CN110882292A - 一种具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位及其提取方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发公开了一种全新的蟛蜞菊有效部位的提取方法,包括以下步骤:(1)将蟛蜞菊干燥全草用醇提取,得醇提物;(2)将醇提物加水混悬后,用石油醚萃取,得石油醚萃取部位;(3)将石油醚萃取部位用硅胶柱层析进行有效成分富集,即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。通过先将蟛蜞菊全草用醇进行提取,再用石油醚萃取,最后经硅胶柱层析进行有效成分的富集,得到的蟛蜞菊有效部位具有非常显著的抗肿瘤作用,可以广泛用于癌症药物和保健品中的制备中。本发明的提取方法效率高,工艺流程简单,成本低廉,应用前景广泛。
Description
技术领域
本发明属于天然药物化学技术领域,具体涉及一种具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位及其提取方法和应用。
背景技术
蟛蜞菊为菊科植物蟛蜞Wedelia chinensis(Osbeck)Merr.[Solidago chinensisOsbeck;Wedelia calendulacea(L.)Less.]的全草。具有清热解毒,凉血散瘀之功效。广泛分布于广东、广西、海南、福建等地。癌症为恶性肿瘤中的一种,据统计,目前总体癌症发病率及死亡率呈现逐年上升趋势。癌症已成为我国四大慢性病之一,严重影响人类的健康。因此,以蟛蜞菊为研究对象,提取其抗肿瘤有效成分,对癌症的治疗具有重要的意义。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此,本发明提出具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位及其提取方法,由该方法提取的蟛蜞菊有效部位具有优异的抗肿瘤作用,可应用在药物制备和保健品中。
为了克服上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:一种具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位的提取方法,其包含如下步骤:
(1)将蟛蜞菊干燥全草用醇提取,得醇提物;
(2)将醇提物加水混悬后,用石油醚萃取,得石油醚萃取部位;
(3)将石油醚萃取部位用硅胶柱层析进行有效成分富集,即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
作为上述方案的进一步改进,步骤(1)中所述的醇为体积分数为70%~95%的乙醇水溶液。
作为上述方案的进一步改进,步骤(1)中进行提取的方式为加热回流提取,其中醇与蟛蜞菊干燥全草的用量比为(10~20)mL:1g。
作为上述方案的进一步改进,步骤(2)中醇提物与水的用量比为1g:(30~100)mL。
作为上述方案的进一步改进,步骤(2)中石油醚与水的体积用量比为(0.3~1):1。
作为上述方案的进一步改进,步骤(3)中用硅胶柱层析进行有效成分富集的具体方法为:将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用由体积比为(95~99):(5~1)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;再用由体积比为(85~88):(15~12)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位,即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
优选的,步骤(3)中用硅胶柱层析进行有效成分富集的具体方法为:将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用由体积比为97:3的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;然后用由体积比为87:13的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
作为上述方案的进一步改进,步骤(3)中用硅胶柱层析进行有效成分富集的具体方法为:将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用3~5倍柱体积的由体积比为(95~99):(5~1)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;然后用4~8倍柱体积的由体积比为(85~88):(15~12)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
优选地,所述的肿瘤为肝癌。
根据如上所述的提取方法提取得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
将如上所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位在癌症药物和保健品制备中的应用。
本发明的有益效果:本发明提供了一种全新的蟛蜞菊有效部位的提取方法,先将蟛蜞菊全草用醇进行提取,再用石油醚萃取,最后经硅胶柱层析进行有效成分的富集,得到的蟛蜞菊有效部位具有非常显著的抗肿瘤作用,可以广泛用于癌症药物和保健品中的制备中。本发明的提取方法效率高,工艺流程简单,成本低廉,应用前景广泛。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体描述,以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是,实施例只是用于对本发明做进一步说明,不能理解为对本发明保护范围的限制,所属领域技术熟练人员,根据上述发明内容对本发明所作出的非本质性的改进和调整,应仍属于本发明的保护范围。同时,下述所提及的原料未详细说明的,均为市售产品;未详细提及的工艺步骤或提取方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或提取方法。
实施例1具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位的提取
(1)将蟛蜞菊干燥全草用体积分数为90%的乙醇水溶液进行加热回流提取,提取时间为2h,重复提取2次后合并提取液浓缩去除溶剂后得醇提物;其中醇与蟛蜞菊干燥全草的用量比为15mL:1g;
(2)将醇提取物加水混悬,用石油醚重复萃取3次,合并萃取液浓缩去除溶剂后得石油醚萃取部位;其中醇提物与水的用量比为1g:50mL;每次萃取过程中石油醚与水的体积用量比为0.5:1;
(3)将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用4倍柱体积的由体积比为97:3的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;然后用5倍柱体积的由体积比为87:13的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的蟛蜞菊有效部位。
对比例1具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位的提取
(1)将蟛蜞菊干燥全草用体积分数为90%的乙醇水溶液进行加热回流提取,提取时间为2h,重复提取2次后合并提取液浓缩去除溶剂后得醇提物;其中醇与蟛蜞菊干燥全草的用量比为15mL:1g;
(2)将醇提取物加水混悬,用石油醚重复萃取3次,合并萃取液浓缩去除溶剂后得石油醚萃取部位;其中醇提物与水的用量比为1g:50mL;每次萃取过程中石油醚与水的体积用量比为0.5:1;
(3)将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用4倍柱体积的由体积比为90:10的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;然后用5倍柱体积的由体积比为80:20的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的蟛蜞菊有效部位。
