则对一种异构体的提及适用于任何可能的异构体。每当异构体组合物未指明时，则包括所有可能的异构体。

如本文所用，术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有按重量计不超过35％(诸如不超过30％，进一步诸如不超过25％，甚至进一步诸如不超过20％)的任何其他立体异构体。在一些实施方案中，术语“基本上纯的”意指目标立体异构体含有按重量计不超过10％(例如不超过5％，诸如不超过1％)的任何其他立体异构体。

当本文所述的化合物含有烯属双键时，除非另外指明，否则此类双键意在包括E和Z几何异构体。

本文所述的一些化合物能以不同的氢连接点存在，称为互变异构体。例如，包括羰基-CH₂C(O)-基团(酮式)的化合物可以经历互变异构以形成羟基-CH＝C(OH)-基团(烯醇式)。在适用时，也旨在包括单独地酮式和烯醇式以及其混合物。

将反应产物互相分离和/或从起始材料中分离可能是有利的。通过本领域中常用的技术，将每一步或一系列步骤的所需产物分离和/或纯化(在下文中分离)至所需的均质程度。通常，此类分离涉及多相提取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可以涉及任意数量的方法，包括例如：反相和正相色谱；尺寸排阻色谱；离子交换色谱；高压、中压和低压液相色谱方法和装置；小规模分析性色谱；模拟移动床(“SMB”)色谱和制备型薄层或厚层色谱法，以及小规模薄层和快速色谱法的技术。本领域技术人员将应用最可能实现所需分离的技术。

通过本领域技术人员熟知的方法，诸如通过色谱法和/或分步结晶，可以基于非对映异构体混合物的物理化学差异将它们分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可以通过以下方式分离：通过与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，诸如手性醇或Mosher氏酰氯)反应，将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离非对映异构体并将单独的非对映异构体转化(例如水解)成对应的纯对映异构体。也可以使用手性HPLC柱来分离对映异构体。

通过使用诸如用光学活性拆分剂形成非对映异构体的方法拆分外消旋混合物可以获得单一立体异构体(例如基本上纯的对映异构体)(Eliel,E.和Wilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York:John Wiley&Sons,Inc.,1994；Lochmuller,C.H.等人“Chromatographic resolution of enantiomers:Selectivereview.”J.Chromatogr.,113(3)(1975):第283-302页)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以通过任何合适的方法分离和分开，包括：(1)用手性化合物形成离子性非对映异构体盐并通过分步结晶或其他方法分离；(2)用手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并转化成纯的立体异构体；以及(3)在手性条件下直接分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：Wainer,Irving W.编Drug Stereochemistry:Analytical Methodsand Pharmacology.New York:Marcel Dekker,Inc.,1993。

“药学上可接受的盐”包括但不限于与无机酸所成的盐，例如选自盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐和硝酸盐；以及与有机酸所成的盐，例如选自苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、链烷酸盐(诸如乙酸盐)，和与HOOC-(CH₂)_n-COOH所成的盐，其中n选自0至4。类似地，药学上可接受的阳离子的例子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。

此外，如果本文公开的化合物是作为酸加成盐获得，则游离碱可以通过碱化酸盐的溶液获得。相反地，如果产物是游离碱，则可以根据用于从碱性化合物制备酸加成盐的常规程序通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并且用酸处理溶液产生加成盐，诸如药学上可接受的加成盐。本领域的技术人员将认识到可用于在无需过度实验的情况下制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。

如本文所定义，“其药学上可接受的盐”包括具有式I、II(包括II-1、II-2或II-3)或III的至少一种化合物的盐，和具有式I、II(包括II-1、II-2或II-3)或III的至少一种化合物的立体异构体的盐，诸如对映异构体的盐和/或非对映异构体的盐。

“治疗(treating，treat或treatment)”或“减轻(alleviation)”是指向患有例如癌症疾病或具有例如癌症疾病的症状或具有易患例如癌症疾病的倾向的有公认需要的受试者给予本文公开的至少一种化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐，目的是治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、改善、改良或影响例如癌症疾病、例如癌症疾病的症状或易患例如癌症疾病的倾向。

术语“有效量”是指本文公开的至少一种化合物、其立体异构体、其药学上可接受的盐及其溶剂化物有效地如上文定义那样“治疗”受试者的疾病或病症的量。在癌症的情况下，有效量可以如上文在“治疗(treating，treat，treatment)”或“减轻(alleviation)”的定义中所述的在受试者中引起可观察到或可测量的任何变化。例如，有效量可以减少癌症或肿瘤细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制或阻止肿瘤细胞浸润到外周器官中，包括例如肿瘤扩散到软组织和骨中；抑制和阻止肿瘤转移；抑制和阻止肿瘤生长；在一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状、降低发病率和死亡率；改善生活质量；或此类效果的组合。有效量可以是足以响应于PARP的抑制减少疾病症状的量。对于癌症疗法，体内功效可以例如通过评估生存持续时间、疾病进展时间(TTP)、响应速率(RR)、响应持续时间和/或生活质量来测量。如本领域技术人员所认识到的，有效量可以根据给予途径、赋形剂使用和与其他药剂的共同使用而变化。

术语“抑制”表示生物活性或过程的基线活性的降低。“PARP的抑制”是指作为对本文公开的至少一种化合物和/或至少一种药学上可接受的盐的存在的直接或间接响应，相对于不存在该至少一种化合物和/或该至少一种其药学上可接受的盐情况下的PARP活性，PARP活性的降低。活性的降低不受理论束缚，并且可能是由于本文公开的至少一种化合物、其立体异构体及其药学上可接受的盐与PARP的直接相互作用，或者是由于本文公开的至少一种化合物和/或至少一种药学上可接受的盐与反过来影响PARP活性的一种或多种其他因子的相互作用。例如，本文公开的至少一种化合物、其立体异构体及其药学上可接受的盐的存在可以通过以下方式来降低PARP活性：与PARP直接结合、(直接或间接地)使得另一因子降低PARP活性、或(直接或间接地)减少细胞或生物体中存在的PARP量。

术语“预防”是指通过给予组合来限制疾病或延迟疾病发生的所有行为。

术语“进展的延缓”是指将组合给予处于待治疗疾病的首次表现或复发的前期或早期的患者，在该患者中诊断出相应疾病的先前形式，或该患者处于医学治疗期间的病状或由事故造成的病状之中，在这种情况下可能患上相应的疾病。

本文公开的术语“至少一个取代基”包括例如1至4(诸如1至3，进一步如1或2)个取代基。例如，本文公开的“至少一个取代基R¹²”包括1至4(诸如1至3，进一步如1或2)个选自如本文所述的R¹²列表的取代基。

当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，本文的术语“给予(administration，administering)”意指使外源药物、治疗剂、诊断剂或组合物与该动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体接触。细胞的处理包括试剂与细胞接触，以及试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。术语“给予(administration)”也意指由试剂、诊断剂、结合化合物或由另一细胞在体外和离体处理例如细胞。本文的术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、犬、猫、兔)且最优选人。

本文的术语“癌症”或“肿瘤”意指或描述涉及异常细胞生长并且具有侵入或扩散至身体的其他部分的可能性的生理状况。“疾病”是指任何疾病、不适、病、症状或适应症，并且可以用术语“病症”或“病状”代替。

在一些实施方案中，癌症为实体癌，包括但不限于结肠直肠癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、黑素瘤、胶质母细胞瘤或淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症为具有未甲基化MGMT启动子的胶质母细胞瘤。在一些实施方案中，癌症为复发性/难治性胶质母细胞瘤。

PARP抑制剂

“PARP抑制剂”意指具有式(I)的化合物、或其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物。

如上述五个方面中的每一个中所公开的，PARP抑制剂为具有式(I)的化合物，

其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，

其中：

R_N选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

X选自由以下项组成的组：C、N、O和S；

m和n，可以相同或不同，各自为0、1、2或3的整数；

t为0、1、2或3的整数；

R¹在每次出现时独立地选自卤素、CN、NO₂、OR⁹、NR⁹R¹⁰、NR⁹COR¹⁰、NR⁹SO₂R¹⁰、CONR⁹R¹⁰、COOR⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R²选自氢、COR⁹、CONR⁹R¹⁰、CO₂R⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸，可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、-NR⁹R¹⁰、-OR⁹、氧代基、-COR⁹、-CO₂R⁹、-CONR⁹R¹⁰、-NR⁹CONR¹⁰R¹¹、-NR⁹CO₂R¹⁰、-NR⁹SO₂R¹⁰、-SO₂R⁹、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、炔基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代，

或者(R³和R⁴)和/或(R⁴和R⁵)和/或(R⁵和R⁶)和/或(R⁶和R⁷)和/或(R⁷和R⁸)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-或-SO₂-的杂原子，并且所述环被至少一个取代基R¹²任选地取代，

前提条件是

当X为O时，R⁵和R⁶不存在，

当X为N时，R⁶不存在，并且

当X为S时，R⁵和R⁶不存在，或R⁵和R⁶中的至少一个为氧代基，

当R³和R⁴中的一个为氧代基时，另一个不存在，

当R⁷和R⁸中的一个为氧代基时，另一个不存在，并且

当X为C并且R⁵和R⁶中的一个为氧代基时，另一个不存在；

R⁹、R¹⁰和R¹¹，可以相同或不同，各自选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R¹²选自CN、卤素、卤代烷基、NO₂、-NR'R"、-OR'、氧代基、-COR'、-CO₂R'、-CONR'R"、-NR'CONR"R"'、-NR'CO₂R"、-NR'SO₂R"、-SO₂R'、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R'、R"和R"'独立地选自氢、卤代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或者(R'和R")和/或(R"和R"')与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-和-SO₂-的另外的杂原子，

R¹³选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。

在一些实施方案中，PARP抑制剂为具有式(II)的化合物，

其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，

其中：

R_N选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

m和n，可以相同或不同，各自为0、1、2或3的整数；

t为0、1、2或3的整数；

R¹在每次出现时独立地选自卤素、CN、NO₂、OR⁹、NR⁹R¹⁰、NR⁹COR¹⁰、NR⁹SO₂R¹⁰、CONR⁹R¹⁰、COOR⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R²选自氢、COR⁹、CONR⁹R¹⁰、CO₂R⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R³、R⁴、R⁵、R⁷和R⁸，可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、-NR⁹R¹⁰、-OR⁹、氧代基、-COR⁹、-CO₂R⁹、-CONR⁹R¹⁰、-NR⁹CONR¹⁰R¹¹、-NR⁹CO₂R¹⁰、-NR⁹SO₂R¹⁰、-SO₂R⁹、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、炔基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代，或者(R³和R⁴)和/或(R⁴和R⁵)和/或(R⁵和R⁷)和/或(R⁷和R⁸)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-或-SO₂-的杂原子，并且所述环被至少一个取代基R¹²任选地取代，