对比例1与实施例1的区别在于,硅胶柱层析的洗脱条件不同。对比例2具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位的提取
(1)将蟛蜞菊干燥全草用体积分数为90%的乙醇水溶液进行加热回流提取,提取时间为2h,重复提取2次后合并提取液浓缩去除溶剂后得醇提物;其中醇与蟛蜞菊干燥全草的用量比为15mL:1g;
(2)将醇提取物加水混悬,用石油醚重复萃取3次,合并萃取液浓缩去除溶剂后得石油醚萃取部位;其中醇提物与水的用量比为1g:50mL;每次萃取过程中石油醚与水的体积用量比为0.5:1;
(3)将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用4倍柱体积的氯仿进行洗脱除杂;然后用5倍柱体积的由体积比为95:5的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的蟛蜞菊有效部位。
对比例1与实施例2的区别在于,硅胶柱层析的洗脱条件不同。
实施例2抗肿瘤实验
将对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板中,细胞密度为4×105/mL,100μL/孔,置于细胞培养箱中培养;16小时后,移除培养液,将不同浓度的待测样品溶液分别加入到培养板中,100μL/孔,每个浓度设3个复孔,同时设置细胞对照组,继续培养48h;弃去培养液,每孔加入40μL 5mg/mL MTT,培养箱中避光培养4h。弃去MTT后加入200μL DMSO溶解反应产物,通过酶标仪570nm测吸光度,计算IC50值;具体结果见表1。其中实验组1的待测样品为实施例1制备得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位;实验组2的待测样品为按实施例1的步骤(2)制备得到的石油醚萃取部位;实验组3的待测样品为对比例1制备得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位;实验组4的待测样品为对比例2制备得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
表1.实验组1-4的蟛蜞菊有效部位对肝癌(HepG2)细胞的IC50值
样品 | IC<sub>50</sub>值(μg/mL) | |
实验组1 | 实施例1蟛蜞菊有效部位 | 25.9 |
实验组2 | 石油醚萃取部位 | 498.3 |
实验组3 | 对比例1蟛蜞菊有效部位 | 264.1 |
实验组4 | 对比例2蟛蜞菊有效部位 | 157.6 |
从表1实验组1和实验组2的对比可以看出,实施例1制备得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位其对肝癌(HepG2)细胞的IC50值远远小于石油醚萃取部位,这说明在本发明所述的硅胶柱层析洗脱条件下富集得到了具有非常显著抗肝癌效果的蟛蜞菊有效部位。
从实验组1、实验组3和实验组4的对比可以看出,实施例1制备得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位其对肝癌(HepG2)细胞的IC50值同样远远小于对比例1和2制备得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位;这说明在本发明所述的硅胶柱层析洗脱条件下才能富集得到具有优异抗肝癌效果的蟛蜞菊有效部位,在实验组3和实验组4的硅胶柱层析洗脱条件下富集不到具有优异抗肝癌效果的蟛蜞菊有效部位。
对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下还可以做出若干简单推演或替换,而不必经过创造性的劳动。因此,本领域技术人员根据本发明的揭示,对本发明做出的简单改进都应该在本发明的保护范围之内。上述实施例为本发明的优选实施例,凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化,均应属于本发明的保护范畴。
Claims (10)
1.一种具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将蟛蜞菊干燥全草用醇提取,得醇提物;
(2)将醇提物加水混悬后,用石油醚萃取,得石油醚萃取部位;
(3)将石油醚萃取部位用硅胶柱层析进行有效成分富集,即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
2.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中所述的醇为体积分数为70%~95%的乙醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中进行提取的方式为加热回流提取,其中醇与蟛蜞菊干燥全草的用量比为(10~20)mL:1g。
4.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(2)中醇提物与水的用量比为1g:(30~100)mL。
5.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(2)中石油醚与水的体积用量比为(0.3~1):1。
6.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中用硅胶柱层析进行有效成分富集的具体方法为:将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用由体积比为(95~99):(5~1)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;再用由体积比为(85~88):(15~12)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位,即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
7.根据权利要求6所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中用硅胶柱层析进行有效成分富集的具体方法为:将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用由体积比为97:3的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;然后用由体积比为87:13的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
8.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中用硅胶柱层析进行有效成分富集的具体方法为:将石油醚萃取部位上硅胶柱,先用3~5倍柱体积的由体积比为(95~99):(5~1)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱除杂;然后用4~8倍柱体积的由体积比为(85~88):(15~12)的氯仿和甲醇组成的洗脱溶剂进行洗脱,收集该洗脱部位即得所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
9.根据权利要求1~8任意项所述的提取方法提取得到的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位。
10.权利要求9所述的具有抗肿瘤作用的蟛蜞菊有效部位在癌症药物和保健品制备中的应用。
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CN105832721A (zh) * | 2015-02-03 | 2016-08-10 | 稳达生技股份有限公司 | 以蟛蜞菊萃取物治疗高三酸甘油脂血症的方法 |
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