前提条件是

当R³和R⁴中的一个为氧代基时，另一个不存在，并且

当R⁷和R⁸中的一个是氧代基时，另一个不存在；

R⁹、R¹⁰和R¹¹，可以相同或不同，各自选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R¹²选自CN、卤素、卤代烷基、NO₂、-NR'R"、-OR'、氧代基、-COR'、-CO₂R'、-CONR'R"、-NR'CONR"R"'、-NR'CO₂R"、-NR'SO₂R"、-SO₂R'、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R'、R"和R"'独立地选自氢、卤代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或者(R'和R")和/或(R"和R"')与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-或-SO₂-的另外的杂原子；并且

R¹³选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。

在一些实施方案中，PARP抑制剂选自以下化合物，

其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物。

如上述五个方面中的每一个中所公开的，PARP抑制剂为具有式(III)的化合物--即化合物A，

或其药学上可接受的盐。

如上述五个方面中的每一个中所公开的，PARP抑制剂为具有式(IV)的化合物--即化合物B。

本文公开的PARP抑制剂(诸如具有式(III)和(IV)的化合物)可以通过WO2013/097225A1和WO2017032289A中公开的合成途径来合成，将该专利的全部公开内容明确地通过引用并入本文。

组合疗法

组合疗法可以作为同时或分开或依序方案给予。当依序给予时，该组合可以分两次或更多次给药来给予。组合给予包括使用分开制剂的共同给予，和以任何顺序进行的连续给予，其中优选有一段时间使两种(或所有)活性剂同时发挥其生物活性。

任何上述共同给予的药剂的合适剂量是目前使用的那些，并且可以由于PARP抑制剂和替莫唑胺和/或放射疗法的组合作用(协同作用)诸如来增加治疗指数或缓解毒性或其他副作用或后果而减少。

在抗癌疗法的一个特定实施方案中，PARP抑制剂和替莫唑胺和/或放射疗法可以进一步与手术疗法组合。

在上述五个方面中的每一个的一个实施方案中，本文公开的PARP抑制剂和替莫唑胺和/或放射疗法的量以及给予的相对时间安排取决于待治疗患者的个体需要、给予途径、疾病或病的严重程度、给药方案、以及指定医生的评估和判断。

例如，PARP抑制剂的给予剂量为1-120mg或1-80mg或1-60mg或1-50mg或1-40mg或1-30mg或1-20mg或1-10mg或20-80mg或20-60mg或20-50mg或20-40mg或20-30mg(以母体化合物计)，并且给予频率为每天一次至两次；优选地，PARP抑制剂的给予剂量为1-80mg(以母体化合物计)，并且给予频率为每天两次(BID)。在一些情况下，更适合应用上述剂量范围的下限，而在其他情况下，可以使用更高剂量而不会引起有害的副作用。

本文公开的PARP抑制剂和替莫唑胺能以各种已知方式给予，诸如口服、局部、直肠、肠胃外、通过吸入喷雾、或通过植入型储库，但是在任何给定情况下最合适的途径将取决于特定宿主以及给予活性成分的病状的性质和严重程度。如本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内以及颅内注射或输注技术。

在上述方面中的每一个的一个实施方案中，本文公开的PARP抑制剂和替莫唑胺能以不同途径给予。在一个优选的实施方案中，口服给予PARP抑制剂，并且口服给予替莫唑胺。

用于实践组合疗法的替莫唑胺的剂量为10至400mg/m²患者体表面积/天，更优选10至150mg/m²且最优选20-120mg/m²/天；或20-75mg/m²/天。优选的是，替莫唑胺的日剂量每天给予一次，持续2至10天的时间段，更优选持续3至8天的时间段且最优选持续5天的时间段。替莫唑胺给药期能以28至42天，更优选28至35天且最优选28天的周期重复。也就是说，在替莫唑胺给予的第一天后28至42天，可以开始另一替莫唑胺给予期。

可替代地，替莫唑胺能以减少的剂量给予长得多的时间段。例如，替莫唑胺能以20至120mg/m²/天的剂量每天给予，持续11天至6周。替莫唑胺能以胶囊形式口服给予，在该胶囊形式中它与常规药物载体混合。

在上述方面的一个实施方案中，将替莫唑胺以20-120QD的剂量给予受试者，并将PARP抑制剂化合物A或化合物B以1-120mg BID的剂量给予受试者。

实施例

通过以下说明本发明的实施例进一步例示但不限制本发明。在本发明的实施例中，除非另外明确说明，否则技术或方法是本领域的常规技术或方法。

实施例1.化合物A和化合物B的制备

步骤1：化合物-2的合成

将溴乙酸叔丁酯(51.7Kg)溶解在无水乙腈(72Kg)中。将温度升至65℃-75℃，然后加入甲基吡咯啉(22Kg)。反应完成后，将反应混合物浓缩，通过加入THF并且然后浓缩除去残余的乙腈。在GC显示完全除去乙腈后，加入更多的THF并搅拌。过滤并收集所得固体。获得44.1Kg灰白色固体化合物-2。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.91(s,2H),4.15(m,2H),3.29(m,2H),2.46(s,3H),),2.14(m,2H),1.46(s,9H)ppm。

步骤2：化合物-3的合成

向三甲基甲硅烷基乙炔(trimethylsilylacetyne)(12.4Kg)的THF冷却(-60℃)溶液中加入正丁基锂的己烷溶液(43.4Kg)。在完全加入正丁基锂溶液后，将所得混合物再搅拌1-2h，然后将整个溶液转移到在-60℃冷却的化合物-2(31Kg)的THF悬浮液中。转移完成后，将所得混合物温热至室温并搅拌1h。将反应用水淬灭，用石油醚萃取。将有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到25.1Kg化合物-3。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.34(d,J＝16.0Hz,1H),3.15(m,1H),2.78(d,J＝16.0Hz,1H),2.27(m,1H),1.93(m,1H),1.68(m,3H),1.41(s,9H),1.24(s,3H),0.13(s,9H)ppm。

步骤3：化合物-4的合成

向70.1Kg化合物-3的THF冷却(0℃-5℃)溶液中加入四丁基氟化铵(13.3Kg)的THF溶液。脱甲硅烷基化完成后，将反应用水淬灭，用石油醚(290Kg)萃取，并且将有机相浓缩并使其通过硅胶垫。浓缩滤液，得到48Kg化合物-4。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.36(d,J＝16.0Hz,1H),3.15(m,1H),2.82(d,J＝16.0Hz,1H),2.28(m,1H),1.97(m,1H),1.70(m,3H),1.41(s,9H),1.26(s,3H)ppm。

步骤4：化合物-5的合成

将化合物-4(48Kg)的THF溶液温热至50℃-60℃。向上述溶液中加入(-)-二-对甲基苯甲酰基-L-酒石酸(69.6Kg)的THF溶液。将所得混合物在50℃-60℃搅拌1-2h，然后逐渐冷却至0℃-10℃。将所得盐固体过滤并重悬于甲基叔丁基醚中并在50℃-60℃加热1h。将混合物逐渐冷却至0℃-5℃。过滤所得固体，得到13.1Kg灰白色固体。将固体用氢氧化钠水溶液处理，用石油醚萃取，浓缩，得到13.1Kg化合物-5(ee≥96％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.36(d,J＝16.0Hz,1H),3.15(m,1H),2.82(d,J＝16.0Hz,1H),2.29(m,1H),1.97(m,1H),1.70(m,3H),1.41(s,9H),1.26(s,3H)ppm。

步骤5：化合物-6的合成

将中间体B(14Kg)、双(三苯基)二氯化钯(0.7Kg)、CuI(0.42Kg)和四甲基胍(11.5Kg)溶解于DMF(48.1Kg)中。将所得溶液搅拌并脱气，然后在氮气下加热。逐滴加入化合物-5(9.24Kg)的DMF(16Kg)溶液。偶联后，浓缩有机相，将残余物与水(145Kg)和甲基叔丁基醚(104Kg)一起搅拌，使整个混合物通过硅藻土垫，分离。用硫脲(14Kg)在水(165kg)和盐水(100Kg)中的溶液洗涤有机相，浓缩。将残余物溶解于正庚烷(120Kg)和乙酸乙酯(28Kg)的混合物中。将溶液与木炭(1.4kg)混合，在40℃-50℃加热1-2h，通过硅胶垫过滤。浓缩滤液，得到化合物-6固体(14.89Kg)和液体滤液(13Kg庚烷溶液，含有1.24Kg化合物-6)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.85(d,J＝9.6Hz,1H),7.55(m,3H),7.32(m,2H),3.87(s,3H),3.37(d,J＝16.0Hz,1H),3.22(m,1H),2.94(d,J＝16.0,Hz,1H),2.60(m,1H),2.48(m,1H),2.29(s,3h),2.26(m,1H),1.82(m,2H),1.49(s,3H),1.43(s,9H)ppm。

步骤6：化合物-7的合成

将上述的化合物-6的庚烷溶液加入到冷的三氟甲磺酸(66.1Kg)中，同时保持内部温度低于25℃。然后分批加入固体化合物-6(14.87Kg)。在完全加入化合物-6后，将反应混合物温热至25℃-30℃并搅拌直至反应完成。将整个混合物倒入乙酸钠(123.5Kg)的水(240Kg)溶液中。然后通过加入固体碳酸钾(46.1Kg)将溶液的pH调节至7-8。将混合物用二氯甲烷(509Kg)萃取，浓缩。将残余物与正庚烷(41Kg)混合，再次浓缩，得到析出物，将其过滤并用正庚烷(8Kg)洗涤并干燥。获得8.78Kg化合物-7。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),7.35(dd,J＝9.2,1.6Hz,1H),7.08(dd,J＝9.2,1.6Hz,1H),3.79(s,3H),3.68(d,J＝17.2Hz,1H),3.21(d,J＝17.2Hz,1H),3.06(m,1H),2.68(m,1H),1.96(m,1H),1.74(m,1H),1.49(s,3H)ppm。

步骤7：化合物A-粗制物1的合成

将化合物-7(8.76Kg)溶解在甲醇(69Kg)中并内部冷却至低于25℃。加入乙酸(9.3Kg)和水合肼(7.4Kg，85％)，同时保持内部温度低于25℃。在脱气并重新充满氮气(重复三次)后，将反应混合物在55℃-60℃搅拌4h。完成反应后，将混合物与水(29Kg)混合。浓缩有机相并加入碳酸钾(12.5Kg)的水(40Kg)溶液。将所得固体过滤，用水(18.3Kg)洗涤。将固体用水(110Kg)浆化，离心，干燥并用乙醇(9.4Kg)浆化，离心，过滤，用乙醇洗涤，真空干燥，得到化合物A-粗制物1(7.91Kg)。¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ12.0(s,1H),10.2(s,1H),7.31(dd,1H,J＝9.6,2.0Hz),7.19(dd,1H,J＝9.6,2.0Hz),3.77(d,1H,J＝16.4Hz),3.34(d,1H,J＝16.4Hz),2.97-3.02(m,1H),2.54-2.58(m,1H),2.35-2.40(m,1H),1.90-1.94(m,1H),1.73-1.75(m,1H),1.47(s,3H),1.43-1.45(m,1H)ppm。MS(ESI)m/e[M+1]⁺299。

步骤8：化合物A-粗制物2的合成

在氮气保护下，将化合物A(粗制物1)(7.88Kg)与异丙醇(422Kg)一起搅拌并在70℃-80℃加热1-2h直至固体完全消失。加入(+)-二-对甲基苯甲酰基-D-酒石酸(10.25Kg)的异丙醇(84.4Kg)溶液。将混合物搅拌14-16h，过滤并用异丙醇(16Kg)洗涤，干燥。将所得盐加入到搅拌的碳酸钾(6.15Kg)的水(118Kg)溶液中。将析出物离心，过滤，用水(18Kg)洗涤。将固体用水(110Kg)浆化，离心，干燥。将固体溶解于THF(75Kg)中，加入活性炭(0.8Kg)。将混合物脱气并用氮气再保护、搅拌并在40℃-45℃加热1-2h，冷却，通过硅藻土过滤，浓缩，得到固体，将其进一步用乙醇(6.5Kg)浆化，过滤，得到5.6Kg化合物A粗制物2。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),10.2(s,1H),7.31(dd,1H,J＝9.6,2.0Hz),7.19(dd,1H,J＝9.6,2.0Hz),3.77(d,1H,J＝16.4Hz),3.34(d,1H,J＝16.4Hz),2.97-3.02(m,1H),2.54-2.58(m,1H),2.35-2.40(m,1H),1.90-1.94(m,1H),1.73-1.75(m,1H),1.47(s,3H),1.43-1.45(m,1H)ppm。MS(ESI)m/e[M+1]⁺299。

步骤9：化合物B的合成

将化合物A-粗制物2(5.3Kg)与异丙醇(41.6Kg)和水(15.9Kg)的溶液混合。将混合物脱气并在氮气下再保护，然后加热至60℃并搅拌2-4h直至固体完全溶解。将温度升至70℃-80℃并加入水(143Kg)。将所得混合物加热至70℃-80℃的内部温度，然后停止加热，但轻轻搅拌16h。将析出物过滤，用水(19Kg)洗涤并用水(21kg)浆化2h。将所得固体过滤，用水(20Kg)洗涤。将过滤的固体在低于45℃的温度干燥24-36h。获得化合物A倍半水合物(4.22kg)，其粒度为D90＝51.51um，D50＝18.62um，D10＝7.63um。PSD的此范围几乎是制剂开发的理想选择。

将粉末X射线衍射图(PXRD)用于表征晶体化合物B，参见图1。晶体化合物B的¹H-NMR示出在图2中。晶体化合物B的¹³C-NMR示出在图3中。

实施例2PARP抑制剂和替莫唑胺(TMZ)的组合的作用

作为单一药剂的化合物B已展示出对具有HR途径缺陷的肿瘤细胞系的优异体外活性。在体内，化合物B对BRCA1突变型小鼠异种移植模型(MDA-MB-436乳腺癌)显示出强的抗肿瘤活性，并且在效力上比奥拉帕尼高16倍。在药动学(PK)/药效学(PD)研究中，口服给予化合物B在小鼠的MDA-MB-436乳腺癌异种移植物中产生对PAR化的时间和剂量依赖性抑制。对肿瘤组织中的PAR化的抑制与化合物B的肿瘤药物浓度相关。

在对单一药剂TMZ(EC50为32μM或更大)具有抗性的8种人GB细胞系中评价化合物B与TMZ的组合的抗增殖作用。在8种细胞系中的7种中，化合物B展示出与TMZ的协同作用，TMZ的EC50变化5倍或更大。在H209小细胞肺癌异种移植模型中也体内展示出这种协同作用(图4)。作为单一药剂治疗的化合物B(2.73mg/kg BID x 21天)对肿瘤生长没有显著影响。作为单一药剂治疗的TMZ(50mg/kg QD，每个28天周期中的第1-5天)在此模型中是非常有效的，在第一治疗周期之后在所有动物中产生客观响应(在8只动物中1个PR和7个CR)。然而，这8只动物中的6只在三个治疗周期后发展出TMZ抗性，并且在第66天平均肿瘤体积达到505mm³。化合物B(0.68mg/kg BID，每个28天周期中的第1-5天)的加入在第一治疗周期之后在所有动物中产生客观响应(在8只动物中2个PR和6个CR)。完成3个治疗周期后(第66天)，大多数动物仍然没有肿瘤(6/8)，并且平均肿瘤体积为12mm³。因此，化合物B和TMZ的组合显著增强TMZ抗肿瘤活性并且延迟抗性。

鉴于化合物B的显著的脑穿透性，在用于H209-T小细胞肺癌异种移植物的裸小鼠的颅内肿瘤模型中进一步探索其活性(图5)。H209-T是通过在体内用多个TMZ周期处理H209异种移植肿瘤而产生的TMZ抗性细胞系。在此模型中，作为单一药剂治疗的化合物B(2.73mg/kg BID)对肿瘤生长没有显著影响，中位生存期为24天，而与其相比，媒介物处理组的中位生存期为22.5天。H209-T颅内异种移植物显示出对单独TMZ治疗(50mg/kg)的抗性，中位生存期为26.5天。然而，与TMZ相比(p<0.01)，化合物B和TMZ的组合显著延长了动物生存期，中位生存期为54天。结果表明化合物B与TMZ组合可以克服此颅内模型中的TMZ抗性。

实施例3：临床试验

对化合物B与放射疗法(RT)和/或替莫唑胺(TMZ)的组合进行的开放标签、多中心、多剂量、剂量递增的1b/2期研究。

(1)在患有具有未甲基化MGMT启动子的一线胶质母细胞瘤(GB)(“未甲基化GB”)的 患者中化合物B与RT组合。

将化合物B(60mg BID)以2、4和6周的增加暴露与RT组合给予患者，持续6至7周。RT完成后，患者未接受进一步的治疗。

(2)在患有一线未甲基化GB的受试者中化合物B与TMZ和RT两者组合。

将化合物B(60mg BID)与持续6至7周的RT和增加剂量的TMZ组合给予患者。RT完成后，患者未接受进一步的治疗。

(3)在患有具有甲基化或未甲基化MGMT启动子的复发性/难治性GB的受试者中化 合物B与TMZ组合。

在每个28天周期中的第1至21天，将化合物B(60mg BID)与增加剂量的TMZ组合给予患者。

在组合疗法(1)、(2)和(3)中：以60mg BID(PO)的剂量给予化合物B；以1.8至2Gy/部分给予RT QD×5天/周，持续6至7周，总剂量高达60Gy；对于TMZ使用固定剂量给药(Flat-dosing)，并且假设平均体表面积为1.73m²，第一剂量水平(20mg)40mg QD对应于23mg/m²，随后的剂量水平80mg和120mg分别对应于46mg/m²和69mg/m²，以PO QD给予。

结果显示所有组合均安全且耐受性良好。

实施例4：在患有局部晚期或转移性实体瘤的患者(pt)中的化合物B+替莫唑胺(TMZ)

方法：

此剂量递增/扩展研究使用改良的3+3设计招募患者以确立化合物B加TMZ的安全性和MTD。在剂量递增期间，患者在每个28天周期中的第1-7天(A组)或连续地(B组)接受化合物B加递增剂量的TMZ QD。在A组和B组中：化合物B以60mg PO BID的剂量给予；TMZ以20mg、40mg、80mg、120mg QD给予，假定平均体表面积为1.73m²，该剂量分别对应于12mg/m²、23mg/m²、46mg/m²和69mg/m²，以PO QD给予。

主要终点是安全性/耐受性，包括MTD和RP2D的估计。关键的次要终点是TMZ和化合物B的PK曲线和组合治疗的抗肿瘤活性(RECIST v1.1)；生物标志物(例如gBRCA)评估是探索性的。

结果：

招募了16名患者(A组，n＝4，40mg TMZ；n＝4，80mg TMZ；n＝3，120mg TMZ；B组，n＝4，20mg TMZ；n＝1，40mg TMZ)，中位年龄为69.5岁(范围50-85)；8名继续接受治疗。前列腺癌和小细胞肺癌(每种n＝4)是最常见的肿瘤；大多数患者(n＝14)接受过≥3次先前治疗。最常见的化合物B相关AE是恶心(n＝6)，而对于TMZ则是恶心和血小板减少(每种n＝5)。在A组中，120mg TMZ下的2名患者报告的DLT为4级中性粒细胞减少>7天。中性粒细胞减少和血小板减少(每种n＝4)是≥3级AE，在>2名患者中发生。没有AE导致治疗中止或死亡。化合物B和TMZ的血浆暴露与单一药剂试验一致。在基线后肿瘤评估≥1的7名患者中，A组中2名患者(肾脏，n＝1；SCLC，n＝1)实现了未经证实的PR。到第12周±SD(by wk 12and SD)，A组中1名患腹膜癌的患者的CA125减少了99.5％，持续约25周。

结论：

在患有实体瘤的患者中，将RP2D的化合物B与脉冲式或连续的固定剂量的TMZ组合显示出初步的抗肿瘤活性和具有预期的骨髓抑制毒性的易控安全性特征。

实施例5：在患有新诊断或复发性/难治性胶质母细胞瘤(GBM)的患者中的化合物B+放射疗法(RT)和/或替莫唑胺(TMZ)

方法：

这项正在进行的剂量递增/扩展研究被设计用于确定化合物B(60mg PO BID)与RT和/或TMZ的组合的安全性/耐受性和抗肿瘤作用。剂量递增部分由3个组组成：

(A组)在新诊断的患有具有未甲基化的MGMT启动子的GBM(“未甲基化GBM”)的患者中将化合物B(60mg BID)以2、4或6周的增加暴露与持续6至7周的RT组合，并且在完成RT后，受试者将不再接受进一步的研究治疗；

(B组)根据A组组合的安全性，在新诊断的患有未甲基化GBM的患者中，将化合物B与持续6至7周的RT和增加的TMZ剂量组合，并且在完成RT后，受试者将不再接受进一步的研究治疗；

(C组)在患有复发性/难治性甲基化或未甲基化GBM的患者中，将在每个28天周期中的第1至21天给予的化合物B与增加剂量的TMZ组合。

在A组、B组和C组中：以60mg BID(PO)的剂量给予化合物B；以1.8至2Gy/部分给予放射疗法(RT)QD×5天/周，持续6至7周，总剂量高达60Gy；对于TMZ使用固定剂量给药，并且假设平均体表面积为1.73m²，第一剂量水平40mg QD对应于23mg/m²。随后的剂量水平80mg和120mg分别对应于46mg/m²和69mg/m²，以PO QD给予。

结果：

招募了15名患者(A组：2周，n＝3；4周，n＝6；C组：TMZ[40mg]，n＝6)。在C组中报告了一例DLT(3级恶心)。在整个研究组中，在≥4名患者中发生的化合物B相关AE是恶心(n＝6)和疲劳(n＝5)。两名患者经历了三种化合物B相关AE≥3级(腹泻[A组：4周，n＝1]；疲劳和恶心[C组：n＝1])。所有三种都是在伴随用药和治疗中断(A组)或中止(C组)的情况下解决的。在肿瘤评估≥1的7名患者中，1名(A组：4周)实现了未经证实的部分响应；4名(A组：2周，n＝2；4周，n＝2)疾病稳定，并且2名患者(A组：2周，n＝1；C组：n＝1)患有进行性疾病。

结论：

此项正在进行的研究的初步数据表明，化合物B与RT和/或TMZ的组合在GBM患者中通常耐受良好。

应当将前述实施例和某些实施方案的描述视为说明性的，而不是对如由权利要求书限定的本发明进行限制。如将容易理解的，在不脱离如权利要求书中所阐述的本发明的情况下，可以利用上述特征的许多变型和组合。所有此类变型都旨在包括在本发明的范围内。引用的所有参考文献均通过引用以其整体并入本文。

应当理解，如果在本文提到了任何现有技术公开案，则这一参考文献并不构成承认该公开案构成任何国家的本领域的公知常识的一部分。

在本发明的随附权利要求书和前述描述中，除了除非由于表达语言或必要的暗示而使上下文另外要求之外，单词“包含(comprise)”或变型诸如“包含(comprises或comprising)”是以包括意义使用的，即用于指明在本发明的各种实施方案中存在陈述的特征但是不排除存在或加入另外的特征。

通过标识引用而在本文提到的所有公开案、专利、专利申请和公开的专利申请的公开内容特此通过引用以其整体并入本文。

Claims (24)

1.一种用于在受试者中预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的该受试者给予治疗有效量的PARP抑制剂与治疗有效量的替莫唑胺和/或放射疗法的组合，

其中该PARP抑制剂为具有式(I)的化合物，

其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，

其中：

R_N选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

X选自由以下项组成的组：C、N、O和S；

m和n，可以相同或不同，各自为0、1、2或3的整数；

t为0、1、2或3的整数；

R¹在每次出现时独立地选自卤素、CN、NO₂、OR⁹、NR⁹R¹⁰、NR⁹COR¹⁰、NR⁹SO₂R¹⁰、CONR⁹R¹⁰、COOR⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R²选自氢、COR⁹、CONR⁹R¹⁰、CO₂R⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸，可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、-NR⁹R¹⁰、-OR⁹、氧代基、-COR⁹、-CO₂R⁹、-CONR⁹R¹⁰、-NR⁹CONR¹⁰R¹¹、-NR⁹CO₂R¹⁰、-NR⁹SO₂R¹⁰、-SO₂R⁹、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、炔基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代，

或者(R³和R⁴)和/或(R⁴和R⁵)和/或(R⁵和R⁶)和/或(R⁶和R⁷)和/或(R⁷和R⁸)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-或-SO₂-的杂原子，并且所述环被至少一个取代基R¹²任选地取代，

前提条件是

当X为O时，R⁵和R⁶不存在，

当X为N时，R⁶不存在，并且

当X为S时，R⁵和R⁶不存在，或R⁵和R⁶中的至少一个为氧代基，

当R³和R⁴中的一个为氧代基时，另一个不存在，

当R⁷和R⁸中的一个为氧代基时，另一个不存在，并且

当X为C并且R⁵和R⁶中的一个为氧代基时，另一个不存在；

R⁹、R¹⁰和R¹¹，可以相同或不同，各自选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R¹²选自CN、卤素、卤代烷基、NO₂、-NR'R"、-OR'、氧代基、-COR'、-CO₂R'、-CONR'R"、-NR'CONR"R"'、-NR'CO₂R"、-NR'SO₂R"、-SO₂R'、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R'、R"和R"'独立地选自氢、卤代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或者(R'和R")和/或(R"和R"')与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-和-SO₂-的另外的杂原子，

R¹³选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。

2.权利要求1的方法，其中该癌症为实体癌。

3.权利要求1的方法，其中该癌症选自结肠直肠癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、黑素瘤、胶质母细胞瘤或淋巴瘤。

4.权利要求1的方法，其中该癌症为具有未甲基化MGMT启动子的胶质母细胞瘤。

5.权利要求1的方法，其中该癌症为复发性/难治性胶质母细胞瘤。

6.权利要求1的方法，其中该PARP抑制剂为具有式(III)的化合物，

或其药学上可接受的盐。

7.权利要求1的方法，其中该PARP抑制剂为具有式(IV)的化合物，

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中该PARP抑制剂以1-120mg的剂量每天两次地给予。

9.权利要求1-7中任一项的方法，其中该PARP抑制剂以1-80mg的剂量每天两次地给予。

10.权利要求1-7中任一项的方法，其中该PARP抑制剂以60mg的剂量每天两次地给予。

11.权利要求1-10中任一项的方法，其中替莫唑胺以20-120mg/m²/天，优选23、46或69mg/m²/天的剂量口服给予。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中该放射疗法以1.8至2Gy/部分给予QD×5天/周，持续6至7周，总剂量高达60Gy。

13.权利要求1的方法，其中该癌症为局部晚期或转移性实体瘤或新诊断或复发性/难治性胶质母细胞瘤。

14.一种用于预防癌症、延缓癌症的进展或治疗癌症的药物组合，该药物组合包含PARP抑制剂和替莫唑胺，

其中该PARP抑制剂为具有式(I)的化合物，

其立体异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物，

其中：

R_N选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

X选自由以下项组成的组：C、N、O和S；

m和n，可以相同或不同，各自为0、1、2或3的整数；

t为0、1、2或3的整数；

R¹在每次出现时独立地选自卤素、CN、NO₂、OR⁹、NR⁹R¹⁰、NR⁹COR¹⁰、NR⁹SO₂R¹⁰、CONR⁹R¹⁰、COOR⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R²选自氢、COR⁹、CONR⁹R¹⁰、CO₂R⁹、SO₂R⁹、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸，可以相同或不同，各自独立地选自氢、卤素、-NR⁹R¹⁰、-OR⁹、氧代基、-COR⁹、-CO₂R⁹、-CONR⁹R¹⁰、-NR⁹CONR¹⁰R¹¹、-NR⁹CO₂R¹⁰、-NR⁹SO₂R¹⁰、-SO₂R⁹、烷基、烯基、环烷基、芳基、杂环基、炔基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂环基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代，

或者(R³和R⁴)和/或(R⁴和R⁵)和/或(R⁵和R⁶)和/或(R⁶和R⁷)和/或(R⁷和R⁸)与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-或-SO₂-的杂原子，并且所述环被至少一个取代基R¹²任选地取代，

前提条件是

当X为O时，R⁵和R⁶不存在，

当X为N时，R⁶不存在，并且

当X为S时，R⁵和R⁶不存在，或R⁵和R⁶中的至少一个为氧代基，

当R³和R⁴中的一个为氧代基时，另一个不存在，

当R⁷和R⁸中的一个为氧代基时，另一个不存在，并且

当X为C并且R⁵和R⁶中的一个为氧代基时，另一个不存在；

R⁹、R¹⁰和R¹¹，可以相同或不同，各自选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中该烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的每一个独立地被至少一个取代基R¹²任选地取代；

R¹²选自CN、卤素、卤代烷基、NO₂、-NR'R"、-OR'、氧代基、-COR'、-CO₂R'、-CONR'R"、-NR'CONR"R"'、-NR'CO₂R"、-NR'SO₂R"、-SO₂R'、烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中R'、R"和R"'独立地选自氢、卤代烷基、烷基、芳基烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，或者(R'和R")和/或(R"和R"')与它们所连接的原子一起形成3-至8-元饱和、部分或完全不饱和的环，该环具有0、1或2个独立地选自-NR¹³-、-O-、-S-、-SO-和-SO₂-的另外的杂原子，

R¹³选自氢、烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基。

15.权利要求14的药物组合，其中该癌症为实体癌。

16.权利要求14的药物组合，其中该癌症选自结肠直肠癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、黑素瘤、胶质母细胞瘤或淋巴瘤。

17.权利要求14的药物组合，其中该癌症为具有未甲基化MGMT启动子的胶质母细胞瘤。

18.权利要求14的药物组合，其中该癌症为复发性/难治性胶质母细胞瘤。

19.权利要求14的药物组合，其中该PARP抑制剂为具有式(III)的化合物，

或其药学上可接受的盐。

20.权利要求14的药物组合，其中该PARP抑制剂为具有式(IV)的化合物，

21.权利要求14-20中任一项的药物组合，其中该PARP抑制剂以1-120mg的剂量每天两次地给予。

22.权利要求14-20中任一项的药物组合，其中该PARP抑制剂以1-80mg的剂量每天两次地给予。

23.权利要求14-20中任一项的药物组合，其中该PARP抑制剂以60mg的剂量每天两次地给予。

24.权利要求14-23中任一项的药物组合，其中替莫唑胺以20-120mg/m²/天，优选23、46或69mg/m²/天的剂量给予。

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